K diagnostice virových onemocnění se používají následující metody:
1) Viroskopické.
2) Imunitní elektronová mikroskopie.
3) Virologické.
4) Sérologické.
5) Imunofluorescenční.
6) Biologické.
7) Použití DNA (RNA) sond.
8) Polymerázová řetězová reakce.
Množení (reprodukce) virů v buněčné kultuře se posuzuje podle cytopatického efektu (CPE), který lze detekovat mikroskopicky a je charakterizován morfologickými změnami v buňkách.
Povaha CPD virů se využívá jak pro jejich detekci (indikaci), tak pro orientační identifikaci, tedy určení jejich druhu.
Metody detekce virů:
1) Hemadsorpční reakce - založená na schopnosti povrchu buněk, ve kterých se rozmnožují, adsorbovat červené krvinky - hemadsorpční reakce. Pro umístění do kultury buněk infikovaných viry se přidá suspenze erytrocytů a po určité době kontaktu se buňky promyjí izotonickým roztokem chloridu sodného. Adherované červené krvinky zůstávají na povrchu buněk infikovaných virem.
2) Hemaglutinační reakce (HR). Používá se k detekci virů v kultivační tekutině buněčné kultury nebo v chorioalantoické nebo plodové vodě kuřecího embrya.
K detekci specifických protilátek i virových antigenů v testovaném materiálu lze použít sérologické metody. Pro tyto účely lze použít všechny známé sérologické reakce:
1) Reakce fixace komplementu.
2) Pasivní hemaglutinační reakce a její varianty (RNAg, RNAt).
3) Hemaglutinační inhibiční reakce.
4) Imunitní adhezní hemaglutinační reakce (komplex antigen + protilátka v přítomnosti komplementu je adsorbován na erytrocytech).
5) Srážecí reakce v gelu.
6) Reakce neutralizace virů.
7) Radioimunitní metoda.
8) Metody enzymového imunotestu.
Z uvedených metod jsou stále oblíbenější metody enzymové imunoanalýzy, které se vyznačují vysokou specificitou a snadností použití.
7. Hemaglutinační reakce, její mechanismus u chřipkových virů. Hemaglutinační inhibiční reakce, její praktické využití.
Hemaglutinační reakce (HR). Používá se k detekci virů v kultivační tekutině buněčné kultury nebo v chorioalantoické nebo plodové vodě kuřecího embrya.
8. Vlastnosti antivirové imunity. Úloha fagocytózy a humorálních faktorů v imunitě. Interferony, charakteristika základních vlastností, klasifikace. Vlastnosti působení interferonů na viry .
Na ochraně těla před viry se podílejí všechny imunitní systémy, ale antivirová imunita má výrazné specifické rysy. Jsou určeny tím, že na průnik viru do těla nereagují jako první komplement a makrofágové systémy, ale systémy interferonů a T-killerů. Další rys tvorby imunity je spojen se skutečností, že viry mají slabý antigenní účinek na B lymfocyty a jejich aktivace, proliferace a diferenciace vyžaduje účast pomocných T-buněk, a tedy jejich prezentaci zpracovaného virového antigenu (peptidové fragmenty ) za účasti molekul MHC II. třídy. Úlohou makrofágů a dalších buněk prezentujících antigen tedy není ani tak samotná fagocytóza, jako spíše zpracování a prezentace antigenu.
První odpovědí na průnik viru je interferonový systém, který potlačuje intracelulární reprodukci virů. Kromě toho mají a- a b-inhibitory přítomné v krevním séru antivirový účinek. Alfa inhibitor je termostabilní substrát, součást α-globulinů, zabraňuje adsorpci virů na buňku a je zničen neuraminidázou orto- a paramyxovirů. Beta-inhibitor je tepelně labilní mukopeptid, součást b-globulinů, potlačuje reprodukci orto- a paramyxovirů.
Interferony a inhibitory však k ochraně před viry nestačily, a tak příroda vytvořila další, velmi silný obranný mechanismus na úrovni těla proti virům. Je reprezentován především T-cytotoxickými lymfocyty a dalšími zabijáckými buňkami. Tyto buňky rozpoznávají všechny cizí antigeny, včetně virových, které jim předkládají molekuly MHC I. třídy. Hlavním biologickým významem T-killer buněk je detekce a zničení jakýchkoli buněk infikovaných cizími antigeny.
Interferon je rodina glykoproteinových proteinů, které jsou syntetizovány buňkami imunitního systému a pojivovou tkání. Podle toho, které buňky syntetizují interferon, se rozlišují tři typy: ?,? a p-interferony.
Alfa interferon je produkován leukocyty a nazývá se leukocyty; interferon beta se nazývá fibroblastický, protože je syntetizován fibroblasty - buňkami pojivové tkáně, a interferon gama se nazývá imunitní, protože je produkován aktivovanými T lymfocyty, makrofágy, přirozenými zabíječskými buňkami, tj. imunitními buňkami.
Produkce interferonu se prudce zvyšuje při infekci viry kromě antivirového účinku má interferon protinádorovou ochranu, neboť zpomaluje proliferaci (reprodukci) nádorových buněk, dále imunomodulační aktivitu, stimuluje fagocytózu, přirozené zabíječe, reguluje protilátku; produkce B buňkami, aktivující expresi hlavního histokompatibilního komplexu.
Mechanismus působení. Interferon nepůsobí přímo na virus mimo buňku, ale váže se na speciální buněčné receptory a ovlivňuje proces reprodukce viru uvnitř buňky ve fázi syntézy proteinů.
Soukromá virologie
1. Viry, které způsobují akutní respirační onemocnění (ARI). Klasifikace. Obecná charakteristika orthomyxovirů. Struktura virionu chřipky. Vlastnosti jeho genomu a implementace informací v něm obsažených. Replikace virionové RNA.
1. Viry jsou původci akutních respiračních infekcí. klasifikace.
Původci akutních respiračních infekcí jsou následující viry:
1. Chřipkové viry A, B, C (Orthomyxoviridae)
2. Paramyxoviry (Paramyxoviridae) - tato čeleď zahrnuje tři rody: paramyxovirus - viry lidské parainfluenzy (HPIV) typu 1, 2, 3, 4, Newcastleská choroba, ptačí parainfluenza a příušnice; Pneumovirus - respirační syncyciální virus (RS virus); Morbillivirus - virus spalniček.
3. Respirační koronaviry (Coronaviridae).
4. Respirační reoviry (Reoviridae).
5. Picornaviry (Picornaviridae).
Virus chřipky A
Virion má kulovitý tvar a průměr 80-120 nm. Genom viru je reprezentován jednořetězcovou fragmentovanou (8 fragmentů) negativní RNA s celkovou molekulovou hmotností 5 MD. Typ symetrie nukleokapsidy je šroubovicový. Virion má superkapsidu (membránu) obsahující dva glykoproteiny – hemaglutinin a neuraminidázu, které vyčnívají nad membránu ve formě různých hrotů.
Viry jsou původci akutních respiračních onemocnění. Vlastnosti manifestace onemocnění způsobených chřipkovými viry, parainfluenzou, rhinoviry, respiračním syncyciálním virem a adenoviry. Laboratorní metody jejich diagnostiky.
Virion má kulovitý tvar a průměr 80-120 nm. Genom viru je reprezentován jednovláknovou fragmentovanou (8 fragmentů) negativní RNA s celkovou molekulovou hmotností 5 MD. Typ symetrie nukleokapsidy je šroubovicový. Virion má superkapsidu (membránu) obsahující dva glykoproteiny – hemaglutinin a neuraminidázu, které vyčnívají nad membránu ve formě různých hrotů.
Ve virech chřipky A lidí, savců a ptáků bylo nalezeno 13 typů hemaglutininu lišících se antigenem, které byly označeny souvislým číslováním (od H1 do H13).
Neuraminidáza (N) je tetramer s molekulovou hmotností 200-250 kDa, každý monomer má molekulovou hmotnost 50-60 kDa.
Virus chřipky A má 10 různých variant neuraminidázy
Laboratorní diagnostika. Materiálem pro studii je výtok z nosohltanu, který se získává buď výplachem nebo pomocí vatových tamponů, a krev. Používají se následující diagnostické metody:
1. Virologická - infekce kuřecích embryí, kultur ledvinových buněk opice zelené (Vero) a psů (MDSC). Buněčné kultury jsou zvláště účinné pro izolaci virů A(H3N2) a B.
2. Sérologické - průkaz specifických protilátek a zvýšení jejich titru (v párových sérech) pomocí RTGA, RSK a enzymové imunoanalytické metody.
3. Jako urychlená diagnostika se používá imunofluorescenční metoda, která umožňuje rychle detekovat virový antigen ve stěrech otisků prstů z nosní sliznice nebo ve stěrech z nosohltanu pacientů.
4. Pro detekci a identifikaci viru (virové antigeny) byly navrženy metody RNA sondy a PCR.
Specifická prevence
1) žijí z oslabeného viru; 2) zabil celý virion; 3) subvirionová vakcína (z štěpených virionů); 4) podjednotková vakcína obsahující pouze hemaglutinin a neuraminidázu.
Viry chřipky (ortomyxoviry). Obecná charakteristika. Superkapsidové proteiny, jejich funkce, význam variability (posun a drift) pro epidemiologii chřipky. Laboratorní diagnostické metody. Vakcíny používané k prevenci chřipky.
Akutní infekční onemocnění, s horečkou, poškozením jater. Antroponóza.
Taxonomie, morfologie, antigenní struktura: Čeleď Picornaviridae, rod Hepatovirus. Typový druh má jeden sérotyp. Je to RNA virus, jednoduše organizovaný a má jeden virově specifický antigen.
Kultivace: Virus se pěstuje v buněčných kulturách. Reprodukční cyklus je delší než u enterovirů, cytopatický efekt není výrazný.
Odolnost: Odolná vůči teplu; inaktivuje se varem po dobu 5 minut. Relativně stabilní ve vnějším prostředí (voda).
