Co je lepší kauterizovat nebo odstranit hemaglutinaci. Salmonella a tyfus, paratyfus. Charakteristika chřipkových virů. epidemiologie a diagnostika chřipky. použití RTG pro sérotypizaci virů chřipky. léky pro specifickou prevenci a léčbu

Správně provedený krevní test pomáhá odhalit původce různých komplexních onemocnění v těle v raných stádiích jejich vývoje a někdy ještě předtím, než se objeví klinické příznaky onemocnění. Velmi často lékaři předepisují pacientům test aglutinační reakce. Dále zjistíme, co to je - krevní test RPGA, kdy se používá a co nám může říct?

Princip fungování

Nepřímá hemaglutinační reakce (také nazývaná pasivní hemaglutinační reakce, také známá jako RPHA, RNGA) nastává, když jsou červené krvinky, které adsorbovaly antigen, vystaveny imunitnímu séru, které odpovídá danému antigenu.

Studie prokázaly, že tato metoda je výrazně lepší než ostatní sérologické testy, pokud jde o specificitu a citlivost. Proto se často používá k detekci onemocnění způsobených bakteriemi nebo rickettsie. Antigeny pro takovou analýzu mohou být bakteriální extrakty, purifikované antigeny různých mikrobů a složky bakteriálních vakcín.

Poté, co patogenní bakterie vstoupí do lidského těla, začne produkovat specifické a nespecifické protilátky, které tvoří specifickou imunitní odpověď. V případě syfilis, jejímž původcem je Treponema pallidum, patřící mezi gramnegativní spirochety, se v lidské krvi tvoří netreponemální nebo treponemové protilátky. Na jejich identifikaci jsou založeny laboratorní diagnostické testy, které by měly potvrdit nebo vyvrátit přítomnost původce viru v těle.

U RPHA se červené krvinky, jejichž povrch má adsorbované antigeny treponema pallidum, po přidání séra s protilátkami proti treponemu z materiálu od člověka infikovaného syfilis k sobě slepí, tedy aglutinují.

Spolehlivost studie

Je důležité si uvědomit, že protilátky proti světlé spirochétě se v těle infikovaných lidí začínají objevovat 2-4 týdny po infekci a v některých případech se toto období může prodloužit až na 6 týdnů.

Z tohoto důvodu je senzitivita analýzy RPHA v primárním stadiu onemocnění asi 86 %, což je výrazně nižší než přesnost diagnostiky pacientů v následujících dvou fázích. Senzitivita analýzy u těchto pacientů, stejně jako u nosičů latentní syfilis, dosahuje 99–100 %.

Pasivní hemaglutinační reakce má však velmi vysokou specificitu, která dosahuje úrovně 96–100 %.

To umožňuje použít toto vyšetření k potvrzení diagnózy v případě pozitivní reakce z předběžné netreponemové studie, např. mikroprecipitační reakce rakoviny močového měchýře.

Vzhledem k tomu, že senzitivita treponemálních testů, včetně RPGA, výrazně převyšuje citlivost netreponemálních metod, jsou tato vyšetření stále častěji předepisována při provádění screeningových testů na syfilis. Pokud je však obdržena pozitivní reakce ze screeningového testu, je k objasnění diagnózy nutná další specifická (treponemální) analýza, nikoli však RPGA.

Přepis analýzy

Když se sérum s protilátkami proti treponemu z materiálu osoby infikované syfilis přidá k činidlu, se kterým se studie provádí, červené krvinky aglutinují, v důsledku čehož se vysrážejí.

Počet lepkavých červených krvinek je ovlivněn hladinou protilátek v séru. Pasivní hemaglutinace proto nejen ukazuje přítomnost protilátek, ale umožňuje také určit jejich množství. Výsledek studie je prezentován hladinou titru protilátek.

Pozitivní reakce indikuje přítomnost patogenu v těle pacienta. V průběhu diagnostického procesu však může docházet k falešně pozitivním reakcím, jejichž počet statisticky nepřesahuje úroveň 0,05-2,5 % z celkového počtu studií.

Pozitivní reakce RPHA u lidí neinfikovaných syfilis se může objevit, pokud:

systémová onemocnění pojivové tkáně,
v krevních protilátkách pacienta proti patogenům podobným Treponema pallidum,
fyziologické patologie, jako je infarkt myokardu,
hepatitida B nebo C,
onkologická onemocnění,
tyfus, leptospiróza, tuberkulóza,
HIV infekce,
borelióza klíšťové etiologie,
rozsáhlá zranění nebo zlomeniny,
těhotenství,
v případě injekční aplikace omamných látek.

Ve většině případů jsou falešně pozitivní reakce doprovázeny nízkým titrem. Vysoké titry jsou typické pro sekundární stadium onemocnění a dříve latentní syfilis. Mohou se však objevit i při falešně pozitivní reakci u pacientů se zhoubnými novotvary.

U lidí, kteří měli syfilis alespoň jednou, zůstává RPHA reakce pozitivní po zbytek jejich života.

Vzácnými výjimkami mohou být situace, kdy bylo onemocnění identifikováno v raném stádiu vývoje, po kterém byla provedena intenzivní a účinná terapie. Analýzu RPGA proto nelze použít k posouzení dynamiky zotavení nebo srovnávací diagnostice časných nebo pozdních stádií onemocnění.

V případě pozitivní reakce je nutné vyšetřit rodinné příslušníky nemocného a osoby, které s ním měly pohlavní styk.

