Infekcia vírusom ľudskej imunodeficiencie je vážna diagnóza. Chyby v diagnostike môžu viesť k katastrofálnym následkom. Test ELISA na HIV je najdostupnejšou výskumnou metódou, ale nie je vo všetkých prípadoch informatívna.
ELISA – enzýmová imunoanalýza. Účelom metódy ELISA je detekcia protilátok proti vírusu imunodeficiencie v biologickom materiáli. Pomocou tejto metódy môžete sledovať prítomnosť v kvapaline nie samotných vírusov, ale iba protilátok produkovaných v reakcii na ich prítomnosť. Enzýmová imunoanalýza je široko používaná v diagnostike STD. Pomáha identifikovať sexuálne prenosné choroby.
Existuje niekoľko typov ELISA: priama verzia, nepriama verzia, sendvičová metóda. V každom prípade je technika založená na stanovení prítomnosti protilátok, ktoré slúžia ako indikátor prieniku cudzieho agens. Na identifikáciu týchto „značiek“ sa biologická zložka ošetrí enzýmami.
Enzýmová imunoanalýza stanovuje protilátky s presnosťou 96–98 %, chyba je nevýznamná. Ide o 2 – 4 %.
ELISA – metóda diagnostiky HIV
ELISA test na HIV je prvou fázou diagnózy. Antigény vírusu imunodeficiencie sú proteíny p24, p15, p17, p31 a glykoproteíny gp 41, gp55, gp66, gp120, gp160.
Na detekciu vírusového proteínu sa odoberie vzorka krvi zo žily. Vzorka odoslaná na krvný test ELISA sa ošetrí reagenciami na enzýmovú imunoanalýzu. Sérum sa izoluje z krvi. Ak sa počas štúdie zistia, znamená to, že vírus je už prítomný v krvi.
Krv sa daruje striktne na prázdny žalúdok. 2 dni pred testom sa neodporúča jesť tučné jedlá ani piť alkohol. Na 14 dní by ste mali prestať užívať antivírusové lieky.
Výhody metódy:
- relatívne nízke náklady;
- vysoká stabilita činidiel;
- vysoká citlivosť;
- krátke trvanie;
- minimálny vplyv ľudského faktora.
Moderné testovacie systémy ELISA sú vyrábané podľa medzinárodných štandardov. To zvyšuje presnosť metódy.
Enzýmová imunoanalýza nie vždy poskytuje spoľahlivé výsledky. Po vstupe vírusu do krvi začína latentné (skryté) štádium vývoja. Obdobie, kým sa vírusy začnú množiť a protilátky sa ešte nevytvoria, sa nazýva „čas séronegatívneho okna“. V tejto fáze nemá zmysel robiť ELISA. Ak dôjde k infekcii, výsledkom bude . Ako rýchlo sa vírus odhalí, závisí od toho, koľko nebezpečných buniek sa dostalo do tela. V prípade nechráneného pohlavného styku alebo transfúzie kontaminovanej krvi bude toto obdobie minimálne.
Pre vysokú spoľahlivosť HIV ELISA sa test vykonáva trikrát. Termíny na odber ELISA na vírus ľudskej imunodeficiencie:
- 6 týždňov po pravdepodobnom kontakte,
- za 3 mesiace,
- o šesť mesiacov neskôr.
ELISA 4. generácie na HIV je metóda, ktorá je najinformatívnejšia v počiatočných štádiách infekcie. Môže sa vykonať už 1 mesiac po podozrení na infekciu. Test je drahý v porovnaní s analógom 3. generácie. Preto sa vo verejných zdravotníckych zariadeniach používa ako doplnková diagnostická metóda. Test 3 sa vykonáva bezplatne. Ak na základe jeho výsledkov nemožno dať jednoznačnú odpoveď, pacient je odoslaný na test ELISA 4. generácie.
Dôležité! Ihneď po infekcii sa človek stáva infekčným. Pre ostatných je nebezpečný, aj keď o svojej diagnóze ešte nevie!
Ak test ELISA odhalí protilátky proti antigénom HIV, musia sa vykonať ďalšie štúdie. Toto zahŕňa . Spoľahlivosť tejto metódy je 80%. PCR testuje krv, spermu a vaginálny výtok. Biologická tekutina sa rozloží v lekárskom reaktore a potom sa spracuje enzýmami. V dôsledku toho sa získajú údaje o koncentrácii buniek HIV v kvapalnom médiu. Vzhľadom na veľkú chybu (20%), ak je výsledok pozitívny, dodatočne sa vykonáva imunoblotting.
Ďalšou fázou diagnostiky je Combo test (alebo imunoblotting). Ide o vysoko citlivý test (spoľahlivosť 98 %), ktorý sa vykonáva, ak sú výsledky ELISA po 6 mesiacoch nejednoznačné.
Dekódovanie výsledkov ELISA
Doba dešifrovania sa pohybuje od 24 do 48 hodín. Ak je potrebné urýchlene získať informácie (vyžaduje sa chirurgický zákrok), dekódovanie sa uskutoční do 2 hodín. Provinčné lekárske strediská nemajú vždy potrebné reagencie. Vzorka sa odoberie na mieste aplikácie, následne sa prevezie do regionálneho centra. Za takýchto okolností možno výsledok zistiť za 1-2 týždne.
Výsledok enzýmového imunotestu môže byť pozitívny alebo negatívny; nie sú žiadne iné možnosti.
Aj keď bol výsledok počiatočného a opakovaného testu ELISA pozitívny, pacient nemôže byť rozpoznaný ako infikovaný HIV. S výhradou chyby. Dôvody falošne pozitívneho výsledku:
- chronické choroby;
- dlhodobé infekčné choroby;
- tehotenstva.
Výsledok analýzy by sa preto mal objasniť dodatočnými štúdiami.
Ak je imunoblotting HIV pozitívny (reaktívny), osoba sa považuje za infikovanú HIV, čo znamená, že je zdravá.
V priebehu času sa bunky vírusu prispôsobia predpísaným liekom. Na kontrolu sa test ELISA periodicky opakuje.
Niekedy imunoblotting ukazuje falošne negatívny výsledok. Je extrémne zriedkavé mať vírus imunodeficiencie 6 mesiacov (alebo viac). To je možné, ak sa do krvi dostane malé množstvo vírusových buniek. V 0,5 % z celkového počtu prípadov je možné infekciu diagnostikovať až po roku. V 99,5%, do šiestich mesiacov po infekcii, ELISA prinesie spoľahlivý výsledok.
Aj pri vysoko presných štúdiách stále existuje 2% pravdepodobnosť chyby. Netreba zabúdať ani na ľudský faktor. Aby sa eliminovala možnosť chyby, test je možné vykonať v 2 rôznych inštitúciách.
5.1 Podstata a klasifikácia ELISA.
ELISA sa objavila v polovici 60. rokov a bola pôvodne vyvinutá ako metóda na identifikáciu antigénu v histologickej vzorke, ako aj na vizualizáciu precipitačných línií v imunodifúznych a imunoelektroforéznych testoch a potom sa začala používať na kvantitatívne stanovenie antigénov a protilátok v r. biologické tekutiny. Na vývoji metódy sa podieľali E. Engvall a R. Pählman, ako aj samostatne W. Van Weeman a R. Schurs.
Ryža. 6 Základný princíp ELISA:
identifikovať antigény; 2) na detekciu protilátok
Metóda je založená na špecifickej väzbe protilátky na antigén, pričom jedna zo zložiek je konjugovaná s enzýmom ako výsledok reakcie s príslušným chromogénnym substrátom vzniká farebný produkt, ktorého množstvo je možné určiť spektrofotometricky (obr. 6).
Objav možnosti imobilizácie antigénu a protilátky na rôznych nosičoch pri zachovaní ich väzbovej aktivity umožnil rozšírenie použitia ELISA v rôznych oblastiach biológie a medicíny.
Vznik monoklonálnych protilátok prispel k ďalšiemu rozvoju ELISA, čo umožnilo zvýšiť jej senzitivitu, špecifickosť a reprodukovateľnosť výsledkov.
Teoreticky je ELISA založená na údajoch modernej imunochémie a chemickej enzymológie, znalosti fyzikálno-chemických zákonitostí reakcie antigén-protilátka, ako aj na hlavných princípoch analytickej chémie. Citlivosť ELISA a čas, ktorý je potrebný, sú určené niekoľkými hlavnými faktormi: kinetickými a termodynamickými charakteristikami reakcie antigén-protilátka, pomerom činidiel, aktivitou enzýmu a rozlíšením jeho detekčných metód. Vo všeobecnosti možno reakciu antigén-protilátka opísať jednoduchou schémou:
+[AG]↔[ATAG]
Rôznorodosť predmetov štúdia od nízkomolekulových zlúčenín po vírusy a baktérie, ako aj neobvykle široká škála úloh spojených s rôznymi podmienkami použitia ELISA, určujú vývoj extrémne veľkého počtu variantov tejto metódy.
Akákoľvek verzia testu ELISA obsahuje 3 povinné fázy:
1. štádium rozpoznania testovanej zlúčeniny protilátkou pre ňu špecifickou, čo vedie k vytvoreniu imunitného komplexu;
2. štádium vytvorenia spojenia konjugátu s imunitným komplexom alebo s voľnými väzbovými miestami;
3. štádium premeny enzýmovej značky na zaznamenaný signál. Klasifikácia metód ELISA je založená na niekoľkých prístupoch:
1. Na základe typu reagencií prítomných v prvej fáze ELISA sa rozlišujú kompetitívne a nekompetitívne metódy.
A) V kompetitívnej ELISA v prvej fáze systém obsahuje analyzovanú zlúčeninu aj jej analóg, značené enzýmom a súperiace s ním o špecifické väzbové miesta.
B) Nekompetitívne metódy sú charakterizované prítomnosťou v systéme v prvom stupni iba analyzovanej zlúčeniny a väzbových centier pre ňu špecifických.
2. Všetky metódy ELISA sú rozdelené na homogénne a heterogénne.
Ak všetky tri stupne ELISA prebiehajú v roztoku a medzi hlavnými stupňami nie sú žiadne ďalšie kroky na oddelenie vytvorených imunokomplexov od nezreagovaných zložiek, metóda patrí do skupiny homogénnych.
Základom homogénnej ELISA, používanej spravidla na stanovenie nízkomolekulových látok, je inhibícia aktivity enzýmu pri jeho kombinácii s antigénom alebo protilátkou. Enzýmová aktivita sa obnoví ako výsledok reakcie antigén-protilátka.
Keď sa protilátka viaže na antigén obsahujúci enzýmovú značku, aktivita enzýmu je inhibovaná o 95 % vzhľadom na substrát s vysokou molekulovou hmotnosťou, čo je spôsobené stérickým vylúčením substrátu z aktívneho centra enzýmu. Keď sa koncentrácia antigénu zvýši, naviaže sa viac protilátok a zostane viac voľných konjugátov antigén-enzým, schopných hydrolyzovať substrát s vysokou molekulovou hmotnosťou. Analýza sa vykonáva veľmi rýchlo, jedno stanovenie si vyžaduje 1 minútu. Citlivosť metódy je pomerne vysoká. Môže sa použiť na stanovenie látky na úrovni pikomolov.