Epidemiologie. Zdroj: pacienti. Mechanismus infekce je fekálně-orální. Viry se vylučují stolicí na počátku klinických projevů. S výskytem žloutenky se intenzita virové sekrece snižuje. Viry se přenášejí vodou, potravinami a rukama.
Postiženy jsou většinou děti ve věku 4 až 15 let.
Mikrobiologická diagnostika. Materiálem pro výzkum je sérum a výkaly. Diagnostika je založena především na stanovení IgM v krvi pomocí ELISA, RIA a imunitní elektronové mikroskopie. Tyto stejné metody mohou detekovat virový antigen ve stolici. Virologické vyšetření se neprovádí.
3. Virologická diagnostika chřipky. Izolace viru, určení jeho typu. Sérologické metody diagnostiky chřipky: RSK, RTGA. Zrychlená diagnostická metoda využívající fluorescenční protilátky.
Mikrobiologická diagnostika. Diagnóza „chřipky“ je založena na (1) izolaci a identifikaci viru, (2) stanovení virových antigenů v buňkách pacienta, (3) hledání protilátek specifických pro virus v séru pacienta. Při výběru materiálu pro výzkum je důležité získat buňky infikované virem, protože právě v nich dochází k replikaci viru. Materiálem pro výzkum je výtok z nosohltanu. Pro stanovení protilátek se vyšetřují párová krevní séra pacienta.
Expresní diagnostika. Virové antigeny jsou detekovány v testovaném materiálu pomocí RIF (přímé a nepřímé varianty) a ELISA. Pomocí PCR je možné detekovat genom virů v materiálu.
Virologická metoda. Optimálním laboratorním modelem pro kultivaci kmenů je kuřecí embryo. Indikace virů se provádí v závislosti na laboratorním modelu (úhyn, klinické a patomorfologické změny, CPP, tvorba „plaků“, „barevný test“, RHA a hemadsorpce). Viry se identifikují podle jejich antigenní struktury. Používají RSK, RTGA, ELISA, RBN (biologická neutralizační reakce) virů atd. Obvykle se typ chřipkových virů určuje v RSK, podtyp - v RTGA.
Sérologická metoda. Diagnóza je stanovena čtyřnásobným zvýšením titru protilátek v párových sérech od pacienta, získaných v intervalu 10 dnů. Používají se viry RTGA, RSK, ELISA, RBN.
Adenoviry, charakteristika vlastností, složení skupiny. Adenoviry patogenní pro člověka. Vlastnosti patogeneze adenovirových infekcí, způsoby kultivace adenovirů. Diagnostika adenovirových onemocnění.
Čeleď Adenoviridae se dělí na dva rody: Mastadenovirus - adenoviry savců, zahrnuje adenoviry lidí (41 sérovarů), opic (24 sérovarů), dále skot, koně, ovce, prasata, psi, myši, obojživelníci; a Aviadenovirus - ptačí adenoviry (9 sérovarů).
Adenoviry postrádají superkapsidu. Virion má tvar dvacetistěnu - kubický typ symetrie, jeho průměr je 70-90 nm. Kapsida se skládá z 252 kapsomer o průměru 7-9 nm.
Ve virionu bylo identifikováno alespoň 7 antigenů. Inkubační doba je 6-9 dní. Virus se množí v epiteliálních buňkách horních cest dýchacích a na sliznici očí. Může proniknout do plic, ovlivnit průdušky a alveoly a způsobit těžký zápal plic; Charakteristickou biologickou vlastností adenovirů je tropismus pro lymfoidní tkáň.
Adenovirová onemocnění lze charakterizovat jako febrilní s katarálními záněty sliznice dýchacích cest a očí, doprovázené zmnožením submukózní lymfatické tkáně a regionálních lymfatických uzlin.
Laboratorní diagnostika. 1. Detekce virových antigenů v postižených buňkách pomocí imunofluorescenčních nebo IFM metod. 2. Izolace viru. Materiálem pro výzkum je výtok z nosohltanu a spojivek, krev, stolice (virus lze izolovat nejen na začátku onemocnění, ale i 7.-14. den). K izolaci viru se používají primární trypsinizované buněčné kultury (včetně diploidních) lidského embrya, které jsou citlivé na všechny sérovary adenovirů. Viry jsou detekovány svým cytopatickým účinkem a pomocí RSC, protože všechny mají společný antigen vázající komplement. Identifikace se provádí typově specifickými antigeny pomocí RTGA a RN v buněčné kultuře. 3. Detekce zvýšení titru protilátek v párových sérech pacientů pomocí RSC. Stanovení zvýšení titru typově specifických protilátek se provádí s referenčními adenovirovými sérostmeny v RTGA nebo PH v buněčné kultuře.
5. Coxsackie a ECHO viry. Charakteristika jejich vlastností. Složení skupiny. Metody mikrobiologické diagnostiky onemocnění způsobených viry Coxsackie a ECHO.
Coxsackie je nejvíce kardiotropní ze všech enterovirů. U 20–40 % pacientů ve věku do 20 let je infekce Coxsackie komplikována myokarditidou. Viry Coxsackie jsou reprezentovány dvěma skupinami: skupina Coxsackie A zahrnuje 23 sérovarů (A1-A22, 24); Skupina Coxsackie B zahrnuje 6 sérovarů (B1-B6).
Coxsackie viry A a B mohou u člověka způsobit kromě onemocnění podobných dětské obrně, někdy doprovázených ochrnutím, různá další onemocnění s jedinečným klinickým obrazem: aseptickou meningitidu, epidemickou myalgii (Bornholmova choroba), herpanginu, lehčí onemocnění, gastroenteritidu, akutní respirační onemocnění, myokarditida
ECHO, což znamená: E - střevní; C - cytopatogenní; H - člověk; O - sirotek - sirotek. má 32 sérovarů.
Zdrojem infekcí Coxsackie a ECHO jsou lidé. K infekci viry dochází fekálně-orální cestou.
Patogeneze onemocnění způsobených viry Coxsackie a ECHO je podobná patogenezi dětské obrny. Vstupními branami jsou sliznice nosu, hltanu a tenkého střeva, v jejichž epiteliálních buňkách se stejně jako v lymfoidní tkáni tyto viry množí.
Afinita k lymfoidní tkáni je jedním z charakteristických rysů těchto virů. Po rozmnožení viry pronikají do lymfy a poté do krve, což způsobuje virémii a generalizaci infekce.
Jakmile se viry dostanou do krevního řečiště, šíří se hematogenně po celém těle a selektivně se usazují v těch orgánech a tkáních, ke kterým mají tropismus.
Metody diagnostiky enterovirových onemocnění. používat virologickou metodu a různé sérologické reakce. Studie musí být provedena na celé skupině enterovirů. K jejich izolaci se používá střevní obsah, výplachy a výtěry z krku, méně často mozkomíšní mok nebo krev, v případě úmrtí pacienta se vyšetřují kousky tkáně z různých orgánů. Testovaný materiál infikuje buněčné kultury (polioviry, ECHO, Coxsackie B a některé sérovary Coxsackie A), stejně jako novorozené myši (Coxsackie A).
Typizace izolovaných virů se provádí v neutralizačních reakcích, RTGA, RSK, precipitačních reakcích, za použití standardních směsí sér různých kombinací. K průkazu protilátek v lidských sérech při enterovirových infekcích se používají stejné sérologické reakce (RN, barevné reakce, RTGA, RSK, precipitační reakce), ale pro tyto účely je nutné mít spárovaná séra od každého pacienta (v akutním období resp. po 2-3 týdnech od začátku onemocnění). Reakce jsou považovány za pozitivní, když se titr protilátek zvýší alespoň 4krát. U těchto dvou metod se také používá IPM (k detekci protilátek nebo antigenu).
Hepatitida B. Struktura a charakteristika hlavních vlastností virionu. Povrchový antigen, jeho význam. Vlastnosti interakce viru s buňkou. Způsoby infekce. Laboratorní diagnostické metody. Specifická prevence.
Virus hepatitidy B, HBV Virion obsahuje tři hlavní antigeny
1. HBsAg - povrchový (povrchový), nebo rozpustný (rozpustný), nebo australský antigen.
2. HBcAg - jádrový antigen (cog antigen).
3. HBeAg - antigen e, lokalizovaný v jádře virionu
Samotný virion, částice Dane, má kulovitý tvar a průměr 42 nm. Superkapsida virionu se skládá ze tří proteinů: hlavního (jádro), velkého a středního (obr. 88.1). Genom je uzavřen v kapsidě a je reprezentován dvouvláknovou kruhovou DNA s molekulovou hmotností 1,6 MD. DNA se skládá z přibližně 3200 nukleotidů, ale její plusové vlákno je o 20-50% kratší než mínusové vlákno.
Povrchový antigen - HBsAg - existuje ve formě tří morfologicky odlišných variant: 1) představuje superkapsidu celého virionu; 2) vyskytující se ve velkém množství ve formě částic o průměru 20 nm a majících kulovitý tvar; 3) ve formě vláken o délce 230 nm. Chemicky jsou totožné. HBsAg obsahuje jeden společný antigen a a dva páry vzájemně se vylučujících typově specifických determinant: d/y a w/r, proto existují čtyři hlavní podtypy HBsAg (a tedy HBV): adw, adr, ayw a ayr. Antigen a zajišťuje vytvoření obecné zkřížené imunity vůči všem subtypům viru.
Proteiny, které tvoří povrchový antigen, existují v glykosylované (gp) a neglykosylované formě. Glykosylované jsou gp27, gp33, gp36 a gp42 (čísla označují mW v kDa). Superkapsida HBV se skládá z hlavního neboli jádra S proteinu (92 %); střední M protein (4 %) a velký nebo dlouhý L protein (1 %).
Hlavní protein - p24/gp27, Velký protein - p39/gp42, Střední protein - gp33/gp36.
Interakce s buňkou.
1. Adsorpce na buňce.
2. Průnik do buňky pomocí mechanismu receptorem zprostředkované endocytózy (ohraničená jamka -> ohraničený váček -> lysozom -> uvolnění nukleokapsidy a průnik virového genomu do jádra hepatocytu).