Negativní reakci lze získat v následujících případech:

osoba nemá syfilis,
krev byla odebrána na vyšetření nesprávně,
Od infekce uplynuly 2-4 týdny a tvorba protilátek ještě nezačala.

V každém případě je nutné výsledek studie posuzovat v kombinaci s dalšími laboratorními a anamnestickými ukazateli.

Komu je analýza určena?

Lékař může doporučit pacienty, aby darovali krev pro RPGA v následujících případech:

v přítomnosti klinických projevů syfilis: ulcerózní vyrážky, zvětšené lymfatické uzliny, difuzní alopecie a další,
pokud máte podezření na možnou infekci v případě kontaktu s již nemocnými lidmi,
dárci, kteří chtějí darovat krev,
osoby, které se každoročně podrobují preventivním prohlídkám nebo vystavují zdravotní potvrzení,
pacientů s pozitivním screeningovým testem,
před hospitalizací v lůžkové nemocnici,
při předoperačním vyšetření,
k identifikaci původců salmonelózy, záškrtu, úplavice metodou RPGA s příslušným diagnostikem.

Postup při provádění studie

Vzorek žilní krve darovaný pacientem je odeslán k testování. Aby nedošlo k chybnému závěru, měl by být pacient odpovědný za přípravu analýzy. Aby byly výsledky testu spolehlivé, měli byste dodržovat následující doporučení:

Test by se měl provádět pouze na prázdný žaludek.
V den analýzy můžete pít minerální vodu bez plynu v minimálním množství.
Před testem byste neměli kouřit alespoň 30 minut, ale je lepší tuto dobu prodloužit na několik hodin.
Platí přímý zákaz požívání alkoholických nápojů.
Pacienti, kteří potřebují pravidelně užívat jakékoli léky, musí informovat lékaře, který je posílá na vyšetření.
Pokud se necítíte dobře nebo se necítíte dobře, musíte to oznámit sestře, která krev odebírá, nebo lékaři na ambulanci, kde je potřeba vyšetření provést.

Buďte zodpovědní nejen za otázku, kde se nechat testovat, ale také za přípravu na zkoušku.

Diagnostika jiných infekčních onemocnění

Člověk by si neměl myslet, že studie, jako je RPGA, může být provedena pouze k identifikaci původce syfilis v těle.

Rozbor salmonelou diagnosticum umožňuje zjistit přítomnost infekce v trávicím systému - salmonely. Počínaje čtvrtým dnem po infekci tělo produkuje protilátky proti antigenům Salmonella, které metoda RPGA pomáhá identifikovat. Negativní výsledek indikuje nepřítomnost infekce a pozitivní titr, zvyšující se od 1:200 do 1:800 v akutní fázi, bude indikovat její přítomnost.

Způsob provedení RPGA s markerem záškrtu umožňuje diagnostikovat záškrt a posoudit imunitu po očkování. Protilátky se začnou produkovat imunitním systémem hned druhý den po infekci a zůstávají v těle několik týdnů. Citlivost této analýzy je vyšší než u bakteriologické výzkumné metody. Titr 1:80 potvrzuje přítomnost záškrtu v těle.

Marker úplavice pro RPHA nejpřesněji detekuje shigelózu (bakteriální úplavici), a to i ve srovnání s laboratorní diagnostickou metodou prostřednictvím bakteriální kultivace. Pokud se pacientovi nedostane kvalitní léčby, nemoc se rozvine v chronický proces, kdy často dochází k relapsům. Analýza umožňuje diagnostikovat akutní a chronickou fázi průjmu, identifikovat původce úplavice, odlišit bakteriální shigelózu od kolorektálního karcinomu, endokrinních poruch nebo zánětů tlustého střeva. Negativní reakce indikuje nepřítomnost bacila a jeho přítomnost je potvrzena titrem 1:80 u dětí nebo 1:320 u dospělých.

Provedení testu s markerem spalniček umožňuje určit onemocnění spalniček. Takové vyšetření se může stát alternativou k RTGA analýze často prováděné pro diagnostiku spalniček.

Takže krevní test RPGA - co to je? Shrneme-li, můžeme s jistotou říci, že se jedná o moderní, vysoce citlivou a spolehlivou metodu pro diagnostiku různých onemocnění bakteriologické etiologie.

V kontaktu s

hemaglutinační inhibiční reakce (HAI)

RHA je založena na schopnosti červených krvinek držet se pohromadě, když jsou na ně adsorbovány určité antigeny. Jako testovací materiál pro hemaglutinaci se používá alantoická a plodová voda, suspenze chorioalantoických membrán kuřecích embryí, suspenze a extrakty z kultur nebo orgánů zvířat infikovaných viry a nativní infekční materiál. RGA není sérologický, protože se vyskytuje bez účasti imunitního séra a používá se k výběru pracovního ředění antigenu pro provedení RGA nebo přítomnosti antigenu (viru) v testovaném materiálu (například u chřipky). Reakce využívá červené krvinky zvířat, ptáků a lidí krevní skupiny I (0).

Pro nastavení přibližné RGA se kapka 5% suspenze červených krvinek a kapka testovaného materiálu nanesou na podložní sklíčko a důkladně se promíchají. Pokud je výsledek pozitivní, po 1-2 minutách je makroskopicky pozorován výskyt flokulentní aglutinace erytrocytů.

