ifa apibrėžimas. Imunofermentinis tyrimas (ELISA, ELISA). Tyrimo esmė, metodo principas ir etapai. Antikūnų, antikūnų klasių, imuninio komplekso analizė. Kaip atliekamas kraujo ELISA tyrimas?

Žmogaus imunodeficito viruso infekcija yra rimta diagnozė. Klaidos diagnozuojant gali sukelti pražūtingų pasekmių. ELISA tyrimas dėl ŽIV yra prieinamiausias tyrimo metodas, tačiau jis ne visais atvejais yra informatyvus.

ELISA – su fermentais susijęs imunosorbentinis tyrimas. ELISA metodo tikslas – aptikti imunodeficito viruso antikūnus biologinėje medžiagoje. Naudodami šį metodą galite stebėti ne pačių virusų buvimą skystyje, o tik antikūnus, pagamintus reaguojant į jų buvimą. Fermentinis imunologinis tyrimas plačiai naudojamas lytiškai plintančių ligų diagnostikai. Tai padeda nustatyti lytiniu keliu plintančias ligas.

Yra keletas ELISA tipų: tiesioginė versija, netiesioginė versija, sumuštinių metodas. Bet kokiu atveju metodas pagrįstas antikūnų, kurie yra svetimkūnio įsiskverbimo rodiklis, nustatymu. Norint nustatyti šias "žymes", biologinis komponentas yra apdorojamas fermentais.

Fermentinis imunologinis tyrimas nustato antikūnus 96–98% tikslumu, paklaida yra nereikšminga. Tai yra 2–4%.

ELISA – ŽIV diagnostikos metodas

ELISA tyrimas dėl ŽIV yra pirmasis diagnozės etapas. Imunodeficito viruso antigenai yra baltymai p24, p15, p17, p31 ir glikoproteinai gp 41, gp55, gp66, gp120, gp160.

Norint nustatyti viruso baltymą, dalis kraujo paimama iš venos. ELISA kraujo tyrimui siunčiamas mėginys apdorojamas fermentiniais imunologiniais reagentais. Serumas išskiriamas iš kraujo. Jei tyrimo metu jie aptinkami, tai reiškia, kad virusas jau yra kraujyje.

Kraujas duodamas griežtai tuščiu skrandžiu. Likus 2 dienoms iki tyrimo nerekomenduojama valgyti riebaus maisto ir gerti alkoholio. 14 dienų turėtumėte nustoti vartoti antivirusinius vaistus.

Metodo privalumai:

• santykinai maža kaina;
• didelis reagentų stabilumas;
• didelis jautrumas;
• trumpalaikė trukmė;
• minimali žmogiškojo faktoriaus įtaka.

Šiuolaikinės ELISA testų sistemos gaminamos pagal tarptautinius standartus. Tai padidina metodo tikslumą.

Fermentinis imunologinis tyrimas ne visada duoda patikimų rezultatų. Virusui patekus į kraują, prasideda latentinė (paslėpta) vystymosi stadija. Laikotarpis, kol virusai pradeda daugintis ir dar nesusiformavo antikūnai, vadinamas „seronegatyvaus lango laiku“. Šiame etape nėra prasmės atlikti ELISA. Jei atsiranda infekcija, rezultatas bus . Kaip greitai virusas atsiskleidžia, priklauso nuo to, kiek pavojingų ląstelių pateko į organizmą. Nesaugių lytinių santykių ar užteršto kraujo perpylimo atveju šis laikotarpis bus minimalus.

Siekiant didelio ŽIV ELISA patikimumo, testas atliekamas tris kartus. Žmogaus imunodeficito viruso ELISA testo atlikimo terminai:

• 6 savaites po galimo kontakto,
• per 3 mėnesius,
• po šešių mėnesių.

4-osios kartos ŽIV ELISA metodas yra informatyviausias ankstyvosiose infekcijos stadijose. Ją galima atlikti praėjus 1 mėnesiui po įtariamos infekcijos. Bandymas yra brangus, palyginti su 3 kartos analogu. Todėl valstybinėse gydymo įstaigose jis naudojamas kaip papildomas diagnostikos metodas. 3 tyrimas atliekamas nemokamai.

Svarbu! Iš karto po užsikrėtimo žmogus tampa užkrečiamas. Jis pavojingas kitiems, net kai dar nežino apie savo diagnozę!

Jei ELISA atskleidžia antikūnus prieš ŽIV antigenus, reikia atlikti papildomus tyrimus. Tai įtraukia . Šio metodo patikimumas yra 80%. PGR tiria kraują, spermą ir makšties išskyras. Biologinis skystis suskaidomas medicininiame reaktoriuje ir apdorojamas fermentais. Dėl to gaunami duomenys apie ŽIV ląstelių koncentraciją skystoje terpėje. Dėl didelės paklaidos (20 proc.), jei rezultatas teigiamas, papildomai atliekamas imunoblotingas.

Kitas diagnozės etapas yra Combo testas (arba imunoblotingas). Tai labai jautrus testas (98 % pasitikėjimas), kuris atliekamas, jei ELISA rezultatai yra neaiškūs po 6 mėnesių.

ELISA rezultatų dekodavimas

Iššifravimo laikas svyruoja nuo 24 iki 48 valandų. Jei reikia skubiai gauti informaciją (reikia operacijos), dekodavimas atliekamas per 2 valandas. Provincijos medicinos centrai ne visada turi reikiamų reagentų. Mėginys paimamas taikymo vietoje, tada perkeliamas į regioninį centrą. Tokiomis aplinkybėmis rezultatą galima sužinoti per 1-2 savaites.

Fermentinio imunologinio tyrimo rezultatas gali būti teigiamas arba neigiamas; kitų variantų nėra.

Net jei pradinio ir pakartotinio ELISA rezultatas buvo teigiamas, pacientas negali būti pripažintas ŽIV infekuotu. Priklausomai nuo klaidų. Klaidingai teigiamo rezultato priežastys:

• lėtinės ligos;
• ilgalaikės infekcinės ligos;
• nėštumas.

Todėl analizės rezultatas turėtų būti patikslintas papildomais tyrimais.

Jei imunoblotingas yra ŽIV teigiamas (reaktyvus), asmuo laikomas ŽIV infekuotu, o tai reiškia, kad jis yra sveikas.

Laikui bėgant viruso ląstelės prisitaiko prie paskirtų vaistų. Norint kontroliuoti, ELISA testas kartojamas periodiškai.

Kartais imunoblotas rodo klaidingai neigiamą rezultatą. Itin retai imunodeficito virusas serga 6 mėnesius (ar ilgiau). Tai įmanoma, jei į kraują patenka nedidelis kiekis viruso ląstelių. 0,5% visų atvejų infekciją galima diagnozuoti tik po metų. 99,5 proc., per šešis mėnesius po užsikrėtimo, ELISA tyrimas duos patikimą rezultatą.

Net ir atliekant labai tikslius tyrimus, išlieka 2% klaidų tikimybė. Neturėtume pamiršti apie žmogiškąjį faktorių. Siekiant pašalinti klaidos galimybę, testą galima atlikti 2 skirtingose ​​įstaigose.

5.1 ELISA esmė ir klasifikacija.

ELISA pasirodė septintojo dešimtmečio viduryje ir iš pradžių buvo sukurtas kaip metodas antigenui identifikuoti histologiniame mėginyje, taip pat nusodinimo linijų vizualizavimui imunodifuzijos ir imunoelektroforezės testuose, o vėliau buvo pradėtas naudoti kiekybiniam antigenų ir antikūnų nustatymui. biologiniai skysčiai. Kuriant metodą dalyvavo E. Engvall ir R. Pählman, taip pat nepriklausomai W. Van Weemanas ir R. Schursas.

Ryžiai. 6 Pagrindinis ELISA principas:

nustatyti antigenus; 2) aptikti antikūnus

Metodas pagrįstas specifiniu antikūno prisijungimu prie antigeno, kai vienas iš komponentų yra konjuguotas su fermentu dėl reakcijos su atitinkamu chromogeniniu substratu, susidaro spalvotas produktas, kurio kiekį galima nustatyti; spektrofotometriškai (6 pav.).

Atradus galimybę imobilizuoti antigeną ir antikūnus ant įvairių nešėjų, išlaikant jų rišamąjį aktyvumą, tapo įmanoma išplėsti ELISA naudojimą įvairiose biologijos ir medicinos srityse.

Monokloninių antikūnų atsiradimas prisidėjo prie tolesnės ELISA plėtros, o tai leido padidinti jos jautrumą, specifiškumą ir rezultatų atkuriamumą.

Teoriškai ELISA yra pagrįsta šiuolaikinės imunochemijos ir cheminės enzimologijos duomenimis, antigeno ir antikūno reakcijos fizikinių ir cheminių dėsnių žiniomis, taip pat pagrindiniais analitinės chemijos principais. ELISA jautrumą ir laiką, kurio reikia atlikti, lemia keli pagrindiniai veiksniai: antigeno-antikūno reakcijos kinetinės ir termodinaminės charakteristikos, reagentų santykis, fermento aktyvumas ir jo nustatymo metodų skiriamoji geba. Apskritai antigeno ir antikūno reakciją galima apibūdinti pagal paprastą schemą:

+[AG]↔[ATAG]

Tyrimų objektų įvairovė nuo mažos molekulinės masės junginių iki virusų ir bakterijų, taip pat neįprastai platus užduočių spektras, susijęs su ELISA naudojimo sąlygų įvairove, lemia itin daug šio metodo variantų.

Bet kurią ELISA versiją sudaro 3 privalomi etapai:

1. tiriamojo junginio atpažinimo pagal jam specifinį antikūną stadija, dėl kurios susidaro imuninis kompleksas;

2. konjugato jungties su imuniniu kompleksu arba su laisvosiomis jungimosi vietomis susidarymo stadija;

3. fermento etiketės pavertimo įrašytu signalu etapas. ELISA metodų klasifikacija grindžiama keliais metodais:

1. Pagal pirmajame ELISA etape esančių reagentų tipą išskiriami konkurenciniai ir nekonkurenciniai metodai.

A) Atliekant konkurencinį ELISA, pirmajame etape sistemoje yra ir analizuojamas junginys, ir jo analogas, pažymėtas fermentu ir konkuruojantis dėl specifinių surišimo vietų.

B) Nekonkurenciniams metodams būdinga tai, kad pirmoje pakopoje sistemoje yra tik analizuojamas junginys ir jam būdingi surišimo centrai.

2. Visi ELISA metodai skirstomi į homogeninius ir nevienalyčius.

Jei visi trys ELISA etapai vyksta tirpale ir tarp pagrindinių etapų nėra papildomų etapų susidariusiems imuniniams kompleksams atskirti nuo nesureagavusių komponentų, metodas priklauso vienarūšių grupei.

Vienalytės ELISA, paprastai naudojamos mažos molekulinės masės medžiagoms nustatyti, pagrindas yra fermento aktyvumo slopinimas, kai jis susijungia su antigenu arba antikūnu. Dėl antigeno ir antikūnų reakcijos atkuriamas fermentų aktyvumas.

Kai antikūnas prisijungia prie antigeno, turinčio fermento žymę, fermento aktyvumas yra slopinamas 95 % didelės molekulinės masės substrato atžvilgiu, o tai yra dėl substrato sterinio išskyrimo iš aktyvaus fermento centro. Didėjant antigeno koncentracijai, jungiasi daugiau antikūnų ir lieka daugiau laisvų antigeno-fermento konjugatų, galinčių hidrolizuoti didelės molekulinės masės substratą. Analizė atliekama labai greitai, vienam nustatymui reikia 1 minutės. Metodo jautrumas yra gana didelis. Jis gali būti naudojamas medžiagai nustatyti pikomolių lygiu.