3. Intracelulární reprodukce.
Zdrojem nákazy virem hepatitidy B je pouze člověk. K infekci dochází nejen parenterálně, ale také sexuálně a vertikálně (z matky na plod)
V současnosti je hlavní metodou diagnostiky hepatitidy B použití reverzního pasivního hemaglutinačního testu (RPHA) k detekci viru nebo jeho povrchového antigenu – HBsAg. Jak již bylo uvedeno, krev obsahuje mnohonásobně více povrchového antigenu než samotný virus (100-1000krát). Pro reakci ROPHA se používají erytrocyty senzibilizované protilátkami proti viru hepatitidy B. Když je v krvi přítomen antigen, dochází k hemaglutinační reakci. K detekci protilátek proti virovému antigenu HBsAg se používají různé imunologické metody (RSK, RPGA, IFM, RIM atd.)
Specifická prevence
Očkování proti hepatitidě B je povinné a mělo by být provedeno v prvním roce života. Pro očkování byly navrženy dva typy vakcín. K přípravě jednoho z nich se jako surovina používá plazma nosičů viru, protože obsahuje virový antigen v množství dostatečném pro přípravu vakcíny. Hlavní podmínkou pro přípravu tohoto typu vakcín je jejich naprostá bezpečnost. Pro výrobu jiného typu vakcíny se využívají metody genového inženýrství, zejména pro získání antigenního materiálu je použit rekombinantní klon kvasinek, který produkuje povrchový antigen. viru hepatitidy B.
V Rusku byly vytvořeny vakcíny jak pro dospělé, tak pro novorozence a malé děti. Celá vakcinace se skládá ze tří injekcí:
Dávkuji - ihned po porodu; II dávka - po 1-2 měsících; III dávka - do ukončeného 1. roku života.
Antigeny– geneticky cizorodé látky, které po zavedení do zvířecího nebo lidského těla vyvolávají specifickou imunitní odpověď – syntézu protilátek, tvorbu senzibilizovaných T-lymfocytů, imunologickou paměť či toleranci. Cizí látky se týkají chemických struktur, které v těle neexistují. Cizí pro lidské tělo jsou viry, mikroorganismy, ale i buňky, tkáně, orgány zvířat a jiných lidí. Antigeny mají několik receptorů pro komunikaci s protilátkami a jsou schopny s nimi reagovat jak ve zvířecím nebo lidském těle (in vivo), tak mimo tělo - in vitro (in vitro).
Protilátky- vysokomolekulární proteiny globulinové frakce krevního séra. Protilátky jsou syntetizovány pod vlivem antigenu a jsou schopny specificky reagovat (spojit se) s odpovídajícím antigenem. Všechny protilátky mají charakteristickou strukturu imunoglobulinů; liší se imunologickými, biologickými a fyzikálními vlastnostmi; a dělí se do 5 tříd – IgG, IgA, IgM, IgD a IgE.
Sérologické reakce
V laboratorní praxi využívají sérologické reakce- laboratorní reakce mezi antigeny a protilátkami, které vedou k detekovatelným změnám ve studovaném systému. Tyto reakce se nazývají sérologické, protože se provádějí pomocí séra (séra) obsahujícího protilátky.
Sérologické testy prováděné k průkazu specifických protilátek a antigenů patogenů u infekčních onemocnění jsou dostupnější laboratorní diagnostickou metodou než bakteriologická detekce patogenu. V některých případech zůstávají sérologické testy jedinou metodou diagnostiky infekčních onemocnění.
Některé metody stanovení protilátek používané v laboratorní praxi
Všechny sérologické reakce jsou založeny na interakci antigenu a protilátky s tvorbou imunitních komplexů, které lze detekovat v testech in vitro (tj. „in vitro“ - mimo živý organismus). Reakce antigen-protilátka v systému in vitro mohou být doprovázeny výskytem několika jevů - aglutinace, precipitace, lýza a další. Vnější projevy reakce závisí na fyzikálně-chemických vlastnostech antigenu (velikost částic, fyzikální stav), třídě a typu protilátek a také na podmínkách experimentu (konzistence média, koncentrace soli, pH, teplota).
1. Reakce fixace komplementu
Doplněk je systém proteinů krevní plazmy, který zahrnuje 9 složek označených písmenem C (C1, C2, C3,... C9), faktor B, faktor D a řadu regulačních proteinů. Některé z těchto složek se skládají ze 2 - 3 proteinů, například C1 je komplex tří proteinů. Tyto proteiny cirkulují v krevním řečišti a jsou přítomny na buněčných membránách. Komplement je nejdůležitějším systémem vrozené i získané imunity. Tento systém je určen k ochraně těla před působením cizích činitelů a podílí se na realizaci imunitní reakce organismu. Komplement objevil na konci 19. století belgický vědec J. Bordet.
Reakce fixace komplementu (CFR)– sérologická reakce používaná pro kvantitativní stanovení protilátek a antigenů fixujících komplement. Poprvé ji popsali Bordet a Gengou v roce 1901. RSC je založeno na skutečnosti, že komplex antigen-protilátka je schopen absorbovat komplement, který se přidává do reakční směsi. Když si antigeny a protilátky navzájem odpovídají, tvoří imunitní komplex, na který se váže komplement. Specifický imunitní komplex adsorbuje komplement přidaný do systému, tzn. Komplement je vázán komplexem antigen-protilátka. Čím více protilátek, tím více komplementu je fixováno. Pokud se nevytvoří komplex antigen-protilátka, komplement zůstává volný.
Složitost RSC spočívá v tom, že reakce tvorby komplexu antigen-protilátka-komplement je neviditelná. K identifikaci složek reakce se používá další hemolytický indikátorový systém. Pomocí hemolytické reakce se po ukončení reakce antigenu s antisérem provádí kvantitativní stanovení zbytku komplementu.
Reakce fixace komplementu (CFR) se používá k detekci protilátek proti specifickému antigenu nebo určení typu antigenu pomocí známé protilátky. Tato komplexní sérologická reakce zahrnuje dva systémy a komplement. První systém je bakteriologický (základní), skládá se z antigenu a protilátky. Druhý systém je hemolytický (indikátor). Zahrnuje ovčí červené krvinky (antigen) a odpovídající hemolytické sérum (protilátka).
RSC se podává ve dvou krocích: nejprve se antigen zkombinuje s testovacím krevním sérem, ve kterém se hledají protilátky, a poté se přidá komplement. Pokud se antigen a protilátka shodují, vytvoří se imunitní komplex, který váže komplement. Při absenci protilátek v séru se imunitní komplex netvoří a komplement zůstává volný. Protože proces adsorpce komplementu komplexem je vizuálně neviditelný, je k identifikaci tohoto procesu přidán systém hemu.
Reakce fixace komplementu (CFR) se pro svou vysokou citlivost využívá jak k sérologické diagnostice bakteriálních a virových infekcí, alergických stavů, tak k identifikaci antigenů (izolovaná bakteriální kultura).
Srážecí reakce (RP)(z latinského praecipitatio - srážení, padání) je založeno na srážení specifického imunitního komplexu sestávajícího z rozpustného antigenu a specifické protilátky za přítomnosti elektrolytu. V důsledku reakce se vytvoří zakalený prstenec nebo uvolněný sediment - sraženina. Mezi ve vodě rozpustným antigenem a protilátkou dochází k precipitační reakci, jejímž výsledkem jsou velké komplexy, které se vysrážejí
3. Flokulační reakce
Flokulační reakce (podle Ramona)(z lat. floccus - vločky vlny, vločky - kousky, vločky; vločkování - tvorba volných vločkových agregátů (vloček) z malých částic dispergované fáze) - výskyt opalescence nebo vločkovité hmoty (imunoprecipitace) ve zkumavce během reakce toxin - antitoxin nebo toxoid - antitoxin. Používá se ke stanovení aktivity antitoxického séra nebo toxoidu.
Flokulační reakce je založena na detekci „počáteční“ flokulace - zákalu při tvorbě komplexu exotoxin (anatoxin) + antitoxin v optimálních kvantitativních poměrech složek.
4. Aglutinační reakce
Aglutinace(z latinského aglutinatio - lepení) je reakce interakce mezi antigenem a specifickou protilátkou, která se projevuje formou lepení. V tomto případě jsou antigeny ve formě částice-korpuskuly (mikrobiální buňky, červené krvinky atd.) slepeny dohromady protilátkami a srážejí se (aglutinují) ve formě vloček. Aglutináty jsou obvykle viditelné pouhým okem. Aby reakce proběhla, je nutná přítomnost elektrolytů (například izotonický roztok chloridu sodného), které urychlují proces aglutinace.
Pomocí aglutinační reakce (RA), reatio aglutinationis (anglicky aglutinační test), detekují se protilátky nebo korpuskulární antigeny. Podle typu použitého imunodiagnostika se rozlišují reakce mikrobiální aglutinace, hemaglutinace, latexaglutinace, koaglutinace atd.
5. Název protilátek účastnících se precipitačních reakcí
Protilátky zapojené do precipitačních reakcí jsou tradičně pojmenovány podle jejich interakce s antigenem:
aglutininy - způsobují slepení korpuskulárního antigenu - aglutinogenu a vysrážení komplexu antigen - protilátka (aglutinát);
precipitiny - tvoří sraženinu s rozpustným antigenem - precipitinogenem.
Bakteriolyziny (způsobují lýzu bakterií) a hemolyziny (způsobují lýzu červených krvinek) se účastní lyzačních reakcí.
Detekce v séru Přítomnost protilátek proti antigenům patogenu umožňuje stanovení diagnózy onemocnění. Sérologické studie se také používají k identifikaci mikrobiálních antigenů, různých biologicky aktivních látek, krevních skupin, tkáňových a nádorových antigenů, imunitních komplexů, buněčných receptorů atd.
Když je mikrob izolován Patogen se identifikuje u pacienta studiem jeho antigenních vlastností pomocí imunodiagnostických sér, tj. krevních sér hyperimunizovaných zvířat obsahujících specifické protilátky. Jedná se o tzv sérologická identifikace mikroorganismy.