Pro vytvoření RGA v nesložené řadě v jamkách polystyrénových destiček se připraví dvojnásobně rostoucí ředění testovaného materiálu ve fyziologickém roztoku v objemu 0,5 ml. Do všech zkumavek se přidá 0,5 ml 0,25 - 1% suspenze červených krvinek. Výsledky se berou v úvahu po úplné sedimentaci erytrocytů v kontrole (červené krvinky + fyziologický roztok). Reakce je zohledněna povahou sedimentu erytrocytů. V pozitivních případech je stupeň aglutinace označen plusy. Reakce, která vypadá jako tenký film lepkavých červených krvinek pokrývajících dno zkumavky (deštníku), je hodnocena čtyřmi plusy, reakce s mezerami ve filmu je označena třemi plusy; okraje lepkavých červených krvinek jsou označeny dvěma plusy vločkovitý sediment červených krvinek obklopený zónou aglutinovaných hrudek erytrocytů odpovídá jednomu plus. Ostře ohraničený sediment erytrocytů nerozeznatelný od kontroly ukazuje na absenci aglutinace. Za titr se považuje maximální ředění testovaného materiálu, které způsobilo aglutinaci erytrocytů dvěma plusy.

Pokud je výsledek RHA pozitivní, pokračuje se ve studii stanovením typu izolovaného viru pomocí reakce inhibice hemaglutinace s typově specifickými séry.

RTGA je založena na vlastnosti antiséra potlačit virovou hemaglutinaci, protože virus neutralizovaný specifickými protilátkami ztrácí schopnost aglutinovat červené krvinky. Pro předběžnou typizaci virů se používá kapková metoda na skle. Pro definitivní stanovení typu izolovaného viru a titraci protilátek v séru se expandovaný RTGA umístí do zkumavek nebo jamek. Za tímto účelem se připraví dvojnásobná ředění sér ve fyziologickém roztoku a rozdělí se do 0,25 ml. K ředěním séra přidejte jednu kapku materiálu obsahujícího virus a jednu kapku 1% suspenze červených krvinek.

Při použití RTGA ke stanovení typu viru se používají typově specifická séra, která se přidávají do stejného objemu pracovního ředění antigenu. Typ izolovaného viru je určen specifickým imunitním sérem, které vykazovalo nejvyšší titr protilátek proti tomuto viru.

RGA a RTGA jsou široce používány pro diagnostiku virových infekcí (klíšťová encefalitida, chřipka atd.) za účelem detekce specifických protilátek a identifikaci mnoha virů podle jejich antigenů.

Imunofluorescenční reakce (RIF)

RIF je založen na kombinaci antigenů bakterií, rickettsie a virů se specifickými protilátkami značenými fluorescenčními barvivy (fluorescein isothiokyanát, rhodamin, B-isoticianit, lisatin rhodamin B-200, sulfochlorid atd.), které mají reaktivní skupiny (sulfochloridit, isothiocyanit , atd.) . Tyto skupiny se kombinují s volnými aminoskupinami molekul protilátky, které neztrácejí svou specifickou afinitu k odpovídajícímu antigenu, když jsou ošetřeny fluorochromem. Výsledné komplexy AG–AT se pod fluorescenčním mikroskopem stávají jasně viditelnými, jasně svítícími strukturami (obr. 48). RIF dokáže detekovat malá množství bakteriálních a virových antigenů. Metoda RIF se používá ve dvou verzích: přímá a nepřímá metoda.

Přímá metoda je založena na přímém spojení antigenu se značenou protilátkou. Nepřímá metoda je založena na postupné detekci komplexu AG–AT pomocí fluorescenčních barviv. První fází je tvorba imunitních komplexů specifického antigenu se specifickými protilátkami. Druhou fází je identifikace tohoto komplexu ošetřením značeným antigamaglobulinem.

Výhodou RIF je jednoduchost, vysoká citlivost a rychlost získávání výsledků. RIF se používá jako metoda pro včasnou expresní diagnostiku chřipky, úplavice, malárie, moru, tularémie, syfilis atd. K provedení takové studie se používá fluorescenční mikroskop.

Radioimunoanalýza (RIA)

RIA je jednou z nejcitlivějších imunodiagnostických metod. Používá se k detekci antigenu viru hepatitidy B u pacientů s virovou hepatitidou. K tomu se do testovacího séra přidá referenční sérum (sérum obsahující protilátky proti viru hepatitidy B). Směs se inkubuje 1-2 dny při teplotě 40 °C, poté se přidá referenční antigen (antigen značený izotopem 125J) a inkubace pokračuje dalších 24 hodin. Do výsledného komplexu antigen-protilátka se přidávají precipitující antiimunoglobuliny proti referenčním sérovým proteinům, což vede ke vzniku precipitátu (obr. 49). Výsledek je zohledněn přítomností a počtem pulzů ve sraženině zaznamenaných čítačem. Pokud je v testovacím séru antigen, který se naváže na specifické protilátky, tyto neinteragují se značeným antigenem, a proto není detekován ve sraženině. RIA je tedy založena na principu kompetitivní interakce detekovaného antigenu a známého množství značeného antigenu s aktivními centry protilátek.

Enzymově vázaná imunosorbentní metoda (ELISA)

Metoda se používá k detekci antigenů pomocí jejich odpovídajících protilátek konjugovaných s tagovým enzymem (křenová peroxidáza, b-galaktóza nebo alkalická fosfatáza). Po spojení antigenu s enzymem značeným imunitním sérem se do směsi přidá substrát a chromogen . Substrát je štěpen enzymem a jeho degradační produkty způsobují chemickou modifikaci chromogenu. Chromogen přitom mění svou barvu – intenzita zbarvení je přímo úměrná počtu navázaných molekul antigenu a protilátky (obr. 50).