Heterogénne metódy sú charakterizované analýzou v dvojfázovom systéme s účasťou pevnej nosnej fázy a povinným stupňom separácie imunitných komplexov od nezreagovaných zložiek (premývanie), ktoré sú v rôznych fázach (vytvorené imunitné komplexy sú na tuhá fáza a nezreagované komplexy sú v roztoku). Heterogénne metódy, pri ktorých dochádza k tvorbe imunitných komplexov v prvom štádiu na pevnej fáze, sa nazývajú metódy na pevnej fáze.
Metódy sa klasifikujú ako homogénne-heterogénne, ak 1. stupeň - tvorba špecifických komplexov nastáva v roztoku a potom sa na oddelenie zložiek použije tuhá fáza s imobilizovaným činidlom.
3. Podľa princípu stanovenia testovanej látky:
A) Priame určenie koncentrácie látky (antigénu alebo protilátky) podľa počtu väzobných miest, ktoré s ňou interagujú. V tomto prípade bude enzýmová značka umiestnená vo vytvorenom špecifickom komplexe AG-AT. Koncentrácia analytu bude priamo úmerná zaznamenanému signálu.
B) Stanovenie koncentrácie látky rozdielom celkového počtu väzobných miest a zostávajúcich voľných väzbových miest. V tomto prípade sa koncentrácia analytu zvýši a zaznamenaný signál sa zníži, preto v tomto prípade existuje inverzný vzťah s veľkosťou zaznamenaného signálu.
5.2 Charakteristiky komponentov používaných v ELISA.
Enzýmy.
Enzýmové značky majú mimoriadne silný katalytický účinok, jedna molekula enzýmu môže reagovať s veľkým počtom molekúl substrátu. Enzým prítomný v nepatrných množstvách teda možno identifikovať a kvantifikovať tvorbou produktov a reakciou, ktorú katalyzuje. Ďalšia výhoda použitia enzýmov ako značiek je spôsobená prítomnosťou mnohých funkčných skupín v molekule (sulfhydrylové, karboxylové, tyrazínové zvyšky atď.), prostredníctvom ktorých môžu byť molekuly ligandu kovalentne pripojené.
Enzýmové markery používané v ELISA musia mať nasledujúce vlastnosti:
– vysoká aktivita a stabilita enzýmu v analytických podmienkach, keď je modifikovaný a v konjugáte s protilátkami alebo inými proteínmi;
– prítomnosť citlivých substrátov a jednoduchosť metódy stanovenia produktov alebo substrátov enzymatickej reakcie;
– schopnosť prispôsobiť systémy substrátov ďalšiemu spevneniu;
– neprítomnosť enzýmu a jeho inhibítorov v skúmanej biologickej tekutine.
V ELISA sa môže použiť najmenej 15 rôznych enzýmov. Najpoužívanejšie sú v súlade s vyššie uvedenými požiadavkami chrenová peroxidáza (HRP), alkalická fosfatáza (ALP) a β-D-galaktozidáza. Všetky tri sú stabilné a katalyzujú vysoko citlivé reakcie. Okrem toho, produkty, ktoré sú výsledkom reakcií katalyzovaných týmito enzýmami, v závislosti od použitého substrátu, môžu byť detegované nielen kolorimetrickými metódami, ale aj fluorescenčnými metódami. Ostatné enzýmy sa používajú oveľa menej často. Vysvetľuje to ich nižšia špecifická aktivita v porovnaní s PC a AP.
Substráty.
Výber substrátu je primárne určený enzýmom použitým ako značka, pretože reakcia enzým-substrát je vysoko špecifická.
Základné požiadavky na podklad:
– zabezpečenie vysokej citlivosti metódy pri detekcii enzýmu v konjugáte;
– tvorba dobre rozpoznateľných (napríklad farebných) produktov reakcie enzým-substrát;
– substrát musí byť bezpečný, lacný, prístupný a vhodný na použitie.
Častejšie sa používajú chromogénne substráty, ktoré po zničení vytvárajú farebnú látku. Sľubné je použitie vysokoenergetických substrátov – fluorescenčných, chemiluminiscenčných. Použitie takýchto substrátov umožňuje teoreticky zvýšiť citlivosť ELISA o dva rády.
Tvorba konjugátu.
Konjugát je antigén alebo protilátka značená enzýmovou značkou. Tvorba konjugátu je jedným z dôležitých štádií testu ELISA.
Pri tvorbe konjugátu sa zvolí optimálny spôsob zavedenia enzýmovej značky tak, aby si obe zložky konjugátu zachovali svoju biologickú aktivitu: enzým - schopnosť interagovať so substrátom a antigén alebo protilátka - antigénnosť a väzbová aktivita antigénu. , resp. Prítomnosť značeného, vysoko purifikovaného antigénu umožňuje použitie kompetitívnych metód. V tomto prípade je v konečnom štádiu možné merať aktivitu konjugátu, ktorý nie je spojený s imobilizovanými protilátkami, čím sa vyhne premývaciemu postupu a analýza je pohodlnejšia. Antigény sa však líšia svojimi fyzikálno-chemickými vlastnosťami a štruktúrou, čo znamená, že nie je možné vyvinúť univerzálne metódy na získanie konjugátu s antigénom. V tomto prípade je získanie konjugátu antigén-enzým samostatnou komplexnou úlohou. Príprava značených protilátok pre ELISA je metodicky dostupnejšia.
Konjugácia enzýmu s imunochemicky aktívnymi proteínmi sa uskutočňuje rôznymi metódami: chemickým zosieťovaním, kovalentnou väzbou molekuly enzýmu na Ag alebo AT a tvorbou zlúčenín prostredníctvom nekovalentných väzieb, napríklad pri spojení medzi enzýmom a Ag alebo AT sa uskutočňuje imunologicky prostredníctvom interakcie antigén-protilátka.
Najpoužívanejšie sú kovalentné metódy na prípravu konjugátov. Voľba väzbovej reakcie je určená typom funkčných skupín dostupných v daných proteínových molekulách. Glutaraldehyd, jodistan sodný atď. sa používajú ako činidlá používané na zavedenie enzýmu do molekúl antigénu a protilátky.
Existujú jednostupňové a dvojstupňové metódy na získanie konjugátov pomocou glutaraldehydu. Môžu sa vytvárať konjugáty rôznych veľkostí so zníženou enzymatickou aktivitou (15 - 60 % voľného enzýmu). Výsledný konjugát veľkej veľkosti môže stéricky brániť stanoveniu testovanej látky. Konjugáty s relatívne nízkou molekulovou hmotnosťou pozostávajú z fragmentu Fab a jednej molekuly enzýmu.
Výsledkom dvojstupňovej syntézy, ktorá pozostáva z postupnej produkcie enzýmu najprv modifikovaného sieťovacím činidlom, jeho izolácie a následnej interakcie s antigénom (protilátkou), sa molekuly vytvorí sa homogénna kompozícia obsahujúca 1 až 2 molekuly enzýmu na molekulu imunoglobulínu a zachováva si vysokú enzymatickú a imunologickú aktivitu. Počet takýchto vytvorených konjugátov je však malý (pre chrenovú peroxidázu je to 5–10 %).
Najväčšie praktické uplatnenie našiel spôsob získavania imunoperoxidázových konjugátov, založený na oxidácii sacharidovej zložky enzýmu jodistanom sodným (naviazanie peroxidázy do konjugátu dosahuje 70-90 % pôvodného množstva enzýmu).
Spoľahlivý konjugát musí mať nasledujúce vlastnosti:
Vysoká sila protilátky a vysoká afinita k antigénu, takže sa môže použiť vo vysokom riedení a tým znížiť nešpecifickú väzbu;
Dostatočná špecifickosť v pracovnom riedení;
Prevaha monomérnych foriem nad polymérnymi, pretože polymérne formy majú tendenciu nešpecificky priľnúť k plastu, čo vedie k vysokej úrovni reakcie;
Optimálny molárny pomer medzi enzýmom a protilátkami (optimálny pomer je asi 1:1);
Dostatočná enzymatická aktivita konjugátu. Táto vlastnosť je určená najmä podmienkami konjugácie a pomerom molekúl enzýmu a protilátok v konjugáte.
5.3 Heterogénne metódy ELISA.
Heterogénne ELISA (alebo ELISA na pevnej fáze) zahŕňajú metódy, v ktorých je analyt prítomný v dvoch fázach. Na oddelenie zložiek imunochemickej reakcie sa používa tuhá fáza (nerozpustný nosič, zvyčajne plast) s protilátkami alebo antigénom, ktoré sú na nej imobilizované, ktorá sa v každom štádiu premyje, aby sa odstránili medziprodukty a nezreagované zložky.
Imobilizácia sa môže uskutočniť kovalentnou väzbou protilátok (antigénov) na aktivovaný nosič pomocou chemických prístupov, ako aj fyzikálnou adsorpciou protilátok (antigénov) na povrchu pevných polymérov (napríklad polystyrénových platní). V zahraničnej literatúre sa tento smer nazýva ELISA test alebo enzyme-linked immunosorbent assay.
Nekompetitívna ELISA na stanovenie antigénov s použitím príkladu použitia enzýmom značených špecifických protilátok a imobilizovaných protilátok.
Roztok obsahujúci analyzovaný antigén sa pridá k nosiču s imobilizovanými protilátkami. Počas inkubačného procesu sa vytvorí špecifický komplex antigén-protilátka. Potom sa nosič vymyje od nenaviazaných antigénov a pridajú sa značené protilátky – konjugát. V tomto prípade je množstvo naviazaného konjugátu priamo úmerné množstvu antigénu v testovanej vzorke. Po sekundárnej inkubácii a odstránení prebytočného konjugátu sa pridá chromogénny substrát pre použitý enzým, ktorý pôsobením enzýmu zmení farbu, t.j. dôjde k enzymatickej reakcii so zafarbením roztoku v jamkách. Stupeň zafarbenia je priamo úmerný množstvu špecifických protilátok značených enzýmom, enzýmom a podľa toho aj študovaným antigénom. Merania optickej hustoty roztoku v jamkách pri určitej vlnovej dĺžke (v závislosti od použitého substrátu) sa vykonávajú pomocou špeciálnych spektrofotometrov prispôsobených pre čítačky mikrodoštičiek. Kvantitatívne hodnotenie koncentrácie antigénu vo vzorke sa stanoví porovnaním výsledkov s kalibračnou krivkou závislosti optickej hustoty roztoku od koncentrácie štandardného roztoku antigénu.
Obrázok 7.
Keďže v štádiu identifikácie špecifického imunokomplexu je antigén asociovaný s molekulami imobilizovaných a značených protilátok, v literatúre sa táto metóda často nazýva „sendvičová“ metóda (z anglického sandvich) alebo metóda dvojmiestneho ELISA (z r. anglický dvojmiestny test).
Táto metóda sa môže použiť na analýzu len tých antigénov, ktoré majú na svojom povrchu aspoň dva antigénne determinanty. Je neprijateľné pre analýzu veľkého počtu monovalentných antigénov (liečivých zlúčenín, pesticídov atď.).
Hlavnou výhodou tejto metódy je jej vysoká citlivosť. Detekčný limit zlúčenín touto metódou v súčasnosti dosahuje hodnotu okolo 10-21 mol, čo zodpovedá detekcii iba 600 molekúl analytu vo vzorke. Maximálna citlivosť sa dosiahne, keď sa každá imunologická reakcia uskutoční v rovnováhe, čo ovplyvňuje trvanie analýzy, ktoré je v priemere 4–6 hodín. Nekompetitívna ELISA na stanovenie protilátok na príklade použitia enzýmom značených sekundárnych protilátok a imobilizovaných antigénov.