Široce používán v mikrobiologii a imunologii aglutinační reakce, precipitace, neutralizace, reakce zahrnující komplement, použití značených protilátek a antigenů (radioimunologické, enzymatická imunoanalýza, imunofluorescenční metody). Uvedené reakce se liší zaznamenaným účinkem a technikou produkce, všechny jsou však založeny na interakční reakci antigenu s protilátkou a slouží k detekci protilátek i antigenů. Imunitní reakce se vyznačují vysokou senzitivitou a specificitou.
Vlastnosti interakce protilátek s antigeny jsou základem diagnostických reakcí v laboratořích. Reakce in vitro mezi antigenem a protilátkou se skládá ze specifické a nespecifické fáze. V specifická fáze dochází k rychlé specifické vazbě aktivního centra protilátky na antigenní determinantu. Pak přijde nespecifická fáze - pomalejší, což se projevuje viditelnými fyzikálními jevy, například tvorbou vloček (aglutinační fenomén) nebo sraženinou ve formě zákalu. Tato fáze vyžaduje přítomnost určitých podmínek (elektrolyty, optimální pH prostředí).
Vazba antigenního determinantu (epitopu) na aktivní centrum Fab fragmentu protilátek je způsobena van der Waalsovými silami, vodíkovými vazbami a hydrofobní interakcí. Síla a množství antigenu vázaného protilátkami závisí na afinitě, aviditě protilátek a jejich valenci.
K otázce expresní diagnostiky:
1. Lze diagnostikovat kulturu izolovanou ve své čisté formě.
2. Ve speciálně vybavených laboratořích (musí mít povolení)
3. Dodržování přísných pravidel, jako jsou: izolovaná místnost, požadované speciální ochranné obleky, povinné kompletní hygienické ošetření místnosti po práci s patogenem, hygienické ošetření výzkumníků po ukončení práce.
Metody expertní diagnostiky.
1. Bakteriologie - kombinovaná polytropní živná média pro rychlé studium morf, tinktor, biochemie. vlastnosti. Použití enzymové indikátorové pásky, elektrofyzikální metoda, metoda papírových disků napuštěných různými látkami (glukóza, laktóza atd.)
2. Diagnostika fágů.
3. Sérodiagnostika - Manciniho metoda, precipitace v gelu dle Ascoli, RA, RPGA.
4. Bakterioskopie - přímá a nepřímá RIF.
Expresní diagnostické metody pro:
Cholera - M.Z Ermolyeva, imobilizační stanice s cholerovým diagnostickým sérem, RIF.
Tularémie - RA na skle, RPGA
Chume - fágová typizace, metoda sacharidového papíru, RPGA.
Sinusový vřed - Ascoliho metoda, RIF, RPGA.
Vzorec růstu: jsou tři z nich: difúzní (nepovinné anaeroby), spodní (obligátní anaeroby) a povrchové (obligátní aeroby).
Izolace čisté kultury anaerobních bakterií
V laboratorní praxi budete často muset pracovat s anaerobními mikroorganismy. Jsou náročnější na živná média než aeroby, častěji vyžadují speciální růstové přísady, vyžadují zastavení přístupu kyslíku při jejich kultivaci a doba jejich růstu je delší. Práce s nimi je proto složitější a vyžaduje značnou pozornost bakteriologů a laborantů.
Je důležité chránit materiál, který obsahuje anaerobní patogeny, před toxickými účinky vzdušného kyslíku. Proto se doporučuje odebírat materiál z ložisek hnisavé infekce při punkci injekční stříkačkou, doba mezi odběrem materiálu a naočkováním na živnou půdu by měla být co nejkratší.
Protože se pro kultivaci anaerobních bakterií používají speciální živná média, která by neměla obsahovat kyslík a mít nízký redoxní potenciál (-20 -150 mV), přidávají se k jejich složení indikátory - resazurin, methylenová modř atd., které reagují na změnu v tomto potenciálu. Jak roste, bezbarvé formy indikátorů se obnovují a mění svou barvu: resazurin se mění na středně růžovou a methylenová modř na středně modrou. Takové změny ukazují na nemožnost použití médií pro kultivaci anaerobních mikrobů.
Zavedení alespoň 0,05% agaru do média pomáhá snižovat redoxní potenciál, který zvýšením jeho viskozity pomáhá snižovat dodávku kyslíku. Toho je zase dosaženo použitím čerstvých (nejpozději dvě hodiny po výrobě) a redukovaných živných médií.
Je třeba vzít v úvahu, že vzhledem ke zvláštnostem fermentačního typu metabolismu anaerobních bakterií vyžadují prostředí bohatší na nutriční složky a vitamíny. Nejčastěji se používají srdeční-mozkové a jaterní infuze, sójové a kvasnicové extrakty, hydrolytický digest kasein, pepton, trypton. Je povinné přidat růstové faktory, jako je Tween-80, hemin, menadion, plná nebo hemolyzovaná krev.
Izolace čisté kultury aerobních mikroorganismů se skládá z řady fází.
První den (1. stupeň studie) se patologický materiál odebere do sterilní nádoby (zkumavka, baňka, lahvička). Studuje se na vzhled, konzistenci, barvu, vůni a další vlastnosti, připravuje se nátěr, natírá se a zkoumá se pod mikroskopem. V některých případech (akutní kapavka, mor) je v této fázi možné provést předchozí diagnózu a navíc vybrat média, na která bude materiál naočkován. Záběr se provádí bakteriologickou kličkou (používanou nejčastěji), špachtlí Drigalského metodou a vatovým tamponem. Kelímky se uzavřou, obrátí dnem vzhůru, podepíší se speciální tužkou a vloží do termostatu při optimální teplotě (37 °C) na 18-48 let. Účelem této fáze je získat izolované kolonie mikroorganismů.
Někdy se však za účelem akumulace materiálu vysévá na tekutá živná média.
Z podezřelých kolonií se připravují nátěry, barví se pomocí Gramovy metody ke studiu morfologických a tinktoriálních vlastností patogenů a vyšetřují se pohyblivé bakterie v „visící“ nebo „rozdrcené“ kapce. Tyto příznaky mají mimořádně velkou diagnostickou hodnotu při charakterizaci určitých typů mikroorganismů.
Zbytky studovaných kolonií se opatrně odstraní z povrchu média, aniž by se dotýkaly ostatních, a naočkují se na šikmé části agaru nebo na sektory Petriho misky s živným médiem, aby se získala čistá kultura. Zkumavky nebo misky s kulturami se umístí do termostatu při optimální teplotě na 18-24 hodin.
Bakterie mohou také růst jinak na tekutých živných půdách, i když charakteristiky růstových projevů jsou horší než na pevných půdách.
Bakterie jsou schopny způsobit difúzní zákal média, jeho barva se nemusí měnit nebo získat barvu pigmentu. Tento růstový vzor je nejčastěji pozorován u většiny fakultativně anaerobních mikroorganismů.
Někdy se na dně zkumavky vytvoří sraženina. Může být drobivý, homogenní, viskózní, slizovitý atd. Médium nad ním může zůstat průhledné nebo se zakalit. Pokud mikrobi netvoří pigment, sediment má modromodrou nebo nažloutlou barvu. Anaerobní bakterie rostou zpravidla podobným způsobem.
Parietální růst se projevuje tvorbou vloček a zrn přichycených k vnitřním stěnám zkumavky. Médium zůstává průhledné.
Aerobní bakterie mají tendenci růst povrchově. Na povrchu se často vytváří jemný, bezbarvý nebo namodralý film ve formě sotva znatelného povlaku, který po protřepání nebo protřepání mizí. Fólie může být vlhká, hustá, vláknitá, slizká konzistence a může se přilepit na smyčku a táhnout za ni. Existuje však také hustý, suchý, křehký film, jehož barva závisí na pigmentu produkovaném mikroorganismy.
Pokud je to nutné, provede se nátěr, obarví se, vyšetří se pod mikroskopem a mikroorganismy se naočkují kličkou na povrch pevného živného média, aby se získaly izolované kolonie.
Třetí den (fáze 3 studie) je studován růstový vzorec čisté kultury mikroorganismů a je prováděna jeho identifikace.
Nejprve věnují pozornost charakteristikám růstu mikroorganismů na médiu a udělají nátěr, obarví jej pomocí Gramovy metody, aby zkontrolovali čistotu kultury. Pokud jsou pod mikroskopem pozorovány bakterie stejného typu morfologie, velikosti a tinctoriálních (schopnost barvit) vlastností, dochází se k závěru, že kultura je čistá. V některých případech lze na základě vzhledu a charakteristik jejich růstu vyvodit závěr o typu izolovaných patogenů. Určení druhů bakterií na základě jejich morfologických charakteristik se nazývá morfologická identifikace. Určení typu patogenu na základě jeho kulturních charakteristik se nazývá kulturní identifikace.
Tyto studie však nestačí ke konečnému závěru o typu izolovaných mikrobů. Proto jsou studovány biochemické vlastnosti bakterií. Jsou poměrně různorodé.
Nejčastěji se studují vlastnosti sacharolytické, proteolytické, peptolytické, hemolytické, tvorba enzymů dekarboxylázy, oxidázy, katalázy, plazmakoagulázy, DNázy, fibrinolysinu, redukce dusičnanů na dusitany a podobně. K tomu existují speciální živná média, která jsou naočkována mikroorganismy (Hiss variegated series, MPB, sražená syrovátka, mléko atd.).
Určení typu patogenu na základě jeho biochemických vlastností se nazývá biochemická identifikace.
PĚSTOVACÍ METODY
A IZOLACE ČISTÉ KULTURY BAKTERIÍ
Pro úspěšnou kultivaci jsou kromě správně vybraných médií a správně nasetých semen zapotřebí optimální podmínky: teplota, vlhkost, provzdušňování (přívod vzduchu). Kultivace anaerobů je obtížnější než u aerobů se používají různé metody k odstranění vzduchu ze živného média.