Heterogeniniams metodams būdinga analizė dviejų fazių sistemoje, kurioje dalyvauja kietoji nešiklio fazė, ir privalomas imuninių kompleksų atskyrimas nuo nesureagavusių komponentų (plovimas), kurie yra skirtingose ​​fazėse (susidarę imuniniai kompleksai yra ant kieta fazė, o nesureagavę kompleksai yra tirpale). Heterogeniniai metodai, kurių metu imuninių kompleksų susidarymas pirmajame etape vyksta kietojoje fazėje, vadinami kietosios fazės metodais.

Metodai priskiriami homogeniniams-heterogeniniams, jei 1 etapas - tirpale susidaro specifiniai kompleksai, o tada komponentams atskirti naudojama kieta fazė su imobilizuotu reagentu.

3. Pagal bandomosios medžiagos nustatymo principą:

A) Tiesioginis medžiagos (antigeno arba antikūno) koncentracijos nustatymas pagal su ja sąveikaujančių surišimo vietų skaičių. Tokiu atveju fermento etiketė bus suformuotame specifiniame AG-AT komplekse. Analitės koncentracija bus tiesiogiai proporcinga įrašytam signalui.

B) Medžiagos koncentracijos nustatymas pagal bendro surišimo vietų ir likusių laisvųjų jungimosi vietų skaičiaus skirtumą. Tokiu atveju analitės koncentracija padidės, o įrašytas signalas sumažės, todėl šiuo atveju yra atvirkštinė priklausomybė nuo įrašyto signalo dydžio.

5.2 ELISA naudojamų komponentų charakteristikos.

Fermentai.

Fermentų žymės turi itin galingą katalizinį poveikį, viena fermento molekulė gali reaguoti su daugybe substrato molekulių. Taigi, fermentą, esantį nedideliais kiekiais, galima identifikuoti ir kiekybiškai įvertinti pagal produktų susidarymą ir jo katalizuojamą reakciją. Kitas fermentų naudojimo kaip etiketės pranašumas yra dėl to, kad molekulėje yra daugybė funkcinių grupių (sulfhidrilo, karboksilo, tirazino liekanų ir kt.), per kurias kovalentiškai gali būti prijungtos ligandų molekulės.

ELISA naudojami fermentų žymenys turi turėti šias savybes:

– didelis fermento aktyvumas ir stabilumas analizės sąlygomis, kai jis yra modifikuotas ir konjuguotas su antikūnais ar kitais baltymais;

– jautrių substratų buvimas ir fermentinės reakcijos produktų arba substratų nustatymo metodo paprastumas;

– gebėjimas pritaikyti substrato sistemas tolesniam stiprinimui;

– fermento ir jo inhibitorių nebuvimas tiriamame biologiniame skystyje.

ELISA gali būti naudojama mažiausiai 15 skirtingų fermentų. Pagal aukščiau nurodytus reikalavimus plačiausiai naudojamos krienų peroksidazė (HRP), šarminė fosfatazė (ALP) ir β-D-galaktozidazė. Visi trys yra stabilūs ir katalizuoja labai jautrias reakcijas. Be to, šių fermentų katalizuojamų reakcijų produktus, priklausomai nuo naudojamo substrato, galima aptikti ne tik kolorimetriniais, bet ir fluorescenciniais metodais. Kiti fermentai naudojami daug rečiau. Tai paaiškinama mažesniu jų specifiniu aktyvumu, palyginti su PC ir AP.

Substratai.

Substrato pasirinkimą pirmiausia lemia fermentas, naudojamas kaip žyma, nes fermento ir substrato reakcija yra labai specifinė.

Pagrindiniai reikalavimai substratui:

– didelio metodo jautrumo užtikrinimas nustatant fermentą konjugate;

– gerai atpažįstamų (pavyzdžiui, spalvotų) fermentų ir substratų reakcijos produktų susidarymas;

– pagrindas turi būti saugus, pigus, prieinamas ir patogus naudoti.

Dažniau naudojami chromogeniniai substratai, kuriuos sunaikinus susidaro spalvota medžiaga. Didelės energijos substratų – fluorescencinių, chemiliuminescencinių – naudojimas yra perspektyvus. Tokių substratų naudojimas leidžia teoriškai padidinti ELISA jautrumą dviem dydžiais.

Konjugato susidarymas.

Konjugatas yra antigenas arba antikūnas, pažymėtas fermento žyma. Konjugato susidarymas yra vienas iš svarbių ELISA etapų.

Formuojant konjugatą, parenkamas optimalus fermento etiketės įvedimo būdas, kad abu konjugato komponentai išlaikytų savo biologinį aktyvumą: fermentas - gebėjimas sąveikauti su substratu, o antigenas arba antikūnas - antigeniškumas ir antigeno surišimo aktyvumas. , atitinkamai. Pažymėto, labai išgryninto antigeno buvimas leidžia naudoti konkurencinius metodus. Tokiu atveju paskutiniame etape galima išmatuoti konjugato, nesusijusio su imobilizuotais antikūnais, aktyvumą, todėl išvengiama plovimo procedūros ir analizė tampa patogesnė. Tačiau antigenai skiriasi savo fizikinėmis ir cheminėmis savybėmis bei struktūra, o tai reiškia, kad neįmanoma sukurti universalių metodų konjugatui su antigenu gauti. Šiuo atveju antigeno ir fermento konjugato gavimas yra atskira sudėtinga užduotis. Pažymėtų antikūnų paruošimas ELISA tyrimui yra metodiškai prieinamesnis.

Fermento konjugacija su imunochemiškai aktyviais baltymais atliekama įvairiais būdais: cheminiu kryžminiu ryšiu, kovalentiniu fermento molekulės surišimu su Ag arba AT ir junginių susidarymu nekovalentiniais ryšiais, pavyzdžiui, kai susijungia fermento ryšys. ir Ag arba AT yra atliekami imunologiškai, per antigeno ir antikūno sąveiką.

Plačiausiai naudojami kovalentiniai konjugatų paruošimo metodai. Ryšio reakcijos pasirinkimas priklauso nuo funkcinių grupių, esančių tam tikrose baltymų molekulėse, tipo. Glutaraldehidas, natrio perjodatas ir kt. naudojami kaip reagentai, naudojami fermentui įvesti į antigeno ir antikūnų molekules.

Yra vieno ir dviejų pakopų metodai, kaip gauti konjugatus naudojant glutaraldehidą. Gali susidaryti įvairaus dydžio konjugatai su sumažintu fermentiniu aktyvumu (15 - 60 % laisvo fermento). Gautas didelis konjugatas gali steriškai trukdyti nustatyti bandomąją medžiagą. Santykinai mažos molekulinės masės konjugatai susideda iš Fab fragmento ir vienos fermento molekulės.

Dėl dviejų etapų sintezės, kurią sudaro fermento, pirmiausia modifikuoto kryžminio ryšio agentu, laipsniškas gamyba, jo išskyrimas, o vėliau sąveika su antigenu (antikūnu), Susidaro vienalytė kompozicija, kurioje yra 1-2 fermentų molekulės vienoje imunoglobulino molekulėje ir išlaikomas aukštas fermentinis ir imunologinis aktyvumas. Tačiau tokių konjugatų susidaro nedaug (krienų peroksidazei – 5–10%).

Didžiausias praktinis pritaikymas nustatytas imunoperoksidazės konjugatų gavimo būdui, paremtam fermento angliavandenių komponento oksidavimu natrio perjodatu (peroksidazės prisijungimas prie konjugato siekia 70-90% pradinio fermento kiekio).

Patikimas konjugatas turi turėti šias savybes:

Didelis antikūnų stiprumas ir didelis afinitetas antigenui, kad jį būtų galima naudoti dideliu praskiedimu ir taip sumažinti nespecifinį surišimą;

Pakankamas darbinio skiedimo specifiškumas;

Monomerinių formų vyravimas prieš polimerines, nes polimerinės formos linkusios nespecifiškai prilipti prie plastiko, todėl susidaro aukštas foninis reakcijos lygis;

Optimalus molinis santykis tarp fermento ir antikūnų (optimalus santykis yra apie 1:1);

Pakankamas konjugato fermentinis aktyvumas. Šią savybę daugiausia lemia konjugacijos sąlygos ir fermentų molekulių bei antikūnų santykis konjugate.

5.3 Heterogeniniai ELISA metodai.

Heterogeniniai ELISA (arba kietosios fazės ELISA) apima metodus, kai analitė yra dviejų fazių. Imunocheminės reakcijos komponentams atskirti naudojama kieta fazė (netirpus nešiklis, dažniausiai plastikas) su ant jos imobilizuotais antikūnais arba antigenu, kuri kiekviename etape plaunama, kad būtų pašalinti tarpiniai ir nesureagavę komponentai.

Imobilizacija gali būti atliekama kovalentiškai sujungiant antikūnus (antigenus) su aktyvuotu nešikliu, naudojant cheminius metodus, taip pat fiziškai adsorbuojant antikūnus (antigenus) ant kietų polimerų (pavyzdžiui, polistireno plokštelių) paviršiaus. Užsienio literatūroje ši kryptis vadinama ELISA testu arba su fermentais susijusiu imunosorbentu.

Nekonkurencinė ELISA, skirta antigenams nustatyti, naudojant fermentu pažymėtų specifinių antikūnų ir imobilizuotų antikūnų naudojimo pavyzdį.

Tirpalas, kuriame yra tiriamas antigenas, pridedamas prie nešiklio su imobilizuotais antikūnais. Inkubacijos metu susidaro specifinis antigeno-antikūno kompleksas. Tada nešiklis nuplaunamas nuo nesurištų antigenų ir pridedami žymėti antikūnai – konjugatas. Šiuo atveju surišto konjugato kiekis yra tiesiogiai proporcingas antigeno kiekiui tiriamajame mėginyje. Po antrinės inkubacijos ir konjugato pertekliaus pašalinimo pridedamas chromogeninis naudojamas fermento substratas, kuris, veikiant fermentui, keičia spalvą, t. Dažymo laipsnis yra tiesiogiai proporcingas specifinių antikūnų, paženklintų fermentu, fermentu ir atitinkamai tiriamu antigenu, kiekiui. Tirpalo optinio tankio matavimai duobutėse esant tam tikram bangos ilgiui (priklausomai nuo naudojamo substrato) atliekami naudojant specialius spektrofotometrus, pritaikytus mikroplokštelių skaitytuvams. Kiekybinis antigeno koncentracijos mėginyje įvertinimas nustatomas lyginant rezultatus su tirpalo optinio tankio priklausomybės nuo standartinio antigeno tirpalo koncentracijos kalibravimo kreive.

7 pav.

Kadangi specifinio imunokomplekso nustatymo etape antigenas yra susietas su imobilizuotų ir paženklintų antikūnų molekulėmis, literatūroje šis metodas dažnai vadinamas „sumuštinio“ metodu (iš anglų kalbos sandvich) arba dviejų vietų ELISA metodu (nuo angliškas dviejų vietų tyrimas).

Šiuo metodu galima analizuoti tik tuos antigenus, kurių paviršiuje yra bent du antigeno determinantai. Tai nepriimtina analizuojant daug monovalentinių antigenų (vaistinių junginių, pesticidų ir kt.).

Pagrindinis šio metodo privalumas yra didelis jautrumas. Šiuo metu junginių aptikimo riba šiuo metodu siekia apie 10-21 mol, o tai atitinka tik 600 analitės molekulių aptikimą mėginyje. Didžiausias jautrumas pasiekiamas, kai kiekviena imunologinė reakcija vykdoma pusiausvyroje, o tai turi įtakos analizės trukmei, kuri vidutiniškai yra 4-6 valandos. Nekonkurencinė ELISA, skirta antikūnams nustatyti, naudojant fermentu pažymėtų antrinių antikūnų ir imobilizuotų antigenų pavyzdį.