Testované sérum sa pridá k imobilizovanému antigénu. Po inkubácii a premytí nenaviazaných protilátok sa pridajú značené sekundárne protilátky, ktoré sú špecifické pre analyzované protilátky. Po sekundárnej inkubácii a odstránení nadbytku značených sekundárnych protilátok je obsah enzýmovej značky na nosiči úmerný koncentrácii špecifických protilátok v sére.
Táto schéma je jednou z najbežnejších ELISA na detekciu protilátok, pretože umožňuje detekciu protilátok proti rôznym antigénom.
Heterogénna kompetitívna ELISA na stanovenie antigénu na príklade použitia značeného antigénu a imobilizovaných protilátok.
K protilátkam imobilizovaným na nosiči sa pridá roztok obsahujúci analyzovaný antigén a fixná koncentrácia konjugátu antigén-enzým. Po inkubácii sa nosič premyje z nenaviazaného voľného a označeného antigénu a zaznamená sa enzymatická aktivita na nosiči, ktorá je nepriamo úmerná koncentrácii stanovovaného antigénu.
5.4 Homogénna metóda ELISA.
Homogénny enzýmový imunotest (HELISA) je metodologicky najjednoduchším typom ELISA. Pri jej realizácii sa jeden z účastníkov imunitnej reakcie (zvyčajne nízkomolekulový antigén) označí enzýmom a sleduje sa postup tvorby komplexu antigén-protilátka, pričom sa zaznamenávajú zmeny v aktivite enzýmu.
K takémuto narušeniu enzymatickej aktivity môže dôjsť buď v dôsledku priestorovej separácie enzýmu a substrátu, alebo v dôsledku konformačných zmien v molekule enzýmu, ktoré sprevádzajú tvorbu imunitného komplexu. HIFA má oproti iným imunochemickým metódam množstvo významných výhod. Po prvé, vysoká expresia (celá analýza pomocou HIFA trvá minúty alebo dokonca zlomky minút).
Ryža.8 Možnosti homogénneho enzýmového imunotestu(A - účinok separácie enzýmu (F) a substrátu (C) v dôsledku stérických prekážok počas interakcie antigénu (Ag) a protilátky (Ab); B - účinok zmeny konformácie enzým počas tvorby komplexu antigén-protilátka).
Po druhé, spôsob je jednokrokový a nevyžaduje prácne a časovo náročné premývacie kroky. A nakoniec, po tretie, metóda vyžaduje minimálne objemy (8-50 μl) a množstvá biologickej alebo klinickej vzorky. Metóda HIFA má však jednu mimoriadne významnú nevýhodu - na jej základe je možné vytvárať diagnostické testovacie systémy len pre nízkomolekulové antigény. Len v tomto prípade môže protilátka interagujúca s antigénom účinne tieniť alebo modifikovať molekulu enzýmu spojenú s týmto antigénom. Práve v tomto smere (napriek zjavnej jednoduchosti a zjavným výhodám oproti iným metódam boli vytvorené diagnostické nástroje založené na HIFA na detekciu iba hormónov, peptidov, liečivých a narkotických látok a niektorých nízkomolekulárnych proteínov.
5.5 „Sendvič“ – variant ELISA na detekciu antigénov.
Antigény detegované pomocou tohto variantu ELISA musia mať viacero epitopov schopných viazať protilátky alebo musia mať opakujúce sa, priestorovo oddelené epitopy s rovnakou špecifickosťou.
Pri vykonávaní tejto verzie testu ELISA sa vysoko špecifické poly- alebo monoklonálne protilátky adsorbované na pevnej fáze inkubujú s testovanou vzorkou. Po premývacom postupe sa do jamiek pridajú enzýmom značené protilátky (konjugát) k rovnakému antigénu a potom sa uskutočnia všetky ostatné stupne reakcie. Účinnosť tvorby špecifického komplexu v každom štádiu analýzy závisí od väzbovej konštanty reakcie antigén-protilátka.
Účelom krvného testu na syfilis je identifikovať protilátky, ktoré by telo mohlo produkovať v boji proti jeho pôvodcovi, Treponema pallidum.
Falošne pozitívny test na syfilis sa môže vyskytnúť v prípadoch, keď k produkcii antigénov došlo z iných dôvodov.
Falošne pozitívny syfilis je diagnostikovaný v 10% prípadov.
Keďže test na syfilis sa predpisuje nielen vtedy, keď má pacient sťažnosti, ale aj počas lekárskej prehliadky, pred zamestnaním, počas tehotenstva, pred hospitalizáciou, existuje vysoké percento infekcie u ľudí, ktorí ani nemali podozrenie na prítomnosť takejto choroby. .
Na odstránenie chýb je potrebné zabezpečiť spoľahlivosť získaných výsledkov.
Pozitívne výsledky pre syfilis sú rozdelené do dvoch skupín: akútne a chronické. Akútny falošne pozitívny výsledok sa objaví do 6 mesiacov od pravidelného testovania.
- akútne infekčné poruchy;
- zranenia;
- akékoľvek očkovanie 1-7 dní pred odberom vzoriek;
- akútnej otravy.
V prítomnosti niektorého z faktorov v organizme sa aktivuje proces tvorby protilátok, čo sa odráža vo výsledkoch testov.
Ak existujú chronické problémy, test môže vykazovať chybné výsledky po dobu 6 mesiacov alebo dlhšie.
- poruchy spojivového tkaniva;
- akákoľvek forma tuberkulózy;
- chronické poruchy pečene;
- HIV, hepatitída B, C, D a iné vírusové ochorenia;
- autoimunitné procesy v tele.
Výsledok sa stáva chybným v dôsledku systematickej produkcie nešpecifických protilátok v reakcii na jednu z uvedených porúch.
Čo robiť, ak sa zistí falošný syfilis
Ak chcete zistiť, či test na syfilis môže byť chybný, musíte vyhodnotiť prítomnosť iných faktorov prejavu ochorenia a pravdepodobnosti infekcie.
Treponema pallidum je patogén, ktorý sa pri kontakte s infikovanou osobou prenáša pohlavným stykom cez sliznice pohlavných orgánov, úst a konečníka. Možný je aj prenos z infikovanej matky na jej dieťa.
Inkubačná doba, počas ktorej sa choroba neprejaví, je 2-6 týždňov. Potom sa na miestach možnej infekcie tvoria syfilitické vredy s hustou základňou.
Po 1-2 týždňoch sa lymfatické uzliny najbližšie k miestu lézie zväčšujú a sú bolestivé.
Pri diagnostikovaní falošne pozitívneho syfilisu sa musíte vrátiť do zdravotníckeho zariadenia. Zároveň informujte o všetkých liekoch, ktoré ste užili v predvečer testu, chronických a akútnych ochoreniach.
Ak ste mali nechránený sex s nevyskúšaným partnerom alebo ste objavili prvé príznaky ochorenia, mali by ste o tom povedať svojmu lekárovi.
Po zhromaždení anamnézy a vykonaní vyšetrenia vám lekár predpíše sériu testov, ktoré vám umožnia určiť presný výsledok s chybou menšou ako 1%.
Typy testov na syfilis
Existujú dva typy testov: non-treponemal a treponemal. Prvá možnosť zahŕňa použitie umelých analógov Treponema pallidum, v druhom prípade sa používajú skutočné treponémy.
Netreponemálne metódy
Takéto techniky sú rozšírené a najčastejšie sa používajú pri bežných lekárskych vyšetreniach.
Výhodou je nízka cena, rýchle výsledky a možnosť výskumu pomocou štandardného laboratórneho vybavenia.
Analýza na RW
Na jeho vykonanie sa pacientovi odoberie krv a menej často cerebrospinálny mok. Krv možno odobrať z prsta alebo zo žily. Chyba pri vykonávaní takejto štúdie môže byť až 7 %.
Mikroreakcia zrážania (MR alebo RMP)
Môže zahŕňať dva typy testov na syfilis RPR a VDRL. V dôsledku rozpadu buniek pod vplyvom treponému vznikajú antilipidové protilátky.
Lipidy môžu byť zničené pod vplyvom iných porúch, takže miera chyby pri vykonávaní VDRL a RPR je 1-3%.
Treponemálne testy
Takéto štúdie sa nevykonávajú na všetkých klinikách a vyžadujú si drahé vybavenie.
Preto sa používajú pri podozrení na prítomnosť ochorenia na základe výsledkov netreponémových testov. Chyba takýchto štúdií je menšia ako 1 %.
Umožňuje určiť antigény a protilátky. Na určenie výsledku pacient daruje krv z prsta alebo žily. Výsledkom je, že testovanie tiež pomáha určiť štádium ochorenia.
RPGA test na syfilis vám umožňuje určiť percento adhézie červených krviniek. Presný výsledok pasívnej hemaglutinačnej reakcie možno získať na 28. deň po infekcii.
Enzýmová imunoanalýza určuje prítomnosť a štádium ochorenia na základe hladiny imunoglobulínov rôznych typov.
Najpresnejší test na detekciu patogénnej DNA. Používa sa v zriedkavých prípadoch, pretože vyžaduje komplexné činidlá.
Pravdepodobnosť chyby testov RIF, RPGA, ELISA je menšia ako 1 %. Pri PCR môže byť chyba 0 – 1 %.
Pozitívny výsledok na syfilis u tehotných žien
U tehotných žien je možné pozorovať chybný výsledok v 1,5% prípadov pri vykonávaní netreponémových testov. Analýza tohto typu ochorenia je povinná počas tehotenstva.
Prvý test na syfilis sa vykonáva v 12. týždni, potom v 30. týždni a pred narodením. Výsledok môže byť falošný v dôsledku prirodzených zmien v tele, a najmä imunity na ochranu rastúceho plodu.
Preto počas tehotenstva môže byť predpísaný opakovaný test, ktorý sa často predpisuje, aj keď sú prvé výsledky negatívne, ak existuje rizikový faktor.
Môžu byť predpísané aj treponémové testy, pretože v prípade potvrdenia diagnózy je účinok ochorenia na telo dieťaťa deštruktívnejší ako liečba antibiotikami.
Slabý pozitívny test
Ak výsledkový formulár, ktorý dostanete, obsahuje 1-2 plusy, môže to znamenať prítomnosť malého množstva protilátok. Tieto výsledky sa môžu vyskytnúť v niekoľkých prípadoch:
- nedokončená inkubačná doba;
- neskorá forma, po 2-4 rokoch;
- zvyškové protilátky po liečbe ochorenia.
V tomto prípade je potrebná opakovaná kontrola po 2 týždňoch.
Ako sa správne pripraviť na testy
Ak bol vykonaný chybný test na syfilis, bude vám poskytnutý opakovaný test. Aby boli jeho výsledky čo najpresnejšie, je potrebné sa poriadne pripraviť.
- Pred analýzou môžete piť iba vodu, jesť je zakázané;
- vzdať sa alkoholu a fajčenia 1 hodinu pred 24 hodinami;
- ak darujete krv zo žily, strávte pred tým 10 minút v pokoji;
- Ak sa infekčné ochorenia zhoršili, dochádza k menštruácii alebo bol pacient deň predtým vystavený röntgenovému žiareniu, krvný test na syfilis sa nevykonáva.
