Čo je lepšie kauterizovať alebo odstrániť hemaglutináciu. Salmonella a týfus, paratýfus. Charakteristika vírusov chrípky. epidemiológia a diagnostika chrípky. použitie RTG na sérotypizáciu vírusov chrípky. lieky na špecifickú prevenciu a liečbu

Správne vykonaný krvný test pomáha odhaliť pôvodcov rôznych komplexných ochorení v tele v počiatočných štádiách ich vývoja a niekedy ešte predtým, ako sa objavia klinické príznaky ochorenia. Veľmi často lekári predpisujú pacientom test aglutinačnej reakcie. Ďalej zistíme, čo to je - krvný test RPGA, kedy sa používa a čo nám môže povedať?

Princíp fungovania

Nepriama hemaglutinačná reakcia (tiež nazývaná pasívna hemaglutinačná reakcia, tiež známa ako RPHA, RNGA) nastáva, keď sú červené krvinky, ktoré adsorbovali antigén, vystavené imunitnému séru, ktoré zodpovedá danému antigénu.

Štúdie preukázali, že táto metóda je výrazne lepšia ako iné sérologické testy, pokiaľ ide o špecifickosť a citlivosť. Preto sa často používa na detekciu chorôb spôsobených baktériami alebo rickettsiou. Antigény na takúto analýzu môžu byť bakteriálne extrakty, purifikované antigény rôznych mikróbov a zložky bakteriálnych vakcín.

Po vstupe patogénnej baktérie do ľudského tela začne produkovať špecifické a nešpecifické protilátky, čím sa vytvorí špecifická imunitná odpoveď. V prípade syfilisu, ktorého pôvodcom je Treponema pallidum, ktorý patrí medzi gramnegatívne spirochéty, sa v ľudskej krvi tvoria netreponémové alebo treponémové protilátky. Na ich identifikácii sú založené laboratórne diagnostické testy, ktoré by mali potvrdiť alebo vyvrátiť prítomnosť pôvodcu vírusu v organizme.

Pri RPHA sa červené krvinky, ktorých povrch má adsorbované antigény treponema pallidum, po pridaní séra s protilátkami proti treponému z materiálu od človeka infikovaného syfilisom k sebe lepia, čiže aglutinujú.

Spoľahlivosť štúdie

Je dôležité mať na pamäti, že protilátky proti svetlej spirochéte sa v tele infikovaných ľudí začínajú objavovať 2-4 týždne po infekcii a v niektorých prípadoch sa toto obdobie môže predĺžiť až na 6 týždňov.

Z tohto dôvodu je citlivosť analýzy RPHA v primárnom štádiu ochorenia asi 86 %, čo je výrazne horšie ako presnosť diagnostiky pacientov v nasledujúcich dvoch štádiách. Citlivosť analýzy u takýchto pacientov, ako aj u nosičov latentného syfilisu, dosahuje 99-100%.

Pasívna hemaglutinačná reakcia má však veľmi vysokú špecificitu, ktorá dosahuje úroveň 96 – 100 %.

To umožňuje použiť toto vyšetrenie na potvrdenie diagnózy v prípade pozitívnej reakcie z predbežnej netreponémovej štúdie, napríklad mikroprecipitačnej reakcie rakoviny močového mechúra.

Vzhľadom na to, že citlivosť treponemálnych testov, vrátane RPGA, výrazne prevyšuje citlivosť netreponemálnych metód, takéto vyšetrenia sa čoraz viac predpisujú pri vykonávaní skríningových testov na syfilis. Ak sa však získa pozitívna reakcia zo skríningového testu, na objasnenie diagnózy je potrebná ďalšia špecifická (treponémová) analýza, nie však RPGA.

Prepis analýzy

Keď sa sérum s protilátkami proti treponému z materiálu osoby infikovanej syfilisom pridá do činidla, s ktorým sa štúdia uskutočňuje, červené krvinky aglutinujú, v dôsledku čoho sa vyzrážajú.

Počet lepkavých červených krviniek je ovplyvnený hladinou protilátok v sére. Preto pasívna hemaglutinácia ukazuje nielen prítomnosť protilátok, ale umožňuje aj určiť ich množstvo. Výsledok štúdie je prezentovaný úrovňou titra protilátok.

Pozitívna reakcia naznačuje prítomnosť patogénu v tele pacienta. Počas diagnostického procesu sa však môžu vyskytnúť falošne pozitívne reakcie, ktorých počet štatisticky nepresahuje úroveň 0,05-2,5 % z celkového počtu štúdií.

Pozitívna reakcia RPHA u ľudí, ktorí nie sú infikovaní syfilisom, sa môže vyskytnúť, ak:

systémové ochorenia spojivového tkaniva,
v krvných protilátkach pacienta proti patogénom podobným Treponema pallidum,
fyziologické patológie, ako je infarkt myokardu,
hepatitída B alebo C,
onkologické ochorenia,
týfus, leptospiróza, tuberkulóza,
HIV infekcie,
borelióza kliešťovej etiológie,
rozsiahle zranenia alebo zlomeniny,
tehotenstvo,
v prípade injekcie omamných látok.

Vo väčšine prípadov sú falošne pozitívne reakcie sprevádzané nízkym titrom. Vysoké titre sú typické pre sekundárne štádium ochorenia a predtým latentný syfilis. Môžu sa však objaviť aj pri falošne pozitívnej reakcii u pacientov s malígnymi novotvarmi.

U ľudí, ktorí mali syfilis aspoň raz, zostáva RPHA reakcia pozitívna po zvyšok ich života.

Zriedkavými výnimkami môžu byť situácie, keď bola choroba identifikovaná v počiatočnom štádiu vývoja, po ktorej sa uskutočnila intenzívna a účinná liečba. Analýza RPGA sa preto nemôže použiť na posúdenie dynamiky zotavenia alebo na porovnávaciu diagnostiku skorých alebo neskorých štádií ochorenia.

Ak sa získa pozitívna reakcia, je potrebné vyšetriť rodinných príslušníkov chorého a ľudí, ktorí s ním mali sexuálny kontakt.

