K přípravě roztoků pufrů se používají činidla chemické kvality. a analytické kvality, speciálně připravené. Příprava činidel se provádí následovně.
Monosubstituovaný fosforečnan draselný, KH2PO4 , molekulová hmotnost 136,09. 100 g drogy se rozpustí zahřátím k varu ve 150 ml vody. Roztok se za horka filtruje. Za stálého míchání se filtrát ochladí na 10 °C. Poté přidejte 150 ml ethylalkoholu. Krystaly uvolněné za stálého míchání filtrátu se odfiltrují za použití sací nálevky a znovu překrystalují za stejných podmínek; krystaly se suší do konstantní hmotnosti při 105…110 ºС. Pokud existuje léčivo s obsahem hlavní látky v rozmezí 99,9...100,0 %, neprovádí se předběžná příprava látky.
Disubstituovaný fosforečnan sodný, Na2HP04.12H20, molekulová hmotnost 358,12. Existují dva způsoby přípravy léku.
a) 150 g drogy se při zahřátí na 100 0 C rozpustí ve 150 ml vody. Roztok se za horka zfiltruje a po ochlazení se odfiltrují vysrážené krystaly. Rekrystalizace se opakuje zahřátím na 100 ºС. Rekrystalizovaná droga se zahřívá v porcelánovém kelímku ve vodní lázni za stálého míchání až do úplného vysušení drogy. Výsledná sůl se suší v exsikátoru nad taveným chloridem vápenatým po dobu 24 hodin. Kontroluje se obsah hlavní látky v rekrystalizovaném přípravku (Na 2 HPO 4 · 2H 2 O). K tomu se asi 0,5000 g léčiva rozpustí v 50 ml vody, přidají se 2...3 ml nasyceného roztoku chloridu sodného a titruje se 0,1N roztokem kyseliny chlorovodíkové za přítomnosti indikátoru methylčerveně. V případě potřeby proveďte úpravy velikosti vzorku. 1 ml přesně 0,1 N roztoku kyseliny chlorovodíkové odpovídá 0,0178 g Na 2 HPO 4 2H 2 O.
b) 75 g léčiva se rozpustí ve 250 ml vody zahřáté na 60 ºС. Roztok se za horka zfiltruje, filtrát se za stálého míchání ochladí na 10 °C. Vysrážené krystaly se odfiltrují pomocí odsávací nálevky a znovu se překrystalují za stejných podmínek. Výsledná sůl se nejprve suší při teplotě nepřesahující 30 ºС po dobu 24 hodin, poté pokračuje v sušení v sušárně při 50 ºС po dobu 3...4 hodin a nakonec při 120±5 ºС do konstantní hmotnosti, čímž se zabrání soli z tání. Po vysušení má sůl složení Na2HP04.
Po přípravě činidel připravte výchozí roztoky monosubstituovaného fosforečnanu draselného a hydrogenfosforečnanu sodného.
Vzorek bezvodého fosforečnanu draselného monosubstituovaného KH2P04 o hmotnosti 9,078 g se rozpustí ve vodě a objem roztoku se upraví na 1 litr. Ke stabilizaci roztoku přidejte 3...4 kapky toluenu.
Vzorek fosforečnanu sodného disubstituovaného Na2HP04.12H20 o hmotnosti 11,876 g se rozpustí ve vodě a objem roztoku se upraví na 1 litr. Ke stabilizaci roztoku přidejte 3...4 kapky toluenu.
Z výchozích roztoků se připraví roztoky fosfátových pufrů s pH od 4,94 do 9,18 podle tabulky A.2.
Tabulka A.2 - Roztok fosfátového pufru s pH 4,94...9,18
| pH | roztok Na 2 HPO 4 12H 2 O, ml | roztok KH2PO4, ml |
| 4,94 | 1,0 | 99,0 |
| 5,29 | 2,5 | 97,5 |
| 5,59 | 5,0 | 95,0 |
| 5,91 | 10,0 | 90,0 |
| 6,24 | 20,0 | 80,0 |
| 6,47 | 30,0 | 70,0 |
| 6,64 | 40,0 | 60,0 |
| 6,81 | 50,0 | 50,0 |
| 6,98 | 60,0 | 40,0 |
| 7,17 | 70,0 | 30,0 |
| 7,38 | 80,0 | 20,0 |
| 7,73 | 90,0 | 10,0 |
| 8,04 | 95,0 | 5,0 |
| 8,34 | 97,5 | 2,5 |
| 8,67 | 99,0 | 1,0 |
| 9,18 | 100,0 | 0,0 |
Datum přidání: 2015-08-06 | Zobrazení: 4058 |
aplikace
Pufr fosforečnan sodný je široce používán, protože je izotonický a netoxický pro buňky. PBS se používá k rozpouštění látek k oplachování nádob obsahujících buňky.
