Bacillus subtilis (Bacillus subtilis, Bacillus subtilis): biochemické vlastnosti, kultivace a použití. „Subtile“ senný bacil – Bacillus subtilis

Mezi bakterie, které jsou v přírodě rozšířené, patří Bacillus subtilis. Poprvé byl popsán v roce 1835. To bylo získáno díky skutečnosti, že kultura byla zpočátku izolována ze shnilého sena. V laboratorních podmínkách se seno vařilo ve vodě v uzavřené nádobě a louhovalo 2-3 dny. Poté se v nádobě vytvořila kolonie požadovaných bakterií.

Studium

Ve vědě existuje pojem „modelový organismus“. Jedná se o různé druhy, které jsou vybírány pro intenzivní studium určitých procesů nebo vlastností a provádění vědeckých experimentů. Známým modelovým organismem jsou nálevníci, jejichž jeden zástupce, nálevník pantoflíček (Paramecium caudatum), je nám dobře známý ze školních hodin.

Mezi modelové organismy patří také Bacillus subtilis. Díky ní byla důkladně studována tvorba spor v bakteriích. Je také modelem pro pochopení mechanismu bičíků a výzkumu v oblasti molekulární genetiky.

Byl proveden experiment s pěstováním Bacillus subtilis v podmínkách blízkých stavu beztíže za účelem studia změn v genomu populace. Kromě toho se tyto bakterie používají ke studiu vlivu kosmického ultrafialového záření a schopnosti živých organismů se mu přizpůsobit. Na příkladu bacilů se zkoumá možnost přežití mikroorganismů ve vesmíru a v podmínkách jiných planet, zejména Marsu.

stručný popis

Jak je jasně vidět na fotografii, má seno rovný, podlouhlý tvar s tupými zaoblenými konci a je obvykle bezbarvý. Průměr bakterie je v průměru 0,6 µm (0,0006 mm), délka se pohybuje od 3 do 8 µm (0,003-0,008 mm). S takovými rozměry jej můžete prozkoumat a vyfotit pomocí moderního školního mikroskopu. Bacily jsou pohyblivé díky přítomnosti bičíků. Rostou po celém povrchu buňky, jak je vidět na fotografii.

Tyto bakterie, které jsou převážně aerobní, potřebují ke svému fungování molekulární kyslík. I když některé kmeny jsou schopny přejít na dýchání bez kyslíku (fakultativní anaeroby).

Bakterie tradičně patří k půdním mikroorganismům. Z půdy se dostává na listy rostlin, ovoce a zeleninu. Nachází se ale také v polétavém prachu a ve vodě. Je součástí normální střevní mikroflóry zvířat i lidí. Dobře se vyvíjí při teplotě +5°...+45°C, optimální rozmezí je 25-30°C.

Z dostupných fotografií si můžete ověřit, že vypadají takto:

• na povrchu kapalin je tenký film s bělavým odstínem;
• na hustých médiích – sametový povlak s jemnými vráskami a zvlněnými okraji; může být bezbarvý, šedavý nebo růžový.

Reprodukce a sporulace

Bacillus subtilis se stejně jako ostatní bakterie rozmnožuje jednoduchým podélným dělením buňky na polovinu. , vzniklé po takovém rozdělení, často zůstávají navzájem spojeny tenkou nití. Takové nitě jsou na fotografii snadno rozlišitelné.

Buňky, které se vyvíjejí ze spór a jejich první potomci, jsou nepohyblivé. Schopnost pohybu se objevuje až v následujících generacích.

Výživa

Některé mikroby, například bakterie mléčného kvašení plantarum (Lactobacillus plantarum), inhibují vývoj Bacillus subtilis. Senný bacil slouží jako potrava prvokům. Začátek jednoho z potravních řetězců tedy vypadá takto: bacil sena - střevíc brvitý - měkkýš - ryba atd. dolů k osobě.

Metody „lovu“ prvoků se liší. Například u améby (Amoeba) se neustále tvoří a mizí výrůstky vnitřního prostředí buněk (pseudoplodia nebo pseudopodia). S nimi oběť obklopí a vtáhne do klece. A například pantoflíček má buněčná ústa (cytostom) pro vstřebávání potravy. Na fotce je vidět jako prohlubeň na těle. S pomocí těch, kteří rostou vedle něj a jsou sjednoceni složité strukturyŘasinky tlačí vodu do úst spolu s bakteriemi, které obsahuje. Nálevníci najít podle Chemikálie které zvýrazňují.

Patogenita

Podle většiny klasifikací není Bacillus subtilis považován za patogenní pro lidi a zvířata. Napomáhá trávení potravy, štěpení bílkovin a sacharidů, bojuje proti patogenní mikroflóře střev a kůže.

Vědci zjistili, že mezi bakteriemi nalezenými v lidské ráně jsou vždy přítomny bacily subtilis. Produkují enzymy, které ničí odumřelou tkáň, antibiotika inhibující patogenní mikroby, a dokonce mají mírný antialergický účinek. Bylo prokázáno, že tento bacil potlačuje rozvoj hlavních původců chirurgických infekcí.

Existují však také negativní účinky této bakterie:

• někdy způsobuje alergie, často vyjádřené jako vyrážka na lidském těle;
• některé kmeny mohou způsobit otravu jídlem po konzumaci jídla, které bylo jimi zkažené;
• může způsobit těžké infekce lidského oka.

Používání

Bacillus subtilis je hlavní aktivní složkou mnoha léků. Používají se při akutních střevních infekcích u dětí, při střevní dysbióze, v pooperačním období k prevenci hnisání atd.

Nejčastěji je základem léčiv kmen Bacillus subtilis 534 (lék Sporobacterin) nebo z něj selektivně získaný kmen Bacillus subtilis 3H (lék Bactisporin). Kmen 31 se využívá i ve farmakologii, např. při výrobě léku Biosporin. Všechny tyto léky jsou antimikrobiální. Jejich hodnota je zvláště velká v boji proti bakteriálním infekcím, kdy pacient z toho či onoho důvodu nemůže užívat antibiotika.

Bacillus seno je také součástí mnoha doplňků stravy. Například Supradin Kinder gel, Vetom, Baktistatin a další.

Je základem mnoha živočišných přípravků. Jedná se o Bakterin-SL, Endosporin, Proteksin, Enterobacterin a další. Úspěšně se používají v chovu hospodářských zvířat, drůbeže a ryb k boji proti patogenním bakteriím, tasemnicím a ke zlepšení imunity.

Existuje samostatná skupina léků na bázi Bacillus subtilis pro rostlinnou výrobu: Alirin-B, Gamair, Fitosporin a další. Jejich hlavním úkolem je chránit rostliny před chorobami způsobenými bakteriemi a houbami. Nepochybnou výhodou je jejich naprostá neškodnost pro člověka při požití spolu s ovocem.

Bacillus seno se také používá pro fermentaci ovsa a fazolí. V Japonsku existuje tradiční pokrm zvaný natto, vyrobený z fermentovaných sójových bobů. K jejich fermentaci se používá speciální kmen tyčinek - Bacillus natto. Natto se dokonce vyrábí z extraktů výživové doplňky a v USA byl vyvinut na bázi Bacillus natto veterinární lék Glogen-8.

Enzymy produkované Bacillus subtilis jsou průmyslově vyráběny k štěpení bílkovin (proteázy, amylázy). Proteáza je tedy obsažena v domácích pracích prostředcích, stejně jako v přípravcích na čištění kůží od bílkovin a tuku při jejich úpravě.

Bacillus subtilis označuje léky, které regulují rovnováhu střevní mikroflóry, udržují ji na fyziologické úrovni, čímž eliminují příznaky stávající dysbiózy. Zvážím farmakologické působení tohoto léku, jeho indikace a kontraindikace, jakož i řadu dalších důležitých aspektů, které musíte vědět, než začnete tento lék používat.

Jaké je složení a forma uvolňování Bacillus subtilis?

Lék se vyrábí ve formě léčivé suspenze, která je umístěna ve speciálních lahvičkách, jejich objem může být různý, například existují nádoby po dvou mililitrech, pěti a deseti.

Droga upravuje rovnováhu střevní mikroflóry Bacillus subtilis, jinak nazývaný Bacillus subtilis - jedná se o sporotvorné bakterie s aerobním způsobem existence, zástupce rodu Bacillus. Bacillus subtilis je bezbarvá tyčinka, její tvar je rovný, může se rozmnožovat jak výtrusy, tak dělením.

Bacillus subtilis je schopen produkovat některá antibiotika a také okyseluje prostředí, ve kterém se nachází, a je antagonistou mnoha mikroorganismů, např. Salmonella, Proteus, kvasinky, stafylokoky a streptokoky. Produkuje enzymy, které mohou odstraňovat hnilobné produkty tkáňového rozpadu; podílí se na syntéze aminokyselin, vitamínů a důležitých imunoaktivních faktorů.

Lék by měl být skladován při teplotě 25 stupňů, ne více a měl by být uchováván mimo dosah malých dětí. Musí být použit pouze do data uvedeného na obalu, po kterém nebude mít léčivý účinek na lidský organismus.

Jaký je účinek Bacillus subtilis?

Bacillus subtilis je lyofilizovaná mikrobiální hmota, která zahrnuje živý antagonisticky aktivní kmen zvaný Bacillus subtilis 3H, přičemž jedna dávka léku obsahuje minimálně jednu miliardu živých bakterií, maximálně však 5 miliard.

Tento lék má antagonistickou aktivitu; Bacillus subtilis inhibuje růst mnoha patogenních i podmíněně patogenních bakterií a některých hub. Díky uvolňování enzymů dochází k štěpení bílkovin, lipidů a sacharidů a také vlákniny, což vede k výraznému zlepšení trávení a vstřebávání potravy. To vše pomáhá čistit zánětlivá ložiska od existující nekrotické tkáně.

Jaké jsou indikace pro použití Bacillus subtilis?

Uvedu seznam indikací, kdy je Bacillus subtilis indikován k použití:

Střevní infekce u malých dětí vyskytující se v akutní stadium;
Používá se při tzv. bakteriální vaginóze;
Indikací je přítomnost střevní dysbiózy, jejíž vývoj ovlivnily různé etiologické faktory;
Kromě uvedených stavů se tento lék doporučuje používat jako profylaxi některých septicko-hnisavých komplikací, které se u pacientů často vyvíjejí v pooperačním období.

Lék by měl být používán pouze po konzultaci pacienta s odborníkem.

Jaké jsou kontraindikace použití Bacillus subtilis?

Kontraindikací k použití Bacillus subtilis je přecitlivělost na složky tohoto léku, proto pokud jste přecitlivělí, je lepší lék nepoužívat, jinak se mohou objevit negativní projevy z těla.

Jaké jsou použití a dávkování Bacillus subtilis?

V případě akutních střevních infekcí se lék používá následujícím způsobem: v pediatrické praxi se lék používá ve věku od jednoho měsíce do jednoho roku, 0,5 dávky dvakrát denně po dobu pěti dnů nebo jednoho týdne. Ve věku nad jeden rok je předepsána jedna dávka dvakrát denně, doba léčby by neměla přesáhnout týden.

Střevní dysbióza, stejně jako alergická dermatóza, vyžaduje následující dávkování: pro děti od jednoho měsíce do jednoho roku - 0,5 dávky dvakrát denně po dobu deseti dnů nebo dvou týdnů. Od jednoho roku věku se doporučuje užívat jednu dávku 2x denně. Dospělí pacienti dostávají lék 1 dávku 2x denně a léčba může trvat maximálně dvacet dní.

Bakteriální vaginóza, stejně jako prevence septicko-hnisavých komplikací v období po operaci, zahrnuje následující dávky léku Bacillus subtilis: dospělým pacientům je předepsána jedna dávka 2krát denně, zatímco terapeutická opatření může trvat pět až deset dní.

Jaké jsou vedlejší účinky Bacillus subtilis?

V současné době nejsou žádné vedlejší efekty nebyl zjištěn žádný lék.

Předávkování Bacillus subtilis

Návod k použití neuvádí případy předávkování Bacillus subtilis, protože takové případy dosud nebyly registrovány... Pokud se však stane, že je lék Bacillus subtilis užitý nad rámec předepsaného dávkování, je nutné informovat ošetřujícímu lékaři o tom, zejména v případě jakýchkoli negativních změn v těle.

Jaké jsou analogy Bacillus subtilis?

Baktisporin je analog, stejně jako lék Sporobactern v kapalině.

Závěr

Před použitím léku Bacillus subtilis si musíte pečlivě přečíst pokyny dodávané s tímto lékem, navíc se doporučuje konzultovat s odborníkem, neměli byste se léčit, protože neoprávněné použití často nevede k pozitivním výsledkům; .

Teze

Gataullin, Airat Gafuanovič

Akademický titul:

Kandidát biologických věd

Místo obhajoby práce:

HAC speciální kód:

Specialita:

Mikrobiologie

Počet stran:

PŘEHLED LITERATURY

Kapitola 1. Mikrobiální antagonismus - základ pro tvorbu bioterapeutických léků pro korekci dysbiotických stavů

Kapitola 2. Sporová probiotika a jejich účinky na makroorganismus

2.1. Přípravky z bakterií rod Bacillus

2.2. Moderní představy o mechanismech terapeutického a profylaktického působení probiotik z bakterií rodu Bacillus

2.3. Biologicky aktivní látky produkované aerobně tvorba spor bakterie

2.4. Patogenní faktory bakterií rodu Bacillus 34 VLASTNÍ VÝZKUM

Kapitola 3. Objekty a metody výzkumu

3.1. Předměty výzkumu

3.2. Metody výzkumu 43 3.2.1. Vybavení a technika

Kapitola 4. Charakteristika izolovaných kmenů

4.1. Studium morfologických a fyziologicko-biochemických vlastností kmenů

4.2. Antagonistická a adhezivní aktivita kmenů B.subtilis v experimentech in vitro

4.3. Definice odolnost proti antibiotikům a plazmidový profil kmenů B. subtilis

Kapitola 5. Vliv kmene B.subtilis 1719 na makroorganismus

5.1. Studium toxicity, toxigenity, virulence a probiotické aktivity kmene B.subtilis 1719 v experimentech in vivo

5.2. Studium vlivu kmene B. subtilis 1719 na parametry imunity v experimentech in vivo s experimentální dysbiózou

Kapitola 6. Technologická charakteristika kmene B.subtilis 1719 jako základ probiotického přípravku

6.1. Hodnocení růstových vlastností na různých tekutých živných půdách

6.2. Studie životaschopnosti a antagonistické aktivity kmene B. subtilis 1719 během skladování

Kapitola 7. Srovnávací charakteristiky vlastností kmene B.subtilis\l\9 a kmenů, které tvoří základ některých komerčních probiotických přípravků. ZÁVĚR

Úvod disertační práce (část abstraktu) Na téma "Biologické vlastnosti kmenů Bacillus subtilis slibné pro tvorbu nových probiotik"

Relevance problému

V současné fázi lékařské mikrobiologie se objevily nové údaje, které ospravedlňují použití saprofytické mikroflóry, která je schopna během svých životních procesů produkovat biologicky aktivní látky (BAS), které potlačují růst patogenních mikroorganismů, zhoubné nádory a normalizace různých patologických a biochemických procesů v lidském těle.