Na zozname kontraindikácií je aj množstvo liekov, preto ak podstupujete liečbu, informujte svojho lekára o liekoch, ktoré užívate.
Ak sa ochorenie potvrdí
Ak je po vykonaní niekoľkých kontrol vrátane treponémových testov výsledok pozitívny, stojí za to prijať niekoľko opatrení:
- informujte o tom svojho sexuálneho partnera, je potrebné, aby sa aj on podrobil vyšetreniu;
- blízki príbuzní sa musia podrobiť vyšetreniu;
- je potrebné vykonať preventívnu liečbu blízkych;
- Počas celého priebehu liečby je potrebné vystaviť potvrdenie o práceneschopnosti a vyhnúť sa úzkemu kontaktu s inými ľuďmi, aby nedošlo k prenosu infekcie;
- Na konci liečby sa vydá osvedčenie, ktoré musí byť priložené k lekárskej dokumentácii a poskytnuté pri vykonávaní testov na protilátky, aby diagnostiki nemali otázky o výskyte antigénov vo výsledkoch.
Pri stanovení diagnózy sú informácie dôverné. Nezverejňuje sa vo všetkých dokumentoch vydávaných nemocnicou, ľudia, ktorí nie sú v blízkom kontakte s pacientom, nie sú o tejto diagnóze informovaní.
Po liečbe je pacient syfilisom v úplnom bezpečí, nemôže byť dôvodom na odopretie zamestnania alebo výkonu iných ľudských práv.
Ak je diagnóza potvrdená v počiatočných štádiách, potom je pravdepodobnosť úplného vyliečenia 100%. Treponema pallidum je jednou z mála, ktorá si počas mnohých rokov liečby pacientov penicilínom nevyvinula ochranu proti nej.
Preto sú pacienti liečení liekmi na báze derivátov penicilínu. Ak dôjde k primárnej forme ochorenia, je potrebné do 3 mesiacov diagnostikovať a liečiť všetkých sexuálnych partnerov, ktorých mal infikovaný.
Syfilis po liečbe počiatočného štádia nezanecháva komplikácie. Choroba môže viesť k invalidite, ak je chronická alebo ak je v maternici infekcia.
pozitívne na syfilis
Otázky a odpovede na tému: ifa pozitívny na syfilis
Otázka pre Dr. Sukhova Yu.A.
Ahoj. Už som vám veľmi stručne položil otázku na stránke Zdravie Ukrajiny. Úplne napíšem svoj príbeh. Prosím poraďte. Aké ďalšie vyšetrenia je potrebné absolvovať?
Pred 2 rokmi bol otvorený náhodný sexuálny kontakt.
Po 1,5 mesiaci začala nejaká hrôza: dlhotrvajúca horúčka, v oblasti štítnej žľazy akoby prebiehala nejaká práca, niečo bzučalo, potom bolesti hlavy, hrdla, silné bolesti kostí a svalov, najskôr bodanie. v prírode potom ako vriaca voda pretekajúca svalmi, nevoľnosť, jednorazová vyrážka, časté akútne respiračné vírusové infekcie, ktoré dlhodobo nereagujú na liečbu, dýchavičnosť, ťažkosti s dýchaním, zápach z úst, neuralgia, nočné potenie, ťažká slabosť, znížená výkonnosť. Takmer som sa zmenil na mŕtvolu. Predtým som bola zdravé a prosperujúce dievča, profesionálne som tancovala, fyzicky som bola dosť odolná a aktívna. Prakticky vôbec som netrpel nádchou, bol som prakticky zdravý.
1 rok a 10 mesiacov po nechránenom pohlavnom styku som mal negatívny test na HIV v 2 rôznych laboratóriách ELISA.
Hepatitída B a C negatívna.
EBV PCR negatívny
CMV PCR negatívny
Herpes vírus typu 6 negatívny
Toxoplazmóza PCR negatívna
Syfilis negatívny
STI negatívne.
Všeobecný krvný test: ESR 30; zvyšok je normálny.
Biochemia je pozitivna CRP, ostatne je v norme.
Čo mám robiť? Som zúfalá, už som testovala na všetky infekcie, ale dôvod sa nenašiel. Od kontaktu už uplynuli 2 roky. Niektoré príznaky odzneli, ale cítim sa veľmi zle, ťažká slabosť, neustála neuralgia, potenie v oblasti hrudníka v noci nechápem, na čo mi je zle som si istý, že ma tento mladý muž nakazil, už som ho nikdy nevidel. Pomoc. Prosim poradte co robit?
Ahoj!
Mám 31 rokov a 35 týždňov tehotenstva. Pred 2 mesiacmi som darovala krv na infekcie metódou ELISA (pretože som skončila so zvracaním na infekčnom oddelení, kde mi robili test), môj gynekológ ma nenasmeroval darovať krv na infekcie v ranom štádiu tehotenstva. (čo sa mi zdá divné, hoci krv sa vyšetruje na AIDS a syfilis tri krát v tehotenstve, všetko negatívne). Teraz som bol informovaný o výsledkoch. Komentujte prosím. Niektoré indikátory sú alarmujúce, ako napríklad vírus osýpok, CMV, herpes HSV 1/2, infekcia vírusom Epstein-Barrovej (EBV):
Rubeola Ig G K = 2,0
CMV Ig G K = 4,1
Herpes HSV Ig G typ 1 K=3,4, typ 2 negatívny.
Epstein-Barr VCA K=4,7 NA —
chlamýdie a mykoplazmy - negatívne.
Môj smer uvádza nasledovné:
Koeficient pozitivity K = optická hustota vzorky. Ak je K menšie ako 0,9, výsledok je negatívny, ak je K od 0,9 do 1,1, je pochybné, ak je K väčšie ako 1,1, je pozitívny.
Hodnoty Ig G, EBV, NA do 55 jednotiek/ml môžu byť normálne, nad touto hodnotou je výsledok pozitívny.
Prosím komentuj! Ďakujem za pozornosť!
Dekódovanie výsledkov testov na syfilis
Syfilis je závažné, vysoko nákazlivé ochorenie. Na identifikáciu ochorenia sa používajú krvné testy (venózne a kapilárne) av niektorých prípadoch sa vyšetruje cerebrospinálny mok. Interpretáciu testu na syfilis vykonáva ošetrujúci lekár. Pacient môže nezávisle vidieť a pochopiť niektoré symboly v analýze, ale konečný záver o prítomnosti alebo neprítomnosti choroby musí urobiť kvalifikovaný lekár. Je možný falošne pozitívny alebo falošne negatívny test na syfilis.
Kedy navštíviť lekára
Po dlhú dobu bol syfilis nebezpečným ochorením, ktoré sa nedalo vyliečiť. Moderná medicína má všetky prostriedky na úplné vyliečenie choroby. Čím skôr je choroba diagnostikovaná a zistená, tým ľahšie bude jej liečba. Infekcia syfilisom sa vyskytuje nielen sexuálnym kontaktom, ale aj zdieľaním rovnakých domácich potrieb s pacientom (zubná kefka, uterák, kuchynský riad atď.). Preto sa pre každú osobu odporúčajú pravidelné expresné krvné testy na syfilis.
Pri infekcii sa lymfatické uzliny v oblasti slabín zväčšia, v ústach a v oblasti genitálií sa objavia vredy a kožné vyrážky. Ak spozorujete prvé príznaky choroby, mali by ste sa okamžite poradiť s lekárom. Vyšetrenie môže byť anonymné s odporúčaním gynekológa, urológa, proktológa, venerológa alebo bežného terapeuta. Po absolvovaní testu by ste sa mali obrátiť na svojho lekára, ktorý vám poskytne prepis testu na syfilis.
Účel vyšetrenia
Často počas lekárskych vyšetrení môže lekár nariadiť veľa laboratórnych testov vrátane testu na syfilis. Toto odporúčanie by sa nemalo brať ako podozrenie z choroby. V mnohých oblastiach verejného života sa vyžaduje potvrdenie o neprítomnosti choroby.
- Rodinné plánovanie
- Registrácia do hostela
- Prístup na pracovisko pre zdravotníckych pracovníkov, stravovací personál a pod.
- Darovanie orgánov alebo krvi
- Pacienti, ktorí sú sexuálne aktívni
- Prítomnosť klinických príznakov
- Koniec liečby syfilisu
Ako primárna štúdia je spravidla predpísaný jeden z nešpecifických (netreponémových) testov. Spoľahlivosť takýchto testov je relatívne nízka a pacient môže dostať falošne pozitívny výsledok. V tomto prípade bude predpísaná opakovaná štúdia s použitím špecifického (treponemálneho) testu. Pozitívny alebo negatívny test musí skontrolovať ošetrujúci lekár.
Príprava na test
Pred darovaním krvi z prsta alebo žily na laboratórne vyšetrenie musíte dodržiavať niektoré pravidlá, aby bola analýza čo najspoľahlivejšia. 8-12 hodín pred odberom krvi by ste nemali konzumovať jedlo, čaj ani kávu. Počas dňa pred návštevou laboratória sa neodporúča jesť korenené, mastné, vyprážané, slané alebo údené jedlá. Antibiotiká a iné lieky môžu tiež interferovať s testom. Všetky prijaté látky je potrebné oznámiť svojmu lekárovi. Môže vám odporučiť, aby ste sa zdržali testu na 1 alebo niekoľko týždňov. Vzorku krvi je možné odobrať v súkromnom laboratóriu, na okresnej klinike alebo si môžete zavolať zdravotníka k sebe domov.
V každom prípade sa používajú sterilné pomôcky a jednorazové rukavice.
Rýchly test na syfilis je možné vykonať nezávisle doma. Lekárne ponúkajú špeciálne testy s podrobnými pokynmi v ruštine. Výsledok testu je známy do 10 minút. Jeden červený pásik na indikátore je negatívny test na syfilis, dva pásiky sú pozitívne. Spoľahlivosť takýchto testov nie je dostatočne vysoká a nemôže slúžiť ako potvrdenie diagnózy.
Ako pochopiť výsledok nešpecifického vyšetrenia
Pacienti sa po teste často cítia neistí. Darovať krv a nemôcť sami dešifrovať testy na syfilis je, samozrejme, nepríjemné. Dešifrovanie krvného testu si vyžaduje lekárske vzdelanie a primeranú kvalifikáciu lekára, ako aj zohľadnenie všetkých faktorov ovplyvňujúcich výsledok. Môže si pacient sám prečítať výsledky svojho testu na syfilis? Po prezretí laboratórnej správy môžete vyvodiť jednoduché závery, ale lekár musí diagnózu potvrdiť alebo vyvrátiť.
Test na toluidínovú červenú nie je predpísaný na diagnostiku, ale na kontrolu účinnosti liečby ochorenia. štúdia ukazuje, ako veľmi sa zmenil počet protilátok v porovnaní s predchádzajúcou analýzou. Ak sa počet znížil, potom je liečba úspešná. Analýza sa vykonáva niekoľkokrát počas liečby podľa predpisu lekára. 3 mesiace po ukončení postupov sa vykoná kontrolné testovanie.