Příprava
Existuje mnoho způsobů přípravy pufru fosforečnanu sodného. Některé přípravky neobsahují draslík, jiné obsahují vápník nebo hořčík.
K přípravě 1 litru jednorázového pufru fosforečnanu sodného použijte:
- 8,00 g NaCl
- 0,20 g KCl
- 1,44 g Na2HP04
- 0,24 g KH2PO4
- rozpuštěné v 800 ml destilované vody
- upravte pH na 7,4 pomocí kyseliny chlorovodíkové nebo hydroxidu sodného
- přidejte destilovanou vodu do 1 litru.
Deset litrů desetinásobného zásobního roztoku PBS lze připravit rozpuštěním 800 g NaCl, 20 g KCl, 144 g Na 2 HPO 4 a 24 g KH 2 PO 4 v osmi litrech destilované vody, čímž se objem zvýší na deset litrů. pH výsledného roztoku bude přibližně 6,8, ale po zředění 1X PBS bude 7,4. Po přípravě roztoku zkontrolujte hodnotu pH pomocí pH metru. V případě potřeby můžete upravit pH pomocí kyseliny chlorovodíkové nebo hydroxidu sodného.
Nejjednodušší způsob přípravy pufru fosforečnanu sodného je použití komerčně dostupných tabletových přípravků. Takové tablety se zředí destilovanou vodou na daný objem a získá se roztok o dané koncentraci.
Pro buněčné kultury by měl být roztok rozdělen na alikvoty a sterilizován autoklávováním (20 minut při 121 °C, kapalný režim). Sterilizace není nutná, záleží na aplikaci. Je možné skladovat pufr fosforečnan sodný při pokojové teplotě, ale pro zamezení růstu bakterií se doporučuje dlouhodobé skladování nesterilního pufru v chladničce. Soli v koncentrovaných zásobních roztocích se mohou při ochlazení vysrážet, proto se před použitím doporučuje zahřát koncentrovaný roztok na pokojovou teplotu a počkat, dokud se sraženina úplně nerozpustí.
Poznámky
viz také
Nadace Wikimedia. 2010.
Fosfátovo-fyziologický promývací pufr s Tween-20 pro imunohistochemii je koncentrát (20x), který se po naředění používá k promývání sklíček reagencií a krátkodobému uchovávání imunohistochemických vzorků mezi postupy. Po naředění má 0,01 M roztok připravený k použití pH 7,4 ± 0,1. Použití tohoto fosfátem pufrovaného fyziologického roztoku umožňuje nejen zajistit kvalitní promytí, ale také zachovat morfologické charakteristiky použitých protilátek a jejich epitopů, což usnadňuje specifickou vazbu nezbytnou pro imunohistochemickou reakci. Přidání Tween-20 do fyziologického roztoku s fosfátovým pufrem podporuje účinnější mytí a zabraňuje nespecifickým skvrnám.
|
|
|
Naše výhody:
V současné době spolupracujeme s předními zahraničními výrobci laboratorních činidel. Našimi klienty jsou jak nevládní, tak státní instituce, včetně lékařských organizací v Moskvě a dalších ruských městech. Pro stálé zákazníky je poskytován systém slev.
2. Fosfátový pufr (0,1 m, pH 5,8-8,0)
|
Na2HP04 0,2 M, ml |
Na2H2P04 0,2 M, ml | ||
3. Tris pufr (0,1 m, pH 7,1-9,2)
24,2 g tris-(hydroxymethyl)aminomethanu se rozpustí v 1litrové odměrné baňce (v 500 ml H20). Pro získání požadované hodnoty pH přidejte objem 1 M HCl uvedený v tabulce a upravte objem destilovanou vodou na 1000 ml.