Negatívnu reakciu možno dosiahnuť v nasledujúcich prípadoch:

osoba nemá syfilis,
krv bola odobratá nesprávne na vyšetrenie,
Od nákazy prešli 2-4 týždne a tvorba protilátok ešte nezačala.

V každom prípade musí byť výsledok štúdie hodnotený v kombinácii s ďalšími laboratórnymi a anamnestickými ukazovateľmi.

Pre koho je analýza určená?

Lekár môže odporučiť pacientov darovať krv na RPHA v nasledujúcich prípadoch:

v prítomnosti klinických prejavov syfilisu: ulcerózne vyrážky, zväčšené lymfatické uzliny, difúzna alopécia a iné,
ak máte podozrenie na možnú infekciu v prípade kontaktu s už chorými ľuďmi,
darcovia, ktorí chcú darovať krv,
osoby, ktoré sa každoročne podrobujú preventívnym prehliadkam alebo vystavujú zdravotné potvrdenia,
pacienti s pozitívnym skríningovým testom,
pred hospitalizáciou v lôžkovej nemocnici,
pri predoperačnom vyšetrení,
identifikovať patogény salmonelózy, záškrtu, dyzentérie metódou RPGA s príslušným diagnostikom.

Postup pri vykonávaní štúdie

Vzorka venóznej krvi, ktorú daruje pacient, sa odošle na testovanie. Aby nedošlo k chybnému záveru, pacient by mal byť zodpovedný za prípravu analýzy. Aby boli výsledky testu spoľahlivé, mali by ste dodržiavať nasledujúce odporúčania:

Test sa má vykonať iba na prázdny žalúdok.
V deň rozboru môžete piť neperlivú minerálnu vodu v minimálnych množstvách.
Pred analýzou by ste nemali fajčiť aspoň 30 minút, ale je lepšie túto dobu predĺžiť na niekoľko hodín.
Platí priamy zákaz požívania alkoholických nápojov.
Pacienti, ktorí potrebujú pravidelne užívať akékoľvek lieky, musia informovať lekára, ktorý ich posiela na vyšetrenie.
Ak sa necítite dobre alebo sa necítite dobre, musíte to oznámiť sestre, ktorá krv odoberá, alebo lekárovi v ambulancii, kde potrebujete urobiť vyšetrenie.

Buďte zodpovední nielen za otázku, kde sa testovať, ale aj za prípravu na skúšku.

Diagnóza iných infekčných chorôb

Nemali by sme si myslieť, že štúdia, ako je RPGA, sa môže uskutočniť len na identifikáciu pôvodcu syfilisu v tele.

Rozbor salmonelou diagnosticum umožňuje zistiť prítomnosť infekcie v tráviacom systéme - salmonely. Od štvrtého dňa po infekcii telo produkuje protilátky proti antigénom Salmonella, ktoré metóda RPGA pomáha identifikovať. Negatívny výsledok indikuje neprítomnosť infekcie a pozitívny titer, zvyšujúci sa z 1:200 na 1:800 v akútnej fáze, bude indikovať jej prítomnosť.

Spôsob vykonávania RPGA s markerom záškrtu umožňuje diagnostikovať záškrt a posúdiť imunitu po očkovaní. Protilátky sa začnú produkovať imunitným systémom hneď na druhý deň po infekcii a zostávajú v tele niekoľko týždňov. Citlivosť tejto analýzy je lepšia ako bakteriologická výskumná metóda. Titer 1:80 potvrdzuje prítomnosť záškrtu v tele.

Marker úplavice pre RPHA najpresnejšie deteguje shigelózu (bakteriálnu úplavicu), a to aj v porovnaní s laboratórnou diagnostickou metódou prostredníctvom bakteriálnej kultivácie. Ak pacient nedostane kvalitnú liečbu, ochorenie prerastie do chronického procesu, pri ktorom často dochádza k relapsom. Analýza umožňuje diagnostikovať akútnu a chronickú fázu hnačky, identifikovať pôvodcu dyzentérie, rozlíšiť bakteriálnu šigelózu od kolorektálneho karcinómu, endokrinných porúch či zápalu hrubého čreva. Negatívna reakcia indikuje neprítomnosť bacila a jeho prítomnosť je potvrdená titrom 1:80 pre deti alebo 1:320 pre dospelých.

Vykonanie testu s markerom osýpok vám umožňuje určiť ochorenie osýpok. Takéto vyšetrenie sa môže stať alternatívou k RTGA analýze, ktorá sa často vykonáva na diagnostiku osýpok.

Takže krvný test RPGA - čo to je? Ak to zhrnieme, môžeme s istotou povedať, že ide o modernú, vysoko citlivú a spoľahlivú metódu diagnostiky rôznych ochorení bakteriologickej etiológie.

V kontakte s

hemaglutinačná inhibičná reakcia (HAI)

RHA je založená na schopnosti červených krviniek spájať sa, keď sú na ne adsorbované určité antigény. Ako testovací materiál na hemaglutináciu sa používa alantoická a plodová voda, suspenzia chorioalantoických membrán kuracích embryí, suspenzie a extrakty z kultúr alebo orgánov zvierat infikovaných vírusmi a natívny infekčný materiál. RGA nie je sérologický, pretože sa vyskytuje bez účasti imunitného séra a používa sa na výber pracovného riedenia antigénu na vykonanie RGA alebo prítomnosti antigénu (vírusu) v testovanom materiáli (napríklad pri chrípke). Reakcia využíva červené krvinky zvierat, vtákov a ľudí krvnej skupiny I (0).

Na nastavenie približného RGA sa na podložné sklíčko nanesie kvapka 5 % suspenzie červených krviniek a kvapka testovaného materiálu a dôkladne sa premieša. Ak je výsledok pozitívny, po 1-2 minútach sa makroskopicky pozoruje výskyt flokulentnej aglutinácie erytrocytov.