Netreponemálne testy (RSKk, RMP a RPR) sa často predpisujú počas lekárskych vyšetrení a ako rýchla diagnóza. Existuje niekoľko možností označenia ako výsledok výskumu. Ich dešifrovanie je pomerne jednoduché:
- "-" negatívny výsledok
- „+“, „1+“) alebo „++“, „2+“ slabo pozitívna analýza
- „+++“, „3+“ alebo „++++“, „4+“ pozitívny test na syfilis
Buď výsledok môže byť falošne pozitívny alebo falošne negatívny na syfilis. Pri absencii klinických príznakov a náhodného sexuálneho kontaktu môže lekár akceptovať negatívny výsledok ako správny. Pozitívna reakcia sa zvyčajne testuje pomocou treponémového testu.
Výsledky konkrétnej štúdie
Treponemálne testy sú zložité a drahé v porovnaní s netreponemálnymi testami. Na diagnostiku syfilisu sa používa niekoľko typov testov: RSCT, RIBT, RIF, RPGA, ELISA a imunoblotting). Jednou z presných špecifických štúdií je analýza RIBT. Výsledok testu môže laboratórium oznámiť v percentách.
- 20 % zodpovedá negatívnemu výsledku („–“)
- 21 – 30 % pochybná analýza („++“ alebo „2+“)
- 31 – 50 % slabo pozitívnych („+++“, „3+“)
- 51 % alebo viac zodpovedá pozitívnemu výsledku
Imunoblotting je jedným z moderných a presných spôsobov diagnostiky ochorenia. Zvyčajne sa predpisuje na potvrdenie alebo vyvrátenie výsledkov prvej štúdie. Detekcia protilátok IgG a IgM v krvi je označená pruhmi. Výsledky testu sa interpretujú v porovnaní s netreponemálnym testom.
Ak sú oba výsledky negatívne, pacient je zdravý alebo je infekcia v prvom týždni vývoja. Oba pozitívne výsledky poukazujú na prítomnosť syfilisu alebo iného, možno autoimunitného ochorenia.
Pozitívny imunoblotový test po negatívnej netreponemálnej štúdii naznačuje prítomnosť syfilisu, autoimunitného ochorenia alebo rakoviny.
U tehotných žien môže byť pozitívna reakcia. Negatívny imunoblotový test po pozitívnej netreponemálnej štúdii znamená absenciu ochorenia.
Spoľahlivosť analýz
Vždy existuje možnosť, že výsledok testu je nesprávny. Pri interpretácii testov na syfilis je potrebné venovať osobitnú pozornosť vonkajším faktorom, ktoré pacient nemôže ovplyvniť. Pomýliť sa môže aj laborant vykonávajúci výskum alebo pacient, keď sa na odber krvi nesprávne pripravili alebo o sebe neposkytli lekárovi pravdivé informácie. Falošne pozitívny výsledok je možný pod vplyvom nasledujúcich faktorov:
- Diabetes akéhokoľvek typu
- Prítomnosť drog v krvi
- Intoxikácia alkoholom
- Infekčné choroby (osýpky, hepatitída, mononukleóza atď.)
- Benígne alebo malígne novotvary
- Choroby srdca
- Užívanie antibiotík alebo nedávne očkovanie
- Autoimunitné ochorenia (lupus erythematosus, reumatoidná artritída atď.)
- Tehotenstvo
- Jedenie mastných, korenených alebo slaných jedál počas dňa pred odberom krvi
V závislosti od štádia ochorenia niektoré testy nemusia ochorenie odhaliť. Wassermanova reakcia (RSKt a RSKk) sa teda uskutočňuje iba 3-4 týždne po možnej infekcii s pravdepodobnosťou 100% v prítomnosti terciárneho syfilisu, spoľahlivosť bude iba 75%. Na diagnostiku skorých štádií ochorenia je vhodné použiť test ELISA. Test je enzýmový imunotest s vysokou citlivosťou na protilátky. Spoľahlivosť výsledku je takmer 100%; falošne pozitívny výsledok v prítomnosti iných ochorení je vylúčený.
Negatívne výsledky testov na sexuálne prenosné choroby znamenajú, že osoba je zdravá. Pochybný test na syfilis povedie k opätovnému vyšetreniu. Ak existujú faktory, ktoré by mohli ovplyvniť konečný záver, napríklad prítomnosť iných ochorení, lekár zmení parametre testu. Pozitívny výsledok testu na syfilis nie je rozsudkom smrti ani dôvodom na paniku. Pomocou liekov je možné ochorenie úplne vyliečiť. Malo by sa však pamätať na to, že choroby v počiatočnom štádiu sú oveľa lepšie liečiteľné.
ELISA na syfilis: metóda analýzy, interpretácia, dôvody falošne pozitívnych výsledkov
Zoznam štandardných diagnostických opatrení používaných pri infekčných ochoreniach zahŕňa enzýmový imunotest. Ak je test ELISA pozitívny na syfilis, neprepadajte okamžite panike.
Pozrime sa bližšie na vlastnosti tejto výskumnej techniky a princípy interpretácie výsledkov získaných u rôznych kategórií pacientov.
Podstata štúdia
Enzýmová imunoanalýza je jednou z najbežnejších metód diagnostiky infekčných ochorení. Patrí do kategórie treponémových testov, to znamená, že sa môže použiť na stanovenie prítomnosti pôvodcu syfilisu - treponema pallidum - v tele pacienta.
Pomocou metódy ELISA sa syfilis zisťuje detekciou protilátok proti treponému. Sú obsiahnuté v krvi pacienta a ich druh a množstvo závisí od štádia a formy ochorenia, čo umožňuje získať dôležité informácie o aktuálnom zdravotnom stave človeka.
Výhody a nevýhody
ELISA sa veľmi často predpisuje pri podozrení na syfilis alebo iné infekčné ochorenia. Dôvodom je skutočnosť, že analýza nám umožňuje identifikovať presný typ a štádium choroby a jej spoľahlivosť zostáva na vysokej úrovni - pravdepodobnosť chyby na základe výsledkov viacerých štúdií je iba 1%, primárna ELISA má presnosť asi 90%.
Použitie vysokokvalitných činidiel a moderného vybavenia nám umožňuje maximalizovať presnosť indikátorov.
Vo všeobecnosti sú výhody metódy:
- Vysoká presnosť výsledkov. Pravdepodobnosť získania falošných údajov je veľmi nízka.
- Minimalizácia vplyvu ľudského faktora. Moderné vybavenie na vykonávanie ELISA eliminuje vplyv človeka na výsledky štúdie vďaka automatizácii procesu.
- Identifikácia špecifických protilátok. Nie je možné zamieňať antigény jedného typu s inými, takže analýza ukazuje presný výsledok pre konkrétnu diagnózu.
- Zaznamenávanie najmenších odchýlok od normy. Dokonca aj najmenšia koncentrácia patologických činiteľov nezostane bez povšimnutia.
Nemali by sme zabúdať na slabé stránky tejto metódy. ELISA má nasledujúce nevýhody:
- Vysoká cena. Vysoké náklady sú spôsobené mnohými faktormi, najmä potrebou dobrého vybavenia, vysokokvalitných činidiel a špecialistov s dostatočnou úrovňou školenia.
- Potreba predbežnej diagnózy. Musíte vedieť, ktoré antigény hľadať, pretože bez dodatočných údajov nebude možné stanoviť presnú diagnózu.
- Pravdepodobnosť falošne pozitívneho výsledku. Určité telesné podmienky a iné faktory môžu skresliť konečné údaje.
Indikácie na použitie
Lekár môže predpísať enzýmový imunotest na diagnostiku nielen syfilisu, ale aj mnohých iných infekčných ochorení.
Ak vezmeme do úvahy situáciu priamo s infekciou treponémom, dôvodom vyšetrenia môže byť:
- objavenie sa vonkajších príznakov ochorenia (chancres, syfilitická vyrážka, ďasná atď.);
- výrazné zníženie imunity;
- detekcia alebo podozrenie na syfilis u sexuálneho partnera, blízkych a rodinných príslušníkov;
- pozitívna reakcia počas iných testov;
- identifikácia iných chorôb, ktoré môžu byť spojené so syfilisom;
- osobné želanie osoby podstúpiť vyšetrenie.
Spôsoby vykonávania
ELISA sa môže uskutočniť rôznymi spôsobmi. V každom konkrétnom prípade sa vyberie najvhodnejšia možnosť.
V prvom rade existuje rozdelenie metód na:
- Kvalitatívne. V tele pacienta sa zistí prítomnosť infekcie alebo vírusu.
- Kvantitatívne. Určuje koncentráciu protilátok proti patogénnemu agens v ľudskom tele, čo naznačuje štádium a intenzitu vývoja ochorenia.
Existuje aj klasifikácia metód na vykonávanie ELISA na princípe reprodukovania požadovanej reakcie.
Sú 3 možnosti:
- Rovno. Označené protilátky sa vstreknú do poskytnutých vzoriek krvi.
- Nepriame s antigénmi. Sorbované antigény sa najskôr umiestnia do buniek polystyrénovej platne určenej na ELISA. Potom sa k nim pridávajú vírusové protilátky, čo vyvoláva tvorbu imunitných komplexov potrebných na ďalšie vyhodnotenie výsledkov.
- Nepriame s protilátkami. Táto metóda sa často používa pri pohlavne prenosných chorobách. Zahŕňa predbežnú absorpciu protilátok, až potom sa do tablety pridajú antigény.
Pravidlá zberu materiálu
Aby sa znížilo riziko získania nespoľahlivých výsledkov, je potrebné správne darovať krv na analýzu.
Pred vykonaním testu ELISA musíte dodržiavať niektoré obmedzenia:
- vyhnúť sa intenzívnemu fyzickému a emocionálnemu stresu;
- prestať fajčiť a piť alkohol aspoň 1-3 dni;
- na niekoľko dní musíte prejsť na správnu výživu;
- Je vhodné, aby ženy kontrolovali fázu menštruačného cyklu, pretože hormóny môžu skresliť výsledky;
- posledné jedlo by malo byť 8 - 10 hodín pred darovaním krvi;
- 10 dní pred užitím liekov, ktoré môžu ovplyvniť výsledky štúdie, sú vylúčené.
Pri ELISA sa venózna krv odoberá z ulnárnej žily, musí sa darovať ráno nalačno. Vo všeobecnosti platia štandardné pravidlá prípravy na odber žilovej krvi. V závislosti od prítomnosti, ktorá choroba sa testuje, môžu byť zavedené ďalšie požiadavky na predbežnú prípravu pacienta.
Metodológia
Pokyny na vykonanie testu ELISA sú pomerne jednoduché:
- Pacientovi sa odoberá krv zo žily.
- Odobratý materiál sa pripraví a rozdelí na vzorky na špeciálnej jemnej palete.
- Antigény sa zmiešajú s protilátkami podľa zvolenej metódy.
- Reakcia sa hodnotí. Vzorky sa porovnávajú s kontrolnými vzorkami a výsledky sa hodnotia kvalitatívne a kvantitatívne.
- Údaje sa zapisujú do špeciálnej tabuľky s pripojenými kvantitatívnymi ukazovateľmi (celkové protilátky).
- Ošetrujúci lekár interpretuje výsledky. V prípade potreby je predpísaná vhodná liečba.
Po vyšetrení dostane pacient dokument s výsledkami. Vyzerá to ako tabuľka so zodpovedajúcimi symbolmi oproti každému typu imunoglobulínu na križovatke s názvami infekčných chorôb.
Dekódovanie
Iba špecialista bude schopný správne dešifrovať výsledky testov. Je ťažké sami prísť na to, čo znamená napríklad výsledok ELISA k = 1 4 aj syfilis sa môže vyskytovať v rôznych formách, čo sa odráža aj na konečných údajoch.