4. Acetátový pufr (0,2 m, pH 3,6-5,8)
|
Octan sodný 0,2 M, ml |
Kyselina octová 0,2 M, ml |
Octan sodný 0,2 M, ml |
Kyselina octová 0,2 M, ml | ||
5. Glycinový pufr (0,05 m, pH 8,6-10,6)
Smíchejte uvedené objemy glycinu a hydroxidu sodného a objem upravte destilovanou vodou na 200 ml
|
Glycin 0,2 M, ml |
NaOH 0,2 M, ml |
Glycin 0,2 M, ml |
NaOH 0,2 M, ml |
||
3. Příprava některých činidel
Aktivační řešení. Do odměrné baňky o objemu 100 ml dejte 155 mg redukovaného glutathionu a 400 mg krystalického albuminu, rozpusťte je v 50 ml destilované vody a upravte pH na 8,2 pomocí 1M roztoku NaOH. Poté přidejte vodu po značku.
Amoniakální roztok dusičnanu stříbrného. Koncentrovaný roztok amoniaku se přidává do 2-3% roztoku stříbra, dokud se sraženina nerozpustí.
Acetátový tlumivý roztok pH 3,6. Připravíme smícháním 463 ml roztoku A a 37 ml roztoku B, zředíme po značku vodou v odměrné baňce na 1 litr. Roztok A: 11,55 ml ledové kyseliny octové se zředí vodou v 1litrové odměrné baňce. Roztok B: 27,2 g octanu sodného se rozpustí ve vodě v jednolitrové baňce.
Biuretovo činidlo (Benediktovo činidlo). 173 g citranu sodného a 100 g uhličitanu sodného se rozpustí ve 300 ml destilované vody ve vodní lázni. Odděleně se rozpustí 17,3 g síranu měďnatého ve 300 ml vody. Oba roztoky se vypustí a celkový objem se upraví na 1 litr.
Tlumivý roztok. 2,76 g veronalu a 2,06 g medinalu se rozpustí v 1 litru destilované vody. Uchovávejte v chladničce, pokud se objeví sediment, roztok není vhodný k použití.
Suspenze uhlí. 0,25 g aktivního uhlí se umístí do 100 ml odměrné baňky a zředí se acetátovým pufrem pH 3,6. Před použitím důkladně protřepejte.
Redukční činidlo. 1% roztok kyseliny askorbové připravený s 0,016% roztokem síranu měďnatého.
Hemoglobin, 4% roztok v acetátovém pufru (pH 4,0). Nejprve připravte 8% roztok hemoglobinu v 8 mol/l roztoku močoviny, udržujte jej v termostatu při 60˚C po dobu 2 hodin a před použitím jej 2krát zřeďte acetátovým pufrem.
Glycyl-glycin. 0,55 mmol/l, pH – 8,3. 3,63 g glycyl-glycinu se vloží do 50ml odměrné baňky a přidá se voda po značku (pufrový roztok).
Denaturační roztok
Diazoreagens pro stanovení bilirubinu. Připravte dvě řešení. První roztok: 3 g kyseliny sulfanilové se rozpustí v 500 ml destilované vody, přidá se 15 ml koncentrované kyseliny chlorovodíkové (v horké lázni), objem se doplní vodou na 1 litr. Druhý roztok: 0,5% vodný roztok dusitanu sodného. Před použitím smíchejte 5 ml prvního roztoku a 0,25 ml druhého roztoku.
Diacetyl, pracovní roztok. 1 ml diacetylu se zředí destilovanou vodou ve 100 ml odměrné baňce (roztok se uchovává v lednici). Pracovní roztok diacetylu se připraví před použitím přidáním 24 ml destilované vody k 1 ml zásobního roztoku diacetylu.
Difenylaminové činidlo. 1 g difenylaminu se rozpustí ve 100 ml ledové kyseliny octové. K roztoku se přidá 2,75 ml koncentrované kyseliny sírové.
Kalibrační roztok. Zásaditá - 0,75 mmol/l ALA (100 μg/ml) v přepočtu na bázi: 0,00635 g ALA hydrochloridu se rozpustí v acetátovém pufru pH 3,6 v 50 ml odměrné baňce. Uchovávejte v chladničce ne déle než měsíc. Z hlavního roztoku se připraví pracovní kalibrační roztok, 1 µg/ml. Před použitím nařeďte zásobní roztok acetátovým pufrem 100x.
Kalibrační roztok. 22,5 mg dihydroxyacetonu se za zahřívání rozpustí ve 25 ml vody. 1 ml takového roztoku obsahuje 10 µmol dioxyacetonu. Do řady zkumavek (viz práce) se nalije kalibrační roztok dioxyacetonu, doplní se na požadovaný objem a poté se reakce provádí stejným způsobem jako při stanovení enzymové aktivity.