Na nastavenie RGA v rozloženom rade v jamkách polystyrénových platní sa pripravia dvojnásobne sa zvyšujúce riedenia testovaného materiálu vo fyziologickom roztoku v objeme 0,5 ml. Do všetkých skúmaviek sa pridá 0,5 ml 0,25 - 1 % suspenzie červených krviniek. Výsledky sa berú do úvahy po úplnej sedimentácii erytrocytov v kontrole (červené krvinky + fyziologický roztok). Reakcia sa berie do úvahy podľa charakteru sedimentu erytrocytov. V pozitívnych prípadoch je stupeň aglutinácie označený plusmi. Reakcia, ktorá vyzerá ako tenký film lepkavých červených krviniek pokrývajúcich dno skúmavky (dáždnika), sa hodnotí štyrmi plusmi, reakcia s medzerami vo filme je označená tromi plusmi; okraje lepkavých červených krviniek sú označené dvoma plusmi, vločkovitý sediment červených krviniek obklopený zónou aglutinovaných hrudiek erytrocytov zodpovedá jednému plusu. Ostro ohraničený sediment erytrocytov nerozoznateľný od kontroly naznačuje neprítomnosť aglutinácie. Za titer sa považuje maximálne zriedenie testovaného materiálu, ktoré spôsobilo aglutináciu erytrocytov dvoma plusmi.

Ak je výsledok RHA pozitívny, štúdia pokračuje, pričom sa určí typ izolovaného vírusu pomocou reakcie inhibície hemaglutinácie s typovo špecifickými sérami.

RTGA je založená na vlastnosti antiséra potláčať vírusovú hemaglutináciu, keďže vírus neutralizovaný špecifickými protilátkami stráca schopnosť aglutinovať červené krvinky. Na predbežnú typizáciu vírusov sa používa kvapôčková metóda na skle. Na definitívne stanovenie typu izolovaného vírusu a titráciu protilátok v sére sa expandovaný RTGA umiestni do skúmaviek alebo jamiek. Na tento účel sa pripravia dvojnásobné riedenia séra vo fyziologickom roztoku a rozdelia sa do 0,25 ml. K riedeniu séra pridajte jednu kvapku materiálu obsahujúceho vírus a jednu kvapku 1% suspenzie červených krviniek.

Pri použití RTGA na určenie typu vírusu sa používajú typovo špecifické séra, ktoré sa pridávajú do rovnakého objemu pracovného riedenia antigénu. Typ izolovaného vírusu je určený špecifickým imunitným sérom, ktoré vykazovalo najvyšší titer protilátok proti tomuto vírusu.

RGA a RTGA sa široko používajú na diagnostiku vírusových infekcií (kliešťová encefalitída, chrípka atď.) s cieľom zistiť špecifické protilátky a identifikovať mnohé vírusy podľa ich antigénov.

Imunofluorescenčná reakcia (RIF)

RIF je založený na kombinácii antigénov baktérií, rickettsie a vírusov so špecifickými protilátkami značenými fluorescenčnými farbivami (fluoresceín izotiokyanát, rodamín, B-izotikyanit, lisatín rodamín B-200, sulfochlorid atď.), ktoré majú reaktívne skupiny (sulfochloridit, izotiocyanit , atď.) . Tieto skupiny sa kombinujú s voľnými aminoskupinami molekúl protilátky, ktoré pri pôsobení fluorochrómu nestrácajú svoju špecifickú afinitu k zodpovedajúcemu antigénu. Výsledné AG–AT komplexy sa pod fluorescenčným mikroskopom stanú jasne viditeľnými, jasne svietivými štruktúrami (obr. 48). RIF dokáže detekovať malé množstvá bakteriálnych a vírusových antigénov. Metóda RIF sa používa v dvoch verziách: priama a nepriama metóda.

Priama metóda je založená na priamej kombinácii antigénu so značenou protilátkou. Nepriama metóda je založená na postupnej detekcii komplexu AG-AT pomocou fluorescenčných farbív. Prvým stupňom je tvorba imunitných komplexov špecifického antigénu so špecifickými protilátkami. Druhou fázou je identifikácia tohto komplexu jeho ošetrením značeným antigamaglobulínom.

Výhodou RIF je jednoduchosť, vysoká citlivosť a rýchlosť získavania výsledkov. RIF sa používa ako metóda na včasnú expresnú diagnostiku chrípky, dyzentérie, malárie, moru, tularémie, syfilisu atď. Na uskutočnenie takejto štúdie sa používa fluorescenčný mikroskop.

Rádioimunoanalýza (RIA)

RIA je jednou z najcitlivejších imunodiagnostických metód. Používa sa na detekciu antigénu vírusu hepatitídy B u pacientov s vírusovou hepatitídou. Na tento účel sa do testovacieho séra pridá referenčné sérum (sérum obsahujúce protilátky proti vírusu hepatitídy B). Zmes sa inkubuje 1-2 dni pri teplote 40 °C, potom sa pridá referenčný antigén (antigén značený izotopom 125J) a inkubácia pokračuje ďalších 24 hodín. Do výsledného komplexu antigén-protilátka sa pridávajú precipitujúce antiimunoglobulíny proti referenčným sérovým proteínom, čo vedie k vytvoreniu zrazeniny (obr. 49). Výsledok sa berie do úvahy prítomnosťou a počtom impulzov v zrazenine zaznamenaných počítadlom. Ak sa v testovacom sére nachádza antigén, ktorý sa naviaže na špecifické protilátky, tieto neinteragujú so značeným antigénom, a preto sa v precipitáte nezistí. RIA je teda založená na princípe kompetitívnej interakcie detegovaného antigénu a známeho množstva značeného antigénu s aktívnymi centrami protilátok.

Enzymovo viazaná imunosorbentná metóda (ELISA)

Metóda sa používa na detekciu antigénov pomocou ich zodpovedajúcich protilátok konjugovaných na značkový enzým (chrenová peroxidáza, b-galaktóza alebo alkalická fosfatáza). Po spojení antigénu s enzýmom značeným imunitným sérom sa do zmesi pridá substrát a chromogén . Substrát je štiepený enzýmom a jeho produkty degradácie spôsobujú chemickú modifikáciu chromogénu. Chromogén zároveň mení svoju farbu – intenzita farby je priamo úmerná počtu naviazaných molekúl antigénu a protilátky (obr. 50).