Nejběžnější je ELISA na pevné fázi, při které je jedna ze složek imunitní reakce (antigen nebo protilátka) adsorbována na pevný nosič. Polystyrenové mikropanely se používají jako pevný nosič. Při stanovení protilátek se do jamek se sorbovaným antigenem postupně přidávají krevní sérum pacienta, antiglobulinové sérum značené enzymem a směs roztoků substrátu enzymu a chromogenu. Pokaždé po přidání další složky se nenavázaná činidla z jamek odstraní důkladným promytím. Pokud je výsledek pozitivní, změní se barva roztoku chromogenu.

Nosič na pevné fázi může být senzibilizován nejen antigenem, ale také protilátkou. Poté se do jamek se sorbovanými protilátkami přidá požadovaný antigen, přidá se imunitní sérum proti antigenu značenému enzymem a poté se přidá směs substrátových roztoků pro enzym a chromogen.

ELISA se používá k diagnostice onemocnění způsobených virovými a bakteriálními patogeny.

ODDÍL VII. ZÁKLADY VIRUSOLOGIE

Laboratorně se používají dvě hemaglutinační reakce s různým mechanismem účinku.

První RGA je sérologické. Při této reakci dochází k aglutinaci červených krvinek při interakci s vhodnými protilátkami (hemaglutininy). Reakce se široce používá k určení krevních skupin.

Druhá RGA není sérologická. V něm není adheze červených krvinek způsobena o

protilátky, ale speciální látky tvořené viry. Například virus chřipky aglutinuje červené krvinky kuřat a morčat a virus dětské obrny aglutinuje červené krvinky ovcí. Tato reakce umožňuje posoudit přítomnost konkrétního viru ve studovaném materiálu.

Reakce se provádí ve zkumavkách nebo na speciálních destičkách s jamkami. Materiál testovaný na přítomnost viru se zředí izotonickým roztokem od 1:10 do 1:1280; 0,5 ml každého ředění se smíchá se stejným objemem 1-2% suspenze červených krvinek. V kontrole se smíchá 0,5 ml erytrocytů s 0,5 ml izotonického roztoku. Zkumavky se umístí na 30 minut do termostatu a destičky se nechají při pokojové teplotě 45 minut.

Účtování výsledků. Pokud je reakce pozitivní, objeví se na dně zkumavky nebo jamky sediment červených krvinek s vroubkovanými okraji („deštník“), který pokrývá celé dno jamky. Pokud je výsledek negativní, červené krvinky tvoří hustý sediment s hladkými okraji („tlačítko“). Stejný sediment by měl být v kontrole. Intenzita reakce je vyjádřena znaménkem „+“. Titr viru je maximální ředění materiálu, ve kterém dochází k aglutinaci.

Hemaglutinační inhibiční reakce

Jedná se o sérologickou reakci, při které specifické antivirové protilátky v interakci s virem (antigenem) jej neutralizují a zbavují ho schopnosti aglutinovat červené krvinky, tj. inhibovat hemaglutinační reakci. Tato reakce umožňuje určit typ a typ virů.

Nastavení reakce. 0,25 ml antivirového séra se smíchá se stejným objemem materiálu obsahujícího virus. Směs se protřepe a umístí na 30 minut do termostatu, načež se přidá 0,5 ml 1-2% suspenze červených krvinek.

Účtování výsledků. Pokud je experiment správně proveden, mělo by se v kontrole séra a erytrocytů vytvořit „tlačítko“ - neexistuje žádný faktor aglutinující erytrocyty; při kontrole antigenu vzniká „deštník“ – virus způsobil aglutinaci červených krvinek. Pokud je sérum homologní se studovaným virem, vytvoří se „tlačítko“ - sérum neutralizovalo virus.

Nepřímá hemaglutinační reakce

Nepřímá (pasivní) hemaglutinační reakce (RIHA) je založena na tom, že červené krvinky, pokud je na jejich povrchu adsorbován rozpustný antigen, získávají schopnost aglutinace při interakci s protilátkami proti adsorbovanému antigenu.

Nastavení reakce. Sérum se zahřívá 30 minut na 56 °C, naředí se postupně v poměru 1:10 - 1:1280 a nalije se do 0,25 ml zkumavek nebo jamek, kam se poté přidají 2 kapky červených krvinek s adsorbovanými antigeny.

Řízení: suspenze erytrocytů s adsorbovanými antigeny s evidentně imunitním sérem, suspenze erytrocytů s na nich adsorbovanými antigeny normálním sérem; suspenze normálních červených krvinek s testovacím sérem. V první kontrole by mělo dojít k aglutinaci, ve druhé a třetí by k ní nemělo dojít.

Kontrolní otázky.

1. Co ukazuje pozitivní výsledek rentgenové analýzy mezi červenými krvinkami a materiálem, který je testován na přítomnost viru?

2. Dojde k aglutinační reakci červených krvinek, pokud se k nim přidá virus a jemu odpovídající sérum? Jak se nazývá reakce, která tento jev odhaluje?

PRAKTICKÁ PRÁCE Č. 12.

Reakce fixace komplementu.

Reakce fixace komplementu (FFR) je založena na skutečnosti, že specifický komplex antigen-protilátka na sebe vždy adsorbuje (váže) komplement.

Tato reakce je široce používána při identifikaci antigenů a v sérodiagnostice infekcí, zejména onemocnění způsobených spirochetami (Wassermannova reakce), rickettsie a viry.

RKS je komplexní sérologická reakce. Zahrnuje komplement a dva systémy antigen-protilátka. V podstatě se jedná o dvě sérologické reakce.