V posledním desetiletí byly biologické produkty založené na živých mikrobiálních kulturách široce používány pro prevenci a léčbu onemocnění gastrointestinálního traktu. tvorba spor

Bakterie rodu Bacillus, jedna z nejrozmanitějších a nejrozšířenějších skupin mikroorganismů, jsou důležité komponenty exogenní flóry lidí a zvířat.

Rod Bacillus přitahoval pozornost badatelů již od starověku. Nashromážděné poznatky z oblasti mikrobiologie, fyziologie, biochemie a bakteriální genetiky naznačují přednosti Bacillus jako producentů biologicky aktivních látek: enzymů, antibiotik, insekticidů. Vysoká adaptabilita na různé životní podmínky (přítomnost či nepřítomnost kyslíku, růst a vývoj v širokém rozsahu teplot, využívání různých organických či anorganických sloučenin jako zdrojů potravy atd.) přispívají k šíření bacilů v půdě, ve vodě, vzduch, potraviny a další předměty vnější prostředí, stejně jako v těle lidí a zvířat.

Rozmanitost metabolických procesů, genetická a biochemická variabilita, rezistence vůči lytickým a trávicím enzymům sloužily jako zdůvodnění pro použití bacilů v různé oblasti lék. Americký úřad pro potraviny a léčiva přidělil Bacillus subtilis GRAS (obecně považovaný za bezpečný) status – zcela bezpečné organismy, což je předpoklad pro využití těchto bakterií při výrobě léčiv.

Aktivita bacilů se projevuje proti širokému spektru patogenních a podmíněně patogenních mikroorganismů. Díky syntéze různých enzymů a dalších látek regulují a stimulují trávení, mají antialergenní a antitoxické účinky. Při použití bacilů se výrazně zvyšuje nespecifická rezistence makroorganismu. Tyto mikroorganismy jsou snadno vyrobitelné, skladovatelné a hlavně šetrné k životnímu prostředí.

Terapeutická a profylaktická léčiva na bázi živých nepatogenních mikrobů, která jsou schopna přirozeným způsobem podávání zajistit příznivé účinky na fyziologické a biochemické funkce organismu hostitele prostřednictvím optimalizace jeho mikrobiologického stavu, jsou v současnosti klasifikována jako probiotická léčiva.

Z bacilů je největší zájem o kmeny B. subtilis. Z hlediska znalosti genetických a fyziologických vlastností zaujímají druhé místo po E. coli. O velkém potenciálu B. subtilis v biotechnologii svědčí vytvoření databanky o molekulární genetice tohoto kmene - SubtiList, do které se zapisují veškeré informace o bakteriálním genomu.

Analýza výsledků vědecký výzkum prováděné u nás i v zahraničí, naznačuje rozsah využití bakterií rodu Bacillus k získávání produktů z bakteriální biomasy nebo jejich metabolitů. Známé metody pěstování

Na základě živých bakterií rodu Bacillus byly vytvořeny probiotické přípravky, které jsou pro makroorganismus neškodné, mají široké spektrum léčebných a profylaktických účinků a jsou ekologicky nezávadné. Výsledky využití živých mikrobiálních kultur rodu Bacillus k léčbě mají velký vědecký i praktický význam. gastrointestinální onemocnění u lidí a hospodářských zvířat.

V současné době jsou v praktickém zdravotnictví hojně využívána známá probiotická léčiva: bactisubtil, sporobacterin, biosporin, bactisporin, subalin, cereobiogen, enterogermin a další.

Indikace pro terapeutické použití a terapeutická účinnost těchto léků jsou omezeny vlastnostmi kmenů používaných k jejich výrobě. Rozhodující význam má spektrum antagonistické aktivity proti patogenním a oportunním mikroorganismům, které způsobují mikroekologické poruchy v různých biotopech lidského nebo zvířecího těla. Kromě toho nelze ignorovat schopnost bacilů produkovat biologicky aktivní látky (polypeptidová antibiotika, enzymy atd.) a jejich odolnost vůči antibiotikům.

Rozmanitost a vznikající odolnost proti antibiotikům mikroorganismy podílející se na vzniku dysbiotických poruch, jednak variabilita biosyntetické schopnosti různých kmenů B.subtilis na druhé straně určují vhodnost neustálého sledování kmenů, které mají cílenou probiotickou aktivitu a/nebo jsou producenty různých biologicky aktivních látek.

Cíl práce:

Studovat biologické vlastnosti izolovaných kmenů B. subtilis a vyhodnotit možnost jejich využití pro vývoj originálního sporového probiotika.

Cíle výzkumu:

1. Studovat morfologické, fyziologicko-biochemické, antagonistické, adhezivní a další vlastnosti izolovaných kultur B. subtilis v experimentech in vitro a vybrat nejslibnější kmen pro další výzkum.

2. Posuďte probiotickou aktivitu vybraného kmene B. subtilis v experimentech in vivo.

3. Vyberte živné médium, které je optimální pro akumulaci biomasy studovaného kmene B.subtilis.

4. Určete životaschopnost a antagonistickou aktivitu vybraného kmene B.subtilis během skladování.

5. Porovnejte vlastnosti původního kmene B. subtilis a kultur používaných pro výrobu komerčních probiotických přípravků.

Vědecká novinka.

Na základě studia morfologického, fyziologicko-biochemického, genetického a dalších biologické vlastnosti izolovaných kmenů byl vybrán bezplasmidový kmen B. subtilis 1719, který vykazuje antagonismus proti oportunním a patogenním mikroorganismům různých taxonomický skupiny, s nízkou adhezivní aktivitou, rezistentní na gentamicin, polymyxin a erythromycin.

Experimentálně byly podloženy přístupy k vytvoření technologie výroby, včetně studia růstových vlastností kmene B. subtilis 1719 na původních živných půdách, podmínek stabilizace jeho životaschopnosti a antagonistické aktivity jako fáze získávání nového probiotického léčiva.

Byla podána přihláška vynálezu (č. 2005111301 ze dne 19. dubna 2005): „Bakteriální kmen Bacillus subtilis 1719 je producentem antagonisticky aktivní biomasy proti patogenním mikroorganismům a také proteolytickým, amylolytickým a lipolytickým enzymům.“

Praktický význam.

Izolovaný a identifikovaný kmen B.subtilis 1719 byl uložen ve Státní sbírce kultur GISC pojmenované po. J.I.A. Taraseviče pod č. 277 a lze jej doporučit pro vývoj průmyslové technologie pro získání originálního bioterapeutického probiotického léku.

Hlavní ustanovení předložená k obhajobě:

1. Identifikované tři kmeny bakteriálních kultur odpovídají morfologickými, fyziologickými, biochemickými a dalšími vlastnostmi druhu B. subtilis. Neobsahují plazmidy, jsou antagonisticky aktivní proti oportunním a patogenním bakteriím různých taxonomických skupin a mají nízkou nebo střední úroveň adheze.

2. Kmen B.subtilis 1719 má probiotické vlastnosti, projevující se likvidací oportunních a patogenních mikroorganismů s obnovením kvantitativního a kvalitativního složení normální mikroflóry u experimentální dysbiózy a má také imunomodulační účinek na makroorganismus.

3. Kmen B.subtilis 1719 lze na základě jeho technologických vlastností doporučit jako kandidáta pro vytvoření originálního probiotického léčiva.

PŘEHLED LITERATURY

Závěr disertační práce na téma "Mikrobiologie", Gataullin, Airat Gafuanovich

1. Na základě morfologických a fyziologicko-biochemických vlastností byly izolované kmeny identifikovány jako B.subtilis. V preparátech DNA kmenů B. subtilis nebyly nalezeny žádné plazmidy, což zjevně ukazuje na chromozomální kontrolu antibiotické rezistence.

2. Na modelu dysbiózy u bílých myší byla ukázána probiotická aktivita kmene B.subtilis 1719, projevující se v likvidaci oportunních a patogenních mikroorganismů s obnovením kvalitativního a kvantitativního složení normální mikroflóry.

3. Optimálním médiem pro akumulaci biomasy při kultivaci kmene B.subtilis 1719 je médium VK-2 s přídavkem glukózy nebo sacharózy jako zdroje sacharidů.

4. Bylo zjištěno, že kmen B.subtilis 1719 si zachovává životaschopnost a antagonistickou aktivitu v lyofilizovaném stavu se stabilizátorem sacharóza-želatina po dobu nejméně 4 let (období pozorování), v kapalné formě stabilizovaný 7% roztokem NaCl - 2 let a 1 rok v přítomnosti destilované vody nebo 10% roztoku glycerinu.

5. Antagonisticky aktivní, málo přilnavý, plazmid prostý, netoxický kmen B. subtilis 1719, který má probiotickou a imunomodulační aktivitu, je uložen ve Státní sbírce kultur GISC pojmenované po. J1.A. Tarasevič.

6. Kmen B.subtilis 1719 (277) je na základě svých biologických vlastností a základních technologických charakteristik perspektivní pro použití při vývoji nových probiotických přípravků.

ZÁVĚR

Objevy a výdobytky moderní biologické a lékařské vědy umožnily vyvinout a uvést do praxe nové biologické produkty – probiotika. Tyto léky jsou založeny na živých mikrobiálních kulturách. Terapeutický účinek těchto léků je založen na výrazném mikrobiálním antagonismu proti patogenním a podmíněně patogenním kmenům - patogenům. V procesu léčby je neméně důležitá imunomodulační aktivita probiotik. Nepopiratelné výhody léků z živých bakterií oproti syntetizovaným lékům chemicky, to je neškodnost, jejich fyziologickost pro lidské tělo, absence alergických reakcí. Probiotika již zaujala přední místa v úpravě gastrointestinální mikroflóry, metabolických poruch a léčbě následků antibakteriální, chemoterapie, hormonální a radiační terapie. Studie fenoménu bakteriální translokace ukázala, že probiotika mohou úspěšně nahradit antibiotika a proteolytické enzymy v prevenci a léčbě různých chirurgických infekcí.

V posledním desetiletí byly biologické produkty založené na živých mikrobiálních kulturách široce používány pro prevenci a léčbu onemocnění gastrointestinálního traktu. tvorba spor bakterie

Rozmanitost metabolických procesů, genetická a biochemická variabilita, rezistence vůči lytickým a trávicím enzymům posloužily jako zdůvodnění pro použití bacilů v různých oblastech medicíny. Tyto mikroorganismy jsou nenáročné na výrobu, stabilní při skladování a hlavně jsou šetrné k životnímu prostředí.

Vysoká aktivita kmenů vůči jedné sadě testovacích kultur nezaručuje její aktivitu vůči ostatním. V tomto ohledu je použití sporových probiotik omezeno na specifické terapeutické účely. Variabilita nosologických forem hnisavě-septická onemocnění a diverzita etiologicky významných mikroorganismů pro rozvoj dysbiotických poruch určují požadavky na použitý biologický přípravek. To povzbuzuje výzkumníky, aby neustále testovali antagonistické kmeny s požadovanými vlastnostmi.

Námi studované kmeny měly morfologické a fyziologicko-biochemické vlastnosti typické pro zástupce B. subtilis a vyznačovaly se souborem enzymů, které rozkládají různé substráty.

Podle literatury mají B. subtilis výrazné antagonistické vlastnosti proti širokému spektru patogenních mikroorganismů a vysokou enzymatickou aktivitu, díky čemuž normalizují trávicí procesy a mají také antitoxický a antialergický účinek.

Studované kmeny B. subtilis měly široký rozsah antagonistické aktivity, nízkou (B. subtilis č. 1719) nebo střední (B. subtilis č. 1594, B. subtilis č. 1318) úroveň adheze.

Kmeny, které jsme studovali, se tedy vyznačovaly vysokou probiotickou aktivitou. Studium biochemických vlastností však ukázalo, že kmen B.subtilis 1719 měl vyšší enzymatickou aktivitu (proteáza, amyláza, lipáza), která se projevila v největší hydrolytické zóně ze studovaných substrátů. Kromě toho nízká úroveň adhezivní aktivity kmene B. subtilis 1719 a zřejmě i jeho přirozená odolnost proti antibiotikům, řízený chromozomem, nám umožnil dospět k závěru, že další studium této kultury je slibné.

Vyhlídky na rozšíření průmyslové výroby léčiv na bázi rodu Bacillus jsou podle nás velmi velké.

Bacily jsou schopny vylučovat mnoho enzymů do kultivační tekutiny. Slouží jako důležité průmyslové místo pro výrobu proteolytických a amylolytických enzymů používaných při výrobě potravinářské výrobky, detergenty a biomedicínské látky. V posledním desetiletí se za jejich účasti podařilo získat řadu nových antibiotik, bakteriálních insekticidů a dalších biologicky aktivních látek.

Navzdory skutečnosti, že B. subtilis má status GRAS, existují ojedinělé zprávy v literatuře o přítomnosti faktorů patogenity u některých kmenů B. subtilis. Je indikováno, že se nejedná o trvalé znamení, protože během opětovného výsevu zmizí. Bylo navrženo, že patogenní vlastnosti bakterií souvisejí s přítomností plazmidů. Například Le N. a Anagnostopoulos S. izolovali plazmidy z 8 kmenů B. subtilis od 83 subjektů. Plazmidová DNA byla stanovena pouze v buňkách toxigenních kmenů B. subtilis a nebyla nalezena v buňkách jiných kmenů stejného druhu, které nejsou toxigenní. Eliminace plazmidů z toxigenních kmenů pod vlivem eliminačních činidel vedla k eliminaci toxigenních vlastností kultivačních filtrátů. Genetická role plazmidů však nebyla dostatečně prostudována.

V našich studiích nebyly nalezeny žádné plazmidy v izolovaných preparátech DNA tří studovaných kmenů B. subtilis.

Autoři, kteří zkoumali vliv bacilů na tělo teplokrevných živočichů, došli k závěru, že kmeny B. subtilis jsou pro člověka i zvířata zcela neškodné. Důkazem neškodnosti pro makroorganismus jsou experimentální údaje, že během několika dnů po parenterálním podání je B.subtilis z těla vyloučen. Mechanismy terapeutického účinku těchto plodin byly studovány na zvířatech. V současné době se má za to, že terapeutický účinek sporových probiotik je dán komplexem faktorů, mezi které patří: produkce bakteriocinů kulturami B. subtilis, které potlačují růst patogenních a podmíněně patogenních mikroorganismů; syntéza vysoce aktivních enzymů: proteázy, ribonukleázy, transaminázy atd.; produkci látek, které neutralizují bakteriální toxiny.