Tiriamasis serumas pridedamas prie imobilizuoto antigeno. Po nesurištų antikūnų inkubacijos ir plovimo pridedami žymėti antriniai antikūnai, kurie yra specifiniai analizuojamiems antikūnams. Po antrinės inkubacijos ir žymėtų antrinių antikūnų pertekliaus pašalinimo fermento etiketės kiekis ant nešiklio yra proporcingas specifinių antikūnų koncentracijai serume.

Ši schema yra viena iš labiausiai paplitusių ELISA antikūnams aptikti, nes ji leidžia aptikti įvairių antigenų antikūnus.

Heterogeninis konkurencinis ELISA tyrimas, skirtas antigenui nustatyti, naudojant paženklinto antigeno ir imobilizuotų antikūnų naudojimo pavyzdį.

Tirpalas, kuriame yra analizuojamas antigenas ir fiksuota antigeno-fermento konjugato koncentracija, pridedama prie antikūnų, imobilizuotų ant nešiklio. Po inkubacijos nešiklis nuplaunamas nuo nesurišto laisvo ir žymėto antigeno ir registruojamas fermentinis aktyvumas ant nešiklio, kuris yra atvirkščiai proporcingas nustatomo antigeno koncentracijai.



5.4 Homogeninis ELISA metodas.

Homogeninio fermento imunologinis tyrimas (HELISA) yra metodologiškai paprasčiausias ELISA tipas. Ją atliekant, vienas iš imuninės reakcijos dalyvių (dažniausiai mažos molekulinės masės antigenas) paženklinamas fermentu ir stebima antigeno-antikūno komplekso susidarymo eiga, fiksuojant fermentų aktyvumo pokyčius.

Toks fermentinio aktyvumo pažeidimas gali atsirasti dėl erdvinio fermento ir substrato atskyrimo arba dėl fermento molekulės konformacinių pokyčių, kurie lydi imuninio komplekso susidarymą. HIFA turi daug reikšmingų pranašumų, palyginti su kitais imunocheminiais metodais. Pirma, didelė išraiška (visa analizė naudojant HIFA užtrunka minutes ir net minučių dalis).

Ryžiai.8 Homogeninių fermentų imunologinio tyrimo parinktys(A – fermento (F) ir substrato (C) atskyrimo poveikis dėl sterinių kliūčių antigeno (Ag) ir antikūno (Ab) sąveikos metu; B – konformacijos pasikeitimo poveikis. fermentas formuojantis antigeno-antikūno kompleksui).

Antra, metodas yra vieno etapo ir nereikalauja daug darbo reikalaujančių ir daug laiko reikalaujančių plovimo etapų. Ir galiausiai, trečia, metodas reikalauja minimalių tūrių (8-50 μl) ir kiekių biologinio ar klinikinio mėginio. Tačiau HIFA metodas turi vieną itin reikšmingą trūkumą – jo pagrindu galima sukurti diagnostinių tyrimų sistemas tik mažos molekulinės masės antigenams. Tik šiuo atveju antikūnas, sąveikaujantis su antigenu, gali veiksmingai apsaugoti arba modifikuoti su šiuo antigenu susijusią fermento molekulę. Būtent šiuo atžvilgiu (nepaisant akivaizdaus paprastumo ir akivaizdžių pranašumų, palyginti su kitais metodais, HIFA pagrindu buvo sukurti diagnostikos įrankiai, skirti aptikti tik hormonus, peptidus, vaistines ir narkotines medžiagas bei kai kuriuos mažos molekulinės masės baltymus.

5.5 „Sumuštinis“ - ELISA variantas antigenams nustatyti.

Antigenai, aptikti naudojant šį ELISA variantą, turi turėti kelis epitopus, galinčius surišti antikūnus, arba pasikartojančius, erdviškai atskirtus to paties specifiškumo epitopus.

Atliekant šią ELISA versiją, labai specifiniai poli- arba monokloniniai antikūnai, adsorbuoti ant kietosios fazės, yra inkubuojami su tiriamuoju mėginiu. Po plovimo į duobutes įdedami fermentu pažymėti antikūnai (konjugatas) prieš tą patį antigeną ir tada atliekami visi kiti reakcijos etapai. Konkretaus komplekso susidarymo efektyvumas kiekviename analizės etape priklauso nuo antigeno-antikūno reakcijos surišimo konstantos.

Sifilio kraujo tyrimo tikslas – nustatyti antikūnus, kuriuos organizmas galėtų gaminti kovojant su jo sukėlėja Treponema pallidum.

Klaidingai teigiamas sifilio testas gali įvykti tais atvejais, kai antigenų gamyba įvyko dėl kitų priežasčių.

Klaidingai teigiamas sifilis diagnozuojamas 10 proc.

Kadangi tyrimas dėl sifilio skiriamas ne tik tada, kai pacientas turi nusiskundimų, bet ir medicininės apžiūros metu, prieš įsidarbinant, nėštumo metu, prieš hospitalizavimą, didelis užsikrėtimo procentas yra žmonių, kurie net neįtarė, kad yra tokia liga. .

Norint pašalinti klaidas, būtina užtikrinti gautų rezultatų patikimumą.

Teigiami sifilio rezultatai skirstomi į dvi grupes: ūminį ir lėtinį. Ūmus klaidingai teigiamas rezultatas atsiranda per 6 mėnesius nuo reguliaraus tyrimo.

• ūminiai infekciniai sutrikimai;
• sužalojimai;
• bet kokia vakcinacija likus 1-7 dienoms iki mėginio paėmimo;
• ūminis apsinuodijimas.

Esant bet kuriam organizmo veiksniui, suaktyvėja antikūnų gamybos procesas, kuris atsispindi tyrimo rezultatuose.

Jei yra lėtinių problemų, testas gali rodyti klaidingus rezultatus 6 mėnesius ar ilgiau.

• jungiamojo audinio sutrikimai;
• bet kokia tuberkuliozės forma;
• lėtiniai kepenų sutrikimai;
• ŽIV, hepatitas B, C, D ir kitos virusinės ligos;
• autoimuniniai procesai organizme.

Rezultatas tampa klaidingas dėl sistemingo nespecifinių antikūnų gamybos reaguojant į vieną iš išvardytų sutrikimų.

Ką daryti, jei aptinkamas netikras sifilis

Norėdami nustatyti, ar sifilio tyrimas gali būti klaidingas, turite įvertinti kitų ligos pasireiškimo veiksnių buvimą ir infekcijos tikimybę.

Treponema pallidum yra patogenas, lytiškai plintantis per lytinių organų, burnos ir tiesiosios žarnos gleivines kontaktuojant su užsikrėtusiu asmeniu. Taip pat galimas užsikrėtusios motinos perdavimas vaikui.

Inkubacinis laikotarpis, per kurį liga nesijaučia, yra 2–6 savaitės. Po to galimos infekcijos vietose susidaro sifilinės opos su tankiu pagrindu.

Po 1-2 savaičių arčiausiai pažeidimo vietos esantys limfmazgiai padidėja ir tampa skausmingi.

Diagnozuodami klaidingai teigiamą sifilį, turite grįžti į gydymo įstaigą. Tuo pačiu informuokite apie visus vaistus, kuriuos vartojote tyrimo išvakarėse, lėtines ir ūmias ligas.

Jei turėjote nesaugių lytinių santykių su neištirtu partneriu arba pastebėjote pirmuosius ligos požymius, turėtumėte apie tai pasakyti gydytojui.

Surinkęs anamnezę ir atlikęs tyrimą, gydytojas paskirs testų seriją, kuri leis nustatyti tikslų rezultatą su mažesne nei 1% paklaida.

Sifilio tyrimų tipai

Yra dviejų tipų testai: netreponeminis ir treponeminis. Pirmasis variantas apima dirbtinių Treponema pallidum analogų naudojimą, antruoju atveju naudojami tikri treponemai.

Ne treponeminiai metodai

Tokie metodai yra plačiai paplitę ir dažniausiai naudojami atliekant įprastinius medicininius tyrimus.

Privalumas – maža kaina, greiti rezultatai, galimybė atlikti tyrimus naudojant standartinę laboratorinę įrangą.

RW analizė

Tam iš paciento imamas kraujas, rečiau – smegenų skystis. Kraujas gali būti paimtas iš piršto arba iš venos. Klaida atliekant tokį tyrimą gali siekti iki 7 proc.

Kritulių mikroreakcija (MR arba RMP)

Gali apimti dviejų tipų sifilio tyrimus RPR ir VDRL. Dėl ląstelių skilimo, veikiant treponemai, susidaro antilipidiniai antikūnai.

Lipidai gali būti sunaikinti veikiant kitiems sutrikimams, todėl paklaidos laipsnis atliekant VDRL ir RPR yra 1-3%.

Treponeminiai tyrimai

Tokie tyrimai atliekami ne visose klinikose ir reikalauja brangios įrangos.

Todėl jie naudojami, kai įtariamas ligos buvimas remiantis netreponeminių tyrimų rezultatais. Tokių tyrimų paklaida yra mažesnė nei 1%.

Leidžia nustatyti antigenus ir antikūnus. Norėdami nustatyti rezultatą, pacientas dovanoja kraują iš piršto ar venos. Todėl tyrimai taip pat padeda nustatyti ligos stadiją.

Sifilio RPGA testas leidžia nustatyti raudonųjų kraujo kūnelių sukibimo procentą. Tikslų pasyviosios hemagliutinacijos reakcijos rezultatą galima gauti 28 dieną po užsikrėtimo.

Fermentinis imunologinis tyrimas nustato ligos buvimą ir stadiją pagal įvairių tipų imunoglobulinų kiekį.

Tiksliausias patogeninės DNR nustatymo tyrimas. Jis naudojamas retais atvejais, nes reikia sudėtingų reagentų.

RIF, RPGA, ELISA testų paklaidos tikimybė yra mažesnė nei 1%. Naudojant PGR, paklaida gali būti 0-1%.

Teigiamas rezultatas sifiliui nėščioms moterims

Nėščioms moterims, atliekant ne treponeminius tyrimus, klaidingas rezultatas gali būti pastebėtas 1,5% atvejų. Šio tipo ligų analizė yra privaloma viso nėštumo metu.

Pirmasis sifilio tyrimas atliekamas 12 savaičių, vėliau 30 savaičių ir prieš gimdymą. Rezultatas gali būti klaidingas dėl natūralių organizmo pokyčių, o ypač dėl imuniteto apsaugoti augantį vaisių.

Todėl nėštumo metu gali būti skiriamas pakartotinis tyrimas, net jei pirmieji rezultatai yra neigiami, jei buvo rizikos veiksnys.

Taip pat gali būti skiriami treponeminiai tyrimai, nes pasitvirtinus diagnozei ligos poveikis vaiko organizmui yra žalingesnis nei gydymas antibiotikais.

Silpnas teigiamas testas

Jei gautoje rezultato formoje yra 1–2 pliusai, tai gali reikšti, kad yra nedidelis antikūnų kiekis. Šie rezultatai gali atsirasti keliais atvejais:

• nebaigtas inkubacinis laikotarpis;
• vėlyva forma, po 2-4 metų;
• likusieji antikūnai po ligos gydymo.

Tokiu atveju pakartotinis patikrinimas reikalingas po 2 savaičių.

Kaip tinkamai pasiruošti testams

Jei buvo atliktas klaidingas sifilio tyrimas, jums bus atliktas pakartotinis tyrimas. Norint, kad jo rezultatai būtų kuo tikslesni, būtina tinkamai pasiruošti.

• Prieš analizę leidžiama gerti tik vandenį, valgyti draudžiama;
• atsisakyti alkoholio ir rūkyti 1 valandą prieš 24 valandas;
• jei dovanojate kraują iš venos, prieš tai darydami pailsėkite 10 minučių;
• Paūmėjus infekcinėms ligoms, prasidėjus mėnesinėms arba pacientė prieš dieną buvo daryta rentgeno spinduliais, kraujo tyrimas dėl sifilio neatliekamas.

Kontraindikacijų sąraše taip pat yra nemažai vaistų, todėl jei gydotės, pasakykite gydytojui apie vartojamus vaistus.