Najbežnejšia je ELISA na pevnej fáze, pri ktorej sa jedna zo zložiek imunitnej reakcie (antigén alebo protilátka) adsorbuje na pevný nosič. Ako pevný nosič sa používajú polystyrénové mikropanely. Pri stanovovaní protilátok sa do jamiek so sorbovaným antigénom postupne pridáva krvné sérum pacienta, enzýmom značené antiglobulínové sérum a zmes roztokov enzýmu a chromogénového substrátu. Vždy po pridaní ďalšej zložky sa nenaviazané činidlá z jamiek odstránia dôkladným premytím. Ak je výsledok pozitívny, zmení sa farba roztoku chromogénu.

Nosič v tuhej fáze môže byť senzibilizovaný nielen antigénom, ale aj protilátkou. Potom sa do jamiek so sorbovanými protilátkami pridá požadovaný antigén, pridá sa imunitné sérum proti antigénu označenému enzýmom a potom sa pridá zmes substrátových roztokov pre enzým a chromogén.

ELISA sa používa na diagnostiku chorôb spôsobených vírusovými a bakteriálnymi patogénmi.

ODDIEL VII. ZÁKLADY VIRUZOLÓGIE

V laboratóriu sa využívajú dve hemaglutinačné reakcie s rôznym mechanizmom účinku.

Prvá RGA je sérologická. Pri tejto reakcii dochádza k aglutinácii červených krviniek pri interakcii s vhodnými protilátkami (hemaglutiníny). Reakcia sa široko používa na stanovenie krvných skupín.

Druhá RGA nie je sérologická. V ňom adhézia červených krviniek nie je spôsobená o

protilátky, ale špeciálne látky tvorené vírusmi. Napríklad vírus chrípky aglutinuje červené krvinky kurčiat a morčiat a vírus detskej obrny aglutinuje červené krvinky oviec. Táto reakcia umožňuje posúdiť prítomnosť konkrétneho vírusu v skúmanom materiáli.

Reakcia sa uskutočňuje v skúmavkách alebo na špeciálnych platniach s jamkami. Materiál testovaný na prítomnosť vírusu sa zriedi izotonickým roztokom od 1:10 do 1:1280; 0,5 ml každého riedenia sa zmieša s rovnakým objemom 1-2% suspenzie červených krviniek. Pri kontrole sa zmieša 0,5 ml erytrocytov s 0,5 ml izotonického roztoku. Skúmavky sa umiestnia do termostatu na 30 minút a doštičky sa nechajú pri teplote miestnosti 45 minút.

Účtovanie výsledkov. Ak je reakcia pozitívna, na dne skúmavky alebo jamky sa objaví sediment červených krviniek s vrúbkovanými okrajmi („dáždnik“), ktorý pokrýva celé dno jamky. Ak je výsledok negatívny, červené krvinky vytvoria hustý sediment s hladkými okrajmi („tlačidlo“). Rovnaký sediment by mal byť v kontrole. Intenzita reakcie je vyjadrená znamienkami „+“. Vírusový titer je maximálne zriedenie materiálu, v ktorom dochádza k aglutinácii.

Reakcia inhibície hemaglutinácie

Ide o sérologickú reakciu, pri ktorej špecifické antivírusové protilátky interagujúce s vírusom (antigénom) ho neutralizujú a zbavujú ho schopnosti aglutinovať červené krvinky, t.j. inhibovať hemaglutinačnú reakciu. Táto reakcia vám umožňuje určiť typ a typ vírusov.

Nastavenie reakcie. 0,25 ml antivírusového séra sa zmieša s rovnakým objemom materiálu obsahujúceho vírus. Zmes sa pretrepe a umiestni sa do termostatu na 30 minút, potom sa pridá 0,5 ml 1-2% suspenzie červených krviniek.

Účtovanie výsledkov. Ak je experiment vykonaný správne, na kontrole séra a erytrocytov by sa malo vytvoriť „tlačidlo“ - neexistuje žiadny faktor aglutinujúci erytrocyty; pri kontrole antigénu sa vytvorí „dáždnik“ - vírus spôsobil aglutináciu červených krviniek. Ak je sérum homológne so skúmaným vírusom, vytvorí sa „tlačidlo“ - sérum neutralizuje vírus.

Nepriama hemaglutinačná reakcia

Nepriama (pasívna) hemaglutinačná reakcia (RIHA) je založená na skutočnosti, že červené krvinky, ak je na ich povrchu adsorbovaný rozpustný antigén, získavajú schopnosť aglutinácie pri interakcii s protilátkami proti adsorbovanému antigénu.

Nastavenie reakcie. Sérum sa zahrieva 30 minút na 56 °C, postupne sa zriedi v pomere 1:10 - 1:1280 a naleje sa do 0,25 ml skúmaviek alebo jamiek, kde sa potom pridajú 2 kvapky červených krviniek s adsorbovanými antigénmi.

Ovládanie: suspenzia erytrocytov s na nich adsorbovanými antigénmi s evidentne imúnnym sérom, suspenzia erytrocytov s na nich adsorbovanými antigénmi s normálnym sérom; suspenzia normálnych červených krviniek s testovaným sérom. Pri prvej kontrole by malo dôjsť k aglutinácii, pri druhej a tretej by k nej nemalo dôjsť.

Kontrolné otázky.

1. Čo znamená pozitívny výsledok röntgenovej analýzy medzi červenými krvinkami a materiálom, ktorý sa testuje na prítomnosť vírusu?

2. Vznikne aglutinačná reakcia červených krviniek, ak sa k nim pridá vírus a jemu zodpovedajúce sérum? Ako sa volá reakcia, ktorá odhaľuje tento jav?

PRAKTICKÁ PRÁCA č.12.

Reakcia fixácie komplementu.

Reakcia fixácie komplementu (FFR) je založená na skutočnosti, že špecifický komplex antigén-protilátka vždy adsorbuje (viaže) komplement na seba.