Izolace jednotlivých typů bakterií (čisté kultury) z testovaného materiálu, který obvykle obsahuje směs různých mikroorganismů, je jednou z fází každé bakteriologické studie. Čistá kultura mikrobů se získává z izolované mikrobiální kolonie.
Při izolaci čisté kultury z krve (hemokultura) se nejprve „pěstuje“ v tekutém médiu: 10-15 ml sterilně odebrané krve se naočkuje do 100-150 ml tekutého média. Poměr naočkované krve k živné půdě 1:10 není náhodný – tím je dosaženo ředění krve (neředěná krev má škodlivý vliv na mikroorganismy).
Fáze izolace čisté kultury bakterií
Fáze I (nativní materiál)
Mikroskopie (přibližná představa mikroflóry).
Výsev na pevné živné půdy (získávání kolonií).
Fáze II (izolované kolonie)
Studium kolonií (kulturní vlastnosti bakterií).
Mikroskopické vyšetření mikrobů v obarveném nátěru
(morfologické vlastnosti bakterií).
Výsev na šikmém živném agaru k izolaci čisté kultury.
Fáze III (čistá kultura)
Stanovení kulturní, morfologické, biochemické
a další vlastnosti pro identifikaci bakteriálních kultur
IDENTIFIKACE BAKTERIÍ
Identifikace izolovaných bakteriálních kultur se provádí studiem morfologie bakterií, jejich kulturních, biochemických a dalších vlastností, které jsou každému druhu vlastní.
Související informace.
č. 1 Sérologické reakce používané pro diagnostiku virové infekce.
Imunitní reakce se využívají v diagnostických a imunologických studiích u nemocných i zdravých lidí. K tomuto účelu využívají sérologické metody, tj. způsoby studia protilátek a antigenů pomocí reakcí antigen-protilátka stanovených v krevním séru a jiných tekutinách, stejně jako v tělesných tkáních.
Detekce protilátek proti patogenním antigenům v krevním séru pacienta umožňuje stanovení diagnózy onemocnění. Sérologické studie se také používají k identifikaci mikrobiálních antigenů, různých biologicky aktivních látek, krevních skupin, tkáňových a nádorových antigenů, imunitních komplexů, buněčných receptorů atd.
Při izolaci mikroba od pacienta je patogen identifikován studiem jeho antigenních vlastností pomocí imunodiagnostických sér, tj. krevních sér hyperimunizovaných zvířat obsahujících specifické protilátky. Jedná se o tzv. sérologickou identifikaci mikroorganismů.
V mikrobiologii a imunologii se široce využívá aglutinace, precipitace, neutralizační reakce, reakce zahrnující komplement, využívající značené protilátky a antigeny (radioimunologické, enzymatické imunostanovení, imunofluorescenční metody). Uvedené reakce se liší registrovaným účinkem a technikou produkce, všechny jsou však založeny na interakční reakci antigenu s protilátkou a slouží k detekci protilátek i antigenů. Imunitní reakce se vyznačují vysokou senzitivitou a specificitou.
Vlastnosti interakce protilátek s antigeny jsou základem diagnostických reakcí v laboratořích. In vitro reakce mezi antigenem a protilátkou sestává ze specifické a nespecifické fáze. Ve specifické fázi dochází k rychlé specifické vazbě aktivního centra protilátky na antigenní determinantu. Poté přichází nespecifická fáze - pomalejší, která se projevuje viditelnými fyzikálními jevy, například tvorbou vloček (aglutinační fenomén) nebo sraženinou ve formě zákalu. Tato fáze vyžaduje přítomnost určitých podmínek (elektrolyty, optimální pH prostředí).
Vazba antigenního determinantu (epitopu) na aktivní centrum Fab fragmentu protilátek je způsobena van der Waalsovými silami, vodíkovými vazbami a hydrofobní interakcí. Síla a množství antigenu vázaného protilátkami závisí na afinitě, aviditě protilátek a jejich valenci.
č. 2 Původci leishmaniózy. Taxonomie. Charakteristika. Mikrobiologická diagnostika. Léčba.
Taxonomie: kmen Sarcomastigophorae, podkmen Mastigophora - bičíkovci, třída Zoomastigophora, řád Kinetoplastida, rod Leishmania.
Pěstování: NNN živné médium obsahující defibrinovaný králičí krevní agar. Leishmania také roste na choriové alantoické membráně kuřecího embrya a v buněčných kulturách.
Epidemiologie: v teplém podnebí. Mechanismus přenosu patogenů je přenosný, prostřednictvím kousnutí přenašečů komárů. Hlavní zdroje patogenů: pro kožní antroponotickou leishmaniózu - lidé; pro kožní zoonotickou leishmaniózu - hlodavci; pro viscerální leishmaniózu - lidé; na mukokutánní leishmaniózu – hlodavce, divoká a domácí zvířata.
Patogeneze a klinika. Existují dva původci kožní leishmaniózy: L. tropica - původce antroponotické leishmaniózy a L. major - původce zoonotické kožní leishmaniózy.
Antroponotická kožní leishmanióza se vyznačuje dlouhou inkubační dobou několika měsíců. V místě kousnutí komárem se objeví tuberkulóza, která se po 3 měsících zvětší a ulceruje. Vředy se nejčastěji nacházejí na obličeji a na horních končetinách, zjizvení do konce roku. Akutnější je zoonotická kožní leishmanióza (časná ulcerující leishmanióza, Pendinského vřed, venkovská forma). Inkubační doba je 2-4 týdny. Močové vředy jsou nejčastěji lokalizovány na dolních končetinách. Mukokutánní leishmanióza je způsobena Leishmania complex L. braziliensis; vznikají granulomatózní a ulcerózní léze kůže nosu, sliznic úst a hrtanu. Antraponotická viscerální leishmanióza je způsobena Leishmania complex L. donovani; U pacientů jsou postižena játra, slezina, lymfatické uzliny, kostní dřeň a trávicí trakt.
Imunita: vytrvalý celoživotní
V nátěrech (z tuberkul, obsahu vředů, punktátů z orgánů), obarvených podle Romanovského-Giemsy, se nacházejí intracelulárně umístěné malé oválné leishmanie (amastigoti). K izolaci čisté kultury patogenu naočkujte na médium NNN: inkubujte 3 týdny. Sérologické metody nejsou dostatečně specifické. Je možné použít RIF, ELISA.
Kožní alergický test na HRT na leishmanin se používá v epidemiologických studiích leishmaniózy.
Léčba: U viscerální leishmaniózy se používají přípravky antimonu a diamidinu (pentamidin). Na kožní leishmaniózu - chinakrin, amfotericin.
Prevence: ničit nemocná zvířata, bojovat proti hlodavcům a komárům. Imunoprofylaxe kožní leishmaniózy se provádí naočkováním živé kultury L. major.
VSTUPENKA #28
č. 1Imunoglobuliny, struktura a funkce.
Povaha imunoglobulinů. Imunitní systém jako odpověď na zavedení antigenu produkuje protilátky – proteiny, které se mohou specificky vázat na antigen, který způsobil jejich tvorbu, a účastnit se tak imunologických reakcí. Protilátky se týkají β-globulinů, tj. nejméně pohyblivé frakce proteinů krevního séra v elektrickém poli. V těle jsou β-globuliny produkovány speciálními buňkami - plazmatickými buňkami. β-globuliny, které nesou funkce protilátek, se nazývají imunoglobuliny a jsou označeny symbolem Ig. Protilátky jsou tedy imunoglobuliny produkované v reakci na zavedení antigenu a schopné specificky interagovat se stejným antigenem.
Funkce. Primární funkcí je interakce jejich aktivních center s jejich komplementárními antigenními determinantami. Sekundární funkcí je jejich schopnost:
Navázat antigen za účelem jeho neutralizace a vyloučení z těla, tj. podílet se na tvorbě ochrany proti antigenu;
Podílet se na rozpoznávání „cizího“ antigenu;
Zajistit spolupráci imunokompetentních buněk (makrofágů, T- a B-lymfocytů);
Účastnit se různých forem imunitní odpovědi (fagocytóza, zabijácká funkce, HNT, HRT, imunologická tolerance, imunologická paměť).
Struktura protilátky. Z hlediska jejich chemického složení jsou imunoglobulinové proteiny klasifikovány jako glykoproteiny, protože se skládají z proteinu a cukrů; sestavené z 18 aminokyselin. Mají druhové rozdíly spojené především se souborem aminokyselin. Jejich molekuly mají válcovitý tvar a jsou viditelné v elektronovém mikroskopu. Až 80 % imunoglobulinů má sedimentační konstantu 7S; odolný vůči slabým kyselinám, zásadám, zahřátí do 60°C. Imunoglobuliny lze z krevního séra izolovat fyzikálními a chemickými metodami (elektroforéza, izoelektrické srážení alkoholem a kyselinami, vysolování, afinitní chromatografie atd.). Tyto metody se používají ve výrobě pro přípravu imunobiologických přípravků.
Imunoglobuliny podle struktury, antigenních a imunobiologických vlastností se dělí do pěti tříd: IgM, IgG, IgA, IgE, IgD. Imunoglobuliny M, G, A mají podtřídy. Například IgG má čtyři podtřídy (IgG, IgG2, IgG3, IgG4). Všechny třídy a podtřídy se liší sekvencí aminokyselin.
Molekuly imunoglobulinů všech pěti tříd se skládají z polypeptidových řetězců: dvou identických těžkých řetězců H a dvou identických lehkých řetězců L, propojených disulfidovými můstky. V souladu s tím každá třída imunoglobulinů, tj. M, G, A, E, D, existuje pět typů těžkých řetězců: ? (mu), ? (gama), ? (alfa), ? (epsilon) a? (delta), lišící se antigenicitou. Světelné řetězy všech pěti tříd jsou běžné a existují ve dvou typech: ? (kapa) a? (lambda); L-řetězce imunoglobulinů různých tříd se mohou kombinovat (rekombinovat) jak s homologními, tak s heterologními H-řetězci. Ve stejné molekule však mohou být pouze identické L-řetězce (a nebo?). H- i L-řetězce mají variabilní - V oblast, ve které sekvence aminokyselin není konstantní, a konstantní - C oblast s konstantní sadou aminokyselin. V lehkých a těžkých řetězcích se rozlišují NH 2 - a COOH-terminální skupiny.