Výsledky naznačujú 3 typy imunoglobulínov:
- IgM. Umožňuje určiť trvanie infekcie syfilisom. Pozitívny výsledok naznačuje exacerbáciu ochorenia. Ich absencia môže naznačovať remisiu chronických patológií alebo latentnú formu ochorenia.
- IgA. Označuje ochorenie, ktoré od nákazy uplynulo viac ako mesiac. Je tiež znakom akútnej fázy ochorenia, a to ako pri bežných patológiách, tak aj pri pokročilých chronických.
- IgG. Je to znak vrcholného obdobia ochorenia, to znamená jeho exacerbácie. Pri syfilise sa pozitívna reakcia objaví po určitom čase po liečbe. Pri niektorých typoch chorôb môže byť príznakom vyvinutej imunity.
Tieto látky telo produkuje v určitom poradí, čo je ďalším znakom choroby. Kvalitatívne testy určujú iba prítomnosť imunoglobulínov v krvi každého typu.
To sa odráža v zmene farby materiálov zahrnutých do analýzy. Kvantitatívne ukazovatele sú pomocné, presnejšie vystihujú situáciu. Pomer antigénov a protilátok udáva závažnosť ochorenia a intenzitu reakcie organizmu.
Čo robiť
Ak má pacient skutočne syfilis, je absolútne vždy zistená pozitívna ELISA, počas takejto štúdie je nemožné nevšimnúť si prítomnosť treponémov. Nezúfajte, choroba je najmä v počiatočných štádiách vysoko liečiteľná.
Čo robiť, ak sú výsledky testu pozitívne:
- podľa indikácií lekára podstúpiť ďalšie vyšetrenia;
- dokončiť priebeh antibiotickej terapie podľa zvoleného režimu;
- zamerať svoje úsilie na posilnenie imunitného systému;
- informujte svojho sexuálneho partnera o chorobe;
- v budúcnosti pravidelne podstupovať preventívnu diagnostiku až do odhlásenia na dispenzarizácii (po 5 rokoch pri absencii pozitívnych výsledkov testov).
Netreba odkladať nemocenskú dovolenku a báť sa zverejnenia výsledkov. Diagnóza je zašifrovaná a zostáva utajená, len ak hrozí infekcia iným ľuďom, je potrebné o probléme informovať príbuzných a sexuálnych partnerov, aby absolvovali požadované vyšetrenia.
Falošne pozitívny výsledok a jeho príčiny
Niekedy sú výsledky iných testov a ELISA zaznamenané ako falošne pozitívne na syfilis. Preto sa odporúča vykonať 2 - 3 pomocné metódy a po určitom čase enzýmový imunotest zopakovať.
Takéto nepresnosti sú zriedkavé, sú spôsobené najmä týmito faktormi:
- tehotenstvo;
- chronické choroby;
- nedávne očkovanie;
- zranenia.
Falošne pozitívne výsledky sú rozdelené na akútne a chronické v závislosti od povahy faktora, ktorý ich vyvolal.
Kompletná interpretácia testov na syfilis
Testy na syfilis: typy testov, interpretácia výsledkov, dôvody falošne pozitívnych a falošne negatívnych výsledkov vyšetrení.
Syfilis je pohlavne prenosné ochorenie spôsobené baktériou Treponema pallidum (treponema pallidum). Prečítajte si viac o cestách prenosu syfilisu, jeho príznakoch a možných komplikáciách v článku Všetko o syfilise. Symptómy a liečba.
Včasná detekcia syfilisu (pomocou špeciálnych testov) umožňuje lekárom začať liečbu včas a zabrániť vzniku nebezpečných komplikácií tejto choroby.
Testovanie na syfilis počas tehotenstva pomáha predchádzať narodeniu detí s vrodeným syfilisom. Viac informácií o testoch na syfilis počas tehotenstva je popísaných v článku Všetko o diagnostike a liečbe syfilisu počas tehotenstva.
Prečo mi bol predpísaný test na syfilis?
Lekári v drvivej väčšine prípadov nemajú možnosť získať presné údaje o sexuálnom živote pacientov (niektorí taja detaily zo svojho sexuálneho života alebo podceňujú riziko nakazenia pohlavnými chorobami). Preto, aby sa ľudia ochránili pred možnými následkami vlastnej neopatrnosti alebo nedostatku medicínskych znalostí, lekári v niektorých prípadoch predpisujú takzvané skríningové testy na syfilis (teda testy, ktoré absolvuje veľké množstvo ľudí).
Váš lekár môže nariadiť testy na syfilis, aj keď nemáte žiadne príznaky ochorenia a ste si istý, že ste sa ním nemohli nakaziť.
Potreba týchto testov je spôsobená skutočnosťou, že syfilis sa niekedy prenáša každodenným kontaktom (nie sexuálnym kontaktom) a vyskytuje sa v latentnej forme (to znamená bez príznakov).
Skríningové vyšetrenie je spravidla predpísané v týchto situáciách:
- Pri uchádzaní sa o prácu (zdravotnícky personál, stravovací pracovníci, vojenský personál atď.)
- Pri registrácii na tehotenstvo.
- Počas prijatia do nemocnice, pri príprave na operácie.
- Darcovia krvi.
- Osoby väznené na miestach pozbavenia slobody.
Váš lekár môže tiež objednať testy na syfilis:
- Keď sa zistia príznaky ochorenia (zvyčajne vyrážka v oblasti genitálií).
- Po získaní pozitívnych výsledkov skríningových testov na syfilis.
- Ak ste mali sexuálny kontakt s osobou, ktorej bola diagnostikovaná syfilis.
- Novonarodené deti, ktorých matky majú syfilis.
Okrem toho sa počas liečby pravidelne vykonávajú testy na syfilis (aby sa zabezpečila účinnosť liečby) a dokonca aj po ukončení liečby, aby sa monitorovalo vyliečenie.
Aké testy sa používajú na diagnostiku syfilisu?
Na diagnostike a liečbe syfilisu sa podieľa dermatovenerológ. Na diagnostiku ochorenia možno použiť nasledujúce testy:
Inšpekcia kože, vonkajších a vnútorných pohlavných orgánov sa vykonáva za účelom identifikácie hlavných príznakov syfilisu: škvŕn, opuchnutých lymfatických uzlín, kožných vyrážok atď. (pozri Príznaky syfilisu)
Za účelom odhaliť Treponema pallidum, lekári skúmajú šmuhy (alebo škrabance) získané z vredov, lymfatických uzlín, plodovej vody u tehotných žien pod mikroskopom Krv sa nevyšetruje pod mikroskopom.
Dôležité: Ak sa vo vašich testoch pod mikroskopom zistila Treponema pallidum, znamená to, že určite máte syfilis. Ak však testy ukazujú, že pôvodca syfilisu nebol zistený, nemôžete si byť úplne istí, že syfilis neexistuje. Aby ste sa uistili, že nie ste chorý, musíte vykonať ďalšie testy, ktoré sú popísané nižšie.
PCR (polymerázová reťazová reakcia) je komplexná a nákladná metóda diagnostiky syfilisu, ktorá umožňuje detekovať DNA Treponema pallidum v krvi alebo iných testovacích materiáloch (plodová voda, likvor). Ak test PCR poskytne negatívny výsledok, potom s najväčšou pravdepodobnosťou nemáte syfilis. Ak však dostanete pozitívny výsledok (teda ak PCR odhalila DNA Treponema pallidum v krvi), neexistuje 100% záruka, že ste chorý. Je to spôsobené tým, že PCR niekedy dáva falošne pozitívne výsledky (poskytuje pozitívny výsledok v neprítomnosti ochorenia). Preto, ak PCR poskytne pozitívny výsledok, odporúča sa dodatočne podstúpiť ďalšie metódy vyšetrenia na syfilis (napríklad imunofluorescenčnú reakciu (RIF) a pasívny hemaglutinačný test (RPHA)).
Čo je sérologický test na syfilis?
Sérologická analýza je detekcia špeciálnych proteínov (protilátok), ktoré sa v ľudskom tele vytvárajú v reakcii na infekciu, v krvi. Na rozdiel od predchádzajúcich diagnostických metód, sérologické testy neodhalia samotný Treponema pallidum, ale iba jeho „stopy“ v tele.
Ak sa vo vašej krvi zistia protilátky proti Treponema pallidum, znamená to, že ste buď momentálne infikovaný syfilisom, alebo ste ho už mali v minulosti.
Aké testy naznačujú, že osoba má syfilis?
Sérologické testy na syfilis sú rozdelené do 2 veľkých skupín: nešpecifické a špecifické testy. Hlavný rozdiel medzi týmito testami je v tom, že nešpecifické testy ukazujú pozitívny výsledok len vtedy, ak má človek momentálne syfilis a po liečbe sa stanú negatívnymi, zatiaľ čo špecifické testy zostávajú pozitívne aj po vyliečení choroby.
Inými slovami, negatívny výsledok nešpecifického testu je určitou zárukou, že ste zdravý.
Aké testy na syfilis sú nešpecifické (netreponémové)?
Medzi nešpecifické testy patrí mikroprecipitačná reakcia (MR) a Wassermanova reakcia (RW). Tieto testy sa používajú na skríning syfilisu. Po vyliečení syfilisu sú tieto testy negatívne u 90% ľudí.
Ako fungujú tieto testy: V dôsledku životne dôležitej aktivity Treponema pallidum (so syfilisom) bunky v tele odumierajú. V reakcii na deštrukciu buniek imunitný systém produkuje špeciálne proteíny (protilátky alebo imunoglobulíny). Nešpecifické testy sú zamerané na identifikáciu týchto protilátok, ako aj na výpočet ich koncentrácie (určenie titra protilátok).
Precipitačná mikroreakcia (MR) a jeho analógy v niektorých krajinách: rýchly reagin test (RPR, Rapid Plasma Reagins) A VDRL test (Laboratórium na výskum pohlavných chorôb) sú netreponemálne testy, ktoré sú predpísané na skríning syfilisu.
Čo sa bude skúmať:
zvyčajne 4-5 týždňov po infekcii.
ak test ukáže pozitívny výsledok, potom existuje možnosť, že máte syfilis. Pretože tento test môže poskytnúť falošne pozitívne výsledky, odporúča sa, aby ste podstúpili ďalšie testovanie pomocou špecifických testov popísaných nižšie. Negatívny výsledok naznačuje neprítomnosť syfilisu alebo skoré štádium ochorenia (pred objavením sa protilátok v krvi).
ak sa protilátky nachádzajú v krvi v titri 1:2 až 1:320 alebo vyššom, znamená to, že ste infikovaný syfilisom. Pri neskorom syfilise môže byť titer protilátok nízky (čo sa hodnotí ako sporný výsledok).
Falošne pozitívne výsledky MR sa vyskytujú približne v 2-5% prípadov, tu sú ich možné príčiny:
- Systémové ochorenia spojivového tkaniva (systémový lupus erythematosus, sklerodermia, reumatoidná artritída, dermatomyozitída, vaskulitída atď.)
- Infekčné ochorenia: vírusová hepatitída, infekčná mononukleóza, tuberkulóza, niektoré črevné infekcie atď.
- Zápalové ochorenia srdca (endokarditída, myokarditída).
- Diabetes.
- Tehotenstvo.
- Nedávne očkovanie (očkovanie).