Táto reakcia je široko používaná pri identifikácii antigénov a pri sérodiagnostike infekcií, najmä chorôb spôsobených spirochétami (Wassermannova reakcia), rickettsiou a vírusmi.

RKS je komplexná sérologická reakcia. Zahŕňa komplement a dva systémy antigén-protilátka. V podstate ide o dve sérologické reakcie.

Pravý hlavný systém pozostáva z antigénu a protilátky (jeden je známy, druhý nie). Pridáva sa k nemu určité množstvo komplementu. Ak sa antigén a protilátka tohto systému zhodujú, spoja sa a spoja kompliment. Výsledný komplex je jemne rozptýlený a nie je viditeľný.

Tvorba tohto komplexu sa zisťuje pomocou druhého hemolytického alebo indikátorového systému. Zahŕňa ovčie červené krvinky (antigén) a príslušné hemolytické sérum (protilátka), t.j. hotový imunitný komplex. V tomto systéme môže k lýze červených krviniek dôjsť len v prítomnosti komplementu. Ak je komplement viazaný prvým systémom, tak v druhom systéme nedôjde k hemolýze, pretože žiadny voľný doplnok. Neprítomnosť hemolýzy (obsah skúmavky je zakalený alebo je na dne sediment erytrocytov) sa zaznamená ako pozitívny výsledok RSC.

Ak v prvom systéme antigén nezodpovedá protilátke, potom sa imunitný komplex nevytvorí a komplement zostane voľný. Kompliment, ktorý zostáva voľný, sa podieľa na druhom systéme, čo spôsobuje hemolýzu, výsledok RSC je negatívny (obsah skúmaviek je priehľadný - „lakovaná krv“).

Komponenty, reakcie fixácie komplementu:

1. Antigén – zvyčajne lyzát, extrakt, haptén,

menej často suspenzia mikroorganizmov.

2. Protilátka – sérum pacienta.

3. Doplnok - morčacie sérum.

4. Antigén - ovčie erytrocyty.

5. Protilátka - hemolyzín proti ovčím erytrocytom.

6. Izotonický roztok.

Vzhľadom na to, že v RSC je zapojených veľké množstvo zložitých komponentov,

musia sa najprv titrovať a prijať do reakcie v presných množstvách a v rovnakých objemoch: 0,5 alebo 0,25, menej často 0,2, 1,25 alebo 1,0 ml (väčšie objemy poskytujú presnejší výsledok). Titrácia reakčných zložiek sa uskutočňuje v rovnakom objeme ako experiment, pričom chýbajúce zložky sa nahradia izotonickým roztokom.

Vidalova reakcia. Od druhého týždňa ochorenia sa v krvi pacientov hromadia protilátky proti infekčnému agens. Na ich identifikáciu sa pacientovo krvné sérum vyšetrí v aglutinačnej reakcii. Ako antigény sa používajú usmrtené kultúry Salmonella – diagnosticums.

Na vykonanie Widalovej reakcie sa používa sérum pacienta, sada diagnostických súprav a izotonický roztok chloridu sodného.

Krv (2-3 ml) z pulpy prsta alebo z loketnej žily sa odoberie do sterilnej skúmavky a doručí sa do laboratória. V laboratóriu sa skúmavka umiestni na 20-30 minút do termostatu, aby sa vytvorila zrazenina, potom sa použije Pasteurova pipeta na krúženie zrazeniny, aby sa oddelila od steny skúmavky, a umiestni sa do chladu. na 30-40 minút. Oddelené sérum sa odsaje a použije na aglutináciu s diagnostikou Salmonella tyfus a paratýfus. Krv sa môže centrifugovať, aby sa získalo sérum.

Keď sa vyskytne infekčný proces - týfus alebo paratýfus - telo produkuje O- a H-protilátky proti rovnakým antigénom patogénu.

Najprv sa objavia O-protilátky a celkom rýchlo miznú. H-protilátky trvajú dlho. To isté sa deje aj pri očkovaní, preto pozitívna Widalova reakcia s O- a H-antigénmi indikuje prítomnosť ochorenia a reakcia len s H-antigénmi môže nastať tak u tých, ktorí sa z ochorenia vyliečili (anamnestická reakcia), ako aj očkovaných (reakcia na vakcínu). Na základe toho sa Widalova reakcia vykonáva oddelene s O- a H-antigénmi (diagnostika).

Keďže týfus a paratýfus A a B sú klinicky podobné, na identifikáciu povahy ochorenia sa pacientovo sérum testuje súčasne s diagnostikou zo Salmonella tyfus a paratýfus A a B.

Widalova reakcia je široko používaná, pretože je jednoduchá a nevyžaduje špeciálne podmienky.

Reakcia sa môže uskutočniť dvoma spôsobmi: po kvapkách a volumetricky (pozri kapitolu 12). V praxi sa častejšie používa volumetrická metóda. Pri vykonávaní lineárnej aglutinačnej reakcie musí počet riadkov zodpovedať počtu antigénov (diagnostik). Za pôvodcu ochorenia sa považuje mikroorganizmus, z ktorého bolo diagnostikum aglutinované sérom pacienta. Niekedy je zaznamenaná skupinová aglutinácia, pretože pôvodcovia týfusu a paratýfusu majú spoločné skupinové antigény. V tomto prípade sa výsledok reakcie v sérii, v ktorej je zaznamenaná aglutinácia pri väčšom zriedení séra, považuje za pozitívny (tabuľka 36).

Tabuľka 36. Možný výsledok aglutinačnej reakcie

Poznámka. V praxi sa Widalova reakcia vykonáva so štyrmi diagnostikami: brušný týfus „O“ a „H“ a paratýfus A a B s diagnostikou „ON“.

Ak dôjde k aglutinácii len v malých riedeniach séra - 1:100, 1:200, tak na odlíšenie reakcie počas ochorenia od očkovania alebo anamnestické reakcie sa uchyľujú k opakovaniu aglutinačnej reakcie po 5-7 dňoch. U pacienta sa titer protilátok zvyšuje, ale u očkovaného alebo uzdraveného človeka sa nemení. Zvýšenie titra protilátok v krvnom sére teda slúži ako indikátor ochorenia.