Jei liga patvirtinama

Jei atlikus keletą patikrinimų, įskaitant treponeminius tyrimus, rezultatas yra teigiamas, verta imtis kelių priemonių:

• informuokite apie tai savo seksualinį partnerį, būtina, kad jis taip pat būtų patikrintas;
• artimi giminaičiai turi būti ištirti;
• būtina atlikti profilaktinį artimųjų gydymą;
• Viso gydymo kurso metu būtina išduoti nedarbingumo pažymėjimą ir vengti artimo kontakto su kitais žmonėmis, kad būtų išvengta infekcijos perdavimo;
• Gydymo pabaigoje išduodama pažyma, kuri turi būti pridedama prie medicininės kortelės ir pateikiama atliekant antikūnų tyrimus, kad diagnostikams nekiltų klausimų dėl antigenų atsiradimo rezultatuose.

Diagnozės metu informacija yra konfidenciali. Ji neatskleidžiama imant nedarbingumo lapelį visuose ligoninės išduodamuose dokumentuose, apie šią diagnozę neinformuojami žmonės, kurie neturi artimo ryšio.

Po gydymo pacientas yra visiškai saugus, anksčiau sirgęs sifiliu, negali būti priežastis atsisakyti įsidarbinti ar naudotis kitomis žmogaus teisėmis.

Jei diagnozė patvirtinama ankstyvosiose stadijose, visiško išgydymo tikimybė yra 100%. Treponema pallidum yra viena iš nedaugelio, per daugelį penicilinu gydytų pacientų, kurie nesukūrė apsaugos nuo jo.

Todėl pacientai gydomi vaistais, kurių pagrindą sudaro penicilino dariniai. Jei pasireiškia pirminė ligos forma, būtina diagnozuoti ir gydyti visus lytinius partnerius, kuriuos užsikrėtęs asmuo turėjo per 3 mėnesius.

Sifilis po gydymo pradiniame etape nepalieka komplikacijų. Liga gali sukelti negalią, jei ji yra lėtinė arba jei yra infekcija gimdoje.

teigiamas dėl sifilio

Klausimai ir atsakymai apie: jei teigiamas dėl sifilio

Klausimas daktarui Sukhovui Yu.A.
Sveiki. Jau labai trumpai uždaviau jums klausimą Ukrainos sveikatos svetainėje. Aš visiškai parašysiu savo istoriją. Prašome pasikonsultuoti. Kokius dar testus reikia atlikti?
Prieš 2 metus buvo atsitiktinis seksualinis kontaktas.
Po 1,5 mėnesio prasidėjo kažkoks siaubas: užsitęsė karščiavimas, skydliaukės srityje lyg koks darbas vyksta, kažkas zvimbė, tada skauda galvą, skauda gerklę, stipriai skauda kaulus ir raumenis, pirmas dūris gamtoje, tada kaip verdantis vanduo, tekantis per raumenis, pykinimas, vienkartinis bėrimas, dažnos ūminės kvėpavimo takų virusinės infekcijos, kurios ilgą laiką nereaguoja į gydymą, dusulys, pasunkėjęs kvėpavimas, blogas kvapas iš burnos, neuralgija, naktinis prakaitavimas, stiprus silpnumas, sumažėjęs našumas. Vos nevirčiau lavonu. Prieš tai buvau sveika ir klesti mergina, šokau profesionaliai, buvau fiziškai gana ištverminga ir aktyvi. Aš praktiškai niekada nesirgau peršalimo ligomis.
Praėjus 1 metams ir 10 mėnesių po neapsaugoto lytinio akto, 2 skirtingose ​​ELISA laboratorijose man ŽIV testas buvo neigiamas.
Hepatitas B ir C neigiamas.
EBV PCR neigiamas
CMV PCR neigiamas
6 tipo herpes virusas neigiamas
Toksoplazmozės PGR neigiamas
Sifilis neigiamas
STI neigiamas.

Bendras kraujo tyrimas: ESR 30; visa kita yra normalu.
Biochemija teigiamas CRP, likusi dalis normali.

Ką turėčiau daryti? Esu beviltiška, jau išsitiriau dėl visų infekcijų, bet priežastis nerasta ar jau praėjo 2 metai nuo kontakto. Kai kurie simptomai praėjo, bet jaučiuosi labai blogai, nuolatinis neuralgija, krūtinės srities prakaitavimas nesuprantu, nuo ko sergu Esu tikras, kad šis jaunuolis mane užkrėtė, aš daugiau jo nemačiau? Pagalba. Prašau patarkite ką daryti?

Sveiki!
Man 31 metai ir 35 nėštumo savaitės. Prieš 2 mėnesius daviau kraujo nuo infekcijų ELISA metodu (nes baigiau vėmimu infekcinių ligų skyriuje, kur padarė tyrimą), ginekologė nenurodė duoti kraujo nuo infekcijų ankstyvose nėštumo stadijose. (kas man atrodo keista, nors kraujas dėl AIDS ir sifilio tiriamas tris kartus nėštumo metu, visi neigiami). Dabar man buvo pranešta apie rezultatus. Prašau pakomentuoti. Kai kurie rodikliai kelia nerimą, pavyzdžiui, tymų virusas, CMV, herpes HSV 1/2, Epstein-Barr viruso infekcija (EBV):

Raudonukė Ig G K=2,0
CMV Ig G K=4,1
Herpes HSV Ig G 1 tipo K=3,4, 2 tipo neigiamas.
Epstein-Barr VCA K=4,7 NA –
chlamidijos ir mikoplazmos – neigiamos.

Mano nurodymas yra toks:
Teigimo koeficientas K = mėginio optinis tankis. Jei K yra mažesnis nei 0,9, rezultatas yra neigiamas, jei K yra nuo 0,9 iki 1,1, tai abejotina, jei K yra daugiau nei 1,1, tai teigiamas.
Ig G, EBV, NA reikšmės iki 55 cu/ml gali būti normalios, virš šios vertės rezultatas yra teigiamas.
Prašome pakomentuoti! Ačiū, už dėmesį!

Sifilio tyrimo rezultatų iššifravimas

Sifilis yra rimta, labai užkrečiama liga. Ligai nustatyti atliekami kraujo (veninio ir kapiliarinio) tyrimai, kai kuriais atvejais tiriamas smegenų skystis. Sifilio testo aiškinimą atlieka gydantis gydytojas. Pacientas gali savarankiškai matyti ir suprasti kai kuriuos analizės simbolius, tačiau galutinę išvadą apie ligos buvimą ar nebuvimą turi padaryti kvalifikuotas gydytojas. Galimas klaidingai teigiamas arba klaidingai neigiamas sifilio testas.

Kada kreiptis į gydytoją

Ilgą laiką sifilis buvo pavojinga liga, kurios nepavyko išgydyti. Šiuolaikinė medicina turi visas priemones visiškai išgydyti ligą. Kuo anksčiau bus nustatyta diagnozė ir nustatyta liga, tuo lengviau ją gydyti. Sifiliu užsikrečiama ne tik lytinio kontakto metu, bet ir dalijantis su ligoniu tais pačiais namų apyvokos daiktais (dantų šepetėliu, rankšluosčiu, virtuvės reikmenimis ir kt.). Todėl periodiškai skubūs kraujo tyrimai dėl sifilio rekomenduojami kiekvienam žmogui.

Užsikrėtus paburksta kirkšnies srities limfmazgiai, burnoje ir lytinių organų srityje atsiranda opų, odos bėrimų. Pastebėję pirmuosius ligos požymius, nedelsdami kreipkitės į gydytoją. Apžiūra gali būti anoniminė, gavus ginekologo, urologo, proktologo, venerologo ar nuolatinio terapeuto siuntimą. Išlaikę testą, turėtumėte kreiptis į gydytoją dėl sifilio tyrimo išrašo.

Egzamino tikslas

Dažnai medicininių apžiūrų metu gydytojas gali nurodyti atlikti daugybę laboratorinių tyrimų, įskaitant sifilio tyrimą. Ši kryptis neturėtų būti priimta kaip įtarimas dėl ligos. Daugelyje visuomenės gyvenimo sričių reikalingas ligos nebuvimo pažymėjimas.

• Šeimos planavimas
• Registracija į nakvynės namus
• Prieiga prie darbo vietos sveikatos priežiūros darbuotojams, maitinimo darbuotojams ir kt.
• Organų ar kraujo donorystė
• Lytiškai aktyvūs pacientai
• Klinikinių simptomų buvimas
• Sifilio gydymo pabaiga

Paprastai vienas iš nespecifinių (ne treponeminių) testų skiriamas kaip pirminis tyrimas. Tokių tyrimų patikimumas yra palyginti mažas ir pacientas gali gauti klaidingai teigiamą rezultatą. Tokiu atveju bus paskirtas pakartotinis tyrimas naudojant specifinį (treponeminį) testą. Teigiamas arba neigiamas testas turi būti peržiūrėtas gydančio gydytojo.

Pasiruošimas testui

Prieš duodami kraują iš piršto ar venos laboratoriniams tyrimams, turite laikytis tam tikrų taisyklių, kad analizė būtų kuo patikimesnė. Likus 8-12 valandų iki kraujo paėmimo negalima valgyti, nevartoti arbatos ar kavos. Dieną prieš apsilankymą laboratorijoje nerekomenduojama valgyti aštrų, riebų, keptą, sūrų ar rūkytą maistą. Antibiotikai ir kiti vaistai taip pat gali trukdyti tyrimui. Apie visas vartojamas medžiagas reikia pranešti gydytojui. Jis gali rekomenduoti susilaikyti nuo testo 1 ar kelias savaites. Kraujo mėginį galima paimti privačioje laboratorijoje, rajono poliklinikoje arba galite išsikviesti sveikatos priežiūros specialistą į namus.

Bet kokiu atveju naudojama sterili įranga ir vienkartinės pirštinės.

Greitąjį sifilio testą galima atlikti savarankiškai namuose. Vaistinės siūlo specialius tyrimus su išsamiomis instrukcijomis rusų kalba. Tyrimo rezultatas sužinomas per 10 minučių. Viena raudona juostelė ant indikatoriaus yra neigiamas sifilio testas, dvi juostelės yra teigiamos. Tokių tyrimų patikimumas nėra pakankamai didelis ir negali būti diagnozės patvirtinimas.

Kaip suprasti nespecifinio tyrimo rezultatą

Po tyrimo pacientai dažnai jaučiasi netikri. Duoti kraujo ir nesugebėti iššifruoti sifilio tyrimų patiems, žinoma, nemalonu. Norint iššifruoti kraujo tyrimą, būtinas medicininis išsilavinimas ir atitinkama gydytojo kvalifikacija, taip pat atsižvelgti į visus rezultatui įtakos turinčius veiksnius. Ar pacientas gali pats perskaityti sifilio tyrimo rezultatus? Pamatę laboratorinę išvadą, galite padaryti paprastas išvadas, tačiau gydytojas turi patvirtinti arba paneigti diagnozę.

Toluidino raudonasis tyrimas skiriamas ne diagnozei nustatyti, o ligos gydymo efektyvumui patikrinti. tyrimas rodo, kiek pasikeitė antikūnų skaičius, palyginti su ankstesne analize. Jei skaičius sumažėjo, gydymas sėkmingas. Gydymo metu analizė atliekama kelis kartus, kaip nurodė gydytojas. Praėjus 3 mėnesiams po procedūrų užbaigimo, atliekamas kontrolinis tyrimas.

Netreponeminiai tyrimai (RSKk, RMP ir RPR) dažnai skiriami medicininių apžiūrų metu ir kaip greita diagnozė. Atlikus tyrimą, yra keletas žymėjimo variantų. Juos iššifruoti gana paprasta:

• "-" neigiamas rezultatas
• „+“, „1+“ arba „++“, „2+“ silpnai teigiama analizė
• „+++“, „3+“ arba „++++“, „4+“ teigiamas testas dėl sifilio

Bet kuris rezultatas gali būti klaidingai teigiamas arba klaidingai neigiamas dėl sifilio. Nesant klinikinių simptomų ir atsitiktinių seksualinių kontaktų, gydytojas neigiamą rezultatą gali pripažinti teisingu. Teigiama reakcija paprastai tikrinama naudojant treponeminį testą.