Studie vlastností vybraného kmene na myších ukázala, že je avirulentní a nevykazuje toxicitu ani toxigenitu.

Faktory pozitivního vlivu probiotik na makroorganismus jsou: různé produkty mikrobiální syntéza: aminokyseliny, polypeptidová antibiotika, hydrolytické enzymy a řada dalších biologicky aktivních látek menšího významu. Studium a izolace ochranných látek produkovaných mikroorganismy rodu Bacillus a tvorba biomedicínských léčiv na jejich základě je proto naléhavou potřebou.

V gastrointestinálním traktu se projevuje přímý antagonistický účinek bacilů, který je převážně selektivní ve vztahu k patogenním a podmíněně patogenním mikroorganismům. Zároveň se vyznačují absencí antagonismu vůči zástupcům normální mikroflóry.

V našich studiích při korekci experimentální dysbiózy navozené podáním antibiotika doxycyklinu přispěla kultura B. subtilis 1719 k normalizaci složení a počtu střevní mikroflóry a také k eliminaci podmíněně patogenních mikroorganismů v parietální a luminální mikroflóra.

Z literárních údajů vyplývá, že průmyslové kmeny rodu Bacillus mají nízký index přilnavost k erytrocytům a slabá nebo střední přilnavost k buňkám střevního epitelu. Kmeny B. subtilis 534 a ZN mají více adhezinů k receptorům enterocytů, kmen B. licheniformis - ke kolonocytům, tzn. Zdá se, že různé kmeny mají adheziny k receptorům na různých střevních buňkách.

Jejich aktivita se vyskytuje ve střevním lumen a je namířena proti patogenním mikroorganismům, aniž by působila antagonisticky na zástupce normální mikroflóry. Při užívání sporových probiotik se realizuje možnost obnovení autoflóry v různých střevních lokusech a po 3-5 dnech se zvyšuje počet laktobacilů, bifidobakterií, E. coli atd. a poté se obnovuje na normální úroveň.

Výsledky našich studií o adhezi mikroorganismů na enterocytech umožňují s větší pravděpodobností tvrdit, že adhezivní schopnost střevních buněk závisí na kvantitativním a kvalitativním složení normální mikroflóry. V dysbiotických podmínkách se na povrchu enterocytů otevírají receptory, na které se podmíněně patogenní a patogenní mikroorganismy vážou, a po úpravě dysbiózy je střevo kolonizováno normální mikroflórou a množství enterocytových receptorů schopných přilnout na jeho povrch ubývá původních mikroorganismů.

Je známo, že normální mikroflóra hraje důležitou spouštěcí roli v mechanismu tvorby imunity a specifické obranné reakce v postnatálním vývoji makroorganismu.

Úloha mikroflóry v rozvoji imunitní odpovědi je dána jejími univerzálními imunomodulačními vlastnostmi, mezi které patří imunostimulace a imunosuprese. Bylo zjištěno, že bakteriální lipopolysacharidy (LPS) mají imunoregulační účinek na imunitní odpověď Ig A a hrají roli adjuvans. Mikroflóra zajišťuje rozvoj komplexu nespecifických a specifických imunologických reakcí, tvořících adaptační a ochranné mechanismy.

Bez ohledu na to, jak vysoká je antimikrobiální aktivita léku, hraje rozhodující roli při eliminaci infekčního patologického stavu. Vytvoření léků, které jsou účinné v antimikrobiálních vlastnostech a stimulují imunitní reakce, se zdá být důležitým úkolem. Proto je velké množství studií zaměřeno na studium vlivu probiotických léků na různé části imunitního systému lidí a zvířat.

Podávání živých kultur aerobních bacilů výrazně stimuluje in vivo produkci sérového interferonu a interferonu indukovanou in vitro virem newcastleské choroby.

Řada studií ukazuje, že probiotická léčiva mají imunomodulační účinek, obnovují imunitní stav narušený patologií, zvyšují produkci endogenního interferonu, zvyšují funkční aktivitu buněk makrofágů, zvyšují fagocytární aktivitu krevních leukocytů - monocytů a neutrofilů.

Naše studie prokázaly, že kultura B. subtilis 1719 významně změnila metabolickou aktivitu neutrofilů při korekci dysbiózy a nezpůsobila změny ve funkční aktivitě neutrofilů v normálním stavu autochtonní mikroflóry. Dále bylo zjištěno, že dysbióza byla doprovázena zvýšením hladiny TNF-a, což svědčilo o výrazné fagocytární, cytotoxické, adhezivní aktivitě makrofágů, lymfocytů, ale i endoteliálních a epiteliálních buněk tenkého střeva.

Zvýšená sekrece prozánětlivých cytokinů u myší s dysbiózou pravděpodobně odráží aktivaci imunokompetentních buněk (T lymfocyty, monocyty/makrofágy). Pod vlivem kultury B.subtilis 1719* byl pozorován pokles produkce TNF-a. Zavedení kultury intaktním zvířatům nezpůsobilo změny v úrovni produkce TNF-a.

Vzhledem k tomu, že TNF-a je marker zánětlivé reakce se dospělo k závěru, že probiotikum hraje důležitou roli při zvyšování protizánětlivé aktivity imunokompetentních buněk u zvířat.

Studie provedené za účelem studia dynamiky produkce cytokinů pod vlivem kmene B. subtilis 1719 ukázaly, že kultivace neměla v prvních hodinách po podání žádný vliv na produkci cytokinů, s výjimkou IL-lp, jehož množství se akumulovalo postupně. . Hladina ostatních studovaných cytokinů (IL-2, IL-4, IL-6, IL-10, IL-12, IFN-y) se významně zvýšila v intervalu 12 až 24 hodin.

Modulace buněk imunitního systému a změny cytokinového potenciálu tedy mohou být jedním z mechanismů, kterými kultura B. subtilis 1719 přispívá ke korekci dysbiózy.

Analýza výsledků vědeckého výzkumu prováděného u nás i v zahraničí ukazuje na rozsah využití bakterií rodu Bacillus k získávání produktů z bakteriální biomasy nebo jejich metabolitů. Známé metody pěstování bakterie rodu Bacillus jsou základem pro technologii získávání řady bakteriálních a enzymové přípravky. .

Při studiu růstových vlastností kultury B. subtilis 1719 na různých tekutých živných půdách bylo zjištěno, že pro maximální akumulaci biomasy lze za nejadekvátnější substrát pro kultivaci kmene považovat médium BK-2 s přídavkem glukózy popř. sacharóza

V současné době se při výběru a charakterizaci produkčních kultur mikroorganismů berou v úvahu zejména tyto ukazatele: biologické vlastnosti: spektrum a úroveň antagonistické aktivity, vyrobitelnost, tzn. schopnost rychle akumulovat bio* hmotu, odolnost proti lyofilizaci, životaschopnost při skladování. Zvláštní pozornost je věnována kritériím pro stupeň bezpečnosti používaných mikroorganismů pro lidské zdraví.

Ve studiích provedených za účelem posouzení životaschopnosti mikrobiálních buněk B.subtilis 1719 při skladování v přítomnosti kapalných stabilizátorů bylo zjištěno, že optimálním stabilizátorem je 7% roztok NaCl, který umožňuje zachovat životaschopnost a antagonistické vlastnosti kmene. 2 roky. Pro zachování vlastností kultury po dobu 1,5 roku je možné použít 10% roztok glycerolu, 1 rok - destilovanou vodu a bylo zjištěno, že tato plniva neměla statisticky významný vliv na antagonistické vlastnosti B. kmen subtilis 1719. Je třeba poznamenat, že důležitou skutečností je schopnost kmene B.subtilis 1719 udržovat antagonistickou aktivitu proti S.sonnei a S.aureus v kapalných stabilizátorech dlouhodobý-36 měsíců (období pozorování).

Lyofilizace se sacharózo-želatinovým stabilizátorem zachovala životaschopnost a antagonistickou aktivitu kmene B. subtilis 1719 po dobu 4 let (období pozorování).

V současné době jsou v praktickém zdravotnictví hojně využívána známá probiotická léčiva: bactisubtil, sporobacterin, biosporin, bactisporin, subalin, cereobiogen, enterogermin a další

Srovnávací studie B. subtilis kmene 1719 pro antagonistickou a adhezivní aktivitu s komerčními kulturami následujících probiotických přípravků: Sporobacterin, Rusko (B. subtilis 534), Cereobiogen, Čína (B. cereus DM423), Subtil, Vietnam (B. cereus var vietnami), Baktisubtil, Francie (B.cereus IP5832), Nutrolin, Indie (B.coagulans), ukázaly, že izolovaný kmen je originální a lze jej doporučit jako produkční při získávání nového probiotického léku.

Z hlediska fyziologických a biochemických vlastností má tedy kmen B. subtilis 1719 jasně rozlišitelné individuální charakteristiky, které jsou obsaženy v kultivačním pasu při uložení do sbírky kultur GISC pojmenované po něm. J.I.A. Tarasevič. Dominantní postavení izolovaného kmene B. subtilis 1719 z hlediska antagonistické aktivity navíc ukazuje na vyhlídky využití této kultury pro vývoj probiotického přípravku na jejím základě.

Seznam odkazů pro výzkum disertační práce Kandidát biologických věd Gataullin, Airat Gafuanovich, 2005

1. Ashmarin I.P., Vorobyov A.A. Statistické metody v mikrobiologickém výzkumu. Medizd, 1962, 180 s.

2. Baibakov V.I., Karikh T.L., Borukaeva L.A. a další Normalizace střevní mikroflóry a celkového stavu myší JCR pod vlivem koncentrátu bifidobakterií.//Antibiotika a chemoterapie. 1997. - T. 42, č. 3. - S. 20-24.

3. Baida G.E., Budarina Zh.I. Primární struktura a analýza genu hemolyzinu II Bacillus cereus// 2 Otevřít hory vědecký conf. oni říkají Vědci v Pushchino, 23.–25. dubna. 1997: Abstrakt. zpráva Pushchino. - 1997 - s. 45-46.

4. Baida G.E., Kuzmin N.P. Gen HLY-III Bacillus cereus, klonovaný do Escherichia coli, kóduje nový hemolysin tvořící póry Int. conf. oddaný na památku akademika A.A. Baeva: Abstrakty zpráv, Moskva, 20. až 22. května 1996. M. - 1996. - S. 108, 291.

5. Baranovský A.Yu., Kondrashina E.A. Dysbakterióza a střevní dysbióza // Petrohrad. "Petr". -2000. -209 str.

6. Bakhanova E.M., Nikolaev S.M., Nikolaeva I.G., a kol. zdroje. 2001. T. 37, č.p. 1. s. 70-76. Vliv extraktu z výhonků Pentaphylloides fruticosa na průběh experimentální střevní dysbiózy způsobené sulfadimethoxinem a isoniazidem

7. Belyavskaya V.A., Sorokulova I.B., Iljičev A.A. Perspektivy návrhu imunopreparátů na bázi rekombinantních bacilů // Nové směry biotechnologie: Proc. doc. YI Conf. RF, 24.-26. května 1994. Pushchino. -1994.-S. 68.

8. Belyavskaya V.A., Sorokulova I.B., Masycheva V.A. Rekombinantní probiotika: problémy a vyhlídky pro použití v medicíně a veterinární medicíně // Dysbakterióza a eubiotika: Abstrakty All-Russian Scientific and Practical Conf. M. - 1996. - S. 7.

9. Belyavskaya V.A., Cherdyntseva N.V., Bondarenko V.M., et al rekombinantní bakterie probiotického léku Subalin. Časopis microbiol., 2003, č. 2, s. 102-109.

10. Beljajev E.I. Způsoby, jak zlepšit léky, které normalizují střevní mikroflóru / Rep. sborník vědeckých prací: „Lidská autoflóra za normálních a patologických podmínek. Hořký. - 1988. - S. 74-78.

11. Bilibin A.F. // Ter. oblouk. -1967. č. 11. - str. 21-28.

12. Bilibin A.F. // Klin. Lék. 1970. - č. 2. - S. 7-12.

13. Birger M.O. Příručka mikrobiologických a virologických vyšetřovacích metod. Stanovení citlivosti mikroorganismů na antibiotika. M.: Medicína, 1982. - S. 180.

14. Blinková L.P., Semenov S.A., Butová L.G. atd. Antagonistická činnost čerstvě izolovaný kmeny bakterií rodu Bacillus // ZhMEI. 1994. -N5.-S. 71-72.

15. Bojko N.V., Turyanitsa A.I., Popovich E.P., Vyunitskaya V.A. Antagonistický účinek kultur Bacillus subtilis na bakterie rodu Klebsiella / Microbiol. a. 1989. - T. 51, N 1. - S. 87-91.

16. Bojko N.V., Lisetska M.V. Rozrobka probutiyuv vib1rkovostn: Protiskle-romna efektivshst dyakikh kmeny V. subtilis // Nauk. Vyun. Užgor. un-tu. Ser. Býk. 1997. - N 4. - S. 194-198.

17. Bondarenko V.M., Petrovská V.G. Rané fáze vývoje infekční proces a dvojí role normální mikroflóry // Bulletin Ruské akademie lékařských věd. -M.- 1997.-N3.-C. 7-10.

18. Bondarenko V.M., Chuprinina R.P., Aladysheva Zh.I., Matsulevich T.V. Probiotika a mechanismy jejich terapeutického působení // Experiment. a klín, gastroenterol. 2004. č. 3. S. 83-87.

19. Bochkareva N.G., Belogortsev Yu.A., Udalova E.V. a další Bakteriální kmen Bacillus subtilis je producentem komplexu hydrolytických enzymů obohacených o b-glukanázu // Pat. N 2046141 Rusko, C12 N 9/42, Publ. 20.10.95. - Býk. N 29.

20. Brilis V.I. Adhezivní vlastnosti laktobacilů // Abstrakt. dis. Ph.D. Miláček. Sci. Tartu. -1990. - 25 s

21. Brilis V.I., Briline T.A., Lenzner H.P., Lenzner A.A. Adhezivní a hemaglutinační vlastnosti laktobacilů. Časopis Microbiol., 1982, 9: 7578.

22. Vasilyeva V.L., Tatskaya V.N., Reznik S.R. Zkušenosti s používáním rostlinných a mikrobiálních adjuvans při získávání tekutin imunitního ascitu u laboratorních zvířat // Mzrobyul. časopis 1974. T. 36, N 3. - S. 358-360.