Kalibrační (standardní) roztok železa (30 µmol/l).
Nejprve se připraví Mohrovy soli.
Kofeinové činidlo. 1 g čistého kofeinu, 7,5 g benzoátu sodného, 12,5 g octanu sodného se rozpustí v 90 ml destilované vody, zahřeje se na 50-60 °C, míchá, ochladí a doplní na 100 ml destilovanou vodou.
Molybdenan amonný v kyselině dusičné. 7,5 g molybdenanu amonného se rozpustí ve 100 ml vody a přidá se 100 ml 32% kyseliny dusičné.
Moč na alkaptonurii. Při absenci patologie se do normální moči přidává hydrochinon rychlostí 20 g/l.
Moč s hyperaminoacidurií. Při absenci patologie se glycin přidává do normální moči rychlostí 1,0 g/l.
Moč při mukopolysacharidóze. Při absenci patologie se do normální moči přidává honsurid nebo heparin rychlostí 0,05-0,1 g/l.
Moč s pentosurií. Pokud není patologie, přidává se do moči xylulóza nebo ribóza v množství 1,0 g/l.
Moč s tyrozinózou. Při absenci patologie se tyrosin přidává do normální moči rychlostí 0,4-0,5 g/l.
Moč s fruktosurií. Při absenci patologie se fruktóza přidává do normální moči rychlostí 0,3-0,4 g/l.
Moč s cystinurií. Při absenci patologie se cystin přidává do normální moči rychlostí 0,4-0,5 g/l.
Octan sodný 3-vodný, nasycený roztok. 375 g octanu sodného 3-voda (nebo 226 g bezvodé soli) se rozpustí ve 250 ml teplé vody, ochlazené na teplotu místnosti. Skladujte při pokojové teplotě. Roztok by měl být bezbarvý a průhledný.
Fosforečnan sodný disubstituovaný 0,25 mol/l. Připravte rozpuštěním 9,7 g Na 2 HPO 4 ∙12H 2 O nebo 18 g Na 2 HPO 4 ∙12H 2 O ve vodě v 200 ml baňce. Při přidání 2 ml tohoto roztoku k 1 ml roztoku kyseliny trichloroctové by pH mělo být mezi 5,0-6,0.
Základní kalibrační roztok kreatininu, 10 mmol/L. 113,1 mg kreatininu se upraví na 100 ml roztokem 0,1 mol/l kyseliny chlorovodíkové. Při sestrojování kalibračního grafu se ze zásobního roztoku připraví pracovní roztok zředěním zásobního roztoku vodou 100x 1 ml roztoku obsahuje 0,1 mmol kreatininu. Na základě toho se získá řada zkumavek s vhodnými koncentracemi kreatinu.
Oxidační směs pro stanovení thiaminu. K 8 ml 1% hexakyanoželezitanu draselného (III) přidejte 20 ml 30% roztoku NaOH a důkladně promíchejte. Před použitím připravte.
Orcinové činidlo. K 1 g orcinu přidejte 500 ml 30% kyseliny chlorovodíkové (hustota 1,15 g/cm3). Míchejte do rozpuštění a přidejte 4-5 ml 10% roztoku chloridu železitého FeCl 3. Činidlo je uloženo v těsně uzavřené tmavé lahvičce.
základní kalibrační roztok p-nitroanilinu. 0,0829 g p-nitroanilinu se vloží do 100 ml odměrné baňky, zředí se po značku vodou a rozpustí se.
Srážecí roztok. 561 g síranu amonného se rozpustí v 1 litru destilované vody a po 24 hodinách se zfiltruje.
Základní fosfátový tlumivý roztok a jeho pracovní roztoky č. 1-4. V odměrné baňce na 500 ml rozpustíme 33,5 g NaOH ve 400 ml vody a přidáme 226,8 g KH 2 PO 4, protřepeme do úplného rozpuštění, ochladíme a doplníme vodou po značku. Pro přípravu pracovních roztoků bazického fosfátového pufru se do 100 ml odměrných baněk odměřují následující objemy bazického fosfátového pufru (v ml): č. 1 – 92,51; č. 2 – 74,91; č. 3 – 59,18 a č. 4 – 48,68, načež se jejich obsah donese na značku vodou.