V reakcii na zavedenie týfusových patogénov s Vi antigénom do tela sa v krvi pacienta objavia Vi aglutiníny. Zisťujú sa od 2. týždňa choroby, ale ich titer zvyčajne nepresahuje 1:10. Detekcia Vi-protilátok je spojená s prítomnosťou patogénov týfusu v organizme, preto má stanovenie týchto protilátok veľký epidemiologický význam, pretože umožňuje identifikáciu nosičov baktérií.

Vi-hemaglutinačná reakcia. Toto je najcitlivejšia reakcia na detekciu protilátok.

Princíp reakcie spočíva v tom, že ľudské (skupina I) alebo ovčie erytrocyty môžu po špeciálnej úprave adsorbovať Vi-antigén na svojom povrchu a tým získať schopnosť aglutinácie s príslušnými Vi-protilátkami.

Červené krvinky s antigénmi adsorbovanými na povrchu sa nazývajú erytrocytové diagnosticum.

Na vykonanie Vi-hemaglutinačnej reakcie vezmite:

1) krvné sérum pacienta (1-2 ml); 2) erytrocyt Salmonella Vi-diagnosticum; H) Vi-sérum; 4) O-sérum; 5) izotonický roztok chloridu sodného.

Reakcia sa uskutočňuje v aglutinačných skúmavkách alebo v plastových platniach s jamkami.

Krv sa pacientovi odoberá rovnakým spôsobom ako pri Vidalovej reakcii. Získa sa sérum. Zo séra sa pripravia dvojnásobné sériové riedenia, počínajúc od 1:10 do 1:160.

Do jamky sa pridá 0,5 ml každého riedenia a pridá sa 0,25 ml erytrocytárneho diagnosticum. Reakcia sa uskutočňuje v objeme 0,75 ml.

Kontroly sú: 1) štandardné aglutinačné monoreceptorové sérum + diagnosticum - reakcia musí byť pozitívna do sérového titra; 2) diagnosticum v izotonickom roztoku chloridu sodného (kontrola) - reakcia by mala byť negatívna.

Obsah jamiek sa dôkladne premieša, umiestni sa na 2 hodiny do termostatu a nechá sa pri izbovej teplote do nasledujúceho dňa (18-24 hodín).

Účtovníctvo začína kontrolou. Reakcia sa hodnotí v závislosti od stupňa aglutinácie diagnostika.

Výsledky sa berú do úvahy podľa štvorkrížového systému:

Červené krvinky sú úplne aglutinované - sedimentujú na dne jamky vo forme „dáždnika“;

+++ „dáždnik“ je menší, nie všetky červené krvinky sú aglutinované;

++ „dáždnik“ je malý, na dne otvoru je sediment neaglutinovaných erytrocytov;

Reakcia je negatívna; červené krvinky sa neaglutinovali a usadili sa na dne jamky vo forme gombíka.

Kontrolné otázky

1. V akom období ochorenia sa vykonáva Vidalova reakcia?

2. Aké zložky sú potrebné na uskutočnenie Widalovej reakcie?

3. Aká diagnostika sa používa na uskutočnenie Vidalovej reakcie?

4. Ktorá sérologická reakcia je najcitlivejšia pri diagnostike týfusových paratýfových infekcií?

5. Aké diagnostické činidlo sa používa pri vykonávaní Vi-hemaglutinačnej reakcie?

6. Aké sérum sa používa na stanovenie prítomnosti Vi-antigénu v skúmanej kultúre?

7. Aký význam má určenie Vi-fagotypu?

Od učiteľa odoberte O- a H-diagnostiku zo Salmonella tyfus, paratýfus A a paratýfus B a sérum pacienta. Dajte Vidalovu reakciu.

Kultúrne médiá

Medicínsky priemysel vyrába agarové médiá EMS, Ploskireva a bizmutovo-sulfitové vo forme suchého prášku. Pripravujú sa podľa návodu na etikete: odvážte určité množstvo prášku, zalejte primeraným množstvom vody, povarte a nasypte do sterilných Petriho misiek.

Russell Streda. Pridajte 40 g suchého živného média do 950 ml destilovanej vody a pridajte 5 g živného agaru. Zahrievajte, kým sa prášky nerozvaria a nerozpustia. 1 g x sa rozpustí v 50 ml destilovanej vody. hodiny glukózy a pridajte do pripravenej zmesi. Médium sa naleje do sterilných skúmaviek s objemom 5-7 ml, sterilizuje sa prúdom pary (2 dni po 2 minúty) a skosí sa tak, aby zostal stĺpec. Rovnakým spôsobom sa pripraví Russellovo médium s manitolom a sacharózou.

Olkenitského médium zo suchého agaru. 2,5 g suchého živného agaru sa rozpustí v 100 ml destilovanej vody. Do agaru ochladeného na 50°C sa pridajú všetky ingrediencie uvedené v recepte (štítku). Médium naliate do skúmaviek sa sterilizuje prúdiacou parou (3 dni, 20 minút každý) a potom sa pokosí. Pripravené médium by malo mať svetloružovú farbu.

Úvod → Analýzy → Imunologická metóda → Hemaglutinačné reakcie (imunologická metóda)

Aglutinačné reakcie sú založené na interakcii činidla (protilátok) s antigénmi umiestnenými na povrchu buniek alebo cudzích častíc. V dôsledku toho vznikajú veľké agregáty, ktoré sa vyzrážajú a sú viditeľné aj voľným okom. Týmto spôsobom sa určuje krvná skupina podľa systému ABO, prítomnosti Rh faktora v ňom atď. Ide o citlivejšiu diagnostickú metódu v porovnaní so zrážacími reakciami, keďže objem sedimentu (aglutinátu) presahuje objem zrazenina.

Priama hemaglutinácia

Priama hemaglutinačná reakcia (DHR) sa používa na detekciu povrchových antigénov mikroorganizmov a červených krviniek, ako aj protilátok proti nim.
Testovaný materiál (krv) sa pridá do štandardného séra obsahujúceho protilátky. Rýchlosť priamej aglutinačnej reakcie závisí od množstva testovaného materiálu, množstva a koncentrácie séra a okolitej teploty.