23. Vershigora A.E. Základy imunologie // Kyjev: škola Vishcha. 1975. - 319 s.

24. Vinnik Yu.S., Peryanova O.P., Yakimov S.V. et al., Metoda léčby hnisavých ran pomocí antagonistů / Mezinárodní časopis o imunorehabilitaci. 1998. - N 4., str. 143.

25. Vinogradov E.Ya., Shichkina V.P. Bakteriální kmen B. mucilaginosus jako producent biostimulátoru nespecifické imunity u telat // A.S. 1210452, SSSR -1/00. Publ. 27.04.96. - Býk. N 12.

26. Vladimirov Yu.A., Sherstnev M.P. Výsledky vědy a techniky: Biofyzika 1989; 24:172.

27. Vorobyov A.A., Abramov N.A., Bondarenko V.M., Shenderov B.A. Dysbakterióza je naléhavým problémem v medicíně // Bulletin Akademie lékařských věd. -1997. - č. 3. -S.3-9.

28. Vorobyov A.A., Nesvizhsky Yu.V., Zudenkova A.E., Budanova E.V. Srovnávací studie parietální a luminální mikroflóry tlustého střeva v experimentech na myších. Časopis microbiol., 2001, 1: 62-67.

29. Vorobyov A.A., Nesvizhsky Yu.V., Lipnitsky E.M. a další Studium parietální mikroflóry lidského střeva. Časopis microbiol., 2003, 1: 6063.

30. Vyunitskaya V.A., Boyko N.V., Spivak N.Ya., Ganova L.A./ Některé mechanismy působení nových mikrobiotik // Mikrobiologické a biotechnologické základy intenzifikace rostlinné výroby a výroby krmiv: Sborník abstraktů Alma-Ata, 1990. - P 17.

31. Galajev Yu.V. Patogenní enzymy bakterií // M.: Medicína. 1968. - 115 s.

32. Goncharova G.I., Semenova A.P., Lyannaya A.M., et al. -1988.-S.118—123

33. Gorskaya E.M. Mechanismy rozvoje mikroekologických poruch ve střevech a nové přístupy k jejich nápravě.//Dizertační práce ve formě vědecké

34. Gracheva N.M., Goncharova G.I. a další Využití bakteriálních biologických přípravků v praxi léčby pacientů se střevními infekcemi. Diagnostika a léčba střevní dysbiózy. Směrnice. 1986, str. 23

35. Gracheva N.M., Gavrilov A.F., Avakov A.A. atd. - Nové léky. 1994, č. 1, s. 3-12

36. Gracheva N.M., Gavrilov A.F., Solovyova A.I. a další Účinnost nového bakteriálního léku biosporin v léčbě akutních střevních infekcí // Journal. microbiol. 1996. - N 1. - S. 75-77.

37. Grebneva A.J1., Myagkova L.P. Střevní dysbakterióza // Průvodce gastroenterologií ve 3 svazcích M., 1996. -T.Z. -S.324-334

38. Grigorieva T.M., Kuzněcovová N.I., Shagov E.M. Kmen Bacillus thuringiensis 4KN, syntetizující exotoxin se specifickou aktivitou proti mandelince bramborové // Biotechnologie. 1994. - N 9-10. - S. 7-10.

39. Gulko M.A., Kazarinova JI.A., Pozdnyakova T.M. Způsob výroby inosinu // Pat. N 175583, C12P 19/32. Publ. 30.08.94. - Býk. N 16.

40. Demyanov A.V., Kotov A.Yu., Simbirtsev A.S., Diagnostická hodnota studia hladin cytokinů v klinické praxi. Journal of Cytokines and Inflammation, 2003, sv. 2, č. 3, s. 20-35

41. Egorov N.S., Zarubina A.P., Vybornykh S.N., Landau N.S. Syntetické * médium pro pěstování bakterií rodu Bacillus // Bulletin Moskevské státní univerzity. 1989. N 4.1. str. 52.

42. Ermakova L.M., Smirnova T.A., Alikhanyan S.I. et al., Krystalové inkluze v mutantě Bacillus subtilis se změněným spektrem proteináz // Dokl. Akademie věd SSSR. 1977. - T. 236, N 4. - S. 1001-1003.

43. Žirkov I.N., Bratuchin I.I. Použití probiotika RAS ke korekci dysbakteriózy u telat // Veterinární lékařství. 1999. N 4. - s. 40-42.

44. Zgonnik V.V., Furtat I.M., Vasilevskaya I.A. atd. Antagonistické vlastnosti tvorba spor bakterie kontaminující proces výroby lysinu // Microbiol. a. 1993. -T.55, N4. - str. 53-58.

45. Zinkin V.Yu. Fotometrický NBT test s lidskými krevními neutrofily a jeho klinický a imunologický význam u pacientů s muskuloskeletálním traumatem. Autorský abstrakt. dis. Ph.D. Miláček. vědy - Moskva, 2004.

46. ​​​​Zudenkov A.E. Mikroflóra a složení imunokompetentních buněk parietálního mucinu tlustého střeva jsou normální av některých případech patologické stavy. Autorský abstrakt. dis. Ph.D. Miláček. Sciences, Moskva, 2001.

47. Ivanovsky A.A., Nový probiotický bactocellolactin pro různé patologie u zvířat // Veterinární lékařství. 1996 - N11. - str. 34-35.

48. Ivanovsky A.A., Vepreva N.S., Zimireva V.V., Lagunova O.P. Způsob výroby probiotik pro veterinární medicínu / RU Patent N 2084233, publ. 20.07.97. Býk. N 20.

49. Kandybin N.V., Ermolova V.P., Smirnov O.V. Výsledky a vyhlídky pro použití bakterokulicidu // Sovrem. úspěch biotechnologie: Mater. 1 Konf. Severní Kavkaz kraj, Stavropol, září. 1995. Stavropol. - 1995. - s. 14-15.

50. Kashirskaya N.Yu. Význam probiotik a prebiotik v regulaci střevní mikroflóry.//Russian Medical Journal. 2000. - T. 8, č. 13-14. - s. 572-575.

51. Kovalchuk L.V., Gankovskaya L.V., Rubakova E.I. Cytokinový systém. M., 2000.

52. Kozačko I.A., Vyunitskaya V.A., Berezhnizkaya T.G. a další Bakterie rodu 4 Bacillus jsou slibnými plodinami pro vytvoření biologických prostředků ochrany rostlin před chorobami. a. - 1995.- T.57, N 5. - S. 69-78.

53. Krasnogolovec V.N. Střevní dysbióza. M., 1979. -198 s.

54. Kudryavtsev V.A., Safronova J.I.A., Osadchaya A.I. a další Vliv živých kultur Bacillus subtilis na nespecifickou odolnost organismu // Microbiol. a. 1996 - T.58, N 2. - S. 46-53.

55. Kuznetsova N.I., Smirnova T.A., Shamshina T.N. a další Kmen Bacillus thuringiensis, toxický pro mouchy domácí // Biotechnologie. 1995. -N3-4.-S. 11-14.

56. Lapchinskaya A.V., Shenderov B.A. Korekce dysbakteriózy způsobené cefalexinem a některými imunomodulátory.//Lékařské aspekty mikrobiální ekologie. M., 1991. -S.70-79

57. Lenzner A.A., Lenzner H.T., Michelsaar M.E. a kol. Laktoflóra a odolnost vůči kolonizaci.//Antibiotika a med. biotechnologie. -1987. -32. -Ne 3. -S. 173-180.

58. Leščenko V.M. Klinika, diagnostika a léčba viscerální kandidózy. Směrnice. M., 19871.

59. Lisetská M.V. Experimentální studie antagonistické aktivity Bacillus subtilis kmen1b a Klebsiella rhinoscleromatis // Nauk. Vyun. Užgor. un-tu. Ser. Býk. 1997. - N 4. - S. 207-212

60. Lopatina T.K. a kol. Imunomodulační účinek eubiotických léků* // Bulletin Ruské akademie lékařských věd. M., "Medicína". -1997. č. 3. -S.30-34

61. Lukin A.A. Tvorba antibiotik a sporulace v plasmidových a bezplasmidových mikroorganismech // Pushchino. 1978. - s. 25-28.

62. Mazánková JI.H., Michajlova N.A., Kurochtina I.S. a další Bactisporin je nové probiotikum pro léčbu akutních střevních infekcí u dětí // Man and Medicine: Proc. zpráva V. Ruský národní kongres, Moskva, 8.–12. dubna 1997. - M. - S. 199.

63. Mazánková L.N., Vaulina O.V. Nové léky pro korekci dysbiotických poruch.//Dětský lékař. 2000. č. 3. - str. 51-53.

64. Maniatis T., French E., Sambrook J. Metody genetického inženýrství. Molekulární klonování, 1984.

65. Markov I.I., Zhdanov I.P., Markov A.I. Kmen Bacillus subtilis MZh-6 antagonista Mycobacterium tuberculosis // Pat. N 2120992, C 12N 1/20. - Publ. 27.10.98.-Bul.N30.

68. Mikshis N.I., Shevchenko O.V., Eremin S.A. et al., Populační heterogenita kmenů Bacillus anthracis II Dep. ve VINITI 06/04/98. Saratov. -1998.-7 str.

69. Mitrochin S.D. // Antibiotika a chemoterapie. 1991. - č. 8. - S.46 - 50.

70. Mitrochin S.D. Metabolity normální lidské mikroflóry v expresní diagnostice a monitorování léčby dysbiózy tlustého střeva: Abstrakt práce. Dr. med. Sciences, M., 1998. 37 s.

71. Mitrochin S.D., Ardatskaya M.D., Nikushkin E.V., Ivanikov I.O. a další - M., 1997. 45 s. Komplexní diagnostika, léčba a prevence střevní dysbakteriózy (dysbiózy) na klinice interních nemocí (Směrnice).

72. Mitrokhin S.D., Shenderov B.A. Mikrobiologické a biochemické ukazatele změn v mikrobiální ekologii tlustého střeva potkanů ​​pod vlivem rifampicinu. Antibiotika a chemoterapie - 1999, T. 34 č. 6 (482-4).

73. Molčanov O.JL, Poznyak A.JI. Využití biosporinu v komplexní terapii bakteriální vaginózy // Proc. zpráva: Moderní technologie diagnostika a terapie infekčních onemocnění. St. P. - 1999, str. 187.

74. Muzychenko JI.A., Senatorova V.N., Alkhovskaya JI.JI. a další Morfometrická analýza vývoje mikroorganismů / Biotechnologie. 1990. - N 3. - S. 3-6.

75. Müller G., Litz P., Munch G. Mikrobiologie potravinářských produktů rostlinného původu// M.: B.I..- 1977.- S.343 347

76. Nikitenko V.I. Bakteriální lék pro prevenci a léčbu zánětu. procesy spalování a alergických onemocnění// Mezinárodní přihláška. N 89/09607, WO, publ. 19. 10. 1989.

77. Nikitenko V.I. Místo léků bakterie // Věda v SSSR. - 1991. - N 4. -S. 116-121.

78. Nikitenko V.I. Kmen bakterií Bacillus subtilis používaný k získání mléčného výrobku určeného k léčbě diatézy, dysbakteriózy a bakteriálních infekcí // A.S. N 1648975, S.U. zveřejněno 15.05. 91.

79. Nikitenko V.I., Nikitenko I.K. Kmen bakterií Bacillus pulvifaciens používaný k výrobě terapeutického a profylaktického léku proti bakteriálním infekcím u zvířat // A.S. N 1723117, S.U. publ. 12. 1992.

80. Nikitenko V.I., Nikitenko I.K. Kmen bakterií Bacillus subtilis používaný k získání léku pro prevenci a léčbu protizánětlivých procesů a alergických onemocnění // A.S. N 1723116, S.U. publ. 12. 1992.

81. Nikitenko L.I., Nikitenko V.I. Bakteriální kmen Bacillus sp. složka terapeutického a profylaktického léku proti dysbakterióze a alergiím // A.S. N 1710575, S.U. - publ. 5. 1992.

82. Nikitenko V.I., Gorbunova N.N., Zhigailov A.V. Sporobactern je nový lék na léčbu dysbakteriózy a hnisavých zánětlivých procesů // Dysbakterióza a eubiotika: Abstrakty zpráv All-Russian. vědecko-praktické conf. -M.- 1996.-S. 26.

83. Nikolicheva T.A., Tarakanov B.V., Golinkevich E.K., Komkova E.E. Změny v biocenóze trávicího traktu selat při zařazení Bacillus micilaginosis do stravy // Bulletin. Všeruský výzkumný ústav fyziol., biochemie a výživy hospodářských zvířat. 1989.-N 2. - str. 31-35.

84. Obukhova O.V., Soboleva N.N. O přítomnosti distribučního faktoru v kulturách saprofytických spórových bakterií // Journal. microbiol. 1950. - N 12. S. 482-485.

85. Stanovení citlivosti mikroorganismů na antibakteriální léčiva. Metodická doporučení MUK 4.2.1980-04,2004.

86. Osadchaya A.I., Kudryavtsev V.A., Safronova JI.A. Vliv střední kyselosti a teploty na růst a vylučování polysacharidů Bacillus subtilis v hloubce pěstování// Misrobyul. časopis 1998. - T. 60., N 4. - S. 25-32.

87. Osipová I.G. Některé aspekty mechanismu ochranného působení kolibakterinu a sporových eubiotik a nové metody jejich kontroly // Autorův abstrakt. kandidát disertační práce biologických věd - M., 1997. - 25 s.

88. Osipová I.G., Sorokulová I.B., Tereshkina N.V., Grigorieva JI.B. Studium bezpečnosti bakterií rodu Bacillus, které tvoří základ některých probiotik // Journal. microbiol. 1998. - N 6. - S. 68-70.

89. Osipova I.G., Mikhailova N.A., Sorokulová I.G., Vasilyeva E.A., Gaiderov A.A. Spore probiotika. Časopis microbiol. - 2003. č. 3. S. 113-119.

90. Osterman L.D. Metody studia proteinů a nukleových kyselin. 1981.

91. Panin A.N., Serykh N.I., Malik E.V. a další Zvyšování účinnosti probiotické terapie u selat / Veterinářství, 1996. - N 3. - S. 17.

92. Panchishina M.V., Oleinik S.F. Střevní dysbióza. Kyjev, 1983

93. Parshina S.N., Imshenetsky A.A., Nesterova N.G. a další Bakteriální kmen Bacillus segesh je výrobcem proteolytických enzymů s trombolytickými účinky // A. C. N 1615177, C 12N 1/20 - Bulletin N 4. 1988.

94. Základy Perth S.D pěstování mikroorganismy a buňky. M. Mir, 1978, 332 s.

95. Petrov L.N., Verbitskaya N.B., Vakhitov T.Ya. Návrh léků pro léčbu a prevenci dysbiózy na základě představ o lidské endoekologii // Rus. a. HIV/AIDS a související problém 1997.- T. 1, N 1. P. 161-162.