- Užívanie alkoholu, drog a pod.
- Predtým trpel a vyliečil syfilis (u asi 10% ľudí, ktorí podstúpili liečbu, môže MR test zostať pozitívny po celý život).
Aké môžu byť príčiny falošne negatívnych výsledkov: test môže chybne ukázať negatívny výsledok, ak krv obsahuje veľa protilátok, ak sa test robí v ranom štádiu ochorenia pred objavením sa protilátok alebo pri neskorom syfilise, keď v krvi zostáva málo protilátok.
Wassermanova reakcia (RW, RW) je netreponemálny test, ktorý sa používa na skríning syfilisu v krajinách SNŠ.
Čo sa bude skúmať: krv (z prsta alebo zo žily), cerebrospinálny mok.
Ako dlho po infekcii je test pozitívny? zvyčajne 6-8 týždňov po infekcii.
Ako vyhodnotiť výsledky analýzy:„-“ je negatívna reakcia, „+“ alebo „++“ je slabo pozitívna reakcia, „+++“ je pozitívna reakcia, „++++“ je silne pozitívna reakcia. Ak Wassermanova reakcia ukázala aspoň jedno plus, musíte vykonať ďalšie testy na syfilis. Negatívna reakcia nie je zárukou, že ste zdraví.
Ako vyhodnotiť výsledný titer protilátok: Titer protilátok od 1:2 do 1:800 indikuje prítomnosť syfilisu.
Aké by mohli byť dôvody falošne pozitívnych výsledkov: Wassermanova reakcia môže chybne poskytnúť pozitívny výsledok z rovnakých dôvodov ako mikroprecipitačná reakcia (MR) a tiež ak ste krátko pred darovaním krvi na analýzu pili alkohol alebo jedli mastné jedlá.
Pre veľké množstvo chybných výsledkov sa Wassermanova reakcia (RW, RW) využíva čoraz menej a je nahrádzaná inými, spoľahlivejšími diagnostickými metódami.
Nešpecifické testy (precipitačná mikroreakcia (MR) a Wassermanova reakcia (RW)) sú dobrými metódami na diagnostiku syfilisu. Negatívny výsledok testu s najväčšou pravdepodobnosťou naznačuje, že ste zdravý. Ak sa však získajú pozitívne výsledky týchto testov, je potrebné ďalšie vyšetrenie pomocou špecifických (treponémových) testov.
Aké testy na syfilis sú špecifické (treponém)?
Treponemálne testy zahŕňajú nasledujúce testy: imunofluorescenčná reakcia (RIF), imunoblotovanie, pasívna aglutinačná reakcia (RPGA), imobilizačná reakcia pallidum pallidum (TPI), enzýmová imunoanalýza (ELISA).
Špecifické testy sú predpísané pre ľudí, ktorí majú pozitívne výsledky mikroprecipitačnej reakcie (MR) alebo Wassermanovej reakcie (WR). Špecifické testy zostávajú pozitívne dlho po vyliečení syfilisu.
Ako fungujú tieto testy: Keď patogény syfilisu vstúpia do tela, imunitný systém produkuje protilátky zamerané na boj proti treponema pallidum. Tieto protilátky sa v krvi neobjavia hneď po infekcii, ale až o niekoľko týždňov neskôr. Približne na konci druhého týždňa po infekcii sa v krvi objavia protilátky IgM. Protilátky tejto triedy naznačujú nedávnu infekciu syfilisom, ale bez liečby zostávajú v krvi niekoľko mesiacov a dokonca rokov (zatiaľ čo ich počet postupne klesá). 4-5 týždňov po infekcii syfilisom sa v krvi začínajú zisťovať protilátky inej triedy, IgG. Protilátky tohto typu zostávajú v krvi mnoho rokov (niekedy počas celého života). Testy na treponemu môžu zistiť prítomnosť protilátok (IgM a IgG) v krvi zameraných na boj proti Treponema pallidum.
Imunofluorescenčná reakcia (RIF) alebo Fluorescenčná treponemálna protilátka (FTA a jej variant FTA-ABS) je treponémový test, ktorý sa používa na potvrdenie diagnózy syfilisu v najskorších štádiách (ešte pred objavením sa prvých príznakov).
Čo sa bude skúmať: krv zo žily alebo prsta.
Ako dlho po infekcii je test pozitívny?: zvyčajne po 6-9 týždňoch.
Ako vyhodnotiť výsledky analýzy: Výsledky analýzy sú prezentované vo forme mínus alebo plus (od jedného do štyroch). Ak test ukazuje znamienko mínus, znamená to, že neboli zistené žiadne protilátky a ste zdravý. Prítomnosť jedného plus alebo viacerých naznačuje prítomnosť syfilisu.
Aké by mohli byť dôvody falošne pozitívnych výsledkov: Falošne pozitívne výsledky sú zriedkavé, ale chyby sú možné u ľudí s ochoreniami spojivového tkaniva (systémový lupus erythematosus, dermatomyozitída atď.), u tehotných žien atď.
Pasívna aglutinačná reakcia (RPGA), alebo Test hemaglutácie Treponema pallidum (TPHA) je špecifický test, ktorý sa používa na potvrdenie diagnózy syfilisu takmer v akomkoľvek štádiu.
Čo sa skúma?: krv zo žily alebo prsta.
Ako dlho po infekcii je test pozitívny? zvyčajne do 4 týždňov.
Ako vyhodnotiť výsledky analýzy: pozitívny výsledok RPGA naznačuje, že máte syfilis alebo ste zdravý, ale v minulosti ste mali toto ochorenie.
Ako vyhodnotiť výsledný titer protilátok: V závislosti od titra protilátok možno zhruba predpokladať trvanie infekcie syfilisom. Čoskoro po prvom vstupe treponému do tela je titer protilátok zvyčajne nižší ako 1:320. Čím vyšší je titer protilátok, tým viac času uplynulo od infekcie.
Enzymovo viazaný imunosorbentový test (ELISA), alebo Enzyme ImmunoAssay (EIA), alebo ELISA (Enzyme Linked ImmunoSorbent Assay) je treponémový test, ktorý sa používa na potvrdenie diagnózy a určenie štádia syfilisu.
Čo sa bude skúmať: krv zo žily alebo prsta.
Ako dlho po infekcii je test pozitívny? už 3 týždne po infekcii.
Ako vyhodnotiť výsledky analýzy: pozitívny výsledok ELISA naznačuje, že máte syfilis alebo ste v minulosti mali toto ochorenie. Tento test môže zostať pozitívny aj po liečbe.
Určenie trvania infekcie syfilisom pomocou ELISA: Podľa toho, aké triedy protilátok (IgA, IgM, IgG) sa nachádzajú v krvi, môžeme predpokladať, ako dlho bola infekcia.
Článok bol napísaný na základe materiálov zo stránok: sifilis24.ru, www.health-ua.org, krov.expert, zppp.su, polimed.ru.
Na vykonanie komplexného hodnotenia stavu tela sa používa diagnostická metóda ELISA. Enzýmová imunoanalýza krvný test je určená na diagnostiku infekčných, hematologických, primárnych a sekundárnych imunodeficiencií.
Čo je analýza ELISA
Mnoho pacientov sa zaujíma o metódu ELISA: čo to je, prečo sa štúdia uskutočňuje. Enzýmové imunotesty sa začali používať relatívne nedávno. Spočiatku sa používal na štúdium antigénnych štruktúr a vykonával sa iba na vedecké účely. Potom vedci dospeli k záveru, že pomocou enzýmov je možné identifikovať špecifické protilátky, ktoré vznikajú ako odpoveď na prebiehajúce ochorenie.
Spočiatku túto techniku používali len vysokošpecializované zdravotnícke zariadenia, hlavne na transfúznych staniciach krvi. Metóda ELISA je obzvlášť dôležitá na detekciu infekcie HIV.
Dnes má táto metóda široké uplatnenie. Moderné laboratóriá ho používajú na diagnostiku:
- nádory;
- hormonálne poruchy;
- infekcie;
- chronické alebo predchádzajúce infekčné procesy;
- helmintov.
Ak sa v tele vyskytuje infekčný proces, potom sa tento typ diagnózy považuje za najoptimálnejší na určenie typu ochorenia.
Podstata metódy a jej typy
Metóda ELISA - čo to je, čo je podstatou tohto typu výskumu? Táto a mnohé ďalšie otázky zaujímajú pacientov. Základom tejto diagnostickej metódy je väzba imunitných buniek organizmu na antigény infekčných agens. Výsledný komplex sa stanoví pomocou špeciálneho enzýmu.
Aby ste pochopili princíp metódy ELISA, musíte vedieť, ako prebieha reakcia antigén-protilátka. Antigén je molekula proteínu cudzia pre telo, ktorá preniká spolu s infekciou. Za antigény sa považujú aj častice krvi niekoho iného, ktoré sa nezhodujú so skupinou. V organizme vyvolávajú imunitnú odpoveď zameranú na ochranu pred cudzorodými látkami. Preto ľudské telo produkuje protilátky - imunoglobulíny, ktoré sa môžu naviazať na antigény a vytvoriť tak imunitný komplex. Takéto zlúčeniny sú oveľa ľahšie rozpoznateľné a zničené imunitnými bunkami.
Reakcia na prítomnosť takýchto imunokomplexov sa uskutočňuje v laboratórnych podmienkach s použitím hotových zlúčenín na určenie, či sú v krvi podobné.
Podstata metódy ELISA je pomerne jednoduchá, ale vzhľadom na to, že sa vykonáva krvný test na zistenie mnohých infekcií a chorôb, existuje niekoľko druhov. Každá sa líši schémou implementácie a rozsahom. Môže to byť priama alebo nepriama ELISA. Priama metóda znamená, že sa používajú imobilizované protilátky, ktoré reagujú s antigénmi. Hlavnou výhodou tejto metódy je, že všetky procesy je možné automatizovať, čo znamená, že diagnostika zaberie málo času.
Nepriama metóda znamená, že sa používajú sekundárne protilátky. A na pevnej fáze je antigén imobilizovaný. Analýza vám umožňuje určiť protilátky proti rôznym antigénom. To pomáha dosiahnuť presnejší výsledok, ale metóda je zložitá.
Prínosy štúdia
Metóda ELISA má oproti iným diagnostickým metódam mnoho výhod. Medzi hlavné patria nasledujúce:
- vysoká citlivosť;
- stabilita zložiek pri skladovaní;
- rýchlosť diagnostiky;
- možno použiť malé množstvo testovacieho materiálu;
- je možné automatizovať všetky procesy;
- infekciu možno zistiť v najskorších štádiách.
Táto diagnostická metóda je univerzálna a preto vhodná na hromadné vyšetrenie. Pomocou analýzy je možné sledovať dynamiku infekčného procesu.
Indikácie pre analýzu a zber materiálu
Štúdia s použitím metódy ELISA môže byť predpísaná, ak existuje podozrenie na mnohé choroby:
Venózna krv sa vyšetruje na prítomnosť protilátok. Pred analýzou sa z nej izolujú prvky, ktoré môžu skomplikovať štúdiu. Môžu sa odoberať aj iné biologické tekutiny.
Na získanie čo najpresnejších informácií sa odber krvi vykonáva nalačno. Ak bol postup predpísaný na určenie latentnej infekcie, potom niekoľko týždňov pred testom by ste mali prestať užívať antibakteriálne a antivírusové lieky. V závislosti od vybavenia laboratória, kde bol materiál odoberaný, je možné výsledok získať do 24 hodín. V núdzových prípadoch sa tento čas skracuje na niekoľko hodín.