Během zpracování? -globulin s merkaptoethanolem rozkládá disulfidové vazby a molekula imunoglobulinu se rozkládá na samostatné řetězce polypeptidů. Když je imunoglobulin vystaven působení proteolytického enzymu papain, je rozdělen na tři fragmenty: dva nekrystalizující fragmenty obsahující determinantní skupiny pro antigen a nazývané Fab fragmenty I a II a jeden krystalizující Fc fragment. Fragmenty Fabl a FabII mají podobné vlastnosti a složení aminokyselin a liší se od fragmentu Fc; Fragmenty Fab a Fc jsou kompaktní útvary navzájem spojené flexibilními úseky H-řetězce, díky nimž mají molekuly imunoglobulinu flexibilní strukturu.
Jak H-řetězce, tak L-řetězce mají odlišné, lineárně spojené kompaktní oblasti nazývané domény; jsou 4 z nich v H-řetězci a 2 v L-řetězci.
Aktivní centra nebo determinanty, které se tvoří ve V oblastech, zaujímají přibližně 2 % povrchu molekuly imunoglobulinu. Každá molekula obsahuje dva determinanty související s hypervariabilními oblastmi H a L řetězců, tj. každá molekula imunoglobulinu může vázat dvě molekuly antigenu. Proto jsou protilátky bivalentní.
Typickou strukturou molekuly imunoglobulinu je IgG. Zbývající třídy imunoglobulinů se liší od IgG dalšími prvky organizace jejich molekul.
V reakci na zavedení jakéhokoli antigenu mohou být produkovány protilátky všech pěti tříd. Obvykle se nejprve produkuje IgM, pak IgG, zbytek o něco později.
č. 2 Původce chlamydií. Taxonomie. Charakteristika. Mikrobiologická diagnostika. Léčba.
Taxonomie:řád Chlamydiales, čeleď Chlamydaceae, rod Chlamydia. Rod je zastoupen druhy C.trachomatis, C.psittaci, C.pneumoniae.
Nemoci způsobené chlamydiemi se nazývají chlamydie. Nemoci způsobené C. trachomatis a C. pneumoniae jsou antroponózy. Ornitóza způsobená C. psittaci je zoonotická infekce.
Morfologie chlamydií: malé, gramové „-“ bakterie, kulovitého tvaru. Netvoří výtrusy, nejsou tam bičíky ani tobolky. Buněčná stěna: 2vrstvá membrána. Mají glykolipidy. Podle Grama - červená. Hlavní metodou barvení je Romanovsky-Giemsa.
2 formy existence: elementární tělíska (neaktivní infekční částice, mimo buňku); retikulární tělíska (uvnitř buněk, vegetativní forma).
Pěstování: Může se množit pouze v živých buňkách. Ve žloutkovém váčku vyvíjejících se kuřecích embryí, v těle citlivých zvířat a v buněčné kultuře
Enzymová aktivita: malý. Fermentují kyselinu pyrohroznovou a syntetizují lipidy. Nejsou schopny syntetizovat vysokoenergetické sloučeniny.
Antigenní struktura: Antigeny tří typů: rodově specifický termostabilní lipopolysacharid (v buněčné stěně). Detekováno pomocí RSC; druhově specifický antigen proteinové povahy (ve vnější membráně). Detekováno pomocí RIF; variantně specifický antigen proteinové povahy.
Faktory patogenity. Proteiny vnější membrány chlamydií jsou spojeny s jejich adhezivními vlastnostmi. Tyto adheziny se nacházejí pouze v elementárních tělesech. Chlamydie produkují endotoxin. Některé chlamydie mají protein tepelného šoku, který může způsobit autoimunitní reakce.
Odpor. Vysoká na různé faktory prostředí. Odolává nízkým teplotám a vysychání. Citlivý na teplo.
C. trachomatis je původcem onemocnění urogenitálního systému, očí a dýchacích cest člověka.
Trachom je chronické infekční onemocnění charakterizované poškozením spojivky a rohovky očí. Antroponóza. Přenáší se kontaktem a kontaktem v domácnosti.
Patogeneze: postihuje oční sliznici. Proniká do epitelu spojivky a rohovky, kde se množí a ničí buňky. Vzniká folikulární keratokonjunktivitida.
Diagnostika: vyšetření škrábanců ze spojivky. V postižených buňkách odhalí Romanovského-Giemsa barvení fialové cytoplazmatické inkluze umístěné v blízkosti jádra - tělíska Provacek. K detekci specifického chlamydiového antigenu v postižených buňkách se také používá RIF a ELISA. Někdy se uchýlí ke kultivaci trachomových chlamydií na kuřecích embryích nebo buněčné kultuře.
Léčba: antibiotika (tetracyklin) a imunostimulanty (interferon).
Prevence: Nekonkrétní.
Urogenitální chlamydie je pohlavně přenosné onemocnění. Jedná se o akutní/chronické infekční onemocnění, které je charakterizováno primárním poškozením urogenitálního traktu.
K infekci člověka dochází přes sliznice genitálního traktu. Hlavním mechanismem infekce je kontakt, cesta přenosu je sexuální.
Imunita: buněčná, se sérem infikovaných lidí - specifické protilátky. Po nemoci se netvoří.
Diagnostika: U očních onemocnění se používá bakterioskopická metoda - intracelulární inkluze se zjišťují ve seškrabech z epitelu spojivky. K detekci chlamydiového antigenu v postižených buňkách se používá RIF. V případě poškození urogenitálního traktu lze použít biologickou metodu založenou na infekci buněčné kultury testovaným materiálem (epiteliální seškraby z močové trubice, pochvy).
RIF a ELISA mohou detekovat chlamydiové antigeny v testovaném materiálu. Sérologická metoda - pro průkaz IgM proti C. trachomatis v diagnostice pneumonie u novorozenců.
Léčba. antibiotika (azithromycin ze skupiny makrolidů), imunomodulátory, eubiotika.
Prevence. Pouze nespecifické (léčba pacientů), osobní hygiena.
Lymphogranuloma venereum je pohlavně přenosné onemocnění charakterizované poškozením pohlavních orgánů a regionálních lymfatických uzlin. Mechanismus infekce je kontakt, cesta přenosu je sexuální.
Imunita: perzistentní, buněčná a humorální imunita.
Diagnostika: Materiál pro výzkum - hnis, biopsie z postižených lymfatických uzlin, krevní sérum. Metoda bakterioskopická, biologická (kultivace ve žloutkovém váčku kuřecího embrya), sérologická (RSC s párovými séry je pozitivní) a alergologická (intradermální test s alergenem na chlamydie).
Léčba. Antibiotika - makrolidy a tetracykliny.
Prevence: Nespecifické.
C. pneumoniae je původcem respiračních chlamydií, způsobuje akutní a chronickou bronchitidu a zápal plic. Antroponóza. K infekci dochází vzdušnými kapkami. Do plic se dostávají horními cestami dýchacími. Způsobit zánět.
Diagnostika: staging RSC k detekci specifických protilátek (sérologická metoda). Při primární infekci se počítá s průkazem IgM. RIF se také používá k detekci chlamydiového antigenu a PCR.
Léčba: To se provádí pomocí antibiotik (tetracykliny a makrolidy).
Prevence: Nespecifické.
S. psittaci je původcem ornitózy, akutního infekčního onemocnění charakterizovaného poškozením plic, nervového systému a parenchymálních orgánů (játra, slezina) a intoxikací.
Zooantroponóza. Zdrojem nákazy jsou ptáci. Mechanismus infekce je aerogenní, cesta přenosu je vzduchem. Původcem je přes hlen. mušle dýchají. drah, do epitelu průdušek, alveol, množí, záněty.
Diagnostika: Materiál pro výzkum - krev, sputum pacienta, krevní sérum pro sérologický výzkum.
Používá se biologická metoda - kultivace chlamydií ve žloutkovém váčku kuřecího embrya, v buněčné kultuře. Sérologická metoda. RSK, RPGA, ELISA se používají s použitím párových krevních sér pacientů. Intradermální alergický test s ornitinem.
Léčba: antibiotika (tetracykliny, makrolidy).
VSTUPENKA #29
č. 1 Původce záškrtu. Taxonomie a charakteristika. Podmíněně patogenní korynebakterie. Mikrobiologická diagnostika. Detekce anoxické imunity. Specifická prevence a léčba.
Záškrt je akutní infekční onemocnění charakterizované fibrinózním zánětem v hltanu, hrtanu a méně často v jiných orgánech a příznaky intoxikace. Jejím původcem je Corynebacterium diphtheriae.
Taxonomie. Corynebacterium patří do divize Firmicutes, rodu Corynebacterium.
Morfologické a tinktoriální vlastnosti. Původce záškrtu je charakterizován polymorfismem: tenké, mírně zakřivené tyčinky (nejběžnější) a kokoidní a větvené formy. Bakterie jsou často umístěny pod úhlem k sobě navzájem. Netvoří spory, nemají bičíky a mnoho kmenů má mikrokapsli. Charakteristickým znakem je přítomnost volutinových zrn na koncích hole (způsobující kyjovitý tvar). Původce záškrtu se pozitivně barví na Gram.
Kulturní vlastnosti. Fakultativně anaerobní, optimální. teplota. Mikrob roste na speciálních živných půdách, např. na Claubergově médiu (agar s krevním teluritem), na kterém bacil záškrtu vytváří kolonie 3 typů: a) velké, šedé, s nerovnými okraji, radiálními pruhy, připomínajícími sedmikrásky; b) malé, černé, konvexní, s hladkými okraji; c) podobný prvnímu a druhému.
V závislosti na kulturních a enzymatických vlastnostech se rozlišují 3 biologické varianty C.diphtheriae: gravis, mitis a intermedius intermedius.