96. Petrovská V.G., Marko O.P. Lidská mikroflóra za normálních a patologických stavů. M.: Medicína. -1976. -217 C.

97. Poberiy I.A., Kharechko A.T., Sadovoy N.V., Litusov N.V. Nový komplexní eubiotický „biosporin“ pro děti a dospělé / Healthcare of Bashkortostan. 1998. -N 1. - S. 97-99.

98. Pogosyan G.P., Nadirova A.B., Kalijev A.B., Karabaev M.K. Plazmid pCLl a antimikrobiální aktivita Bacillus sp. 62 II Molekulární genetika, mikrobiol. a virologie. 1999. - N 1. - S. 37-38.

99. Podberezný V.V., Pařík V.A. Médium pro kultivaci symbiontních bakterií Bacillus pulvifaciens nebo Bacillus subtilis - výrobce probiotik // RU patent č. 2100029, nakl. 27. 12. 97. Bulletin č. 36.

100. Podberezny V.V., Polyantsev N.I., Ropaeva L.V. Pěstování produkční kmeny Bacillus subtilis v syrovátce // Veterinářství - 1996.-N 1.-S. 21-29.

101. Podoprigora G.I. Imunitní a nespecifické mechanismy kolonizační rezistence.//Antibiotika a kolonizační rezistence/Hromady Všeruského výzkumného ústavu antibiotik - M. -1990. - vydání X1X. -S. 15-25.

102. Polkhovsky V.A., Bulanov P.A. O dekarboxylázy aminokyseliny v Bacillus cereus //Mikrobiologie. 1968. - T. 37, N 4. - S. 600-604.

103. Pospelova V.V., Gracheva N.M., Antonova L.V. et al. -1990. -sv. 5. - str. 1-8.

104. Pospelová V.V., Rakhimova N.G., Khaleneva M.P. a další Nové oblasti aplikace mikrobiálních biologických přípravků pro korekci bakteriocenózy lidského těla.//Immunobiol. drogy. M. -1989. -S. 142-152.

105. Řezník S.R. Metoda pro léčbu a prevenci virových a bakteriálních onemocnění zvířat // SU, A.s. N 1311243, publ. 1982.

106. Reznik S.R., Sorokulova I.B., Vyunitskaya V.A. a další Preventivní biologický přípravek sporolakt // Patent N 2035186. RU. - A 61 K 35/66, nakl. 05/20/95, bulletin. N 14.

107. Řezník S.R., Shust I.I. Hematologické a cytochemické parametry telat při podávání léku Bacteria-SL // Biochemie zemědělských zvířat a potravinářský program: Proc. zpráva All-Unie symposium -Kyjev, 1989. S. 25.

108. Reshedko G.K., Stetsyuk O.U. Vlastnosti stanovení citlivosti mikroorganismů metodou diskové difúze. Moderní metody klinická mikrobiologie, číslo 1. Smolensk, 2003.

109. Ryapis JI.A., Lipnitsky A.V. Mikrobiologické a populačně genetické aspekty bakteriální patogenity // Journal. microbiol. 1998. - N 6. S. 109-112.

110. Savitskaya K.I. Poruchy mikroekologie gastrointestinálního traktu a chronická střevní onemocnění // Terra medica. - 1998. N 2. - s. 13-15.

111. Svechnikova E.B., Maksyutova L.F., Khunafin S.N. et al., Zkušenosti s použitím bactisporinu v komplexní léčbě dětí s tepelným poraněním // Proc. Dokl: Moderní technologie pro diagnostiku a terapii infekčních onemocnění. St. P. - 1999 - S. 268.

112. Sinev M.A., Budarina Zh.I., Gavrilenko I.V. et al., Důkaz existence hemolyzinu II Bacillus cereus: klonování genetického determinantu hemolyzinu II // Molek. biol. 1993. - T. 27, N 6. - S. 1218-1229.

113. Slabospitskaya A.T., Krymovskaya S.S., Reznik S.R. Enzymatická aktivita bacilů, které jsou slibné pro zahrnutí do biologických produktů // Microbiol. a. 1990. - N2. - S. 9-14.

114. Smirnov V.V., Reznik S.R., Vasilevskaya I.A. Tvorba spór aerobní bakterie jsou producenty biologicky aktivních látek. - Kyjev, 1982 - 280 s.

115. Smirnov V.V. Metodická doporučení pro izolaci a identifikaci bakterií rodu Bacillus z lidského těla a zvířat // Kyjev, 1983. -49 s.

116. Smirnov V.V., Reznik S.R., Vasilevskaya I.A. Spórotvorné aerobní bakterie - producenti biologicky aktivních látek // Kyjev. Naukova duma.- 1983.- 278 s.

117. Smirnov V.V., Řezník S.R., Sorokulová I.B. a další O některých mechanismech výskytu asymptomatické bakteriémie // Microbiol. časopis 1988 -T. 50, N6.-S. 56-59.

118. Smirnov V.V., Řezník S.R., Sorokulová I.B. a další Metoda léčby purulentně-septických poporodních onemocnění suspenzí živých kultur // A. p. N 1398868 S.U. - A 61 K 35/74. - publ. 30.05.88, bulletin. N 20.

119. Smirnov V.V., Řezník S.R., Sorokulová I.B. a další Lék biosporin pro prevenci a léčbu lidských gastrointestinálních onemocnění // A. p. N 1722502. S.U. - A 61 K. 39/02, nakl. 30.03.92.

120. Smirnov V.V., Reznik S.R., Sorokulova I.B., Vyunitskaya V.A. Kontroverzní otázky tvorby a použití bakteriálních přípravků pro korekci mikroflóry teplokrevných živočichů // Microbiol. časopis 1992. - T.54, N 6.- S. 82-92.

121. Smirnov V.V., Reznik S.R., Vyunitskaya V.A., et al. Moderní představy o mechanismech terapeutického a profylaktického působení probiotik z bakterií rodu Bacillus II Microbiol. časopis - 1993. - 55, - č. 4. S. 92—112

122. Smirnov V.V., Osadchaya A.I., Kudryavtsev V.A., Safronova JI.A. Růst a sporulaci Bacillus subtilis za různých podmínek provzdušňování // Microbiol. časopis 1993. - T. 55, N 3. - S. 38-44.

123. Smirnov V.V., Řezník S.R., Sorokulová I.B. a další Preventivní biologický přípravek subalin // Patent N 2035185, RU. A 61 K 35/66, nakl. 05/20/95, bulletin. N 14.

124. Smirnov V.V., Sorokulová I.B., Osipová I.G. Biologický produkt subtikol pro prevenci a léčbu infekčních onemocnění // Patent N 2129432. -A. 61 K 35/74. - Býk. N 12, publ. 27.04.99.

125. Smirnov V.V., Reva O.N., Vyunitskaya V.A. Vytvoření a praktická aplikace matematického modelu antagonistického působení bacilů při návrhu probiotik // Mshrobyulopchnyi zhurn. 1995. -T. 64, N 5. -S. 661-667.

126. Smirnov V.V., Kosyuk I.V. Adhezivní vlastnosti bakterií rodu Bacillus - složky drobiotic // Mshrobyulopchnyi zhurnal. 1997. - T. 69, N 6. - S. 36-43.

127. Sorokulová I.B. Perspektivy využití bakterií rodu Bacillus pro návrh nových biologických produktů // Antibiotika a chemoterapie. -1996. T.41, N 10. - s. 13-15.

128. Sorokulová I.B. Srovnávací studie biologických vlastností biosporinu a dalších komerčních přípravků na bázi bacilu // časopis Mshrobyu-lopchny. 1997. - T. 69, N 6. - S. 43-49.

129. Sorokulová I.B. Vliv probiotik z bacilů na funkční aktivitu makrofágů / Antibiotika a chemoterapie. 1998. - T. 43, N 2. - S. 20-23.

130. Storozhuk P.G., Bykov I.M., Storozhuk A.P. Patogenetická orientace proteinové výživy a enzymatické substituční terapie u imunodeficitních stavů těla // Mezinárodní časopis o imunorehabilitaci. 1998. - N 10., s. 110-115.

131. Tabolin V.A., Belmer S.V., Gasilina T.V. atd. Racionální terapie střevní dysbióza u dětí. Směrnice. M., 1998. -11 s.

132. Topchy M.P. Použití léků z živých kultur Bacillus subtilis pro dysbakteriózu telat: Abstrakt práce. dis. Ph.D. biol. Sci. Minsk, 1997. -21 s.

133. Trishina N.V. Vztah mezi rozvojem střevní dysbiózy a stavem antiendotoxinové imunity. Autorský abstrakt. dis. Ph.D. Miláček. Sci. -Moskva, 2003., 24 s.

134. Učitel I.Ya. Makrofágy v imunitním systému. M 1978; 175.).

135. Fazylová A.A. Klinické a imunologické zdůvodnění použití sporobacterinu a bactisporinu pro střevní dysbiózu u malých dětí // Autor. umět. dis. Ufa. - 1998. - 24 s.

136. Harwood K. Bacillus. Genetika a biotechnologie. M., 1992. - S. 52.

137. Kharchenko S.N., Reznik S.R., Litvin V.P. Metoda boje proti plísni krmiva // A.S. N 751382, SSSR, publ. v B.I., 1980, č. 28.

138. Khmel I.A., Chernin L.S., Levanova N.B. a další Kmen bakterií Bacillus pumilus pro získání léku proti fytopatogenním mikroorganismům // Patenty 1817875 Rusko F01N 63/00, C12N 1/20. publ. 05.20.95. - Býk. N 14.

139. Chernyakova V.I., Bereza N.M., Selezneva S.I. Bakteriologická a imunologická účinnost léku biosporin u nespecifické ulcerózní kolitidy // Mikrobiol.zh. 1993. - T. 55, N 3. - S. 63-67.

140. Chkhaidze I.G., V.G. Likhoded, et al. Korektivní účinek protilátek při experimentální dysbakterióze // Journal. Microbiol. 1998, č. 4: 12-14.

141. Sharp R., Scaven M., Atkinson T. Bacillus: Genetika a biotechnologie. -M. 1992. - 398 s.

142. Sheveleva S.A. Probiotika, prebiotika a probiotické produkty. Aktuální stav problematiky // Problematika výživy. -1999. -T.68. -Ne 2. -S.32

143. Shenderov B. A. Lékařská mikrobiální ekologie a funkční výživa.-M., 1998, T. I, P. 287.

144. Shenderov B.A. Kolonizační rezistence a chemoterapeutická a antibakteriální léčiva // Antibiotika a kolonizační rezistence: Sborník Všeruského výzkumného ústavu antibiotik. M. -1990. - vydání X1X. -S.5-16.

145. Shenderov B.A., Manvelova M.A., Stepanchuk Yu.B., Skiba N.E. Probiotika a funkční výživa // Antibiotika a chemoterapie. 1997. - T. 42, N 7. - S. 30-34.

146. Shenderov B.A. Lékařská mikrobiální ekologie a funkční výživa.-M., 1998, T. II, P. 413.

147. Yampolskaya T.A., Velikzhanina G.A., Zhdanova N.I. atd. Bakteriální kmen Bacillus subtilis produkující L-fenylalanin: A.s. N 1693056, C 12 R 13/22, publ. 23.11.91. Býk. N 43.

148. Adami A., Sandrucci A., Cavazzoni V. Selata krmená od narození probiotickým Bacillus coagulans jako aditivem: Zootechnické a mikrobiologické aspekty // Ann. microbiol. ed enzimol. 1997. - V. 47, N 1. - S. 139-149.

149. Azuma I., Sugimura C., Iton S. Adjuvantní aktivita bakteriálních glykolipidů // Jap. J. Microbiol. 1977. - V. 20, N 5. - S. 465-468.

150. Benedettini J. a kol. Imunomodulace sporami Bacillus subtilis // Boll. 1., Sierote Milán. 1983.-V. 62.,N6.-P. 509-516.

151. Berkel H., Hadlok R. Lecithinase-und Toxinbildung durch Stamme der Gat-tung Bacillus // Lebensmittelhygiene. 1976. - V. 27, N 2. - Str. 63-65.

152. Bernheimer A., ​​​​Avigad L. Povaha a vlastnosti cytolytického činidla produkovaného Bacillus subtilis // J. Gen. Microb. - 1970. V. 61, N 2. - S. 361-369.

153. Blažnic J, Kumel I.M., Salamum B. et al. Sdravljenje kronicne granulomotozne bolezni z acidofilnem mlecom // Zdrav.Vesth. 1976. N 45. - S. 77-79.

154. Boer A.S., Priest F., Diderichsen B. O průmyslovém využití Bacillus licheniformis: Přehled // Appl. Microbiol a Biotechnol. 1994. - V. 40, N 5. - S. 595-598.

155. Buchell M.E., Smith J., Lynch H.C. Fyziologický model pro kontrolu produkce erythromycinu ve vsádkové a cyklické vsázkové kultuře // Mikrobiologie. -1997. V. 143, N 2. - S. 475-480.

156. Cipradi G. a kol. Účinky doplňkové léčby s Bacillus subtilis pro potravinovou alergii // Chemioterapie. -1986. 5, N6. -S.408-410

157. Cromwick A.M., Birrer G.A., Gross R.A. Účinky pH a provzdušňování na tvorbu y-poly (kyseliny glutamové) bakterií Bacillus licheniformis v kulturách řízených vsádkových fermentorů // Biotechnol. a Bioeng. 1996. - V. 50, N 2. - S. 222-227.

158. Danchin A., Glasser P., Kunst F. a kol. Bacillus subtilis devoile ses geny // Biofutur. 1998. - N 174. - S. 14-17.

159. Děvín K.M. Projekt genomu Bacillus subtilis: Cíle a pokrok // Trends Biotechnol. 1995. - V. 13, N 6. - S. 210-216.

160. Donovan W.P., Rupar M.J., Slanei A.C. Bacillus thuringiensis krytický, protein toxický pro hmyz z čeledi Coleoptera // Patent N 5378625 USA A61K 31/00. Publ. 01/03/95.

161. Dubos R. Toxické faktory v enzymech používaných v pracích prostředcích // Věda. 1971. - N 3993. - S. 259-260.

162. Edlund C., Nord C.E. Vliv chinolonů na střevní ekologii. Drugs, 1998, 58(2): 65-70.

163. Flindt M. Pulmonare nemoc způsobená inhalací derivátů Bacillus subtilis obsahujících proteolytický enzym // Lancet - 1969. V. 1, N 7607. - S. 1177-1181.