Test na syfilis
Použitie metódy ELISA pomáha určiť prítomnosť mnohých infekcií v tele, najmä syfilisu. Na vykonanie štúdie sa krv odoberie z žily na prázdny žalúdok. Potom sa uskutoční štúdia, ktorá pomáha určiť nielen prítomnosť choroby v tele, ale aj presné načasovanie jej nástupu, pretože v priebehu choroby sú niektoré protilátky nahradené inými v presne definovanom poradí.
V akútnej fáze, ktorá naznačuje predĺžený priebeh ochorenia, alebo pri exacerbácii chronickej infekcie, sa v krvi zistia imunoglobulíny typu M. Prítomnosť imunoglobulínov typu A naznačuje, že infekcia žije v tele už dlhšie ako 4 týždne. Imunoglobulíny skupiny G indikujú výšku ochorenia alebo predchádzajúcu liečbu.
Intenzita infekčného procesu sa hodnotí podľa stupňa zafarbenia otvorov, pretože jeho nasýtenie závisí od počtu vytvorených imunitných komplexov.
Test na infekciu HIV
Na analýzu sa v tomto prípade používa aj metóda ELISA, ktorá má určité znaky, ktoré súvisia s priebehom a progresiou ochorenia. Táto výskumná metóda sa považuje za najprijateľnejšiu na stanovenie, ale mala by sa vykonať najskôr mesiac po vystavení rizikovým faktorom. Je to spôsobené prítomnosťou inkubačnej doby, ktorá trvá od 45 dní do 6 mesiacov. Preto je potrebné analýzu po šiestich mesiacoch zopakovať.
- askarióza;
- giardiáza;
- toxoplazmóza atď.
Napriek všetkým výhodám má metóda ELISA aj nevýhody. Hlavnou nevýhodou je, že pri vykonávaní štúdie musí mať lekár vopred predpoklad o chorobe.
Ak nie je možné náhodne nájsť patogén a určiť jeho imunoenzýmové vlastnosti. Test indikuje iba prítomnosť protilátok v krvi pacienta. Navyše je to dosť nákladná analýza.
Prepis analýzy
Výsledkom kvalitného testu ELISA bude buď prítomnosť protilátok, alebo ich absencia v krvi. Ak sa vykonáva kvantitatívna analýza, koncentrácia protilátky môže byť vyjadrená buď ako digitálna hodnota, alebo v určitom počte znakov +.
Okrem toho ukazovatele ako:
Indikátor IgM indikuje výskyt akútneho infekčného procesu v tele. Jeho úplná absencia môže naznačovať neprítomnosť pôvodcu ochorenia alebo jeho prechod do chronického štádia.
Hodnota IgA s negatívnym výsledkom testu IgM naznačuje chronickú alebo latentnú infekciu. Súčasná prítomnosť IgM a IgA naznačuje, že ochorenie je v akútnom štádiu. Prítomnosť IgG naznačuje prechod ochorenia do chronického štádia alebo úplné zotavenie a rozvoj imunity.
Teraz existujú špeciálne testy ELISA, ktoré môžete urobiť sami.
ELISA alebo enzýmová imunoanalýza sa vzťahuje na sérologické testy a je určená na detekciu a diagnostiku patologických mikroorganizmov v krvnom sére.
Prostredníctvom analýzy, rôzne triedy imunoglobulínov na baktérie: IgM- pri akútnom patologickom procese, a IgG v štádiu zotavenia, ktoré v niektorých prípadoch pretrvávajú počas celého života.
Pomocou diagnostiky enzýmovej imunoanalýzy sa zisťujú choroby rôznej etiológie:
ELISA je tiež indikovaná na diagnostiku syfilisu, keď sú pozitívne výsledky potvrdené metódou RT, a umožňuje vám sledovať účinnosť liečby v patologickom procese.
Enzýmová imunoanalýza sa predpisuje podľa indikácií (ak existuje podozrenie na infekciu mikroorganizmami) a je povinná počas tehotenstva a pred chirurgickým zákrokom na zistenie prenosu rôznych baktérií.
Postup analýzy sa vykonáva ráno nalačno, materiál (krv) sa odoberá zo žily. Výsledky diagnostickej štúdie sa pripravujú do 10 dní.
Pozitívna ELISA
Pozitívny výsledok testu ELISA je potvrdený prítomnosťou imunoglobulínov triedy IgG a IgM. Zistené titre v krvi IgM vždy indikuje ochorenie v progresívnom štádiu zdravý človek tieto protilátky nemá.
A IgG naznačuje predchádzajúcu infekciu alebo prenos patogénnych mikroorganizmov, z ktorých niektoré sú v malých množstvách považované za normálne. Napríklad streptokoky a stafylokoky sú prítomné v každom ľudskom tele.
syfilis
IgM protilátky na syfilis sa detegujú od 2 týždňov po infekcii a indikujú prítomnosť primárnej, sekundárnej alebo vrodenej epizódy s liečbou, vymiznú asi po šiestich mesiacoch, bez liečby - po 18 mesiacoch. Ak sa súčasne zistia oba typy imunoglobulínov, syfilis sa potvrdí v akútnej fáze. U ľudí, ktorí boli chorí IgG protilátky proti syfilisu zostať v sére po celý život.
Vírusová hepatitída
IgM na vírusovú hepatitídu sa často zistí v inkubačnej dobe ochorenia, skôr ako sa objavia prvé prejavy, a pretrváva v priebehu ochorenia po uzdravení, nie je zistený. Výnimkou je vírusová hepatitída C, pri ktorej sa IgM deteguje v aktívnom aj latentnom alebo chronickom štádiu.
IgG protilátky proti hepatitíde A môžu byť prítomné aj u zdravých ľudí, čo je spôsobené predchádzajúcou infekciou alebo zníženou imunitou, ale prítomnosť IgG proti hepatitíde B, C a D sa u zdravých ľudí nepozoruje.
CMVI
CMV infekcia je rozšírená takmer všade a nepredstavuje hrozbu pre verejné zdravie. Nesie však smrteľné nebezpečenstvo pre novorodenca a plodu počas vnútromaternicovej infekcie.
Detekcia IgM protilátok proti cytomegalovírusu indikuje primárnu infekciu alebo aktiváciu latentnej fázy. Titre IgG pretrvávajú u ľudí, ktorí sa zotavili z choroby 10 rokov.
Herpes
Protilátky proti herpes vírusu u zdravých ľudí normálne chýbajú. Obsah IgM označuje akútnu fázu ochorenia, IgG - latentnú fázu (v tomto prípade je osoba nosičom infekcie). Ak máte IgG na herpes, mali by ste vedieť, že vírus sa môže aktivovať kedykoľvek od latentného štádia až po progresívne štádium.
Kiahne
Počas ovčích kiahní a 2 roky po liečbe zostávajú imunoglobulíny triedy IgM v krvi. Normálne sa protilátky proti ovčím kiahňam u zdravých ľudí nezistia.
Choroby spôsobené stafylokokmi a streptokokmi
Všetci ľudia majú imunoglobulíny na stafylokoky a streptokoky. Preto je možné diagnostikovať patologický proces spôsobený týmito skupinami baktérií vykonaním metódy dvojitého enzýmového imunotestu. Ak dôjde k zvýšeniu titrov počas opakovanej ELISA (týždeň po prvej), potom sa analýza považuje za potvrdenú.
Chlamydia
Pozitívny výsledok na chlamýdie je indikovaný identifikáciou Titre IgM 1:8 a vyššie a triedy IgG – 1:64 a vyššie, ktoré sa v priebehu ochorenia zvyšujú a dosahujú vysoké hodnoty. Napríklad u detí s chlamýdiovou pneumóniou sa titre zvyšujú na 1:2000 – 1:4000. Prítomnosť IgM naznačuje aktivitu chlamýdií po určitom čase po infekcii, v krvi sa zistia globulíny IgG.
Negatívny enzýmový imunotest je označený absencia IgM protilátok. Detegovateľné IgG nie sú vo všetkých prípadoch považované za potvrdenie diagnostického testu, často pretrvávajú niekoľko rokov po infekcii, niekedy aj celý život.
Po syfilise, infekčnej mononukleóze IgG imunoglobulíny pretrvávať počas celého života a sú detekované v krvnom sére. 10 rokov zostávajú mikroorganizmy CMV, osýpky, ružienka a toxoplazmóza.
Titre amébiázy pretrvávajú niekoľko mesiacov až niekoľko rokov. Protilátky proti stafylokokovým a streptokokovým baktériám sú detegované absolútne u všetkých ľudí v malých množstvách.
Vo vyššie uvedených prípadoch nám detekcia IgG imunoglobulínov po ochoreniach umožňuje považovať výsledky ELISA za negatívne.
Normálne počas tehotenstva
V prvom trimestri tehotenstva absolvuje každá žena kompletné vyšetrenie tela, ktorého súčasťou je enzýmový imunotest.
Testy na toxoplazmózu, CMV, chlamýdie, herpes typu 2 (genitálne), rubeolu, ureaplazmu a mykoplazmu sú povinné, pretože tieto ochorenia predstavujú vážnu hrozbu pre vývoj plodu. Sú schopné preniknúť do tela dieťaťa a obísť placentárnu bariéru.
A v celom rozsahu predstavujú osobitné nebezpečenstvo prvý trimester tehotenstva a takmer vždy vedú k intrauterinná smrť plodu a spontánny potrat.
Problémom vyššie uvedených ochorení je, že často prebiehajú v asymptomatickom štádiu, bez viditeľných klinických prejavov a je možné ich identifikovať len pomocou enzýmovej imunosorbentnej diagnostiky.
Dobré výsledky analýzy možno povedať, ak sa v sére nezistia žiadne mikroorganizmy. Detegovateľný IgG indikuje prenos vírusov a vyžaduje neustále sledovanie ženy, aby sa poskytla včasná liečba v prípade náhlej exacerbácie. Pozitívny IgM signalizuje progresívny patologický proces a vyžaduje okamžitú elimináciu patogénu.
Detekcia názvu IgG na rubeolu indikuje predchádzajúce ochorenie a je normálne počas tehotenstva. IgG na CMV tiež nepredstavujú osobitnú hrozbu pre plod, nemožno však vylúčiť možnosť exacerbácie (frekvencia prejavov približne 1-2%).
Osobitnou hrozbou je prítomnosť IgG pre herpes vírus typu 2 alebo genitálny (HSV2), pretože riziko exacerbácie sa výrazne zvyšuje počas pôrodu. V gestačnom období sa výskyt akútnej fázy vyskytuje v 0,9% prípadov. Infekcia plodu herpes vírusom počas prechodu pohlavného traktu sa vyskytuje v 40% prípadov a vedie k smrti v 50%.
V prípadoch toxoplazmózy môže IgM pretrvávať až 2 roky po liečbe. Riziko infekcie plodu je v tomto prípade 17% v prvom trimestri a zvyšuje sa na 60% v treťom trimestri, pretože hlavná cesta infekcie je transplacentárna. Identifikované IgG na toxoplazmózu mnohí odborníci majú tendenciu hodnotiť výsledok ako negatívny výsledok, ktorý prakticky neohrozuje priebeh tehotenstva.