Aktivita enzymů. Vysoký. Fermentují glukózu a maltózu za vzniku kyseliny, ale nerozkládají sacharózu, laktózu a mannitol. Neprodukují ureázu a netvoří indol. Produkuje enzym cystinázu, který štěpí cystein na H2S. Tvoří katalázu, sukcinátdehydrogenázu.
Antigenní vlastnosti. O-antigeny jsou termostabilní polysacharidy umístěné hluboko v buněčné stěně. K-antigeny jsou povrchové, termolabilní, šedavě specifické. Pomocí sér na K-antigen C.diph. rozděleny na sérovary (58).
Faktory patogenity. Exotoxin, který narušuje syntézu bílkovin, a proto ovlivňuje buňky myokardu, nadledvin, ledvin a nervových ganglií. Schopnost produkovat exotoxin je způsobena přítomností v buňce profága nesoucího tox gen odpovědný za tvorbu toxinu. Agresivní enzymy - hyaluronidáza, neuraminidáza. Mikrokapsle je také faktorem patogenity.
Odpor. Je odolný proti vysychání a nízkým teplotám, takže na předmětech nebo ve vodě vydrží i několik dní.
Epidemiologie. Zdrojem záškrtu jsou nemocní lidé Infekce se vyskytuje častěji prostřednictvím dýchacích cest. Hlavní cesta přenosu je také možná vzdušnou cestou - přes prádlo a nádobí.
Patogeneze. Vstupní branou infekce jsou sliznice hltanu, nosu, dýchacích cest, očí, genitálií a povrchu rány. V místě vstupní brány je pozorován fibrinózní zánět, vytváří se charakteristický film, který se obtížně odděluje od podkladových tkání. Bakterie uvolňují exotoxin, který se dostává do krevního oběhu a způsobuje toxinémii. Toxin ovlivňuje myokard, ledviny, nadledviny a nervový systém.
Klinika. Existují různé lokalizační formy záškrtu: záškrt hltanu, který je pozorován v 85-90% případů, záškrt nosu, hrtanu, očí, vnějších genitálií, kůže, rány. Inkubační doba se pohybuje od 2 do 10 dnů. Onemocnění začíná zvýšením tělesné teploty, bolestí při polykání, výskytem filmu na mandlích a zvětšenými lymfatickými uzlinami. Rozvíjí se otok hrtanu, záškrt, který může vést k asfyxii a smrti. Dalšími závažnými komplikacemi, které mohou způsobit i smrt, jsou toxická myokarditida a paralýza dýchacích svalů.
Imunita. Po onemocnění - přetrvávající, intenzivní antitoxická imunita. Obzvláště důležitá je tvorba protilátek proti fragmentu B. Neutralizují difterický histotoxin a zabraňují jeho připojení k buňce. Antibakteriální imunita – neposílená, šedavě specifická
Mikrobiologická diagnostika. Pomocí tamponu se pacientovi odebere film a hlen z krku a nosu. Pro stanovení předběžné diagnózy je možné použít bakterioskopickou metodu. Hlavní diagnostická metoda je bakteriologická: kultivace na médiu Klauber II (agar s krevním teluritem), na pevném sérovém médiu pro detekci produkce cystinázy, na médiu Hiss, na médiu pro stanovení toxigenity patogenu. Vnitrodruhová identifikace spočívá ve stanovení bio- a sérovaru. Pro urychlenou detekci difterického toxinu se používají: IRHA (nepřímá hemaglutinační reakce) s protilátkou erytrocytární diagnosticum, protilátková neutralizační reakce (přítomnost toxinu se posuzuje podle účinku prevence hemaglutinace); RIA (radioimunitní test) a ELISA (enzymový imunosorbentní test).
Léčba. Hlavní metodou terapie je okamžité podání specifického antitoxického antidifterického tekutého koňského séra. Lidský anti-difterický imunoglobulin pro intravenózní podání.
Přidružené vakcíny: DTP (absorbovaná vakcína proti černému kašli-tetanu), ADS (absorbovaný toxoid záškrtu-tetanu).
č. 2 Třídy imunoglobulinů, jejich charakteristika.
Imunoglobuliny podle struktury, antigenních a imunobiologických vlastností se dělí do pěti tříd: IgM, IgG, IgA, IgE, IgD.
Imunoglobulin třídy G. Izotyp G tvoří většinu Ig v krevním séru. Tvoří 70–80 % všech sérových Ig, přičemž 50 % je obsaženo v tkáňovém moku. Průměrný obsah IgG v krevním séru zdravého dospělého je 12 g/l. Poločas IgG je 21 dní.
IgG je monomer, má 2 centra vázající antigen (může současně vázat 2 molekuly antigenu, jeho valence je tedy 2), molekulovou hmotnost asi 160 kDa a sedimentační konstantu 7S. Existují podtypy Gl, G2, G3 a G4. Syntetizováno zralými B lymfocyty a plazmatickými buňkami. Je dobře detekován v krevním séru na vrcholu primární a sekundární imunitní odpovědi.
Má vysokou afinitu. IgGl a IgG3 vážou komplement, přičemž G3 je aktivnější než Gl. IgG4, stejně jako IgE, má cytofilitu (tropismus nebo afinitu k žírným buňkám a bazofilům) a podílí se na rozvoji alergické reakce I. typu. Při imunodiagnostických reakcích se IgG může projevit jako neúplná protilátka.
Snadno prochází placentární bariérou a poskytuje humorální imunitu novorozenci v prvních 3-4 měsících života. Může se také vylučovat do mukózních sekretů, včetně mléka, difúzí.
IgG zajišťuje neutralizaci, opsonizaci a značení antigenu, spouští cytolýzu zprostředkovanou komplementem a cytotoxicitu zprostředkovanou buňkami závislou na protilátkách.
Imunoglobulin třídy M. Největší molekula ze všech Ig. Jedná se o pentamer, který má 10 antigen-vazebných center, tj. jeho valence je 10. Jeho molekulová hmotnost je asi 900 kDa, jeho sedimentační konstanta je 19S. Existují podtypy Ml a M2. Těžké řetězce molekuly IgM jsou na rozdíl od jiných izotypů sestaveny z 5 domén. Poločas IgM je 5 dní.
Tvoří asi 5-10 % všech sérových Ig. Průměrný obsah IgM v krevním séru zdravého dospělého člověka je asi 1 g/l. Této úrovně je u lidí dosaženo ve věku 2-4 let.
IgM je fylogeneticky nejstarším imunoglobulinem. Syntetizováno prekurzory a zralými B lymfocyty. Tvoří se na začátku primární imunitní odpovědi, a také se jako první začíná syntetizovat v těle novorozence – určuje se již ve 20. týdnu nitroděložního vývoje.
Má vysokou aviditu a je nejúčinnějším aktivátorem komplementu klasickou cestou. Podílí se na tvorbě sérové a sekreční humorální imunity. Jelikož jde o molekulu polymeru obsahující J-řetězec, může tvořit sekreční formu a uvolňovat se do mukózních sekretů, včetně mléka. Většina normálních protilátek a isoaglutininů jsou IgM.
Neprochází placentou. Detekce specifických protilátek izotypu M v krevním séru novorozence svědčí o dřívější intrauterinní infekci nebo defektu placenty.
IgM zajišťuje neutralizaci, opsonizaci a značení antigenu, spouští cytolýzu zprostředkovanou komplementem a buněčně zprostředkovanou cytotoxicitu závislou na protilátkách.
Imunoglobulin třídy A Existuje v sérové a sekreční formě. Asi 60 % všech IgA je obsaženo ve slizničních sekretech.
IgA v séru: Tvoří asi 10-15 % všech sérových Ig. Krevní sérum zdravého dospělého člověka obsahuje asi 2,5 g/l IgA, maxima je dosaženo do 10. roku věku. Poločas IgA je 6 dní.
IgA je monomer, má 2 centra vázající antigen (tj. 2-valentní), molekulovou hmotnost asi 170 kDa a sedimentační konstantu 7S. Existují podtypy A1 a A2. Syntetizováno zralými B lymfocyty a plazmatickými buňkami. Je dobře detekován v krevním séru na vrcholu primární a sekundární imunitní odpovědi.
Má vysokou afinitu. Může to být neúplná protilátka. Neváže komplement. Neprochází placentární bariérou.
IgA zajišťuje neutralizaci, opsonizaci a značení antigenu a spouští cytotoxicitu zprostředkovanou buňkami závislou na protilátkách.
Sekreční IgA: Na rozdíl od séra existuje sekreční sIgA v polymerní formě ve formě di- nebo trimeru (4- nebo 6-valentní) a obsahuje J- a S-peptidy. Molekulová hmotnost 350 kDa a vyšší, sedimentační konstanta 13S a vyšší.
Je syntetizován zralými B-lymfocyty a jejich potomky - plazmatickými buňkami odpovídající specializace pouze uvnitř sliznic a je vylučován do jejich sekretů. Objem produkce může dosáhnout 5 g za den. SlgA pool je považován za nejpočetnější v těle - jeho množství převyšuje celkový obsah IgM a IgG. Nezjištěno v krevním séru.
Sekreční forma IgA je hlavním faktorem specifické humorální lokální imunity sliznic gastrointestinálního traktu, urogenitálního systému a dýchacích cest. Díky S-řetězci je odolný vůči proteázám. slgA neaktivuje komplement, ale účinně se váže na antigeny a neutralizuje je. Zabraňuje adhezi mikrobů na epiteliálních buňkách a generalizaci infekce na sliznicích.
Imunoglobulin třídy E. Také nazývaný reagin. Obsah v krevním séru je extrémně nízký - přibližně 0,00025 g/l. Detekce vyžaduje použití speciálních vysoce citlivých diagnostických metod. Molekulová hmotnost - asi 190 kDa, sedimentační konstanta - asi 8S, monomer. Tvoří asi 0,002 % všech cirkulujících Ig. Této úrovně je dosaženo ve věku 10-15 let.
Je syntetizován zralými B lymfocyty a plazmatickými buňkami především v lymfoidní tkáni bronchopulmonálního stromu a gastrointestinálního traktu.