164. Fox M. Fylogeneze prokaryot // Věda. -1980. V. 209, N 4455. S. 457-463.

165. Fuller R. J Appl Bacteriol 1989; 66:5:365-378.

166. Gastro G.R., Ferrero M.A., Abate C.M. a kol. Simultánní produkce alfa a beta amyláz Bacillus subtilis Mir-5 ve vsádkové a kontinuální kultuře // Biotechnol. Lett. 1992. - V. 14, N 1. - S. 49-54.

167. Glatz B.A., Spira W.M., Goepfert J.M. Změna vaskulární permeability u králíků kultivačními filtráty Bacillus cereus a příbuzných druhů // Infect, and Immunol. 1974. V. 10, N 2. - S. 299-303.

168. Guida V., Guida R. Importansia dos Bacillos esporulados aerobios em gastroenterologia e nutricao // Rev. Brazílie. med. 1978. - V. 35, N 12. - S. 702707.

169. Haenel H., Bending J. Střevní flóra ve zdraví a nemoci // Progr. Jídlo a výživa sci.- 1975.-V. 21, N l.-P. 64.

170. Himanen J.-P., Pyhala L., Olander R.-M. a kol. Biologické aktivity kyseliny lipo-teichoové a peptidoglykanové kyseliny teichoové Bacillus subtilis 168 // J. Gen. Microbiol. - 1993.-V. 139,N 11.-P. 2659-2665.

171. Hirano Y., Matsudo M., Kameyama T. Dvourozměrná elektroforéza na polyakrylamidovém gelu proteinů syntetizovaných během časného klíčení Bacillus subtilis 168 v přítomnosti aktinomycinu D // J. Basic Microbiol. 1991. - V. 31, N 6. - S. 429-436.

172. Humbert Florence Les probiotigues: un sujet d" Actualite // Bull. inf. Stat. exp. auicult. Ploufragan. 1988. - V. 28, N 3. - S. 128-130.

173. Inouye S., Kondo S. Amicoumacin a SF-2370, farmakologicky aktivní látky mikrobiolového původu // Novel Microbial Prod. Med. a Agr. Amsterdam. -1989.-P. 179-193.

174. Johnson S. E. Letální toxin Bacillus cereus 1. Vztahy a povaha toxinu, hemolyzinu a fosfolipázy // J. Bacterid. 1967. V. 94, N 2. - S. 306316.

175. Kakinuma A., Hori M., Isono M. Stanovení mastné kyseliny v surfactinu a objasnění celkové struktury surfactinu // Agric. a Biol. Chem. 1969. - V. 33. - S. 973-976.

176. Kaneko J., Matsushima H. ​​​​Struktura podobná krystalu ve sporulačních buňkách Bacillus subtilis 168 // J. Electron. Microsc. - 1973. V. 22, N 2. - S. 217-219.

177. Kaneko J., Matsushima H. ​​​​Krystalické inkluze ve sporulujících buňkách Bacillus subtilis // In: Spores YI. Vybrat. Pap. 6th Int. Spore Conf. Washington. - 1975. -P. 580-585.

178. Kitazawa H, Nomura M, Itoh T. J Dairy Sci 1991; 74:7:2082 2088.

179. Kubo Kazuhiro. Čistá kultura Bacillus subtilis FERM BP-3418 // Pat. N 5364738. USA. MKI A01N 25//00. - publ. 15. 11. 94.

180. Kudrya V.A., Simoněnko L.A. Izolace alkalické serinové proteinázy a lektinu z kultivační tekutiny Bacillus subtilis // Appl. Microbiol a Biotechnol. -1994.-V. 41,N5.-P. 505-509.

181. Le H., Anagnostopoulos C. Detekce a charakterizace přirozeně se vyskytujících plazmidů // Molec. Gen. Genet. 1977. - V. 157. - S. 167-174.

182. Legakis N.J., Papavassilion J. Tenkovrstvá chromatografická technika pro rychlou detekci bakteriálních fosfolipáz // J. Clin. Microbiol. - 1975. V.2, N 5. - S. 373-376.

183. Leviveld H.L.M., Bachmayer H., Boon B. a kol. Bezpečná biotechnologie. Část 6. Hodnocení bezpečnosti mikroorganismů používaných v biotechnologii z hlediska lidského zdraví // Appl. Microbiol a Biotechnol. 1995. V. 43, N 3. - S. 389-393.

184. Lin S.-C., Carswell K.S., Sharma M.M., Georgiou G. Kontinuální produkce lipopeptidového biosurfaktantu Bacillus licheniformis JF-2 // Appl. Microbiol a Biotechnol. 1994. - V. 41, N 3. - S. 281-285.

185. Lovett P., Bramucci M. Plazmidová DNA v bacilech // In: Microbiology-Washington. 1976. - S. 388-393.

186. Markham R., Wilkie B. Vliv detergentu na alergickou senzibilizaci aerosolu s enzymy z vás. subtilis // Int. Oblouk. Alergie a aplikace Immunol. 1976.-V. 51, N 5. - S. 529-543.

187. Maruta Kiyoshi Vyloučení střevních pahogenů kontinuálním krmením Bacillus subtilis C-3102 a jeho vliv na mikroflóru ve varlatech u brojlerů // Anim. Sci. a Technol. 1996. - V. 67, N 3. - S. 273-280.

188. Moszer I., Glaser P., Danchin A. SubtiList: Relační databáze pro genom Bacillus subtilis // Mikrobiologie. 1995. - V. 141, N 2. - S. 261-268.

189. Murray P.R., Baron E.J., Pfaller M.A., Tenover F.C., Jolken R.H., Manuál klinické mikrobiologie, 7. vydání, Washington D.C., ASM Press, 1999

190. Nozari-Renard J. Induction d 5, OInterferon par Bacillus subtilis // Ann. Microbiol. 1978. - V. 129a. - N 4. - S. 525-542.

191. Oh M.K., Kim B.G., Park S.H. Význam sporových mutant pro fed-batch a kontinuální fermentaci Bacillus subtilis // Biotechnol. a Bioeng. 1995.-V. 47, N 6. - S. 696-702.

192. Payne Jewel M. Isolates of Bacillus thuringiensis Hist jsou aktivní ayanistická háďátka / Patent N 5151363, C12 N 1/20, A 01 N 63/00, appl. 27.07.90, publ. 09.29.92.

193. Pepys J., Hargreave F., Longbotton Y. Alergické reakce plic na enzymy Bacillus subtilis // Lancet. 1969. - V. 1, N 44 - 7607. - S. 1181-1184.

194. Peterson W.L., Mackrowiak Ph.A., Barnett C.C. a kol. Baktericidní bariéra lidského žaludku: Mechanismy účinku, relativní antibakteriální aktivita a dietní vlivy.//J. infekce Nemoci. -1989. -159 č. 5. -str.978-985.

195. Prasad S.S.V., Shethna G.J. Biochemie biologické aktivity proteinového krystalu Bacillus thuringiensis // J. Sci. a Ind. Res. 1976. - V. 35, N 10. - S. 626-632.

196. Rocchietta I. Použití Bacillus subtilis při léčbě nemocí/Minerva Med. -1969. -60. N3/4. -P. 117-123.

197. Rosenthal G.J., Corsini E. // Methods Immunotoxicol. 1995. V 1, P 327-343

198. Rychen G., Simoes Nunes C. Effets des flores lactigues des produits laitiers fermentes: Une base scientifigue pour l "etude des probiotiques microbiens dans l"espece prase // Prod. anim. 1995. - V. 8, N 2. - S. 97-104.

199. Salminen Seppo Klinické aspekty probiotik //Ecol. zdraví a nemoci.-1999.- 11.-N4.-P. 251-252

200. Shore N., Greene R., Kezeni H. Disfuction plic u worcers vystavených Bacillus subtilis // Environm. Res. 1971. - V. 4, N 6. - S. 512-519.

201. Slein M., Logan G., Charakterizace vašich fosfolipáz. cereus a jejich účinky na erytrocyty, kostní a ledvinové buňky // J. Bacteriol. 1965. - V. 90, Nl.-P. 69-81.

202. Somerville H.J. Insekticidní endotoxin Bacillus thuringiensis // In: Sem. etuda téma Prod, natur. et prot. rostlina. 1977. - S. 253-268.

203. Spira W., Goepfert J. Biologické charakteristiky enterotoxinu produkovaného Bacillus cereus // Can. J. Microbiol. 1975. - V. 21, N 8. - S. 1236-1246.

204. Stgard Henri Microbielle v kstfremmer til svin. Teori og prasksis/ Dan veterinaertidsskr. 1989. - V. 72, N 15. - S. 855-864.

205. Su Li, Zhang Zhihong, Xiao Xianzhi, Wang Xiaomin Wuhan daxue xuebao. Zákaz Ziran kexue // J. Wuhan Univ. Natur. Sci. Ed. 1996. - V. 42, N 4. - C. 516518.

206. Sumi H. Fyziologická funkce natto // J. Brew. Soc. jap. 1990. - V. 85, N 8.-P. 518-524.

207. Tihole F. Fizioloski pomer backteriemije z geiunalo microflora // Zdravstv vestn 1982. - V. 51, N 1. P. 3-5.

208. Towalski Z., Rothman H. Enzyme technology //in: The Biotechnological Challenge. Cambridge University Press. Cambridge, 1986 - str. 37 -76.

209. Tsuge Kenji, Ano Takashi, Shoda Makoto. Charakterizace Bacillus subtilis YB8, koproducent lipopeptidů surfaktin a plipastatin B1 //J. Gen. a Appl. Microbiol. 1995.-41, N 6. P. 541-545.

210. Van der Waaij D. Kolonizační odolnost trávicího traktu: mechanismus a klinické důsledky.//Nahrung. -1987. -31 č. 5. -str.507-524.

211. Vollaard E.J., Clasener H.A.L., Janssen J.H.M. Příspěvek Escherichia coli k rezistenci vůči mikrobiální kolonizaci.//.!, Antimikrobiální chemoterapie. -1990.- 26. -str.411-418

Vezměte prosím na vědomí, že výše uvedené vědecké texty jsou zveřejněny pouze pro informační účely a byly získány pomocí rozpoznávání textu původní disertační práce (OCR). Proto mohou obsahovat chyby spojené s nedokonalými rozpoznávacími algoritmy.
V souborech PDF disertačních prací a abstraktů, které dodáváme, takové chyby nejsou.

Dnes je rod Bacillus jedním z nejznámějších a důkladně prostudovaných zástupců rodu bacilů. Většina bakterií rodu Bacillus (včetně B. subtilis) je pro člověka neškodná a široce rozšířená v životním prostředí. Nedostatek patogenity u kmenů B. subtilis a jejich metabolitů nám umožňuje zvážit
jsou nejslibnější jako základ pro novou generaci probiotik. Mezi důležité vlastnosti vlastní B. subtilis je třeba vyzdvihnout schopnost okyselovat prostředí, stejně jako produkovat antibiotika, čímž se snižuje dopad různých oportunních a patogenních mikroorganismů. Produkce antibakteriálních faktorů a různých enzymů B. subtilis se stala základem nové
metabiotický produkt - Bactistatin. Jedná se o biologicky aktivní doplněk stravy skládající se ze tří přírodních složek, které se vzájemně doplňují. Tento produkt kombinuje vlastnosti aktivních metabolitů Bacillus subtilis a enterosorbentu. Článek prezentuje výsledky klinických studií s použitím Baktistatinu u různých gastrointestinálních patologií u dospělých a dětí. Získané údaje ukazují na dobrou účinnost a bezpečnost Baktistatinu.

Klíčová slova: Bacillus subtilis, gastrointestinální trakt, metabiotikum, enterosorbent, Bactistatin.
Pro cenovou nabídku: Plotnikova E.Yu. Účinky aktivních metabolitů Bacillus subtilis v probiotickém produktu nové generace // RMJ. Lékařská revue. 2018. č. 3. s. 39-44

Účinky aktivních metabolitů Bacillus subtilis v probiotickém produktu nové generace
Plotniková E. Yu.

Kemerovská státní lékařská univerzita

V současné době je Bacillus jedním z nejznámějších a pečlivě studovaných zástupců rodu Bacillus. Většina bakterií rodu Bacillus (včetně B. subtilis) není pro člověka nebezpečná a je široce rozšířena v životním prostředí. Vzhledem k absenci patogenity lze kmeny B. subtilis a jejich metabolity považovat za nejslibnější základ pro probiotika nové generace. Mezi důležité vlastnosti B. subtilis patří její schopnost okyselovat prostředí a produkovat antibiotika, což snižuje účinek různých oportunních patogenů a patogenních mikroorganismů. Produkce antibakteriálních faktorů a enzymů Bacillus subtilis se stala základem pro nový metabiotický přípravek - Bactistatin ®. Jedná se o doplněk stravy, který se skládá ze tří přírodních složek, které se vzájemně doplňují. Tento lék kombinuje vlastnosti aktivních metabolitů Bacillus subtilis a enterosorbentu. Článek uvádí výsledky klinických studií použití Bactistatinu ® u různých patologií gastrointestinálního traktu u dospělých a dětí. Získaná data ukazují na dobrou účinnost a bezpečnost Bactistatinu®.

klíčová slova: Bacillus subtilis, gastrointestinální trakt, metabiotikum, enterosorbent, Bactistatin.
Pro citaci: Plotniková E. Yu. Účinky aktivních metabolitů Bacillus subtilis v probiotickém produktu nové generace // RMJ. Lékařská revue. 2018. č. 3. S. 39–44.

Jsou zvažovány účinky aktivních metabolitů Bacillus subtilis v probiotickém produktu nové generace. Prezentovány jsou výsledky klinických studií s použitím Baktistatinu u různých gastrointestinálních patologií u dospělých a dětí. Získané údaje ukazují na dobrou účinnost a bezpečnost Baktistatinu.

Probiotika, která jsou v současné době dostupná na trhu, je podle našeho názoru třeba považovat za první generaci přípravků zaměřených na nápravu mikroekologických poruch. Budoucí vývoj tradičních probiotik bude zahrnovat zdokonalování této generace prostřednictvím produkce přírodních metabiotik (vyrobených ze současných probiotických kmenů) a syntetických (nebo polosyntetických) metabiotik, což budou analogy nebo vylepšené kopie přírodních bioaktivních látek produkovaných komenzálními mikroorganismy. .