Nepriama hemaglutinácia

Nepriama hemaglutinačná reakcia sa vykonáva na detekciu protilátok v krvi pacienta pomocou erytrocytárneho diagnostika. Činidlo pozostáva z červených krviniek, na povrchu ktorých je antigén (proteíny mikroorganizmov, toxíny, alergény atď.).
Krvné sérum pacienta sa zriedi 0,9% roztokom chloridu sodného, potom sa pridá erytrocytárne diagnosticum a sleduje sa výsledok. Táto vysoko citlivá diagnostická metóda deteguje antigény už v malých koncentráciách.

Hemaglutinačná reakcia (HRA).

V laboratóriu sa využívajú dve hemaglutinačné reakcie s rôznym mechanizmom účinku.

Druhá RGA nie je sérologická. V ňom adhézia červených krviniek nie je spôsobená o

Hemaglutinačná reakcia

Vírusový titer je maximálne zriedenie materiálu, v ktorom dochádza k aglutinácii.

Reakcia inhibície hemaglutinácie

Nepriama hemaglutinačná reakcia

Nastavenie reakcie. Sérum sa zahrieva 30 minút na 56 °C, zriedi sa postupne v pomere 1:10 - 1:1280 a naleje sa do 0,25 ml do skúmaviek alebo jamiek, kde sa potom nakvapkajú 2 kvapky červených krviniek s adsorbovanými antigénmi. pridané.

Kontrolné otázky.

1. Čo znamená pozitívny výsledok röntgenovej analýzy medzi červenými krvinkami a materiálom, ktorý sa testuje na prítomnosť vírusu?

2. Vznikne aglutinačná reakcia červených krviniek, ak sa k nim pridá vírus a jemu zodpovedajúce sérum? Ako sa volá reakcia, ktorá odhaľuje tento jav?

PRAKTICKÁ PRÁCA č.12.

Reakcia fixácie komplementu.

Reakcia fixácie komplementu (FFR) je založená na skutočnosti, že špecifický komplex antigén-protilátka vždy adsorbuje (viaže) komplement na seba.

Táto reakcia je široko používaná pri identifikácii antigénov a pri sérodiagnostike infekcií, najmä chorôb spôsobených spirochétami (Wassermannova reakcia), rickettsiou a vírusmi.

RKS je komplexná sérologická reakcia. Zahŕňa komplement a dva systémy antigén-protilátka. V podstate ide o dve sérologické reakcie.

Komponenty, reakcie fixácie komplementu:

1. Antigén – zvyčajne lyzát, extrakt, haptén,

menej často suspenzia mikroorganizmov.

2. Protilátka – sérum pacienta.

3. Doplnok - morčacie sérum.

4. Antigén - ovčie erytrocyty.

5. Protilátka - hemolyzín proti ovčím erytrocytom.

6. Izotonický roztok.

Vzhľadom na to, že v RSC je zapojených veľké množstvo zložitých komponentov,

Súvisiace informácie:

Hľadať na stránke:

Nepriamy alebo pasívny hemaglutinačný test (IRHA alebo RPHA) je citlivejší a špecifickejší ako aglutinačný test. Táto reakcia sa tiež používa v dvoch smeroch.

1) Na detekciu protilátok v krvnom sére pacienta sa používa erytrocytová diagnostika, pri ktorej sa antigén adsorbuje na povrchu erytrocytov ošetrených tanínom. V súvislosti s touto reakciou sa častejšie používa pojem RPGA.

Testované sérum sa zriedi v jamkách plastových platničiek a pridá sa erytrocytárne diagnosticum. Pri pozitívnej reakcii sa pozdĺž stien otvoru objaví tenký film vo forme „čipkového dáždnika“ s negatívnou reakciou sa objaví hustý sediment erytrocytov vo forme „tlačidla“.

2) Na detekciu toxínov a bakteriálnych antigénov v skúmanom materiáli sa používa protilátková erytrocytová diagnostika získaná adsorpciou protilátok na erytrocytoch. V súvislosti s touto reakciou sa častejšie používa termín RNGA. Napríklad pomocou protilátkovej diagnostiky sa zisťuje morový bacilový antigén, difterický exotoxín, botulotoxín.

Čo je diagnostika erytrocytov? Čo je to protilátková diagnostika erytrocytov?

Erytrocytové diagnostické prostriedky sú červené krvinky (ošetrené tanínom alebo formalínom) s antigénmi extrahovanými z baktérií, ktoré sú na nich adsorbované, a používajú sa pri RPHA (pasívne hemaglutinačné reakcie). V prípade, že sa RPGA používa na detekciu antigénu v sekrétoch pacientov, v tkanivách a pod., používajú sa „protilátkové diagnostická“, teda červené krvinky senzibilizované protilátkami.

V RNGA sa protilátky v krvnom sére detegujú pomocou antigénneho erytrocytového diagnostica, ktorým sú erytrocyty s adsorbovanými antigénmi.

Metodika nastavenia reakcií. Koaglutinačná reakcia.

- fixácia červených krviniek formaldehydom alebo glutarovými alebo akrylovými aldehydmi. Takto ošetrené červené krvinky sa dlhodobo skladujú. Častejšie sa na tento účel používajú erytrocyty z oviec, ľudí, kurčiat atď.;
— ošetrenie fixovaných erytrocytov roztokom tanínu. Výsledkom je, že červené krvinky získavajú schopnosť nevratne adsorbovať proteíny (vírusy a protilátky) na svojom povrchu;
- senzibilizácia tanizovaných erytrocytov vírusmi alebo protilátkami.

Koaglutinačná reakcia (PCA)

Koaglutinačná reakcia sa používa na stanovenie antigénov pomocou protilátok adsorbovaných na proteín A stafylokokových buniek (antibody diagnosticum).
Proteín A má afinitu k Fc fragmentu imunoglobulínov, preto takéto baktérie ošetrené imunodiagnostickým sérom nešpecificky adsorbujú sérové protilátky, ktoré potom interagujú s aktívnymi centrami so zodpovedajúcimi mikróbmi izolovanými od pacientov. V dôsledku koagulácie sa vytvárajú vločky pozostávajúce zo stafylokokov, diagnostických sérových protilátok a detekovaného mikróbu.