Konkretūs tyrimo rezultatai

Treponeminiai testai yra sudėtingi ir brangūs, palyginti su netreponeminiais. Sifiliui diagnozuoti naudojami kelių tipų tyrimai: RSCT, RIBT, RIF, RPGA, ELISA ir imunoblotingas). Vienas iš tikslių specifinių tyrimų yra RIBT analizė. Tyrimo rezultatą laboratorija gali nurodyti procentais.

• 20 % atitinka neigiamą rezultatą („–“)
• 21–30 % abejotina analizė („++“ arba „2+“)
• 31–50 % silpnai teigiami („+++“, „3+“)
• 51% ar daugiau atitinka teigiamą rezultatą

Imunoblotavimas yra vienas iš šiuolaikinių ir tikslių ligos diagnozavimo būdų. Paprastai skiriamas patvirtinti arba paneigti pirmojo tyrimo rezultatus. IgG ir IgM antikūnų nustatymas kraujyje rodomas juostelėmis. Tyrimo rezultatai interpretuojami lyginant su netreponeminiu testu.

Jei abu rezultatai yra neigiami, pacientas yra sveikas arba infekcija yra pirmąją vystymosi savaitę. Abu teigiami rezultatai rodo, kad yra sifilis arba kita, galbūt autoimuninė liga.

Teigiamas imunobloto testas po neigiamo netreponeminio tyrimo rodo, kad yra sifilis, autoimuninė liga ar vėžys.

Nėščioms moterims gali būti teigiama reakcija. Neigiamas imunobloto testas po teigiamo netreponeminio tyrimo reiškia ligos nebuvimą.

Analizės patikimumas

Visada yra tikimybė, kad tyrimo rezultatas bus neteisingas. Aiškinant sifilio tyrimus, ypatingas dėmesys turėtų būti skiriamas išoriniams veiksniams, kurių pacientas negali kontroliuoti. Tyrimą atliekantis laborantas ar pacientas taip pat gali suklysti, kai neteisingai pasiruošė kraujo paėmimui arba nepateikė gydytojui tikros informacijos apie save. Klaidingai teigiamas rezultatas galimas dėl šių veiksnių:

• Bet kokio tipo diabetas
• Vaistų buvimas kraujyje
• Apsinuodijimas alkoholiu
• Infekcinės ligos (tymai, hepatitas, mononukleozė ir kt.)
• Gerybiniai ar piktybiniai navikai
• Širdies ligos
• Antibiotikų vartojimas arba neseniai atlikta vakcinacija
• Autoimuninės ligos (raudonoji vilkligė, reumatoidinis artritas ir kt.)
• Nėštumas
• Valgyti riebų, aštrų ar sūrų maistą dieną prieš imant kraujo mėginius

Priklausomai nuo ligos stadijos, kai kurie tyrimai gali neaptikti ligos. Taigi, Wasserman reakcija (RSKt ir RSKk) atliekama tik po 3-4 savaičių po galimo užsikrėtimo su 100% tikimybe, esant tretiniam sifiliui, patikimumas bus tik 75%. Norint diagnozuoti pradines ligos stadijas, patartina naudoti ELISA testą. Tyrimas yra fermentinis imunologinis tyrimas, turintis didelį jautrumą antikūnams. Rezultato patikimumas yra beveik 100%, jei yra kitų ligų, klaidingai teigiamas rezultatas.

Neigiami lytiškai plintančių ligų tyrimų rezultatai reiškia, kad žmogus sveikas. Abejotinas sifilio testas lems pakartotinį tyrimą. Jei yra veiksnių, galinčių turėti įtakos galutinei išvadai, pavyzdžiui, kitų ligų buvimas, gydytojas pakeis tyrimo parametrus. Teigiamas sifilio tyrimo rezultatas nėra mirties nuosprendis ar priežastis panikuoti. Vaistų pagalba ligą galima visiškai išgydyti. Tačiau reikia atsiminti, kad ligos ankstyvoje stadijoje yra daug lengviau išgydomos.

ELISA dėl sifilio: analizės metodas, interpretacija, klaidingai teigiamų rezultatų priežastys

Į standartinių infekcinių ligų diagnostikos priemonių sąrašą įtrauktas fermentinis imunologinis tyrimas. Jei ELISA tyrimas yra teigiamas dėl sifilio, nedelsdami nepanikuokite.

Pažvelkime atidžiau į šios tyrimo technikos ypatumus ir gautų rezultatų interpretavimo principus skirtingose ​​pacientų kategorijose.

Tyrimo esmė

Fermentinis imunologinis tyrimas yra vienas iš labiausiai paplitusių infekcinių ligų diagnostikos metodų. Jis priklauso treponeminių tyrimų kategorijai, tai yra, jis gali būti naudojamas norint nustatyti sifilio sukėlėjo - blyškiosios treponemos - buvimą paciento organizme.

Taikant ELISA metodą, sifilis nustatomas nustatant antikūnus prieš treponemą. Jų yra paciento kraujyje, o jų tipas ir kiekis priklauso nuo ligos stadijos ir formos, o tai leidžia gauti svarbios informacijos apie esamą žmogaus sveikatos būklę.

Privalumai ir trūkumai

Įtariant sifilį ar kitas infekcines ligas, labai dažnai skiriama ELISA. Taip yra dėl to, kad analizė leidžia tiksliai nustatyti ligos tipą ir stadiją, o jos patikimumas išlieka aukšto lygio – paklaidos tikimybė, remiantis kelių tyrimų rezultatais, yra tik 1%, pirminis ELISA tyrimas. tikslumas yra apie 90%.

Aukštos kokybės reagentų ir modernios įrangos naudojimas leidžia maksimaliai padidinti rodiklių tikslumą.

Apskritai metodo pranašumai yra šie:

1. Didelis rezultatų tikslumas. Tikimybė gauti klaidingus duomenis yra labai maža.
2. Žmogiškojo poveikio faktoriaus sumažinimas.Šiuolaikinė ELISA atlikimo įranga pašalina žmogaus įtaką tyrimo rezultatams dėl proceso automatizavimo.
3. Specifinių antikūnų identifikavimas. Neįmanoma supainioti vieno tipo antigenų su kitais, todėl analizė parodo tikslų konkrečios diagnozės rezultatą.
4. Užfiksuoti menkiausius nukrypimus nuo normos. Net ir mažiausia patologinių veiksnių koncentracija neliks nepastebėta.

Neturėtume pamiršti apie šio metodo trūkumus. ELISA turi šiuos trūkumus:

1. Auksta kaina. Didelę kainą lemia daugybė veiksnių, visų pirma geros įrangos, aukštos kokybės reagentų ir pakankamai išsilavinusių specialistų poreikis.
2. Preliminarios diagnozės poreikis. Turite žinoti, kokių antigenų ieškoti, nes be papildomų duomenų nebus įmanoma nustatyti tikslios diagnozės.
3. Klaidingai teigiamo rezultato tikimybė. Tam tikros kūno būklės ir kiti veiksniai gali iškraipyti galutinius duomenis.

Naudojimo indikacijos

Gydytojas gali paskirti fermentinį imunologinį tyrimą, kad nustatytų ne tik sifilį, bet ir daugybę kitų infekcinių ligų.

Jei atsižvelgsime į situaciją tiesiogiai su treponemos infekcija, tyrimo priežastis gali būti:

• išorinių ligos simptomų atsiradimas (šankrai, sifilinis bėrimas, dantenos ir kt.);
• reikšmingas imuniteto sumažėjimas;
• seksualinio partnerio, artimųjų ir šeimos narių sifilio aptikimas ar įtarimas;
• teigiama reakcija kitų tyrimų metu;
• nustatyti kitas ligas, kurios gali būti susijusios su sifiliu;
• asmens noras pasitikrinti.

Vykdymo būdai

ELISA galima atlikti įvairiais būdais. Kiekvienu konkrečiu atveju parenkamas tinkamiausias variantas.

Visų pirma, metodai skirstomi į:

1. Kokybiškas. Aptinkamas infekcijos ar viruso buvimas paciento kūne.
2. Kiekybinis. Nustato antikūnų prieš patogeninį agentą koncentraciją žmogaus organizme, kuri parodo ligos vystymosi stadiją ir intensyvumą.

Taip pat yra ELISA atlikimo metodų klasifikacija, pagrįsta reikiamos reakcijos atkūrimo principu.

Yra 3 variantai:

1. Tiesiai. Pažymėti antikūnai suleidžiami į pateiktus kraujo mėginius.
2. Netiesioginis su antigenais. Sorbuoti antigenai pirmiausia dedami į polistireno plokštelės, skirtos ELISA tyrimui, ląsteles. Tada prie jų pridedami virusiniai antikūnai, kurie provokuoja imuninių kompleksų, būtinų tolesniam rezultatų vertinimui, susidarymą.
3. Netiesioginis su antikūnais.Šis metodas dažnai naudojamas lytiniu keliu plintančioms ligoms gydyti. Tai apima preliminarią antikūnų absorbciją, tik tada į tabletę pridedami antigenai.

Medžiagų surinkimo taisyklės

Norint sumažinti nepatikimų rezultatų gavimo riziką, būtina teisingai paaukoti kraują analizei.

Prieš atlikdami ELISA testą, turite laikytis tam tikrų apribojimų:

• vengti stipraus fizinio ir emocinio streso;
• mesti rūkyti ir gerti alkoholį bent 1-3 dienas;
• keletą dienų reikia pereiti prie tinkamos mitybos;
• Moterims patartina kontroliuoti menstruacinio ciklo fazę, nes hormonai gali iškraipyti rezultatus;
• paskutinis valgis turėtų būti 8–10 valandų prieš kraujo donorystę;
• 10 dienų prieš vartojant vaistus, kurie gali turėti įtakos tyrimo rezultatams, neįtraukiami.

Atliekant ELISA veninį kraują imamas iš alkūnkaulio venos, jis turi būti duodamas ryte tuščiu skrandžiu. Apskritai galioja standartinės pasiruošimo veninio kraujo paėmimui taisyklės. Atsižvelgiant į tai, kokia liga yra tiriama, gali būti keliami papildomi išankstinio paciento paruošimo reikalavimai.

Metodika

ELISA atlikimo instrukcijos yra gana paprastos:

1. Paciento kraujas imamas iš venos.
2. Paimta medžiaga paruošiama ir suskirstoma į pavyzdžius ant specialaus smulkaus tinklelio padėklo.
3. Antigenai sumaišomi su antikūnais pagal pasirinktą metodą.
4. Reakcija vertinama. Mėginiai lyginami su kontroliniais mėginiais, o rezultatai vertinami kokybiškai ir kiekybiškai.
5. Duomenys įvedami į specialią lentelę su pridedamais kiekybiniais rodikliais (bendras antikūnų kiekis).
6. Gydantis gydytojas interpretuoja rezultatus. Jei reikia, skiriamas tinkamas gydymas.

Po tyrimo pacientui išduodamas dokumentas su rezultatais. Tai atrodo kaip lentelė su atitinkamais simboliais priešais kiekvieną imunoglobulino tipą sankirtoje su infekcinių ligų pavadinimais.

Dekodavimas

Tik specialistas galės teisingai iššifruoti tyrimo rezultatus. Sunku savarankiškai išsiaiškinti, ką reiškia, pavyzdžiui, ELISA rezultatas k = 1 4 Sifilis taip pat gali pasireikšti įvairiomis formomis, tai atsispindi ir galutiniuose duomenyse.