Kyselina pikrová, nasycený roztok. Komerční kyselina pikrová obsahuje 15-20 % vlhkosti, nesušte kyselinu. Explozivní! Za zahřívání v horké lázni rozpusťte 2 g kyseliny pikrové ve 100 ml vody. Poté se roztok nechá stát 24 hodin za občasného míchání. Roztok se poté filtruje. Roztok je stabilní a skladuje se v nádobách z tmavého skla.
Pyrofosfátový pufr 0,05 M pH 8,2. Do odměrné baňky o objemu 200 ml se převede 4,46 g pyrofosforečnanu sodného, rozpustí se v přibližně 100 ml vody, pH se upraví na 8,2 roztokem 0,1 M HCl a doplní se destilovanou vodou po značku.
Pyrofosfátový pufr 0,1 M pH 8,5. Do odměrné baňky o objemu 100 ml přeneste 4,46 g pyrofosforečnanu sodného, rozpusťte v 50 ml vody, upravte pH na 8,5 roztokem 0,1 M HCl a přidejte destilovanou vodu po značku.
Pracovní činidlo. Připraví se v den stanovení smícháním 30 dílů 0,3 N hydroxidu sodného. 2 díly 0,5% roztoku fenolftaleinu a 1 díl 0,12% roztoku síranu měďnatého.
Roztok acetonkyanohydrinu. Rozpusťte 1 ampuli acetonkyanohydrinu (0,5 ml - 0,47 g ze soupravy pro stanovení hemoglobinu v krvi) v 1 litru destilované vody.
Roztok feracetonkyanohydrinu. V 1 litru destilované vody rozpusťte 200 mg sulfidu draselného a 1 ampuli (0,5 ml - 0,47 g) acetonkyanohydrinu: je možné použít ze sady činidel pro přípravu transformačního roztoku pro stanovení krevního hemoglobinu. Při skladování v nádobách z tmavého skla při pokojové teplotě je stabilní několik měsíců.
Roztok glukoxidázy. Obsahuje cca 300 jednotek. v 1 mg. Připravíme rozpuštěním příslušného množství suché drogy v 10 ml vody.
Roztok sulfonovaného batho-fenantrolinu. Ve zkumavce se ke 100 mg batho-fenantrolinu přidá 0,5 ml kyseliny chlorsulfonové, zahřívá se 30 s ve vroucí vodní lázni, ochladí se a pomalu se přidá 10 ml dvakrát destilované vody, znovu se zahřívá ve vodní lázni 5 minut. Směs se přenese do 200 ml baňky, přidá se 100 ml vody, pH roztoku se upraví na 4-5 N NaOH a přidá se voda na objem 200 ml.
Roztok jódu v jodidu draselném (Lugolův roztok). 20 g jodidu draselného a 10 g jodu se rozpustí ve 100 ml destilované vody. Před použitím se roztok 5krát zředí.
roztok p-nitrosodimethylanilinu (NDMA).. Komerčně dostupný přípravek NDMA se rekrystalizuje z ethyletheru. Pro měření alkoholdehydrogenázy se 1 mg NDMA rozpustí ve 100 ml 0,1 M pyrofosfátového pufru (pH 8,5). Výsledný roztok se zfiltruje přes papírový filtr a filtrát se zředí 2krát tímto pufrem. Skladujte při teplotě 4˚C po dobu dvou měsíců.
Ilkovo činidlo. K 5 objemovým dílům anhydridu kyseliny octové přidejte 1 díl ledové kyseliny octové, poté postupně přilévejte 1 díl koncentrované kyseliny sírové. Udržujte činidlo v chladu!
Millonovo činidlo. (Vaření pod tlakem! ) 40 g rtuti se rozpustí v 57 ml koncentrované kyseliny dusičné nejprve za studena a poté zahřeje ve vodní lázni. Výsledný roztok se zředí 2 objemy vody, nechá se usadit a vypustí se ze sedimentu. Uchovávejte v tmavé skleněné lahvičce.
Činidlo molybdenan amonný. 2,5 g molybdenanu amonného se rozpustí v 60 ml destilované vody a zfiltruje. Roztok se přidá do 100 ml baňky. V jiné baňce se přidá 7,5 ml koncentrované kyseliny sírové do 25 ml destilované vody. Druhý roztok se nalije do prvního, ochladí a upraví po značku destilovanou vodou. Řešení je vhodné na měsíc.
Činidlo "NADI". 1% roztok dimethyl-p-fenylendiaminu se smíchá se stejným objemem 1% roztoku a-naftolu v alkoholu a 1,5% roztokem uhličitanu sodného. Roztok je tmavě hnědý a neměl by mít růžový odstín. Připravte se 1 hodinu před lekcí.
