Bacillus cereus
Bacillus cereus je všadeprítomná, grampozitívna, spórotvorná, pohyblivá tyčinka. U ľudí spôsobujú žalúdočné ochorenia (hnačky a pod.), ďalej septikémiu, endokarditídu, poškodenie centrálneho nervového systému. Ochorenie je zvyčajne krátkodobé a zmizne bez akejkoľvek liečby, ale boli hlásené aj ojedinelé úmrtia. Otrava jedlom Bacillus cereus nie je hlásená z dôvodu relatívne nízkeho počtu ním spôsobených ochorení (do 1 % z celkového počtu). Výskyt ochorenia sa geograficky líši. V niektorých krajinách teda predstavujú menej ako 1% všetkých otráv jedlom, zatiaľ čo v iných - viac ako 30%. Bacillus cereus sa z produktov izoluje pomerne často, čo z tohto typu baktérií robí významný indikátorový testovací organizmus pre potravinársky priemysel. Najviac ohrozenými potravinami sú mäso a mliečne výrobky, zelenina, polievky, koreniny a najmä detská výživa. Takmer všetky kmene Bacillus cereus produkujú toxíny. Takmer 95 % izolátov Bacillus cereus produkuje cytotoxické enterotoxíny. Z nich nehemolytický enterotoxín (NHE) produkuje viac ako 90 % kmeňov a hemolyzín BL (HBL) produkuje asi 55 % študovaných kmeňov. Predpokladá sa, že HBL a NHE sa tvoria v črevách pacienta po konzumácii potravín kontaminovaných vegetatívnymi bunkami alebo spórami Bacillus cereus. Okrem týchto dvoch toxínov produkujú niektoré kmene Bacillus cereus tepelne stabilný emetický enterotoxín (ETE). Predpokladá sa, že ETE enterotoxín sa spočiatku hromadí v potravinách, najčastejšie v potravinách obsahujúcich škrob, ako je ryža a cestoviny. Z týchto dôvodov je sledovanie obsahu enterotoxínov v týchto produktoch pomocou spoľahlivých zrýchlených testovacích metód čoraz dôležitejšie.

Patogenita, rozsah ochorenia
Bacillus cereus je oportúnny mikroorganizmus, ktorý spôsobuje sporadickú otravu jedlom u ľudí. Bacillus cereus je v prírode všadeprítomný. Etiologickú úlohu Bacillus cereus pri otravách jedlom pôvodne študoval a opísal Hauge v roku 1950. Za zdroj otravy jedlom spôsobenej Bacillus cereus sa spočiatku považovali kulinárske produkty obsahujúce zemiakový škrob. Potom boli popísané ohniská podobných otráv spôsobených rastlinami, mäsom, rybami a inými potravinovými produktmi. Bacillus cereus sa najrýchlejšie množí v drvených výrobkoch (mleté ​​mäso, rezne, klobása, smotany). V surovinách nie je povolených viac ako 100 buniek/g; prítomnosť Bacillus cereus v konzervách nie je povolená. V sterilizovaných mäsových konzervách sa pri dodržaní stanovených technologických podmienok nenachádzajú bunky tejto baktérie. Keď v konzerve zostanú životaschopné spóry, patogén sa môže množiť v podmienkach skladovania konzervovaných potravín pri 20 °C. Zároveň sa na povrchu produktu objavuje sivý povlak, mení sa jeho vôňa a konzistencia.

Bacillus cereus môže tiež spôsobiť hnačkový syndróm u zvierat, vtákov a hmyzu 6-18 hodín po konzumácii kontaminovanej potravy. Je to spôsobené predovšetkým viacerými druhmi toxínov (NHE, HBL, bc-D-ENT) obsiahnutými v kontaminovaných potravinách a následne premnožením baktérií v črevách. Tento komplex toxínov Bacillus cereus spôsobuje cytotoxický účinok a sekréciu tekutín v čreve. Keď sa vykoná biologický test na myšiach, zvieratá pociťujú nekrózu kože v mieste vpichu a následnú smrť.

Morfológia baktérií a kolónií
Tyčinkové (0,9-1,5 x 3-5 µm), sporogénne chemoorganotrofné aeróbne alebo fakultatívne anaeróbne baktérie z čeľade Bacillaceae (pod mikroskopom vyzerajú tyčinkové bunky s narezanými koncami ako voskové sviečky). Endospóry sú umiestnené centrálne, nepresahujú veľkosť bunky, bičíky sú peritrichiálne. Baktérie sú morfologicky podobné Bacillus anthracis, ale majú pohyblivosť. Na selektívnom agare sa vytvoria kolónie s priemerom 1,5-2 mm, obklopené zónami precipitátu s priemerom 4-5 mm. V prvých hodinách rastu sú kolónie okrúhle a konvexné, potom sú okraje kolónií zubaté. Kolónie pestované na agare majú voskový vzhľad. Na tekutých médiách Bacillus cereus vytvára vločkovitý sediment, jemný film na povrchu a spôsobuje zákal v bujóne.