Neváže komplement. Neprochází placentární bariérou. Má výraznou cytofilitu - tropismus pro žírné buňky a bazofily. Podílí se na vzniku okamžité hypersenzitivity typu – reakce I. typu.
Imunoglobulin třídy D. O Ig tohoto izotypu není mnoho informací. Téměř úplně obsažen v krevním séru v koncentraci asi 0,03 g/l (asi 0,2 % celkového cirkulujícího Ig). IgD má molekulovou hmotnost 160 kDa a sedimentační konstantu 7S, monomer.
Neváže komplement. Neprochází placentární bariérou. Je to receptor pro prekurzory B-lymfocytů.
VSTUPENKA #30
č. 1 Původce amébózy. Taxonomie. Charakteristický. Mikrobiologická diagnostika. Specifická léčba.
Taxonomie: kmen Sarcomastigophorae, podkmen Sarcodina, třída Lobosia, řád Amoebida.
Morfologie: Existují dvě fáze vývoje patogenu: vegetativní a cystická. Vegetativní stadium má několik forem: velké vegetativní (tkáň), malé vegetativní; precystická forma, podobná luminální, tvořící cysty.
Cysta (klidové stadium) má oválný tvar. Zralá cysta obsahuje 4 jádra. Lumenální forma je neaktivní, žije v lumen horní části tlustého střeva jako neškodný komenzál, živí se bakteriemi a detritem.
Velká vegetativní forma vzniká za určitých podmínek z malé vegetativní formy. Je největší, tvoří pseudopodia a má pohyb. Může fagocytovat červené krvinky. Nachází se v čerstvém trusu během amébózy.
Pěstování: na živně bohatých médiích.
Odpor: Mimo tělo vegetativní formy patogenu rychle odumírají (do 30 minut). Cysty jsou perzistentní v prostředí a přetrvávají ve výkalech a vodě. V potravinách, zelenině a ovoci cysty přetrvávají několik dní. Při vaření umírají.
Epidemiologie: Amébiáza je antroponotické onemocnění; zdrojem invaze jsou lidé. Přenosový mechanismus je fekálně-orální. K infekci dochází, když jsou cysty zavedeny prostřednictvím jídla, vody nebo předmětů pro domácnost.
Patogeneze a klinika: Cysty, které se dostanou do střeva, a luminální formy améb, které se z nich pak tvoří, mohou žít v tlustém střevě, aniž by způsobovaly onemocnění. Při poklesu odolnosti organismu améby pronikají střevní stěnou a množí se. Rozvíjí se střevní amebiáza.
Trofozoity z tkání jsou pohyblivé díky tvorbě pseudopodií. Pronikají stěnou tlustého střeva a způsobují nekrózu; schopné fagocytovat červené krvinky; lze nalézt v lidských výkalech. Při nekróze se tvoří vředy. Klinicky se střevní amebiáza projevuje ve formě časté, řídké, krvavé stolice, doprovázené horečkou a dehydratací. Ve stolici se nachází hnis a hlen, někdy s krví.
Améby s krevním řečištěm se mohou dostat do jater, plic a mozku, což vede k rozvoji extraintestinální amébózy.
Imunita: Nestabilní, aktivuje se převážně buněčná složka.
Mikrobiologická diagnostika. Hlavní metodou je mikroskopické vyšetření stolice pacienta a také obsahu abscesů vnitřních orgánů. Nátěry se barví Lugolovým roztokem nebo hematoxylinem. Sérologické testy (RNGA, ELISA, RSK): nejvyšší titr protilátek v krevním séru je detekován při extraintestinální amebiáze.
Léčba: Používá se metronidazol a furamid.
Prevence: identifikace a léčba exkretorů cyst a nosičů améb, provádění obecných hygienických opatření.
č. 2 Interferony. Příroda, způsoby výroby. Aplikace.
Interferony jsou glykoproteiny produkované buňkami v reakci na virovou infekci a další podněty. Blokují reprodukci viru v jiných buňkách a podílejí se na interakci buněk imunitního systému. Existují dvě sérologické skupiny interferonů: typ I - IFN-? a IFN-a; Typ II - IFN-.? Interferony typu I mají antivirové a protinádorové účinky, zatímco interferony typu II regulují specifickou imunitní odpověď a nespecifickou rezistenci.
Interferon (leukocyt) je produkován bílými krvinkami ošetřenými viry a jinými látkami. β-interferon (fibroblast) je produkován fibroblasty ošetřenými viry.
IFN typu I tím, že se naváže na zdravé buňky, je chrání před viry. Antivirový účinek IFN typu I může být také způsoben tím, že je schopen inhibovat buněčnou proliferaci interferencí se syntézou aminokyselin.
IFN-? produkují T lymfocyty a NK. Stimuluje aktivitu T- a B-lymfocytů, monocytů/makrofágů a neutrofilů. Indukuje apoptózu aktivovaných makrofágů, keratinocytů, hepatocytů, buněk kostní dřeně, endoteliálních buněk a potlačuje apoptózu periferních monocytů a neuronů infikovaných herpesem.
Geneticky upravený leukocytární interferon je produkován v prokaryotických systémech (Escherichia coli). Biotechnologie pro výrobu leukocytárního interferonu zahrnuje následující kroky: 1) ošetření leukocytové hmoty induktory interferonu; 2) izolace směsi mRNA z ošetřených buněk; 3) získání celkové komplementární DNA za použití reverzní transkriptázy; 4) vložení cDNA do plazmidu E. coli a jeho klonování; 5) selekce klonů obsahujících interferonové geny; 6) zahrnutí silného promotoru do plazmidu pro úspěšnou transkripci genu; 7) exprese genu interferonu, tzn. syntéza odpovídajícího proteinu; 8) destrukce prokaryotických buněk a purifikace interferonu pomocí afinitní chromatografie.
Interferony aplikovat pro prevenci a léčbu řady virových infekcí. Jejich účinek je dán dávkou léčiva, ale vysoké dávky interferonu mají toxický účinek. Interferony jsou široce používány při chřipce a dalších akutních respiračních onemocněních. Lék je účinný v časných stádiích onemocnění a aplikuje se lokálně. Interferony mají terapeutický účinek proti hepatitidě B, herpesu a také proti maligním novotvarům.
Imunitní reakce používá se v diagnostických a imunologických studiích u nemocných a zdravých lidí. K tomuto účelu využívají sérologické metody , tj. způsoby studia protilátek a antigenů pomocí reakcí antigen-protilátka stanovených v krevním séru a jiných tekutinách, stejně jako v tělesných tkáních.
Detekce v séru Přítomnost protilátek proti antigenům patogenu umožňuje stanovení diagnózy onemocnění. Sérologické studie se také používají k identifikaci mikrobiálních antigenů, různých biologicky aktivních látek, krevních skupin, tkáňových a nádorových antigenů, imunitních komplexů, buněčných receptorů atd.
Když je mikrob izolován Patogen se identifikuje u pacienta studiem jeho antigenních vlastností pomocí imunodiagnostických sér, tj. krevních sér hyperimunizovaných zvířat obsahujících specifické protilátky. Jedná se o tzv sérologická identifikace mikroorganismy.
Široce používán v mikrobiologii a imunologii aglutinační reakce, precipitace, neutralizace, reakce zahrnující komplement, použití značených protilátek a antigenů (radioimunologické, enzymatická imunoanalýza, imunofluorescenční metody). Uvedené reakce se liší registrovaným účinkem a technikou produkce, všechny jsou však založeny na interakční reakci antigenu s protilátkou a slouží k detekci protilátek i antigenů. Imunitní reakce se vyznačují vysokou senzitivitou a specificitou.
Vlastnosti interakce protilátek s antigeny jsou základem diagnostických reakcí v laboratořích. Reakce in vitro mezi antigenem a protilátkou se skládá ze specifické a nespecifické fáze. V specifická fáze dochází k rychlé specifické vazbě aktivního centra protilátky na antigenní determinantu. Pak přijde nespecifická fáze - pomalejší, což se projevuje viditelnými fyzikálními jevy, například tvorbou vloček (aglutinační fenomén) nebo sraženinou ve formě zákalu. Tato fáze vyžaduje přítomnost určitých podmínek (elektrolyty, optimální pH prostředí).
Vazba antigenního determinantu (epitopu) na aktivní centrum Fab fragmentu protilátek je způsobena van der Waalsovými silami, vodíkovými vazbami a hydrofobní interakcí. Síla a množství antigenu vázaného protilátkami závisí na afinitě, aviditě protilátek a jejich valenci.
Imunodeficience, jak primární, tak především sekundární, jsou mezi lidmi rozšířené. Jsou příčinou mnoha onemocnění a patologických stavů, a proto vyžadují prevenci a léčbu pomocí imunotropních léků.
34. Inaktivované (zvláštní) vakcíny. Účtenka. Aplikace. Výhody. Nedostatky.
Inaktivované (usmrcené, korpuskulární nebo molekulární) vakcíny– přípravky, které jako účinnou látku obsahují kultury patogenních virů nebo bakterií usmrcených chemickou nebo fyzikální metodou (buněčné, virionové) nebo komplexy antigenů extrahované z patogenních mikrobů obsahujících ochranné antigeny (subcelulární, subvirionové vakcíny).
K izolaci antigenních komplexů (glykoproteiny, LPS, proteiny) z bakterií a virů se používá kyselina trichloroctová, fenol, enzymy a izoelektrická precipitace.
Získávají se pěstováním patogenních bakterií a virů na umělých živných médiích, jejich inaktivací, izolací antigenních komplexů, jejich čištěním a konstruováním ve formě kapalného nebo lyofilního přípravku.
Výhodou tohoto typu vakcíny je relativní snadnost výroby (odpadá dlouhé studium a izolace kmenů). Mezi nevýhody patří nízká imunogenicita, nutnost trojnásobného použití a vysoká reaktogenita formalizovaných vakcín. Ve srovnání s živými vakcínami také imunita, kterou produkují, nevydrží dlouho.
V současnosti se používají tyto usmrcené vakcíny: tyfus, obohacený o Vi antigen; vakcína proti choleře, vakcína proti černému kašli.