Rezultatai rodo 3 imunoglobulinų tipus:

1. IgM. Leidžia nustatyti užsikrėtimo sifiliu trukmę. Teigiamas rezultatas rodo ligos paūmėjimą. Jų nebuvimas gali rodyti lėtinių patologijų remisiją arba latentinę ligos formą.
2. IgA. Nurodo ligą, kuriai nuo užsikrėtimo praėjo daugiau nei mėnuo. Tai taip pat yra ūminės ligos fazės požymis tiek esant įprastoms patologijoms, tiek esant pažengusioms lėtinėms.
3. IgG. Tai yra ligos piko laikotarpio, tai yra jos paūmėjimo, požymis. Sergant sifiliu, teigiama reakcija pasireiškia praėjus kuriam laikui po gydymo. Kai kurių tipų ligoms tai gali būti išsivysčiusio imuniteto požymis.

Šias medžiagas organizmas gamina tam tikra seka – tai papildomas ligos požymis. Kokybiniai tyrimai nustato tik imunoglobulinų buvimą kiekvienos rūšies kraujyje.

Tai atsispindi analizėje dalyvaujančių medžiagų spalvos pasikeitime. Kiekybiniai rodikliai yra pagalbiniai, jie tiksliau apibūdina situaciją. Antigenų ir antikūnų santykis rodo ligos sunkumą ir organizmo reakcijos intensyvumą.

Ką daryti

Jei pacientas tikrai serga sifiliu, absoliučiai visada nustatomas teigiamas ELISA, tokio tyrimo metu neįmanoma nepastebėti treponemų. Nenusiminkite, liga yra labai išgydoma, ypač pradinėse stadijose.

Ką daryti, jei tyrimo rezultatai yra teigiami:

• pagal gydytojo nurodymus atlikti papildomus tyrimus;
• baigti antibiotikų terapijos kursą pagal pasirinktą režimą;
• sutelkti savo pastangas į imuninės sistemos stiprinimą;
• informuoti savo seksualinį partnerį apie ligą;
• ateityje reguliariai atlikti profilaktinę diagnostiką iki išregistravimo ambulatorijoje (po 5 metų, jei nėra teigiamų tyrimų rezultatų).

Nereikia atidėlioti nedarbingumo atostogų ir bijoti rezultatų viešinimo. Diagnozė yra užšifruota ir lieka paslaptyje tik esant grėsmei užsikrėsti kitiems žmonėms, apie problemą būtina informuoti artimuosius ir seksualinius partnerius, kad jie atliktų reikiamus tyrimus.

Klaidingai teigiamas rezultatas ir jo priežastys

Kartais kitų tyrimų ir ELISA rezultatai registruojami kaip klaidingai teigiami dėl sifilio. Štai kodėl rekomenduojama atlikti 2–3 pagalbinius metodus ir po kurio laiko pakartoti fermentinį imuninį tyrimą.

Tokie netikslumai dažniausiai atsiranda dėl šių veiksnių:

• nėštumas;
• lėtinės ligos;
• neseniai atlikta vakcinacija;
• traumų.

Klaidingai teigiami rezultatai skirstomi į ūminius ir lėtinius, atsižvelgiant į juos išprovokavusio veiksnio pobūdį.

Išsamus sifilio testų aiškinimas

Sifilio tyrimai: tyrimų rūšys, rezultatų interpretavimas, klaidingai teigiamų ir klaidingai neigiamų tyrimo rezultatų priežastys.

Sifilis yra lytiniu keliu plintanti liga, kurią sukelia bakterija Treponema pallidum (treponema pallidum). Daugiau apie sifilio perdavimo būdus, jo simptomus ir galimas komplikacijas skaitykite straipsnyje Viskas apie sifilį. Simptomai ir gydymas.

Laiku aptiktas sifilis (naudojant specialius tyrimus) leidžia gydytojams laiku pradėti gydymą ir užkirsti kelią pavojingų šios ligos komplikacijų vystymuisi.

Sifilio tyrimas nėštumo metu padeda išvengti įgimtu sifiliu sergančių vaikų gimimo. Daugiau informacijos apie sifilio tyrimus nėštumo metu rasite straipsnyje Viskas apie sifilio diagnozę ir gydymą nėštumo metu.

Kodėl man buvo paskirtas sifilio tyrimas?

Daugeliu atvejų gydytojai neturi galimybės gauti tikslių duomenų apie pacientų seksualinį gyvenimą (kai kurie žmonės slepia seksualinio gyvenimo detales arba neįvertina rizikos užsikrėsti lytiškai plintančiomis ligomis). Todėl, siekdami apsaugoti žmones nuo galimų jų pačių neatsargumo ar medicininių žinių stokos pasekmių, kai kuriais atvejais gydytojai skiria vadinamuosius sifilio atrankinius tyrimus (tai yra tyrimus, kuriuos atlieka daug žmonių).

Gydytojas gali nurodyti atlikti sifilio tyrimus, net jei neturite ligos simptomų ir esate įsitikinę, kad negalėjote juo užsikrėsti.

Šių tyrimų poreikis yra dėl to, kad sifilis kartais perduodamas kasdieninio kontakto metu (ne lytiniu būdu) ir pasireiškia latentiniu pavidalu (ty be simptomų).

Paprastai atrankos tyrimas skiriamas šiais atvejais:

1. Kreipdamiesi dėl darbo (sveikatos priežiūros darbuotojai, maitinimo darbuotojai, kariškiai ir kt.)
2. Registruojantis nėštumui.
3. Priėmimo į ligoninę metu, ruošiantis operacijoms.
4. Kraujo donorai.
5. Asmenys, kali laisvės atėmimo vietose.

Jūsų gydytojas taip pat gali paskirti sifilio tyrimus:

1. Kai nustatomi ligos simptomai (dažniausiai bėrimas lytinių organų srityje).
2. Gavus teigiamus atrankos tyrimų dėl sifilio rezultatus.
3. Jei turėjote lytinių santykių su asmeniu, kuriam buvo diagnozuotas sifilis.
4. Naujagimiai, kurių motinos serga sifiliu.

Be to, gydymo metu periodiškai atliekami sifilio tyrimai (siekiant užtikrinti, kad gydymas būtų veiksmingas) ir net pasibaigus gydymo kursui, siekiant stebėti, ar jis išgydomas.

Kokie testai naudojami sifiliui diagnozuoti?

Gydytojas dermatovenerologas užsiima sifilio diagnozavimu ir gydymu. Norint diagnozuoti ligą, gali būti naudojami šie tyrimai:

Inspekcija odos, išorinių ir vidinių lytinių organų tyrimai atliekami siekiant nustatyti pagrindinius sifilio simptomus: šansą, limfmazgių padidėjimą, odos bėrimus ir kt. (žr. Sifilio simptomai)

Tam, kad aptikti Treponema pallidum, gydytojai mikroskopu tiria tepinėlius (ar nuospaudas), gautus iš opų, limfmazgių, nėščių moterų vaisiaus vandenų ir kt. Kraujas mikroskopu netiriamas.

Svarbu: jei atliekant tyrimus mikroskopu buvo aptikta Treponema pallidum, tai reiškia, kad tikrai sergate sifiliu. Bet jei tyrimai rodo, kad sifilio sukėlėjas nebuvo nustatytas, negalite būti visiškai tikri, kad sifilio nėra. Kad įsitikintumėte, jog nesergate, turite atlikti papildomus tyrimus, aprašytus toliau.

PCR (polimerazės grandininė reakcija) yra sudėtingas ir brangus sifilio diagnostikos metodas, leidžiantis nustatyti Treponema pallidum DNR kraujyje ar kitose tiriamosiose medžiagose (amniono skystyje, smegenų skystyje). Jei PGR testas duoda neigiamą rezultatą, greičiausiai nesergate sifiliu. Tačiau jei gaunate teigiamą rezultatą (tai yra, jei PGR aptiko Treponema pallidum DNR kraujyje), nėra 100% garantijos, kad sergate. Taip yra dėl to, kad PGR kartais duoda klaidingai teigiamus rezultatus (duoda teigiamą rezultatą nesant ligos). Todėl, jei PGR duoda teigiamą rezultatą, rekomenduojama papildomai atlikti kitus sifilio tyrimo metodus (pvz., imunofluorescencinę reakciją (RIF) ir pasyvų hemagliutinacijos testą (RPHA)).

Kas yra serologinis sifilio tyrimas?

Serologinė analizė – tai specialių baltymų (antikūnų), kurie gaminami žmogaus organizme reaguojant į infekciją, nustatymas kraujyje. Skirtingai nuo ankstesnių diagnostikos metodų, serologiniais tyrimais aptinkama ne pati Treponema pallidum, o tik jos „pėdsakai“ organizme.

Jei jūsų kraujyje aptinkama Treponema pallidum antikūnų, tai rodo, kad šiuo metu esate užsikrėtę sifiliu arba sirgote juo anksčiau.

Kokie tyrimai rodo, kad žmogus serga sifiliu?

Serologiniai sifilio tyrimai skirstomi į 2 dideles grupes: nespecifinius ir specifinius. Pagrindinis skirtumas tarp šių tyrimų yra tas, kad nespecifiniai testai rodo teigiamą rezultatą tik tuo atveju, jei žmogus šiuo metu serga sifiliu ir po gydymo tampa neigiamas, o specifiniai testai išlieka teigiami net ir išgydžius ligą.

Kitaip tariant, neigiamas nespecifinio tyrimo rezultatas yra tam tikra garantija, kad esate sveikas.

Kokie sifilio tyrimai yra nespecifiniai (ne treponeminiai)?

Nespecifiniai testai apima mikroprecipitacijos reakciją (MR) ir Wassermano reakciją (RW). Šie testai naudojami sifiliui tikrinti. Išgydžius sifilį, šie testai tampa neigiami 90% žmonių.

Kaip veikia šie testai: Dėl Treponema pallidum (su sifiliu) gyvybinės veiklos organizmo ląstelės miršta. Reaguodama į ląstelių sunaikinimą, imuninė sistema gamina specialius baltymus (antikūnus arba imunoglobulinus). Nespecifiniais tyrimais siekiama nustatyti šiuos antikūnus, taip pat apskaičiuoti jų koncentraciją (antikūnų titrą).

Kritulių mikroreakcija (MR) ir jo analogai kai kuriose šalyse: greito atgimimo testas (RPR, Rapid Plasma Reagins) Ir VDRL testas (Venerinių ligų tyrimų laboratorija) yra ne treponeminiai tyrimai, skirti sifiliui tikrinti.

Kas bus tiriama:

paprastai praėjus 4-5 savaitėms po užsikrėtimo.

jei testas rodo teigiamą rezultatą, tada yra tikimybė, kad sergate sifiliu. Kadangi šis testas gali duoti klaidingai teigiamus rezultatus, rekomenduojama atlikti papildomus tyrimus, naudojant toliau aprašytus konkrečius testus. Neigiamas rezultatas rodo sifilio nebuvimą arba ankstyvą ligos stadiją (prieš antikūnų atsiradimą kraujyje).

jei kraujyje randama antikūnų, kurių titras yra nuo 1:2 iki 1:320 arba didesnis, tai reiškia, kad esate užsikrėtę sifiliu. Sergant vėlyvuoju sifiliu, antikūnų titras gali būti žemas (tai vertinama kaip abejotinas rezultatas).

Klaidingai teigiami MR rezultatai būna maždaug 2–5% atvejų, čia pateikiamos galimos jų priežastys:

1. Sisteminės jungiamojo audinio ligos (sisteminė raudonoji vilkligė, sklerodermija, reumatoidinis artritas, dermatomiozitas, vaskulitas ir kt.)
2. Infekcinės ligos: virusinis hepatitas, infekcinė mononukleozė, tuberkuliozė, kai kurios žarnyno infekcijos ir kt.
3. Uždegiminės širdies ligos (endokarditas, miokarditas).
4. Diabetas.
5. Nėštumas.
6. Neseniai atlikta vakcinacija (vakcinacija).
7. Alkoholio, narkotikų ir kt.
8. Anksčiau sirgo ir išgydė sifiliu (apie 10 % gydytų žmonių MRT testas gali likti teigiamas visą gyvenimą).