Pravý hlavní systém se skládá z antigenu a protilátky (jeden je známý, druhý ne). Je k němu přidáno určité množství komplementu. Pokud se antigen a protilátka tohoto systému shodují, spojí se a vytvoří kompliment. Výsledný komplex je jemně rozptýlený a není viditelný.

Tvorba tohoto komplexu je detekována pomocí druhého hemolytického nebo indikátorového systému. Zahrnuje ovčí červené krvinky (antigen) a odpovídající hemolytické sérum (protilátka), tzn. hotový imunitní komplex. V tomto systému může k lýze červených krvinek dojít pouze v přítomnosti komplementu. Pokud je komplement vázán prvním systémem, pak v druhém systému nedojde k hemolýze, protože žádný volný doplněk. Jako pozitivní výsledek RSK se zaznamená nepřítomnost hemolýzy (obsah zkumavky je zakalený nebo je na dně sediment erytrocytů).

Pokud v prvním systému antigen neodpovídá protilátce, pak se imunitní komplex nevytvoří a komplement zůstane volný. Kompliment, který zůstává volný, se účastní druhého systému a způsobuje hemolýzu, výsledek RSC je negativní (obsah zkumavek je průhledný - „lakovaná krev“).

Komponenty, reakce fixace komplementu:

1. Antigen - obvykle lyzát, extrakt, hapten,

méně často suspenze mikroorganismů.

2. Protilátka - sérum pacienta.

3. Doplněk - morčecí sérum.

4. Antigen - ovčí erytrocyty.

5. Protilátka - hemolyzin proti ovčím erytrocytům.

6. Izotonický roztok.

Vzhledem k tomu, že v RSC je zapojeno velké množství složitých komponent,

musí být nejprve titrovány a zreagovány v přesných množstvích a ve stejných objemech: 0,5 nebo 0,25, méně často 0,2, 1,25 nebo 1,0 ml (větší objemy dávají přesnější výsledek). Titrace reakčních složek se provádí ve stejném objemu jako experiment, přičemž se chybějící složky nahradí izotonickým roztokem.

Vidalova reakce. Od druhého týdne onemocnění se v krvi pacientů hromadí protilátky proti infekčnímu agens. K jejich identifikaci je pacientovo krevní sérum vyšetřeno aglutinační reakcí. Jako antigeny se používají usmrcené kultury Salmonella - diagnosticums.

K provedení Widalovy reakce se používá pacientovo sérum, sada diagnostických souprav a izotonický roztok chloridu sodného.

Krev (2-3 ml) z dřeně prstu nebo z loketní žíly se odebere do sterilní zkumavky a dodá se do laboratoře. V laboratoři se zkumavka umístí na 20-30 minut do termostatu, aby se vytvořila sraženina, poté se sraženina krouží Pasteurovou pipetou, aby se oddělila od stěny zkumavky, a umístí se do chladu po dobu 30-40 minut. Oddělené sérum je odsáto a použito k provedení aglutinační reakce s diagnostikou Salmonella tyfus a paratyfus. Krev lze centrifugovat, aby se získalo sérum.

Když dojde k infekčnímu procesu - břišnímu tyfu nebo paratyfu - tělo produkuje O- a H-protilátky proti stejným antigenům patogenu.

Nejprve se objevují O-protilátky a poměrně rychle mizí. H-protilátky vydrží dlouho. Totéž se děje i při očkování, proto pozitivní Widalova reakce s O- a H-antigeny indikuje přítomnost onemocnění a reakce pouze s H-antigeny může nastat jak u těch, kteří se z nemoci uzdravili (anamnestická reakce), tak očkovaní (reakce na vakcínu). Na základě toho se Widalova reakce provádí odděleně s O- a H-antigeny (diagnostika).

Vzhledem k tomu, že břišní tyfus a paratyfus A a B jsou klinicky podobné, k identifikaci povahy onemocnění je pacientovo sérum testováno současně s diagnostikou na Salmonella tyfus a paratyfus A a B.

Widalova reakce je široce používána, protože je jednoduchá a nevyžaduje zvláštní podmínky.

Reakce může být provedena dvěma způsoby: po kapkách a volumetricky (viz kapitola 12). V praxi se častěji používá objemová metoda. Při provádění lineární aglutinační reakce musí počet řádků odpovídat počtu antigenů (diagnostik). Za původce onemocnění je považován mikroorganismus, z něhož bylo diagnostikum aglutinováno sérem pacienta. Někdy je zaznamenána skupinová aglutinace, protože původci tyfu a paratyfu mají společné skupinové antigeny. V tomto případě je výsledek reakce v sérii, ve které je zaznamenána aglutinace ve větším ředění séra, považován za pozitivní (tabulka 36).

Tabulka 36. Možný výsledek aglutinační reakce

Poznámka. V praxi se Widalova reakce provádí se čtyřmi diagnostiky: tyfus „O“ a „H“ a paratyfus A a B s diagnostikou „ON“.

Pokud k aglutinaci dochází pouze v malých ředěních séra - 1:100, 1:200, pak pro odlišení reakce během onemocnění od vakcinace nebo anamnestické reakce se uchýlí k opakování aglutinační reakce po 5-7 dnech. U pacienta se titr protilátek zvyšuje, ale u očkované nebo uzdravené osoby se nemění. Zvýšení titru protilátek v krevním séru tedy slouží jako indikátor onemocnění.