Aglutinačné séra: čo obsahujú; ako sa získavajú, na čo sa používajú; Aký je titer aglutinačného séra?

Aglutinačné sérum sa získava imunizáciou králikov (intravenózne, subkutánne alebo intraperitoneálne) suspenziou usmrtených baktérií, počínajúc dávkou 200 miliónov, potom 500 miliónov, 1 miliardy, 2 miliárd mikrobiálnych teliesok v 1 ml, v intervaloch 5 dní. 7-8 dní po poslednej imunizácii sa odoberie krv a stanoví sa titer protilátok.

Titer aglutinačného séra je maximálne zriedenie séra, pri ktorom dochádza k aglutinácii s príslušným mikroorganizmom.

Aglutinačné séra sa používajú na identifikáciu mikróbov v aglutinačnej reakcii v plnom rozsahu.

Hemaglutinačná reakcia (HRA)

Ak je skúmaný mikroorganizmus aglutinovaný sérom na titer alebo polovičnú hodnotu titra, možno ho považovať za patriaci k druhu, ktorého názov je uvedený na štítku ampulky.

Aké sú rozdiely medzi polyvalentnými a monovalentnými (monoreceptorovými) aglutinačnými sérami; Prečo imunizácia králika mikróbmi jedného typu produkuje sérum obsahujúce protilátky proti niekoľkým antigénom?

Monoreceptorové séra sú séra obsahujúce protilátky len proti jednému antigénu a polyvalentné séra, ktoré spôsobujú aglutinačné reakcie s dvomi alebo tromi príbuznými baktériami, ktoré majú spoločný antigén. Aglutinačné séra sa používajú na identifikáciu mikroorganizmov v aglutinačnej reakcii. Nevýhodou takýchto sér je, že sú schopné vyvolať skupinové aglutinačné reakcie, pretože obsahujú protilátky proti baktériám, ktoré majú spoločné antigény.

Hemaglutinačná reakcia. Popis a aplikácia

Vychádza z toho, že červené krvinky, na ktorých sú predtým adsorbované antigény, získavajú schopnosť aglutinácie v prítomnosti homológnych sér (protilátok).

Červené krvinky v tomto prípade pôsobia ako nosiče so špecifickými determinantami, ktorých aglutinácia nastáva v dôsledku reakcie antigén + protilátka.

Červené krvinky, na ktorých povrchu sú pevne naviazané antigény, sa nazývajú erytrocytárne antigén diagnosticum alebo erytrocyty senzibilizované antigénom.

Iný typ RNGA - protilátky sú adsorbované na povrchu erytrocytov a v prítomnosti homológneho antigénu dochádza k ich následnej aglutinácii. V tomto prípade sa takéto erytrocyty nazývajú erytrocyty protilátka diagnosticum alebo erytrocyty senzibilizované protilátkami.

Na základe týchto dvoch základných metodologických prístupov boli vyvinuté a používané mnohé modifikácie RNGA. Ako nosiče sa teda používajú malé štandardné latexové častice. V tomto prípade sa reakcia nazýva latexová aglutinačná reakcia (RLA) alebo sa používa Staphylococcus aureus - koagulačná reakcia atď. Diagnostika erytrocytov sa zvyčajne pripravuje v biologických priemyselných podnikoch a hlavné skúsenosti RNGA sa vykonávajú v diagnostických laboratóriách.

Príprava diagnostiky erytrocytov zahŕňa nasledujúce kroky:

fixácia červených krviniek formaldehydom alebo glutarovými alebo akrylovými aldehydmi. Takto ošetrené červené krvinky sa dlhodobo skladujú. Častejšie sa na tento účel používajú erytrocyty oviec, ľudí, kurčiat atď.;
ošetrenie fixovaných erytrocytov roztokom tanínu. Výsledkom je, že červené krvinky získavajú schopnosť nevratne adsorbovať proteíny (vírusy a protilátky) na svojom povrchu;
senzibilizácia tanizovaných erytrocytov vírusmi alebo protilátkami.

Treba poznamenať, že metódy prípravy diagnostiky erytrocytov na vírusové infekcie sú odlišné.

Postup vykonania RNGA na detekciu a stanovenie titra protilátok je nasledujúci:

rovnaké dávky erytrocytov senzibilizovaných antigénom sa pridajú k postupným 2-násobným riedeniam séra;
zmes sa nechá 2-3 hodiny pri teplote miestnosti alebo 16-18 hodín pri 4 °C;
brať do úvahy výsledky. Ak sérum obsahuje protilátky proti vírusu, ktorým boli červené krvinky senzibilizované, pozoruje sa hemaglutinácia, ktorá sa hodnotí krížením.

Titer protilátky v sére sa považuje za najvyššie riedenie séra, ktoré ešte poskytuje hemaglutináciu aspoň dvoma kríženiami.

RNGA sprevádzajú všetky príslušné kontroly. Zvyčajne sa reakcia uskutočňuje pomocou mikrometódy.

RNGA vám umožňuje vyriešiť nasledujúce diagnostické problémy:

detekovať protilátky a určiť ich titer v krvnom sére pomocou známeho diagnostika antigénu erytrocytov;
detekovať a identifikovať neznámy vírus pomocou známej diagnostiky protilátok proti erytrocytom.

Výhody RNGA: vysoká citlivosť, jednoduchosť techniky umiestnenia a rýchlosť odozvy. Je však dôležité poznamenať, že veľké ťažkosti vznikajú pri príprave stabilnej diagnostiky erytrocytov (veľká závislosť od čistoty použitých komponentov, nutnosť výberu spôsobu fixácie, tanizácie a senzibilizácie erytrocytov pre každý typ vírusu).

Ak nájdete chybu, vyberte časť textu a stlačte Ctrl+Enter.

V kontakte s