Kokios gali būti klaidingai neigiamų rezultatų priežastys: tyrimas gali klaidingai parodyti neigiamą rezultatą, jei kraujyje yra daug antikūnų, jei tyrimas atliekamas ankstyvoje ligos stadijoje, kol dar neatsirado antikūnų, arba sergant vėlyvuoju sifiliu, kai kraujyje lieka mažai antikūnų.

Wassermano reakcija (RW, RW) yra netreponeminis testas, naudojamas sifiliui tikrinti NVS šalyse.

Kas bus tiriama: kraujas (iš piršto arba iš venos), smegenų skystis.

Kiek laiko po užsikrėtimo testas tampa teigiamas? paprastai praėjus 6-8 savaitėms po užsikrėtimo.

Kaip įvertinti analizės rezultatus:„-“ yra neigiama reakcija, „+“ arba „++“ yra silpnai teigiama reakcija, „+++“ yra teigiama reakcija, „++++“ yra stipriai teigiama reakcija. Jei Wasserman reakcija parodė bent vieną pliusą, turite atlikti papildomus sifilio tyrimus. Neigiama reakcija nėra garantija, kad esate sveikas.

Kaip įvertinti gautą antikūnų titrą: Antikūnų titras nuo 1:2 iki 1:800 rodo sifilio buvimą.

Kokios gali būti klaidingai teigiamų rezultatų priežastys: Wassermano reakcija gali klaidingai duoti teigiamą rezultatą dėl tų pačių priežasčių, kaip ir mikroprecipitacijos reakcija (MR), taip pat jei prieš pat kraujo davimą analizei gėrėte alkoholį ar valgėte riebų maistą.

Dėl daugybės klaidingų rezultatų Wasserman reakcija (RW, RW) naudojama vis rečiau ir pakeičiama kitais, patikimesniais diagnostikos metodais.

Nespecifiniai testai (kritulių mikroreakcija (MR) ir Wasserman reakcija (RW, RW)) yra geri metodai sifiliui diagnozuoti. Neigiamas testo rezultatas greičiausiai rodo, kad esate sveikas. Bet jei gaunami teigiami šių tyrimų rezultatai, būtinas papildomas tyrimas naudojant specifinius (treponeminius) testus.

Kokie sifilio tyrimai yra specifiniai (treponeminiai)?

Treponeminiai tyrimai apima šiuos tyrimus: imunofluorescencinė reakcija (RIF), imunoblotinga, pasyvioji agliutinacijos reakcija (RPGA), pallidum pallidum imobilizacijos reakcija (TPI), fermentinis imunosorbentinis tyrimas (ELISA).

Žmonėms, kurių mikroprecipitacijos reakcijos (MR) arba Wassermano reakcijos (WR) rezultatai yra teigiami, skiriami specialūs tyrimai. Konkrečių tyrimų rezultatai išlieka teigiami dar ilgai po to, kai sifilis išgydomas.

Kaip veikia šie testai: Kai sifilio sukėlėjai patenka į organizmą, imuninė sistema gamina antikūnus, skirtus kovoti su treponema pallidum. Šie antikūnai kraujyje atsiranda ne iš karto po užsikrėtimo, o tik po kelių savaičių. Maždaug antros savaitės po užsikrėtimo pabaigoje kraujyje atsiranda IgM antikūnų. Šios klasės antikūnai rodo neseniai užsikrėtusį sifiliu, tačiau negydant jie išlieka kraujyje kelis mėnesius ir net metus (o jų skaičius palaipsniui mažėja). Praėjus 4-5 savaitėms po užsikrėtimo sifiliu, kraujyje pradedama aptikti kitos klasės antikūnų – IgG. Šio tipo antikūnai išlieka kraujyje daugelį metų (kartais visą gyvenimą). Treponemos testai gali nustatyti, ar kraujyje yra antikūnų (IgM ir IgG), kuriais siekiama kovoti su Treponema pallidum.

Imunofluorescencinė reakcija (RIF) arba Fluorescencinis treponeminis antikūnas (FTA ir jo variantas FTA-ABS) yra treponeminis testas, kuris naudojamas sifilio diagnozei patvirtinti ankstyviausiose stadijose (net nepasireiškus pirmiesiems simptomams).

Kas bus tiriama: kraujas iš venos ar piršto.

Kiek laiko po užsikrėtimo testas tampa teigiamas?: paprastai po 6-9 savaičių.

Kaip įvertinti analizės rezultatus: Analizės rezultatai pateikiami minuso arba pliusų pavidalu (nuo vieno iki keturių). Jei testas rodo minuso ženklą, tai reiškia, kad antikūnų neaptikta ir esate sveikas. Vieno ar daugiau pliuso buvimas rodo sifilio buvimą.

Kokios gali būti klaidingai teigiamų rezultatų priežastys: Klaidingai teigiami rezultatai pasitaiko retai, tačiau galimos klaidos sergantiesiems jungiamojo audinio ligomis (sistemine raudonąja vilklige, dermatomiozitu ir kt.), nėščiosioms ir kt.

Pasyvioji agliutinacijos reakcija (RPGA), arba Treponema pallidum hemagliucijos tyrimas (TPHA) yra specifinis testas, naudojamas sifilio diagnozei patvirtinti beveik bet kuriame etape.

Kas tiriama?: kraujas iš venos ar piršto.

Kiek laiko po užsikrėtimo testas tampa teigiamas? paprastai per 4 savaites.

Kaip įvertinti analizės rezultatus: teigiamas RPGA rezultatas rodo, kad sergate sifiliu arba esate sveikas, bet anksčiau sirgote šia liga.

Kaip įvertinti gautą antikūnų titrą: Atsižvelgiant į antikūnų titrą, galima apytiksliai daryti prielaidą, kiek trunka užsikrėtimas sifiliu. Netrukus po pirmojo treponemos patekimo į organizmą antikūnų titras paprastai būna mažesnis nei 1:320. Kuo didesnis antikūnų titras, tuo daugiau laiko praėjo nuo užsikrėtimo.

Su fermentais susijęs imunosorbentinis tyrimas (ELISA), arba Fermentų imunologinis tyrimas (EIA), arba ELISA (fermentu susietas imunosorbento tyrimas) yra treponeminis testas, naudojamas diagnozei patvirtinti ir sifilio stadijai nustatyti.

Kas bus tiriama: kraujas iš venos ar piršto.

Kiek laiko po užsikrėtimo testas tampa teigiamas? jau praėjus 3 savaitėms po užsikrėtimo.

Kaip įvertinti analizės rezultatus: teigiamas ELISA rezultatas rodo, kad sergate sifiliu arba anksčiau sirgote šia liga. Šis testas gali išlikti teigiamas net ir po gydymo.

Užsikrėtimo sifiliu trukmės nustatymas naudojant ELISA: Atsižvelgiant į tai, kokių klasių antikūnai (IgA, IgM, IgG) randami kraujyje, galime daryti prielaidą, prieš kiek laiko buvo infekcija.

Straipsnis buvo parašytas remiantis medžiaga iš svetainių: sifilis24.ru, www.health-ua.org, krov.expert, zppp.su, polismed.ru.

Siekiant visapusiškai įvertinti organizmo būklę, naudojamas ELISA diagnostikos metodas. Fermentinis imunologinis kraujo tyrimas skirtas diagnozuoti infekcinius, hematologinius, pirminius ir antrinius imunodeficitus.

Kas yra ELISA analizė

Daugelis pacientų domisi ELISA metodu: kas tai yra, kodėl atliekamas tyrimas. Fermentiniai imunologiniai tyrimai pradėti naudoti palyginti neseniai. Iš pradžių jis buvo naudojamas tirti antigenines struktūras ir buvo atliktas tik mokslo tikslais. Tada mokslininkai priėjo prie išvados, kad fermentų pagalba galima nustatyti specifinius antikūnus, atsirandančius reaguojant į besitęsiančią ligą.

Iš pradžių šią techniką naudojo tik labai specializuotos medicinos įstaigos, daugiausia kraujo perpylimo stotyse. ELISA metodas yra ypač svarbus nustatant ŽIV infekciją.

Šiandien šis metodas turi platų pritaikymo spektrą. Šiuolaikinės laboratorijos jį naudoja diagnozuoti:

• navikai;
• hormoniniai sutrikimai;
• infekcijos;
• lėtiniai ar buvę infekciniai procesai;
• helmintai.

Jei organizme vyksta infekcinis procesas, tokio tipo diagnozė laikoma optimaliausia nustatant ligos tipą.

Metodo esmė ir jo rūšys

ELISA metodas – kas tai yra, kokia tokio tipo tyrimų esmė? Šis ir daugelis kitų klausimų domina pacientus. Šio diagnostikos metodo pagrindu laikomas organizmo imuninių ląstelių susiejimas su infekcinių agentų antigenais. Gautas kompleksas nustatomas naudojant specialų fermentą.

Norėdami suprasti ELISA metodo principą, turite žinoti, kaip vyksta antigeno ir antikūnų reakcija. Antigenas yra organizmui svetima baltymo molekulė, kuri prasiskverbia kartu su infekcija. Kieno nors kito kraujo dalelės, kurios neatitinka grupės, taip pat laikomos antigenais. Kūne jie sukelia imuninę reakciją, kuria siekiama apsisaugoti nuo pašalinių medžiagų. Todėl žmogaus organizmas gamina antikūnus – imunoglobulinus, kurie gali prisijungti prie antigenų, sudarydami imuninį kompleksą. Tokius junginius daug lengviau atpažįsta ir sunaikina imuninės ląstelės.

Reakcija į tokių imuninių kompleksų buvimą atliekama laboratorinėmis sąlygomis, naudojant jau paruoštus junginius, siekiant nustatyti, ar kraujyje yra panašių.

ELISA metodo esmė yra gana paprasta, tačiau dėl to, kad kraujo tyrimas atliekamas norint nustatyti daugybę infekcijų ir ligų, yra keletas jo atmainų. Kiekvienas iš jų skiriasi savo įgyvendinimo schema ir apimtimi. Gali būti tiesioginė arba netiesioginė ELISA. Tiesioginis metodas reiškia, kad naudojami imobilizuoti antikūnai, kurie reaguoja su antigenais. Pagrindinis šio metodo privalumas – visus procesus galima automatizuoti, todėl diagnostika užtrunka nedaug.

Netiesioginis metodas reiškia, kad naudojami antriniai antikūnai. Ir kietoje fazėje antigenas yra imobilizuotas. Analizė leidžia nustatyti antikūnus prieš įvairius antigenus. Tai padeda pasiekti tikslesnį rezultatą, tačiau metodas yra sudėtingas.

Tyrimo privalumai

ELISA metodas turi daug privalumų, palyginti su kitais diagnostikos metodais. Tarp pagrindinių yra šie:

• didelis jautrumas;
• ingredientų laikymo stabilumas;
• diagnostikos greitis;
• galima naudoti nedidelį bandomosios medžiagos kiekį;
• galima automatizuoti visus procesus;
• infekcija gali būti aptikta ankstyvose stadijose.

Šis diagnostikos metodas yra universalus, todėl tinkamas masiniam tyrimui. Analizės pagalba galima atsekti infekcinio proceso dinamiką.

Indikacijos analizei ir medžiagos rinkimui

Jei įtariama daug ligų, gali būti paskirtas tyrimas naudojant ELISA metodą:

Veninis kraujas tiriamas, ar nėra antikūnų. Prieš analizę iš jo išskiriami elementai, kurie gali apsunkinti tyrimą. Taip pat gali būti renkami kiti biologiniai skysčiai.