V reakci na zavedení tyfových patogenů obsahujících Vi antigen do těla se v krvi pacienta objeví Vi aglutininy. Zjišťují se od 2. týdne nemoci, ale jejich titr většinou nepřesahuje 1:10. Průkaz Vi-protilátek je spojen s přítomností tyfových patogenů v organismu, proto má stanovení těchto protilátek velký epidemiologický význam, protože umožňuje identifikaci přenašečů bakterií.

Vi-hemaglutinační reakce. Toto je nejcitlivější reakce pro detekci protilátek.

Princip reakce spočívá v tom, že lidské (skupina I) nebo ovčí erytrocyty mohou po speciální úpravě adsorbovat Vi-antigen na svůj povrch a tím získat schopnost aglutinace s odpovídajícími Vi-protilátkami.

Červené krvinky s antigeny adsorbovanými na povrchu se nazývají erytrocytární diagnosticum.

Chcete-li provést Vi-hemaglutinační reakci, vezměte:

1) krevní sérum pacienta (1-2 ml); 2) erytrocyt Salmonella Vi-diagnosticum; H) Vi-sérum; 4) O-sérum; 5) izotonický roztok chloridu sodného.

Reakce se provádí v aglutinačních zkumavkách nebo v plastových destičkách s jamkami.

Krev je pacientovi odebrána stejným způsobem jako u Vidalovy reakce. Získá se sérum. Ze séra se připraví dvojnásobná sériová ředění, počínaje 1:10 až 1:160.

Do jamky se přidá 0,5 ml každého ředění a přidá se 0,25 ml erytrocytárního diagnosticum. Reakce se provádí v objemu 0,75 ml.

Kontroly jsou: 1) standardní aglutinační monoreceptorové sérum + diagnosticum - reakce musí být pozitivní do sérového titru; 2) diagnosticum v izotonickém roztoku chloridu sodného (kontrola) - reakce by měla být negativní.

Obsah jamek se důkladně promíchá, umístí na 2 hodiny do termostatu a nechá se při pokojové teplotě do druhého dne (18-24 hodin).

Účetnictví začíná kontrolou. Reakce se hodnotí v závislosti na stupni aglutinace diagnostika.

Výsledky se berou v úvahu podle čtyřkřížového systému:

Červené krvinky jsou zcela aglutinované - sedimentují na dně jamky ve formě „deštníku“;

+++ „deštník“ je menší, ne všechny červené krvinky jsou aglutinované;

++ „deštník“ je malý, na dně otvoru je sediment neaglutinovaných erytrocytů;

Reakce je negativní; červené krvinky se neaglutinovaly a usadily se na dně jamky ve formě knoflíku.

Kontrolní otázky

1. V jakém období onemocnění se provádí Vidalova reakce?

2. Jaké přísady jsou potřeba k provedení Widalovy reakce?

3. Jaká diagnostika se používá k provedení Vidalovy reakce?

4. Která sérologická reakce je nejcitlivější při diagnostice tyfových paratyfových infekcí?

5. Jaké diagnostické činidlo se používá při provádění Vi-hemaglutinační reakce?

6. Jaké sérum se používá ke stanovení přítomnosti Vi-antigenu ve zkoumané kultuře?

7. Jaký význam má stanovení Vi-fagotypu?

Odeberte O- a H-diagnostiku ze Salmonella tyfus, paratyfus A a paratyfus B a pacientovo sérum od učitele. Uveďte Vidalovu reakci.

Kulturní média

Agarové médium EMS, Ploskireva a vizmut-siřičitan vyrábí lékařský průmysl ve formě suchého prášku. Připravují se podle návodu na etiketě: odvažte určité množství prášku, zalijte odpovídajícím množstvím vody, povařte a nasypte do sterilních Petriho misek.

Russell Středa. Přidejte 40 g suché živné půdy do 950 ml destilované vody a přidejte 5 g živného agaru. Zahřívejte, dokud se prášky nevyvaří a nerozpustí. 1 g x se rozpustí v 50 ml destilované vody. hodin glukózy a přidejte do připravené směsi. Médium se nalije do sterilních zkumavek o objemu 5-7 ml, sterilizuje se proudící párou (2 dny po 2 minuty) a zkosí se tak, aby zůstala kolona. Stejným způsobem se připraví Russellovo médium s mannitolem a sacharózou.

Olkenitského médium ze suchého agaru. 2,5 g suchého živného agaru se rozpustí ve 100 ml destilované vody. Do agaru ochlazeného na 50 °C se přidají všechny ingredience uvedené v receptu (na etiketě). Médium nalité do zkumavek se sterilizuje proudící párou (3 dny, každý 20 minut) a poté se seče. Připravené médium by mělo mít světle růžovou barvu.

Home → Analýzy → Imunologická metoda → Hemaglutinační reakce (imunologická metoda)

Aglutinační reakce jsou založeny na interakci činidla (protilátek) s antigeny umístěnými na povrchu buněk nebo cizích částic. V důsledku toho vznikají velké agregáty, které se vysrážejí a jsou vidět i pouhým okem. Tímto způsobem se určuje krevní skupina podle systému ABO, přítomnosti Rh faktoru v něm atd. Jedná se o citlivější diagnostickou metodu ve srovnání se srážecími reakcemi, neboť objem sedimentu (aglutinátu) převyšuje objem sraženina.

Přímá hemaglutinace

K detekci povrchových antigenů mikroorganismů a červených krvinek a také protilátek proti nim se používá přímá hemaglutinační reakce (DHR).
Testovaný materiál (krev) se přidá ke standardnímu séru obsahujícímu protilátky. Rychlost přímé aglutinační reakce souvisí s množstvím testovaného materiálu, množstvím a koncentrací séra a okolní teplotou.