Výhody metabiotik

Metabiotika jsou léky nové generace, které pomáhají střevní mikroflóře dělat správně svou práci. Přesnější definici této skupiny formuloval profesor B.A. Shenderov. Metabiotika jsou strukturální složky probiotických mikroorganismů a/nebo jejich metabolity a/nebo signální molekuly se specifickou (známou) chemickou strukturou, které jsou schopné optimalizovat fyziologické funkce specifické pro hostitele, regulační, metabolické a/nebo behaviorální reakce spojené s aktivitou původního vlastníka mikroflóry těla. Podporují prospěšné bakterie a vyhánějí nebezpečné a zbytečné mimozemšťany – v tomto smyslu jsou metabiotika podobná probiotikům, jen působí mnohem efektivněji a navíc neobsahují žádné bakterie. Jaké je tedy jejich tajemství? Metabiotika lze právem zařadit mezi prostředky nové generace pro řízení mikroflóry tlustého střeva jako ekosystému a metabolického orgánu. Jsou slibné pro korekci různých funkčních poruch orgánů a systémů, které vznikají v důsledku dysbiózy. Aktivní metabolity mají komplex pozitivní účinky: antibakteriální vlastnosti umožňují bojovat s patogenními a oportunními mikroorganismy bez ovlivnění prospěšné střevní mikroflóry; díky enzymatické aktivitě hydrolytických enzymů se zlepšuje trávení; imunitní obrana je posílena
tělo.
Jejich výhody:
mají vysokou biologickou dostupnost, protože metabiotické látky dosahují tlustého střeva z 95–97 % beze změny (u probiotik - méně než 0,0001 %);
na rozdíl od probiotických mikrobů se nedostávají do konfliktu (antagonistické vztahy) s vlastní mikrobiotou pacienta;
začít jednat „tady a teď“.
V Rusku terapie a prevence dysbiotických stavů léky na bázi metabolitů teprve začíná. V současné době aktivně probíhá vývoj metabiotik pro zvýšení účinnosti korekce a prevence dysbiotických poruch. Příkladem takového produktu je Bactistatin®.
Terapeutický účinek metabiotik je způsoben kombinací několika hlavních účinků: schopností zajistit podmínky homeostázy nezbytné pro normální interakci mezi epitelem a mikroflórou v kontaktní zóně, stejně jako přímý účinek na fyziologické funkce a biochemické reakce makroorganismus a vliv na aktivitu buněk a biofilmů. Zároveň je stimulována vlastní tělní mikroflóra. Taková terapie je přiměřeně fyziologická, protože má regulační účinek na symbiontní vztah mezi hostitelem a jeho mikroflórou a prakticky minimalizuje možnost vedlejší efekty z prováděné léčby.

Vícesložkový komplex Baktistatin ®

Baktistatin ® je unikátní patentovaný komplex přírodních složek, které zesilují vzájemné působení: metabiotika, prebiotika a sorbent. Baktistatin ® je dostupný ve formě kapslí a používá se jako prostředek k obnově normální střevní mikroflóry a zlepšení funkčního stavu lidského gastrointestinálního traktu. Baktistatin ® je vyráběn v souladu s mezinárodními standardy kvality. Výrobce je certifikován podle systému ISO 9001-2008. V letech 1999–2004 skupina autorů prováděla vývoj Baktistatinu, vývoj technologie jeho výroby, experimentální a preklinické studie. V roce 2004 byl Bactistatin ® zaregistrován a uveden na trh. V letech 2004 až 2011 probíhaly klinické studie, které měly zhodnotit jeho účinnost.
Baktistatin ® obsahuje (hm. %): sterilizovanou kultivační kapalinu obsahující metabolity Bacillus subtilis- 0,1–2,0 %; zeolit ​​- 68–85 %; hydrolyzát sójové mouky - 15–30 %; stearát vápenatý - 0,5–5,0 %. K získání hlavních komponent použijte následující metody: mikroorganismy Bacillus subtilis vypěstována hloubkovou kultivací, poté je kultivační kapalina s mikroorganismy podrobena centrifugaci a sterilizaci. Výsledná sterilizovaná kulturní kapalina (SCL), obsahující metabolity výrobce, je smíchána s hydrolyzátem sójové mouky, stearátem vápenatým a zeolitem. Výsledná směs je podrobena lyofilizaci, během které jsou biologicky aktivní složky imobilizovány na částicích zeolitu. Následné balení kompozice do želatinových kapslí zajišťuje ochranu všech složek před působením faktorů způsobujících jejich degradaci.
Působení Baktistatinu je založeno na tom, že při jeho průchodu gastrointestinálním traktem v dané zóně dochází k destrukci ochranného pouzdra a uvolňování probiotických složek imobilizovaných na částicích zeolitu do střevní dutiny. V tomto případě se kolem částic zeolitu tvoří útvary micelární struktury, které se při pohybu gastrointestinálním traktem postupně uvolňují z porézního povrchu zeolitu. Na jedné straně to umožňuje udržet aktivitu biologických složek probiotika v gastrointestinálním traktu alespoň jeden den, což je nezbytné pro obnovení a stimulaci funkční aktivity normální střevní mikroflóry. Metabolity Bacillus subtilis jsou schopny inhibovat růst patogenní mikroflóry a stimulovat rozvoj normální žaludeční mikroflóry.
Na druhé straně efekt postupného uvolňování aktivních složek z povrchu zeolitu vede ke vzniku otevřených ploch jeho porézní struktury, což zajišťuje zahrnutí mechanismů iontové výměny a selektivní sorpce toxických sloučenin. To je důležité zejména pro celkovou detoxikaci organismu.
Role a význam jednotlivých složek, které tvoří Baktistatin, lze určit následovně: některé kmeny Bacillus subtilis produkují metabolity, které vykazují antagonistickou aktivitu proti Salmonella paratyphi, Salmonella stenly, Salmonella typhimurium, Staphylococcus aureus, Shigella sonnei, Pseudomonas aeruginosa, Proteus vulgaris, Klebsiella pneumoniae, Citrobacter freundii, Candida albicans, Campilobacter jejuni. Také, když se metabolity dostanou do těla Bacillus subtilis schopný produkovat 2x105 ME a2-interferon. Dá se tedy očekávat, že když se metabolity těchto kmenů dostanou do těla, přispějí ke zlepšení mikroflóry v oblasti, kde se nacházejí.
SCF Bacillus subtilis, získaný hlubokou kultivací tohoto mikroorganismu, obsahuje unikátní soubor biologicky aktivních složek produkovaných v procesu života. Mezi nimi jsou široce zastoupeny různé přírodní antibakteriální látky (bakteriociny, lysozym, katalázy), které selektivně potlačují růst a reprodukci patogenních a oportunních mikroorganismů ve střevě, aniž by ovlivnily mikroflóru symbiontů. Kromě toho mikroorganismy produkují různé enzymy a koenzymy, aminokyseliny, polypeptidy, prebiotické složky, které pomáhají zlepšovat mikroekologické poměry ve střevě, ovlivňují metabolické procesy a působí imunomodulačně.
Zeolit, který je součástí Baktistatinu, zajišťuje transport metabolitů v optimálním režimu a postupné uvolňování biologicky aktivních látek na něm imobilizovaných, což umožňuje udržet úroveň aktivity tohoto léku po dobu nejméně jednoho dne. Zároveň zajišťuje navázání a odstranění nízkomolekulárních toxinů (metan, sirovodík, čpavek aj.), těžkých kovů a radionuklidů. Kromě toho se zeolit ​​při průchodu gastrointestinálním traktem podílí na selektivní výměně iontů (odstraňuje nebo snižuje negativní dopad hliníkových iontů na tělo, synergicky působí s hořčíkem a fluorem a je dalším zdrojem mikroelementů). Zeolit ​​jako zdroj křemíku se účastní reakcí, které zajišťují syntézu kolagenu a propůjčují vazivovým tkáním pružnost; podílí se na inhibici sukcinátdehydrogenázy, esterázy, hyaluronidázy, urychluje syntézu irolinu, glykosaminoglykanů; je zvláště důležitý pro tvorbu struktury kůže, vlasů a nehtů. Obsah zeolitu by měl zajistit sorpci celého metabolitu. Výrazný pokles koncentrace zeolitu vede ke ztrátě některých metabolitů a snížení účinnosti a obsah zeolitu v koncentraci vyšší než 85 % vede k ředění Baktistatinu nízkoaktivní látkou a také k snížení jeho účinnosti.
Hydrolyzát sójové mouky v tomto případě je na jedné straně součástí ochranného prostředí metabolitů, které je z velké části zodpovědné za sílu jejich sorpce na povrchu zeolitu, a na druhé straně je zdrojem aminokyselin, který zajišťuje nutriční potřeby normální střevní mikroflóry a buněk makroorganismů. Hlavní složkou je sójový oligosacharid (SOE), který má bifidogenní vlastnosti. Jedná se o směs sacharózy (44 %), stachyózy (23 %), rafinózy (7 %) a monosacharidů.
Stearát vápenatý působí jako strukturotvorný prostředek (aerosil). Zároveň působí protistresově, antioxidačně přítomnost vápenatých solí zlepšuje stav kosterního systému a zlepšuje činnost nervové soustavy.

Zkušenosti s Bactistatinem

M.Yu Volkov et al., autoři vynálezu, předkládají řadu studií prováděných s použitím Bactistatinu. Použití 500 mg dávky Bactistatinu poskytuje maximální inhibici růstu
Shigella sonnei A Staphylococcus aureus in vitro. Výsledky jiné studie naznačují, že při přidávání in vitro na živném médiu v dávce 500 mg/ml dochází k výrazné stimulaci růstu Escherichia coli M-17. Ve srovnání s kontrolními hodnotami koncentrací mikroorganismů je efekt zvýšení jejich počtu 30%. To naznačuje, že pro účinnou stimulaci a obnovu normální gastrointestinální mikroflóry je optimální dávka navrhovaného metabiotického složení v rozmezí 400–600 mg.
Bylo sledováno 7 lidí s celiakií.
Všichni pacienti měli na základě dat klinickou diagnózu celiakální enteropatie klinický průběh onemocnění, morfometrické studium sliznice duodena, imunologický krevní test (stanovení hladiny antigliadinových protilátek a protilátek proti transglutamináze). Bactistatin ® byl předepsán na 4 týdny. 2 kapsle 2x denně. Analýza stolice na dysbakteriózu byla provedena před léčbou a 25.–31. den po léčbě. U 71,4 % pacientů bylo množství bifidobakterií sníženo u 28,6 % pacientů, množství bifidobakterií bylo na úrovni 104–105 buněk/g (norma 108–1010 buněk/g). U 14,3 % pacientů nebyly bifidobakterie ve stolici před léčbou zjištěny. Obsah laktobacilů byl pod normálními hodnotami u 100 % pacientů. U 42,9 % pacientů došlo k poklesu počtu bakteroidů ve stolici, u 14,3 % pacientů nebyly bakteroidy detekovány. Výrazné změny byly pozorovány v kvalitativním a kvantitativním složení E-coli: u téměř 42,9 % pacientů nebyla prokázána E. coli s normálními enzymatickými vlastnostmi, u 42,8 % pacientů bylo její množství sníženo, pouze u 14,3 % pacientů bylo množství E. coli dostatečné. 42,9 % z celkového počtu E-coli sestával z Escherichie se změněnými enzymatickými vlastnostmi (normálně - ne více než 10 %).
U 14,3 % pacientů kvasinkovité houby rod Candida. Ke zvýšení počtu klostridií došlo u 14,3 % pacientů, jejichž počet dosáhl 108. Při užívání Bactistatinu došlo k výraznému zlepšení jak anaerobní flóry, tak aerobní složky. U 57,1 % pacientů došlo ke zvýšení počtu bifidobakterií a laktobacilů, bacteroides - u 42,9 %; ukazatele se zlepšily E-coli- zvýšení počtu Escherichia s normální enzymatickou aktivitou bylo pozorováno u 85,7 % pacientů. U pacientů se procento E. coli se změněnými vlastnostmi snížilo ze 42,9 % na 28,6 %. Po terapii se počet hemolytických organismů snížil o 14,3 %, oportunní bakterie, kvasinkám podobné houby Candida a klostridium.
M.K. Bekhtereva a kol. provedli otevřenou srovnávací kontrolovanou studii, která zahrnovala 50 pacientů ve věku 6 až 18 let se středně závažnou ACI bakteriální etiologie. Děti byly hospitalizovány od 1. do 4. dne nemoci, nejvíce v prvních 2 dnech (70 % případů (35 pacientů)). Jedna ze skupin (n = 25) dostávala kromě základní terapie Bactistatin ® 1 kapsli 2x denně po dobu 7 dnů. akutní období onemocnění na pozadí základní terapie.
Studie klinického průběhu invazivního průjmu u vyšetřovaných dětí prokázala, že zařazení Bactistatinu do komplexní terapie pomohlo zkrátit dobu trvání hlavních projevů onemocnění. Ve skupině pacientů užívajících Baktistatin ® tedy došlo k významnému zkrácení trvání febrilního období, bolesti břicha a průjmový syndrom byly zmírněny dříve než u dětí ze srovnávací skupiny. Nejvýznamnějším efektem použití Bactistatinu u invazivních akutních střevních infekcí bylo snížení frekvence preskripce antimikrobiální terapie ve skupině pacientů léčených Bactistatinem - až o 48 % oproti 76 % ve srovnávací skupině (p<0,05). Кроме этого, включение Бактистатина в комплексную терапию инвазивных ОКИ приводило к снижению частоты негладкого течения болезни (суперинфекция, обострение) и способствовало более редкому формированию реконвалесцентного бактериовыделения. В группе пациентов, получавших Бактистатин ® , реконвалесцентное бактериовыделение формировалось в 8% случаев против 20% в группе сравнения (р>0,05). Ve skupině dětí užívajících Baktistatin ® nebyl pozorován žádný neklidný průběh onemocnění, zatímco ve srovnávací skupině byl nehladký průběh (exacerbace) zaznamenán u 16 % dětí (p<0,05). Выявлено, что использование Бактистатина не только приводило к более раннему купированию основных симптомов заболевания, но и имело доказанный эффект, выражающийся в изменении микробиоценоза толстой кишки за счет увеличения доли облигатной и факультативной микрофлоры и уменьшения числа условно-патогенных бактерий .
V.V. Pavlenko a kol. studovali účinnost Baktistatinu v komplexní terapii 30 pacientů (18 mužů, 12 žen) s ulcerózní kolitidou (UC) různé závažnosti se syndromem střevní dysbiózy. Průměrný věk pacientů byl 37,4±5 let. Pacienti s UC byli rozděleni do 2 skupin. Skupina 1 (15 pacientů) dostávala základní terapii (mesalazin, prednisolon, azathioprin) v kombinaci s Bactistatinem, 1 kapsli 2x denně po dobu 3 týdnů. Pacienti ve skupině 2 dostávali pouze základní terapii. Srovnávací skupinu (skupina 3) tvořilo 10 pacientů s biliárně dependentní chronickou pankreatitidou. Věk pacientů ve srovnávací skupině byl 40,3±4 roky (poměr mužů a žen 2:1). Tito pacienti dostávali enzymovou substituční terapii (pankreatin, spazmolytika, antisekreční léky v doporučených dávkách + Bactistatin ® 1 kapsle 2x denně). Laboratorní a instrumentální studie byly provedeny před a po použití Baktistatinu, v průměru po 3 týdnech.
Aby bylo možné studovat účinek Baktistatinu na střevní mikroflóru, byli studovaní pacienti rozděleni podle závažnosti dysbiózy s použitím klasifikace dysbiózy podle V.N. Krasnogolovec. U všech sledovaných pacientů byla zjištěna dysbióza, převážně 1., 2. a 3. stupně. V 1. a 3. skupině pacientů došlo při užívání Baktistatinu k výraznému snížení závažnosti dysbiózy nebo jejímu úplnému vymizení (s 1. stupněm oproti 2. skupině) (p<0,05). После приема Бактистатина у пациентов 1-й группы и группы сравнения отмечались увеличение (или нормализация) количества облигатной флоры (бифидо- и лактобактерий), уменьшение неполноценной и гемолизирующей кишечной палочки, клостридий. В то же время во 2-й группе пациентов отмечалась слабоположительная динамика нормализации кишечного микробиоценоза в отсутствие пробиотика в комплексной терапии (р<0,05). Таким образом, совместное использование базисных препаратов и Бактистатина при ЯК и билиарнозависимом панкреатите существенно повышало эффективность лечения этой патологии ЖКТ .
E.P. Jakovenko a kol. studovali účinnost Bactistatinu v léčbě postinfekčního syndromu dráždivého tračníku (PI-IBS). Bylo vyšetřeno 40 pacientů s PI-IBS. Pro posouzení střevní mikroflóry byly provedeny kultivace stolice a vodíkový dechový test. Na konci 4týdenní kúry Bactistatinu bylo dosaženo stabilní klinické remise PI-IBS. V kulturách stolice se snížila hladina oportunní mikroflóry, počet bifidobakterií a laktobacilů se zvýšil na normální hodnotu a ukazatele vodíkového dechového testu se normalizovaly (p<0,05). Бактистатин ® оказывает хорошее терапевтическое действие при лечении больных ПИ-СРК, способствует восстановлению нормальной кишечной микрофлоры и улучшению клинических симптомов (р<0,05). Применение Бактистатина приводило к восстановлению фекальной кишечной микрофлоры, устранению синдрома избыточного бактериального роста в тонкой кишке, адсорбции раздражающих субстанций и газов в кишке, улучшению кишечного пищеварения, повышению порога болевой чувствительности, купированию болевого синдрома, нормализации моторики кишечника и стула .