Norint gauti kuo tikslesnę informaciją, kraujas imamas tuščiu skrandžiu. Jei procedūra buvo paskirta latentinei infekcijai nustatyti, likus kelioms savaitėms iki tyrimo reikia nutraukti antibakterinių ir antivirusinių vaistų vartojimą. Priklausomai nuo laboratorijos, kurioje buvo surinkta medžiaga, įrangos, rezultatą galima gauti per 24 valandas. Ekstremaliais atvejais šis laikas sutrumpinamas iki kelių valandų.

Sifilio tyrimas

ELISA metodas padeda nustatyti daugelio infekcijų, ypač sifilio, buvimą organizme. Norint atlikti tyrimą, kraujas imamas iš venos tuščiu skrandžiu. Tada atliekamas tyrimas, kuris padeda nustatyti ne tik ligos buvimą organizme, bet ir tikslų jos pradžios laiką, nes ligos eigoje vieni antikūnai pakeičiami kitais griežtai nustatyta tvarka.

Ūminėje fazėje, nurodant užsitęsusią ligos eigą arba paūmėjus lėtinei infekcijai, kraujyje bus aptikti M tipo imunoglobulinai. A tipo imunoglobulinų buvimas rodo, kad infekcija organizme gyvena ilgiau nei 4 savaites. G grupės imunoglobulinai rodo ligos aukštį arba ankstesnį gydymą.

Infekcinio proceso intensyvumas vertinamas pagal skylių spalvos laipsnį, nes jo sodrumas priklauso nuo susidariusių imuninių kompleksų skaičiaus.

ŽIV infekcijos tyrimas

Analizei taip pat naudojamas ELISA metodas, jis turi tam tikrų savybių, kurios yra susijusios su ligos eiga ir progresavimu. Šis tyrimo metodas laikomas priimtiniausiu nustatymui, tačiau jis turėtų būti atliktas ne anksčiau kaip po mėnesio nuo rizikos veiksnių poveikio. Taip yra dėl to, kad yra inkubacinis laikotarpis, kuris trunka nuo 45 dienų iki 6 mėnesių. Štai kodėl analizę reikia pakartoti po šešių mėnesių.

• askaridozė;
• giardiazė;
• toksoplazmozė ir kt.

Nepaisant visų privalumų, ELISA metodas turi ir trūkumų. Pagrindinis trūkumas yra tas, kad atlikdamas tyrimą gydytojas turi iš anksto turėti prielaidą apie ligą.

Jei nepavyksta atsitiktinai surasti ligos sukėlėjo ir nustatyti jo imunofermentinių savybių. Tyrimas rodo tik antikūnų buvimą paciento kraujyje. Be to, tai gana brangi analizė.

Analizės stenograma

Aukštos kokybės ELISA rezultatas bus arba antikūnų buvimas, arba jų nebuvimas kraujyje. Jei atliekama kiekybinė analizė, antikūnų koncentracija gali būti išreikšta skaitmenine verte arba tam tikru + ženklų skaičiumi.

Be to, tokie rodikliai kaip:

IgM indikatorius rodo ūmaus infekcinio proceso atsiradimą organizme. Visiškas jo nebuvimas gali rodyti ligos sukėlėjo nebuvimą arba jo perėjimą į lėtinę stadiją.

IgA rodmuo su neigiamu IgM tyrimo rezultatu rodo lėtinę arba latentinę infekciją. IgM ir IgA buvimas tuo pačiu metu rodo, kad liga yra ūminėje stadijoje. IgG buvimas rodo ligos perėjimą į lėtinę stadiją arba visišką atsigavimą ir imuniteto vystymąsi.

Dabar yra specialūs ELISA testai, kuriuos galite atlikti patys.

ELISA arba su fermentais susijęs imunosorbentinis tyrimas reiškia serologinius tyrimus ir yra skirtas patologiniams mikroorganizmams kraujo serume aptikti ir diagnozuoti.

Analizuojant įvairias imunoglobulinų klasės bakterijoms: IgM- esant ūminiam patologiniam procesui ir IgG atsigavimo stadijoje, kuri kai kuriais atvejais išlieka visą gyvenimą.

Naudojant fermentinę imunologinę diagnostiką, nustatomos įvairios etiologijos ligos:

ELISA taip pat skiriama sifiliui diagnozuoti, kai teigiami rezultatai patvirtinami RT metodu, ir leidžia stebėti gydymo efektyvumą patologiniame procese.

Fermentinis imunologinis tyrimas skiriamas pagal indikacijas (jei įtariamas užsikrėtimas mikroorganizmais), yra privalomas nėštumo metu ir prieš operaciją, siekiant nustatyti įvairių bakterijų pernešimą.

Analizės procedūra atliekama ryte tuščiu skrandžiu, medžiaga (kraujas) paimama iš venos. Diagnostinio tyrimo rezultatai parengiami per 10 dienų.

Teigiamas ELISA

Teigiamas ELISA rezultatas patvirtinamas IgG ir IgM klasių imunoglobulinų buvimu. Aptikti titrai kraujyje IgM visada rodo ligą progresuojančioje stadijoje sveikas žmogus šių antikūnų neturi.

O IgG rodo ankstesnę infekciją arba patogeninių mikroorganizmų nešimą, kai kurie iš jų nedideliais kiekiais laikomi normaliomis ribomis. Pavyzdžiui, streptokokų ir stafilokokų bakterijų yra kiekvieno žmogaus organizme.

Sifilis

IgM antikūnai nuo sifilio nustatomi praėjus 2 savaitėms po užsikrėtimo ir rodo pirminio, antrinio ar įgimto epizodo buvimą gydant, jie išnyksta maždaug po šešių mėnesių, negydant – po 18 mėnesių. Jei vienu metu nustatomi abiejų tipų imunoglobulinai, sifilis patvirtinamas ūminėje fazėje. Žmonėms, kurie sirgo IgG antikūnai prieš sifilį išlieka serume visą gyvenimą.

Virusinis hepatitas

IgM į virusinį hepatitą dažnai nustatomas ligos inkubaciniu laikotarpiu, prieš pasireiškus pirmiesiems apraiškoms, ir išlieka ligos eigoje po pasveikimo, nenustatomas. Išimtis yra virusinis hepatitas C, kurio IgM aptinkama tiek aktyvioje, tiek latentinėje ar lėtinėje stadijoje.

IgG antikūnų prieš hepatitą A gali būti net sveikiems žmonėms, o tai yra dėl ankstesnės infekcijos ar sumažėjusio imuniteto, tačiau sveikiems žmonėms IgG prieš hepatitą B, C ir D nepastebima.

CMVI

CMV infekcija yra plačiai paplitusi beveik visur ir nekelia pavojaus visuomenės sveikatai. Tačiau ji neša mirtiną pavojus naujagimiui ir vaisius intrauterinės infekcijos metu.

IgM antikūnų prieš citomegalovirusą aptikimas rodo pirminę infekciją arba latentinės fazės suaktyvėjimą. IgG titrai žmonėms, kurie pasveiko nuo ligos, išlieka 10 metų.

Herpes

Sveikiems žmonėms herpeso viruso antikūnų paprastai nėra. IgM kiekis rodo ūminę ligos fazę, IgG – latentinę fazę (šiuo atveju žmogus yra infekcijos nešiotojas). Jei turite IgG iki herpeso, turėtumėte žinoti, kad virusas gali būti aktyvuotas bet kuriuo metu nuo latentinės iki progresuojančios stadijos.

Vėjaraupiai

Sergant vėjaraupiais ir 2 metus po gydymo kraujyje išlieka IgM klasės imunoglobulinai. Paprastai sveikiems žmonėms vėjaraupių antikūnų neaptinkama.

Stafilokokų ir streptokokų sukeltos ligos

Visi žmonės turi imunoglobulinų stafilokokams ir streptokokams. Todėl šių bakterijų grupių sukeltą patologinį procesą galima diagnozuoti atliekant dvigubo fermento imunologinio tyrimo metodą. Jei pakartotinio ELISA metu (po savaitės po pirmosios) padidėja titrai, analizė laikoma patvirtinta.

Chlamidija

Teigiamas chlamidijų rezultatas rodomas identifikuojant IgM titrai 1:8 ir aukštesnė bei klasė IgG – 1:64 ir didesnės, kurios ligos eigoje didėja ir pasiekia aukštas vertes. Pavyzdžiui, vaikams, sergantiems chlamidine pneumonija, titrai padidėja iki 1:2000 – 1:4000. IgM buvimas rodo chlamidijų aktyvumą praėjus kuriam laikui po užsikrėtimo, kraujyje aptinkami IgG globulinai.

Neigiamas fermentinis imunologinis tyrimas rodo IgM antikūnų nebuvimas. Aptinkami IgG ne visais atvejais laikomi diagnostinio tyrimo patvirtinimu, jie dažnai išlieka keletą metų po užsikrėtimo, kartais visą gyvenimą.

Po sifilio, infekcinės mononukleozės IgG imunoglobulinai išlieka visą gyvenimą ir aptinkami kraujo serume. 10 metų išlieka CMV, tymų, raudonukės ir toksoplazmozės mikroorganizmai.

Amebiazės titrai išlieka nuo kelių mėnesių iki kelerių metų. Antikūnai prieš stafilokokus ir streptokoko bakterijas aptinkami absoliučiai visiems žmonėms nedideliais kiekiais.

Minėtais atvejais IgG imunoglobulinų nustatymas po ligų leidžia ELISA rezultatus vertinti kaip neigiamus.

Normalus nėštumo metu

Pirmąjį nėštumo trimestrą kiekvienai moteriai atliekamas išsamus kūno tyrimas, kuris apima fermentų imuninį tyrimą.

Toksoplazmozės, CMV, chlamidijų, 2 tipo (genitalijų), raudonukės, ureaplazmos ir mikoplazmos tyrimai yra privalomi, nes šios ligos kelia rimtą grėsmę vaisiaus vystymuisi. Jie gali prasiskverbti į vaiko kūną, aplenkdami placentos barjerą.

Ir jie kelia ypatingą pavojų visame pasaulyje pirmasis nėštumo trimestras ir beveik visada veda prie intrauterinė vaisiaus mirtis ir savaiminis persileidimas.

Minėtų ligų problema yra ta, kad jos dažnai pasireiškia besimptomėje stadijoje, be matomų klinikinių apraiškų, o nustatyti jas galima tik atliekant fermentinę imunosorbentinę diagnostiką.

Gerus analizės rezultatus galima pasakyti, jei serume nėra aptikta jokių mikroorganizmų. Aptinkamas IgG rodo virusų pernešimą ir reikalauja nuolatinio moters stebėjimo, kad staiga paūmėjus būtų laiku suteikta terapija. Teigiamas IgM signalizuoja apie progresuojantį patologinį procesą ir reikalauja nedelsiant pašalinti patogeną.

Pavadinimo aptikimas IgG nuo raudonukės rodo ankstesnę ligą ir yra normalu nėštumo metu. IgG į CMV taip pat nekelia ypatingos grėsmės vaisiui, tačiau negalima atmesti paūmėjimo galimybės (pasireiškimo dažnis, maždaug 1-2%).

Ypatingą grėsmę kelia IgG buvimas 2 tipo herpeso virusui arba genitalijų (HSV2) virusui, nes gimdymo metu paūmėjimo rizika žymiai padidėja. Nėštumo laikotarpiu ūminė fazė pasireiškia 0,9% atvejų. Vaisiaus užsikrėtimas herpeso virusu per lytinius organus įvyksta 40% atvejų ir 50% sukelia mirtį.

Toksoplazmozės atvejais IgM gali išlikti iki 2 metų po gydymo. Vaisiaus infekcijos rizika šiuo atveju yra 17% pirmąjį trimestrą ir padidėja iki 60% trečiąjį, nes pagrindinis infekcijos kelias yra transplacentinis. Identifikuota IgG iki toksoplazmozės daugelis ekspertų yra linkę vertinti rezultatą kaip neigiamą rezultatą, kuris praktiškai nekelia grėsmės nėštumo eigai.