Naše činidlo. Do 100ml baňky se přidá 15,4 g octanu amonného, 0,3 g ledové kyseliny octové a 0,2 g acetylacetonu, rozpustí se v destilované vodě a doplní se po značku.
Nesslerovo činidlo. V odměrné baňce na 500 ml se smíchá 150 g jodidu draselného, 110 g jódu, 100 ml destilované vody a asi 140–150 g kovové rtuti a 15 minut se intenzivně protřepává. V tomto případě se roztok samovolně zahřívá a barva způsobená rozpuštěným jódem postupně bledne. Poté se směs začne chladit pod tekoucí vodou, dokud nezůstane zřetelná červená barva, poté se obsah protřepává, dokud se červená barva nezbarví do zelena. Po dekantaci se sraženina rtuti důkladně promyje vodou. Smíchejte roztok a promývací vody, zřeďte je vodou na 2 litry. 75 ml výsledného roztoku se odebere do 0,5litrové odměrné baňky obsahující 75 ml vody a 350 ml 10% roztoku hydroxidu sodného a zředí se vodou po značku.
Fehlingovo činidlo. Připravte dva roztoky samostatně. Roztok 1: 200 g Rochelleovy soli a 150 g NaOH rozpustíme v 1litrové odměrné baňce a zředíme po značku vodou. Roztok 2: v odměrné baňce o objemu 1 litr rozpusťte 40 g síranu měďnatého ve vodě a doplňte po značku vodou. Před použitím smíchejte stejné objemy těchto roztoků.
Folinovo činidlo. V jednolitrové baňce se rozpustí 1 g wolframanu sodného a 20 g kyseliny fosfomolybdenové v 750 ml vody. Baňku uzavřete zpětným uzávěrem a po zapnutí průtoku vody v chladničce vařte obsah po dobu 10 hodin; poté se ochladí, nalije do odměrné baňky a vodný objem činidla se upraví na 1 litr.
Ehrlichovo činidlo. 0,7 g p-dimethylaminobenzaldehydu se rozpustí ve 150 ml koncentrované kyseliny chlorovodíkové, přidá se do 100 ml vody a promíchá se. Roztok by měl být bezbarvý nebo slabě žlutý. Skladujte v nádobách z tmavého skla. Činidlo je stabilní.
Ehrlichovo činidlo. 1 g p-dimethylaminobenzaldehydu se rozpustí v 50 ml odměrné baňce ve 35 ml ledové kyseliny octové, přidá se 8 ml 57% kyseliny chloristé a doplní se po značku ledovou kyselinou octovou. Uchovávejte v tmavé skleněné nádobě v chladničce ne déle než týden.
Alkoholový roztok thymolu (10%). 10 g přečištěného thymolu se rozpustí ve 100 ml 96˚ ethylalkoholu. Příprava purifikovaného thymolu se provádí následovně. 100 g thymolu se rozpustí ve 100 ml 96˚ ethylalkoholu a zfiltruje. K filtrátu přidejte 1 litr studené destilované vody, důkladně protřepejte a nechte 20 minut odstát. Filtr a krystaly zbývající na filtru se dvakrát promyjí studenou destilovanou vodou. Sušte nejprve na filtračním papíru, poté 2–3 dny v exsikátoru nad bezvodým chloridem vápenatým do konstantní hmotnosti.
Standartní řešení. Příprava standardního roztoku se provádí smícháním dvou roztoků: 1) 0,0962 N roztok chloridu barnatého: 1,175 g krystalického BaCl 2 ∙2H 2 O se rozpustí ve 100 ml vody v odměrné baňce. 2) 0,2 N roztok kyseliny sírové. Dále se získá suspenze síranu barnatého: 3 ml 0,0962 N roztoku chloridu barnatého se nalije do 100 ml odměrné baňky a objem se upraví 0,2 N roztokem kyseliny sírové při teplotě +10 °C ( při této teplotě poskytují velikosti částic vysráženého síranu barnatého relativně stabilní výsledek).