Nepřímá hemaglutinace

Nepřímá hemaglutinační reakce se provádí k detekci protilátek v krvi pacienta pomocí erytrocytárního diagnostika. Činidlo se skládá z červených krvinek, na jejichž povrchu je antigen (proteiny mikroorganismů, toxiny, alergeny atd.).
Krevní sérum pacienta se naředí 0,9% roztokem chloridu sodného, poté se přidá erytrocytární diagnosticum a sleduje se výsledek. Tato vysoce citlivá diagnostická metoda detekuje antigeny již v malých koncentracích.

Hemaglutinační reakce (HRA).

Laboratorně se používají dvě hemaglutinační reakce s různým mechanismem účinku.

Druhá RGA není sérologická. V něm není adheze červených krvinek způsobena o

Hemaglutinační reakce

Titr viru je maximální ředění materiálu, ve kterém dochází k aglutinaci.

Hemaglutinační inhibiční reakce

Nepřímá hemaglutinační reakce

Nastavení reakce. Sérum se zahřívá po dobu 30 minut na 56 °C, naředí se postupně v poměru 1:10 - 1:1280 a nalije se po 0,25 ml do zkumavek nebo jamek, kam se poté přidají 2 kapky červených krvinek s adsorbovanými antigeny. přidal.

Kontrolní otázky.

1. Co ukazuje pozitivní výsledek rentgenové analýzy mezi červenými krvinkami a materiálem, který je testován na přítomnost viru?

2. Dojde k aglutinační reakci červených krvinek, pokud se k nim přidá virus a jemu odpovídající sérum? Jak se nazývá reakce, která tento jev odhaluje?

PRAKTICKÁ PRÁCE Č. 12.

Reakce fixace komplementu.

Reakce fixace komplementu (CFR) je založena na skutečnosti, že specifický komplex antigen-protilátka na sebe vždy adsorbuje (váže) komplement.

Tato reakce je široce používána při identifikaci antigenů a v sérodiagnostice infekcí, zejména onemocnění způsobených spirochetami (Wassermannova reakce), rickettsie a viry.

RKS je komplexní sérologická reakce. Zahrnuje komplement a dva systémy antigen-protilátka. V podstatě se jedná o dvě sérologické reakce.

Komponenty, reakce fixace komplementu:

1. Antigen - obvykle lyzát, extrakt, hapten,

méně často suspenze mikroorganismů.

2. Protilátka - sérum pacienta.

3. Doplněk - morčecí sérum.

4. Antigen - ovčí erytrocyty.

5. Protilátka - hemolyzin proti ovčím erytrocytům.

6. Izotonický roztok.

Vzhledem k tomu, že v RSC je zapojeno velké množství složitých komponent,

Související informace:

Hledat na webu:

Nepřímý nebo pasivní hemaglutinační test (IRHA nebo RPHA) je citlivější a specifičtější než aglutinační test. Tato reakce se také používá ve dvou směrech.

1) K průkazu protilátek v krevním séru pacienta se používá erytrocytární diagnostika, při které je antigen adsorbován na povrchu erytrocytů ošetřených taninem. V souvislosti s touto reakcí se častěji používá termín RPGA.

Testované sérum se naředí v jamkách plastových destiček a přidá se erytrocytární diagnosticum. Při pozitivní reakci se podél stěn otvoru objeví tenký film ve formě „krajkového deštníku“ s negativní reakcí se objeví hustý sediment erytrocytů ve formě „knoflíku“.

2) K průkazu toxinů a bakteriálních antigenů ve studovaném materiálu se využívá protilátková erytrocytární diagnostika získaná adsorpcí protilátek na erytrocytech. V souvislosti s touto reakcí se častěji používá termín RNGA. Pomocí protilátkové diagnostiky je například detekován antigen moru, difterický exotoxin a botulotoxin.

Co je diagnostika erytrocytů? Co je diagnostika erytrocytů protilátek?

Diagnostika erytrocytů jsou červené krvinky (ošetřené taninem nebo formalínem) s antigeny extrahovanými z bakterií, které jsou na nich adsorbovány, a používají se při RPHA (pasivní hemaglutinační reakce). V případě, že se RPGA používá k detekci antigenu v sekretech pacientů, v tkáních apod., používají se „protilátková diagnostika“, tedy červené krvinky senzibilizované protilátkami.

V RNGA jsou protilátky v krevním séru detekovány pomocí antigenního erytrocytárního diagnostica, což jsou erytrocyty s adsorbovanými antigeny.

Metodika nastavení reakcí. Koaglutinační reakce.

- fixace červených krvinek formaldehydem nebo glutarovými nebo akrylovými aldehydy. Takto ošetřené červené krvinky jsou dlouhodobě skladovány. Častěji se k tomuto účelu používají erytrocyty z ovcí, lidí, kuřat atd.;
— ošetření fixovaných erytrocytů roztokem taninu. Díky tomu získávají červené krvinky schopnost nevratně adsorbovat proteiny (viry a protilátky) na svém povrchu;
- senzibilizace tanizovaných erytrocytů viry nebo protilátkami.

Koaglutinační reakce (CAR)

Koaglutinační reakce se používá ke stanovení antigenů pomocí protilátek adsorbovaných na protein A stafylokokových buněk (antibody diagnosticum).
Protein A má afinitu k Fc fragmentu imunoglobulinů, proto takové bakterie ošetřené imunitním diagnostickým sérem nespecificky adsorbují sérové protilátky, které pak interagují s aktivními centry s odpovídajícími mikroby izolovanými od pacientů. V důsledku koagulace se tvoří vločky sestávající ze stafylokoků, diagnostických sérových protilátek a detekovaného mikroba.