Závěr

Baktistatin ® se tedy osvědčil jako lék s mnohostrannou klinickou účinností a v současnosti je doporučován v léčebných režimech pro léčbu pacientů se střevní dysbiózou různého původu: při chronických onemocněních trávicího traktu, po akutních střevních infekcích, během a po užívání antibiotik, po chemoterapii, na pozadí dlouhodobé hormonální terapie, v podmínkách chronických stresových stavů, s iracionální dietní terapií.
Užívání Baktistatinu výrazně snižuje závažnost dyspeptických poruch, zlepšuje střevní trávení, účinně harmonizuje složení střevní mikrobiocenózy, působí imunomodulačně, příznivě ovlivňuje psychický stav pacientů a pomáhá zlepšit kvalitu jejich života. Bactistatin ® nemá žádné kontraindikace a nezpůsobuje vedlejší účinky. Neměl by být předepsán, pokud máte individuální nesnášenlivost na složky. Ve většině případů nejsou při použití tohoto produktu potřeba další terapeutické a zdraví zlepšující látky (antibiotika, vitamíny, enzymy, mikroelementy atd.), protože jsou již obsaženy v jejich složení a (nebo) jsou ve svém složení nahrazeny podobnými. akce.
Rozsah aplikace Baktistatinu se neustále rozšiřuje. Již nyní se používá v režimech pro léčbu a prevenci dysbiózy různého původu, mimo jiné na pozadí antibiotické terapie, gastrointestinálních onemocnění, infekčních-zánětlivých, alergických, dermatologických, kardiovaskulárních onemocnění, metabolických onemocnění atd. použití Baktistatinu umožňuje nejen obnovit eubiózu, ale také pomáhá zlepšit výsledky léčby základního onemocnění.

Vynález se týká biotechnologie, veterinární medicíny a lze jej použít k získání léčiva ze skupiny probiotik. Bakteriální kmen Bacillus subtilis BKM B-2287 byl izolován z půdy. Buňky jsou grampozitivní, netvoří tobolky, tvoří kulaté výtrusy, typ dýchání je aerobní. Hydrolyzuje glukózu, mannitol, laktózu. Nefermentuje sacharózu, inositol, sorbitol, maltózu. Během fermentace se nevytváří plyn. Potlačuje růst stafylokoků, E. coli, enterobakterií, citrobakterií, aeromonas. Kmen se používá jako produkční kmen k získání probiotického přípravku, který autoři nazvali „Subtilis+“. Lék normalizuje činnost gastrointestinálního traktu hospodářských zvířat, drůbeže a ryb; slibné v léčbě a prevenci bakteriálních infekcí. 1 stůl

Vynález se týká biotechnologie a může být použit v mikrobiologickém průmyslu k získání probiotického přípravku používaného ve veterinární medicíně při léčbě a prevenci gastrointestinálních onemocnění zvířat, drůbeže a ryb.

Známý kmen Bacillus subtilis 534 je výrobcem probiotika „Sporobacterin“, které je určeno k prevenci a léčbě gastrointestinálního traktu a dysbiózy. SU 1708350, tř. A 61 K 35/66.

Nevýhodou je krátká trvanlivost, protože... obsahuje živé bakterie, které si nedokážou dlouhodobě uchovat své vlastnosti, nízká čistota drogy, která má úzký rozsah použití - jako krmná přísada pro zvířata. Kmen je citlivý i na antibiotika s výjimkou polymyxinu, který omezuje rozsah použití léku.

Známý kmen Bacillus subtilis 3H (GISC č. 248), který má vlastnost antibiotické rezistence, se používá k získání probiotického přípravku „Bactisporin“, který se používá ve spojení s antibiotiky k léčbě a prevenci dysbiózy, deficitu enzymů trávicího systému, hnisavé infekce a potravinové alergie. RU 2067616 C1, tř. A 61 K 35/74, 10.10.1996.

Známý kmen Bacillus subtilis TPAXC-KM-117 vykazuje inhibiční aktivitu proti patogenním mikroorganismům a je odolný vůči mnoha léčivům. Kmen je odolný vůči tetracyklinu, rifampicinu, alenicilinu, chloramfenikolu a aprektomycinu. Na jejím základě je připraveno antibiotikum rezistentní probiotikum pro léčbu a prevenci infekčních onemocnění při stejnojmenné antibiotické terapii (RU 2118364 C1, třída C 12 N 1/20, 27.08.1988).

Známý kmen Bacillus subtilis VKM B-2250 (RU č. 2184774, třída A 61 K 35/74, 07/10/02), který je základem léku pro veterinární účely a pro rybářství.

Problém, na který je vynález zaměřen, je identifikace nového účinného kmene produkujícího probiotické léčivo pro veterinární účely a rybářství.

Technickým výsledkem dosaženým realizací vynálezu je zvýšení účinnosti léčby, zvýšení stravitelnosti krmiva, užitkovosti a hmotnostních přírůstků zvířat, drůbeže, ryb pomocí probiotického přípravku na základě navrženého kmene producenta a stability přípravek při skladování v širokém rozsahu teplot prostředí.

Kmen Bacillus subtilis B-9 byl izolován z půdy a uložen do All-Russian Collection of Microorganisms (IBFM pojmenovaná po K. G. Skryabinovi) pod číslem VKM B-2287.

Bacillus subtilis kmen VKM B-2287 lze skladovat v lyofilizovaném stavu po dobu několika let nebo na zásobách s agarovým médiem na bázi masovo-peptonového bujónu s povinnou subkultivací alespoň jednou za 2 měsíce na stejném médiu.

Charakteristika kmene.

Kulturní a morfologické charakteristiky. Tyčinky. Velikost jednodenní agarové kultury je 3-5 mikronů. Buňky se barví Gram pozitivně, tvoří kulaté, jednotlivé spory s centrálním průměrem menším než je průměr buňky. Kolonie na MPA jsou bílé a neuvolňují pigment do média.

Fyziologické příznaky. Aerobní, optimální růstová teplota 37°C a pH 3,5-8,0. Růst je možný v rozmezí teplot 4-50° C. Vztah k NaCl - růst při obsahu do 3%.

Biochemické příznaky. Rozkládá glukózu, laktózu, mannitol. Nefermentovatelné uhlíkaté sloučeniny: sacharóza, inositol, sorbitol, maltóza, laktóza. Recykluje citrát a acetát. Během fermentace neprodukuje plyn. Produkuje oxidázu, katalázu.

Antagonistická znamení. Bacillus subtilis kmen BKM B-2287 inhibuje růst stafylokoků, Proteus, Klebsiella, Escherichia coli, Enterobacteriaceae, Citrobacteriaceae, Aeromonas a kvasinkových hub.

Bacillus subtilis kmen BKM B-2287 není patogenní pro rostliny, zvířata, ryby a lidi.

Údaje v tabulce 1 ukazují antagonistickou aktivitu testovaných kmenů mikroorganismů (metoda opožděného antagonismu).

Pro kultivaci kmene Bacillus subtilis BKM B-2287 se používá tekuté živné médium obsahující kaseinový hydrolyzát - 5 cm 3 dm -3 (N aM = 300 mg %); kukuřičný extrakt - 80 cm3 dm-3 (N am = 290 mg %), MnS04 5H20 - 0,250 g-dm-3; MgS047H20 - 0,300 g-dm-3; FeS047H20 - 0,015 g-dm-3; CaCl2 2H20 - 0,052 g-dm-3; NaCl - 11 000 g-dm -3, destilovaná voda.

Předsušená biomasa mikroorganismů se vysévá do zkumavky s bujónem. Když se objeví viditelný růst, kolonie se subkultivují na masovém peptonovém agaru ve zkumavkách.

Typické kolonie se vyberou a subkultivují na kapalném médiu v lahvičkách. Po 22 hodinách se celá vyrostlá hmota přenese do 20litrové láhve s 10 litry živného média a kultivuje se 26 hodin při 37-39 °C, čímž se získá semenný materiál.

Živné médium na bázi kaseinového hydrolyzátu je umístěno do biologického reaktoru, sterilizováno 60 minut při 1 atm, ochlazeno na 39 °C a naočkováno semeny z láhve v poměru 1:9.

Při aerobní kultivaci se pH média udržuje v rozmezí (6,8-7,2) jednotek. pH, přiváděním (10-15)% glukózy do média na konečnou koncentraci (0,1-0,2)%. Když je biologická koncentrace podle BK (15-20) 10 9 buněk cm -3 a (8-10) 10 9 buněk cm -3 podle BKt, přestaňte přidávat glukózu, dokud pH neklesne na 4,0 a vypněte přívod vzduchu . Poté se ohřev reaktoru vypne, médium se ochladí na (15-19) °C. Výsledná ochlazená kultura se čerpá do nádob nebo balí do lahviček.

Uvedeným způsobem kultivace se získá probiotický přípravek ve formě tekuté formy obsahující (80-95) % spor a živé vegetativní buňky bakteriálního kmene Bacillus subtilis VKM B-2287.

Navržený probiotický přípravek je zdravotně nezávadný a neobsahuje cizorodou mikroflóru. Neškodnost byla testována na bílých myších o hmotnosti (18-20) g, kterým byl lék podáván perorálně v objemu 1,0 ml.

Lék má specifickou aktivitu: počet buněk v jedné dávce léčiva je (8-20)10 9 buněk cm -3, antagonistická aktivita - zóna inhibice růstu testovaných mikroorganismů se pohybuje od 10 do 38 mm.

Navrhovaný kmen Bacillus subtilis VKM B-2287 lze tedy použít jako produkční kmen pro získání probiotického léčiva doporučeného pro prevenci a léčbu gastrointestinálních onemocnění zvířat, drůbeže a ryb.

Vynález je ilustrován příklady.

Příklad 1. Testování navrženého probiotického přípravku na novorozených telatech a selatech.

Účinnost léku na bázi navrhovaného kmene Bacillus subtilis VKM B-2287 byla testována na novorozených telatech a selatech s diagnózou průjmu, ke kterému došlo na pozadí obtížné epizootické situace na farmě. Kontrolní skupiny telat a selat byly chovány podle technologie používané na farmě. Telatům a selatům pokusných skupin byl navíc podáván lék na bázi navrhovaného kmene Bacillus subtilis BKM B-2287 orálně s malým množstvím vody 20 minut před krmením v jedné dávce 15 ml na hlavu pro telata a 20 ml pro. selata třikrát denně po dobu tří dnů . Pozorování ukázala, že v experimentálních skupinách se jeden den po podání léku zlepšil celkový stav všech zvířat, ustal průjem a po dalších dvou dnech byla všechna zvířata prakticky zdravá. Stav zvířat v kontrolních skupinách byl charakterizován pokračováním průjmového stavu úmrtnost 10 % u telat a 22 % u selat.

Příklad 2. Přidání probiotického přípravku „Subtilis+“ do potravy akvarijních ryb.

Odrostlá mláďata zlaté rybky (oranda) byla krmena extrudovaným krmivem s přídavkem probiotického přípravku „Subtilis+“. Množství krmiva bylo 10 kg, přidané probiotikum 1 ml. Počet ryb v experimentální a kontrolní skupině byl po 250 exemplářích. Krmení bylo prováděno 4-6krát denně. Jídlo se snědlo bez problémů. Rychlost růstu mláďat v experimentální skupině ve srovnání s kontrolní skupinou byla 22 %. Výtěžnost ryb v pokusné skupině byla 98 %, v kontrolní skupině 78 %. Voda v akváriích se nezhoršila a nebyl žádný zákal.

Příklad 3. Bezpečnost kuřat v prvních týdnech.

Testy „Subtilis+“ byly provedeny na kuřatech z brojlerové drůbežárny (po 5 drůbežárnách v experimentální a kontrolní skupině). Odpad kuřat v kontrolní skupině, která nedostala probiotika, byl 4 %, v experimentální skupině - 0,2 %. V pokusných skupinách kuřata intenzivněji přibírala na váze. Po prvních třech dnech byla průměrná hmotnost kuřete v kontrolní skupině 61 g, v experimentální skupině - 70 g.

Provedené testy prokázaly účinnost léku „Subtilis+“, získaného na základě navrženého kmene Bacillus subtilis BKM B-2287.

NÁROK

Bakteriální kmen Bacillus subtilis BKM B-2287, používaný k získání probiotického přípravku určeného k prevenci a léčbě gastrointestinálních onemocnění zvířat, drůbeže a ryb.