Roztok substrátového pufru: do zkumavky nalijte 10 ml vody a přidejte 0,028 g L-glutamyl-p-nitroanilinu a 0,082 g chloridu sodného a bez přerušení míchání rozpusťte obsah zkumavky ve vroucí vodní lázni po dobu 60 sekund . Poté se roztok ochladí na 37 °C a přidá se 2,5 ml tlumivého roztoku. Během provozu je připravený substrátový roztok skladován ve vodní lázni při 37˚C. Nepoužitý roztok substrátu lze skladovat v chladničce až týden. Substrát je špatně rozpustný a při pokojové teplotě se vysráží. Před použitím se proto vykrystalizovaný substrát rozpustí zahřátím ve vroucí vodní lázni. Zahřívání a rozpouštění substrátu lze opakovat nejvýše dvakrát.
Substrátový roztok pro stanovení ALT (roztok č. 1). Na analytických vahách se odváží vzorky 29,2 mg kyseliny α-ketoglutarové a 1,78 g alaninu (0,89 g α-alaninu) a rozpustí se v 1M roztoku hydroxidu sodného, dokud se sraženina úplně nerozpustí (pH 7,4). Roztok se nalije do 100 ml baňky a objem se upraví po značku 0,1 M fosfátovým pufrem (pH 7,4). Přidejte 1 kapku chloroformu. Roztok se skladuje zmrazený v lednici.
Substrátový roztok pro stanovení AST (roztok č. 2). Na analytických vahách byly zváženy vzorky 29,2 mg kyseliny a-ketoglutarové a 2,66 g kyseliny a-asparagové (1,33 g kyseliny a-asparagové). Dále se roztok připraví stejným způsobem jako roztok č. 1.
Substrátový roztok pro stanovení glukózofosfátizomerázy. Připraví se roztok medinal-acetátového pufru s pH 7,4 (9,714 g octanu sodného a 14,714 g medinalu se rozpustí ve vodě a objem se upraví na 500 ml). Smíchejte 8,33 ml 0,03 M roztoku disodné soli glukóza-6-fosfátu s 25 ml medinal acetátového pufru; ke směsi se přidá 25 ml 0,1 M roztoku kyseliny chlorovodíkové a zředí se vodou na 100 ml. Uchovávejte v chladu.
Substrátový roztok pro stanovení laktátdehydrogenázy. Smíchejte 1 ml 1 M roztoku laktátu sodného, 9 M roztoku NaCl, 0,05 M Cl 2, roztoku NAD o koncentraci 10 g/l. K obsahu přidejte 2,5 ml 0,5 M roztoku fosfátového pufru (pH 7,4) a 1 g/l roztoku nitrotetrazoliové modři. Před použitím do směsi přidejte 0,25 ml roztoku metasulfátu fenanzinu o koncentraci 1 g/l.
Substrátový roztok pro stanovení fruktózabisfosfátaldolázy. 270 mg barnaté soli bisfosfátu fruktózy se rozpustí ve 3,5 ml 1M roztoku kyseliny chlorovodíkové. Přidá se 1 ml 14% roztoku síranu sodného a výsledná sraženina se odstraní centrifugací. Přidejte 1 kapku síranu sodného do supernatantu. Vznik zákalu ukazuje na nedostatečně úplné vysrážení iontů barya. V tomto případě přidejte více síranu sodného a znovu odstřeďte. Centrifugát se upraví 3% roztokem hydroxidu sodného na pH 7,4-7,6, přenese do 25ml baňky a objem se upraví po značku. Výsledný roztok se smíchá s 25 ml 0,56 M roztoku hydrazinchloridu, 25 ml 0,002 M roztoku kyseliny monojodoctové, 100 ml 0,5% roztoku uhličitanu sodného a 25 ml destilované vody. Uchovávejte v lednici.
Thymol-veronalový pufr. Ve 100 ml odměrné baňce smícháme 80 ml tlumivého roztoku a 1 ml 10% lihového roztoku thymolu, protřepeme a přidáme tlumivý roztok po značku. Hodnota pH by měla být 7,55.
o-toluidinové činidlo. 0,15 g thiomočoviny se rozpustí v 94 ml ledové kyseliny octové a smíchá se s 6 ml destilovaného O-toluidinu. Uchovávejte v tmavé lahvičce.
Fenol, nasycený vodou. Ke 100 g destilovaného fenolu se přidá 35 ml vody a promíchá se a směs se mírně zahřívá, aby se urychlilo rozpouštění fenolu.
Fenolftalen, pracovní roztok. Připraví se rozpuštěním 75 mg látky v 15 ml 0,1 N roztoku hydroxidu sodného, roztok by měl být bezbarvý nebo slabě narůžovělý, roztoky nejsou vhodné. Pro zvýšení stability činidla se do něj přidávají 3 mg trilonu, který vazbou solí těžkých kovů zabraňuje autooxidaci fenolftaleinu vzdušným kyslíkem.