Aglutinační séra: co obsahují; jak se získávají, k čemu se používají; Jaký je titr aglutinačního séra?

Aglutinační sérum se získává imunizací králíků (intravenózně, subkutánně nebo intraperitoneálně) suspenzí usmrcených bakterií, počínaje dávkou 200 milionů, poté 500 milionů, 1 miliardy, 2 miliard mikrobiálních tělísek v 1 ml, v intervalech 5 dnů. 7-8 dní po poslední imunizaci se odebere krev a stanoví se titr protilátek.

Titr aglutinačního séra je maximální ředění séra, při kterém dochází k aglutinaci s odpovídajícím mikroorganismem.

Aglutinační séra se používají k identifikaci mikrobů v aglutinační reakci v plném rozsahu.

Hemaglutinační reakce (HRA)

Pokud je zkoumaný mikroorganismus aglutinován sérem na titr nebo poloviční hodnotu titru, lze jej považovat za patřící k druhu, jehož název je uveden na štítku ampule.

Jaké jsou rozdíly mezi polyvalentními a monovalentními (monoreceptorovými) aglutinačními séry; Čím to je, že když je králík imunizován mikroby jednoho typu, získá se sérum obsahující protilátky proti několika antigenům?

Monoreceptorová séra jsou séra obsahující protilátky pouze proti jednomu antigenu a polyvalentní séra, která poskytují aglutinační reakce se dvěma nebo třemi příbuznými bakteriemi, které mají společný antigen. Aglutinační séra se používají k identifikaci mikroorganismů v aglutinační reakci. Nevýhodou takových sér je, že jsou schopna vyvolat skupinové aglutinační reakce, protože obsahují protilátky proti bakteriím, které mají společné antigeny.

Hemaglutinační reakce. Popis a aplikace

Vychází z toho, že červené krvinky, na kterých jsou dříve adsorbovány antigeny, získávají schopnost aglutinace v přítomnosti homologních sér (protilátek).

Červené krvinky v tomto případě působí jako nosiče se specifickými determinantami, k jejichž aglutinaci dochází v důsledku reakce antigen + protilátka.

Červené krvinky, na jejichž povrchu jsou pevně přichyceny antigeny, se nazývají erytrocytární antigen diagnosticum neboli erytrocyty senzibilizované antigenem.

Další typ RNGA - protilátky jsou adsorbovány na povrchu erytrocytů a v přítomnosti homologního antigenu dochází k jejich následné aglutinaci. V tomto případě se takové erytrocyty nazývají erytrocytární protilátka diagnosticum nebo erytrocyty senzibilizované protilátkami.

Na základě těchto dvou základních metodologických přístupů bylo vyvinuto a používáno mnoho modifikací RNGA. Jako nosiče se tedy používají malé standardní latexové částice. V tomto případě se reakce nazývá latexová aglutinační reakce (RLA) nebo se používá Staphylococcus aureus - koaglutinační reakce atd. Diagnostika erytrocytů se obvykle připravuje v biologických průmyslových podnicích a hlavní zkušenosti RNGA se provádějí v diagnostických laboratořích.

Příprava diagnostiky erytrocytů zahrnuje následující kroky:

fixace červených krvinek formaldehydem nebo glutarovými nebo akrylovými aldehydy. Takto ošetřené červené krvinky jsou dlouhodobě skladovány. Častěji se k tomuto účelu používají erytrocyty z ovcí, lidí, kuřat atd.;
ošetření fixovaných erytrocytů roztokem taninu. Díky tomu získávají červené krvinky schopnost nevratně adsorbovat proteiny (viry a protilátky) na svém povrchu;
senzitizace tanizovaných erytrocytů viry nebo protilátkami.

Je třeba poznamenat, že metody přípravy diagnostiky erytrocytů pro virové infekce jsou různé.

Postup provádění RNGA k detekci a stanovení titru protilátek je následující:

stejné dávky erytrocytů senzibilizovaných antigenem se přidají k postupným dvojnásobným ředěním séra;
směs se ponechá 2-3 hodiny při teplotě místnosti nebo 16-18 hodin při 4 °C;
vzít v úvahu výsledky. Pokud sérum obsahuje protilátky proti viru, kterým byly červené krvinky senzibilizovány, je pozorována hemaglutinace, která se hodnotí křížením.

Titr protilátek v séru je považován za nejvyšší ředění séra, které ještě poskytuje hemaglutinaci alespoň dvěma kříženími.

RNGA je doprovázena všemi příslušnými kontrolami. Obvykle se reakce provádí pomocí mikrometody.

RNGA vám umožňuje řešit následující diagnostické problémy:

detekovat protilátky a stanovit jejich titr v krevním séru pomocí známého erytrocytárního antigenního diagnostika;
detekovat a identifikovat neznámý virus pomocí známé diagnostiky protilátek proti erytrocytům.

Výhody RNGA: vysoká citlivost, jednoduchost techniky umístění a rychlost odezvy. Je však důležité si uvědomit, že velké obtíže vznikají při přípravě stabilní diagnostiky erytrocytů (velká závislost na čistotě použitých komponent, nutnost volby způsobu fixace, tanizace a senzibilizace erytrocytů pro každý typ viru).

Pokud najdete chybu, vyberte část textu a stiskněte Ctrl+Enter.

V kontaktu s