Fibrin. Fibrin z hovězí krve se několik dní vymývá z krevních barviv v tekoucí vodě, dokud se nezíská bílá sraženina. Voda se vytlačí a fibrin naplněný glycerinem se uloží do těsně uzavřené nádoby. Před použitím se fibrin vymyje z glycerinu.
Fosfor-vanilinové činidlo. 4 objemové díly koncentrované kyseliny ortofosforečné se smíchají s 1 dílem 0,6% vodného roztoku vanilinu. Činidlo se skladuje v nádobě z tmavého skla při pokojové teplotě.
Fruktóza 1,6-bisfosfát, sodná sůl. 2,0 ml 10% roztoku sodné soli fruktóza-1,6-bisfosfátu se zředí v 25ml baňce vodou po značku. Stabilní při skladování v lednici.
Barevné činidlo pro močovinu. Tableta z močovinové testovací soupravy obsahující diacetylmonooxim a thiosemikarbazid se za zahřívání rozpustí v 50ml baňce. Roztok je stabilní po dobu tří týdnů. Před použitím smíchejte stejné objemy připraveného roztoku a 9,6% roztoku kyseliny sírové.
Alkalický roztok β-glycerofosfátu. Do odměrné baňky o objemu 100 ml přidejte 1 g β-glycerofosfátu sodného a 0,85 g medinalu, přidejte asi 30 ml destilované vody, rozpusťte a doplňte vodou po značku. Do další odměrné baňky na 100 ml přidejte 50 ml připraveného roztoku β-glycerofosfátu, 2,8 ml 0,1 M roztoku hydroxidu sodného a doplňte destilovanou vodou po značku (pH roztoku 8,6). Na kapalinu se navrství přibližně 3 ml toluenu. Roztok uchovávejte v chladničce ne déle než 10 dní.
Fosfátem pufrovaný fyziologický roztok: 1 l 10X
Popis
PBS: 1 l 10X (fosfátem pufrovaný fyziologický roztok) je koncentrovaný roztok pufru připravený k naředění na pracovní roztok 1X PBS běžně používaný v biologickém výzkumu. PBS pufr je ideální pro udržení konstantního pH, a protože je izotonický a netoxický pro buňky, může být použit v široké řadě biologických aplikací. PBS se často používá jako promývací a ředicí pufr a také se používá k získání referenčního spektra při měření adsorpce proteinů.
Používání
Před použitím nařeďte na 1X roztok a přefiltrujte přes 0,22 µm filtr do sterilní baňky. Vyrobí 10 1 1X PBS pufru s koncentrací fosfátového pufru 0,01 M, 0,027 M chlorid draselný, 0,137 M chlorid sodný a 1,76 mM fosforečnan draselný. pH roztoku PBS bude přibližně 7,4.
. Pokud se v aplikacích buněčných kultur používá pufr, může být nutná sterilizace roztoku. Předem zředěný pufr lze rozdělit na alikvoty a sterilizovat autoklávováním (20 minut, 121 °C, kapalinový cyklus).
. PBS lze skladovat při pokojové teplotě, ale nesterilní roztoky mohou vyžadovat chlazení, aby se zabránilo růstu bakterií v průběhu času. Koncentrované zásobní roztoky se mohou po ochlazení vysrážet a měly by se před použitím uchovávat při pokojové teplotě, dokud se sraženina úplně nerozpustí.
Technické informace
| pH: | Po zředění na 1X koncentraci bude pH ~7,4. |
| Úložný prostor: | Skladujte při pokojové teplotě |
| Synonymum: | Fosfátem pufrovaný fyziologický roztok |
| Aplikace: | Tlumivý roztok běžně používaný v biologickém výzkumu |
Informace pro objednání
| Oblast použití: | Výroba: | Santa Cruz |
| Metoda: | ||
| Hlasitost: | 1 l | |
| Kočka. číslo: | sc-24946 | |
| Cena (s DPH 20%): | NA ZNAMENÍ | Přidat do košíku |
 Název: PBS pufr (fyziologický roztok pufrovaný fosfátem), 10X, 1 l / fyziologický roztok pufrovaný fosfátem: 1 1 10X. Poznámka: Druhová specifičnost: . Popis: . Aplikace: . Dodávka na modrém ledu, skladování při pokojové teplotě, | ||