Fyziologické a biochemické vlastnosti
Bacillus cereus je aerób, ale môže rásť aj bez kyslíka. Na MPA tvorí veľké, sivobiele kolónie so zubatými okrajmi, niektoré kmene vytvárajú na krvnom agare ružovohnedý pigment so širokými, ostro ohraničenými zónami hemolýzy; na MPB tvorí jemný film, stenový prstenec, rovnomerný zákal a vločkovitý sediment na dne skúmavky. Všetky kmene Bacillus cereus rastú intenzívne pri pH = 9-9,5 pri pH 4,5-5, rast buniek sa zastaví. Optimálna teplota rastu je 30-32 o C, maximum je 37-48 o C, minimum je 10 o C. Bacily sú citlivé na pôsobenie gama fágov, hemolyzujú ovčie červené krvinky, majú vysokú proteolytickú aktivitu - 80 % kmeňov skvapalní želatínu v priebehu 1-4 dní. Rozkladajú glukózu a maltózu na kyselinu a niektoré kmene rozkladajú aj sacharózu, glycerín, laktózu, galaktózu, inzulín, dulcit a dextrín. Bacily produkujú enterotoxíny iba in vivo a sú patogénne pre biele myši a morčatá.

Zdroje a faktory prenosu infekcie
Hlavným biotopom Bacillus cereus je pôda s neutrálnou alebo mierne zásaditou reakciou. Z pôdy sa patogén dostáva do ovzdušia, vody, potravín, na odevy a ruky ľudí, na kožu zvierat a na povrch zariadení v potravinárskych podnikoch. Bacillus cereus je zriedkavo detekovaný z čriev zdravých ľudí a zvierat a v malých množstvách. Rozmnožovaniu Bacillus cereus bráni kyslé prostredie a vysoká koncentrácia cukru. Pri skladovaní kontaminovaných potravín v chladničke (pri 0...+4°C) sa patogén nemnoží.

Patogenéza
Toxické infekcie prenášané potravinami sa vyskytujú pri konzumácii produktu obsahujúceho veľké množstvo živých buniek Bacillus cereus, ktoré produkujú enterotoxíny. Toxické infekcie z potravín sa vyskytujú v prípadoch, keď sa živé mikroorganizmy v dôsledku rôznych sanitárnych a technologických porušení počas prípravy, skladovania a predaja potravinárskych výrobkov v nich začnú intenzívne množiť a pri konzumácii potravín vstupujú do ľudského tela vo veľkých množstvách. Inkubačná doba pacienta sa pohybuje od 3-4 do 10-16 hodín Ochorenie sa vyskytuje náhle a je sprevádzané vracaním a akútnou hnačkou. Úmrtnosť je nižšia ako 1% a pozoruje sa veľmi zriedkavo: u ľudí so zlým zdravotným stavom, najmä u starších ľudí a detí. Keď sú mikróby v gastrointestinálnom trakte, vstupujú do krvi cez lymfatický trakt, čo spôsobuje bakteriémiu. Zároveň sa v ňom nemnožia mikróby, ktoré vstupujú do krvi z primárneho ohniska, ale sú len transportované do iných orgánov a tkanív. Baktérie sa množia v bunkách retikuloendotelového systému. Endotoxín produkovaný bacilom ovplyvňuje črevný lymfatický systém, čo spôsobuje dystrofické zmeny v črevných stenách. Všeobecná nevoľnosť je spôsobená účinkom endotoxínu na centrálny nervový systém. Dôsledkom utrpenia toxickej infekcie je prenos baktérií a v niektorých prípadoch dosť dlhodobý. Pacienti nie sú nebezpeční pre ostatných; Neexistuje žiadna kontaktná infekcia, pretože patogén sa vylučuje vo zvratkoch a stolici na krátky čas a má nízku patogenitu. Klinický obraz je vyjadrený prejavmi gastroenteritídy (koliková bolesť brucha, nevoľnosť, hnačka). Enterotoxíny ovplyvňujú transport tekutín, elektrolytov a glukózy bunkami čreva. Telesná teplota chorého človeka je zvyčajne v medziach normy alebo sa mierne zvyšuje. Ťažšie formy ochorenia sprevádzajú silné bolesti hlavy, vracanie, kŕče až strata vedomia. Trvanie otravy jedlom je až 4-6 dní. Na základe prevládajúcich príznakov otravy jedlom spôsobenej Bacillus cereus sa rozlišujú dve formy ochorenia: hnačkové a toxikózne podobné (emetické). Hnačkový typ otravy jedlom sa najčastejšie vyskytuje pri konzumácii nekvalitného mäsa, rýb, mlieka a zeleniny. Pri hnačkovej forme vzniká klinický obraz 24 hodín po konzumácii infikovaného produktu. Teplota sa spravidla nezvyšuje. Hnačková forma sa vyvíja, keď sa do tela dostane veľké množstvo Bacillus cereus (viac ako 106 mikrobiálnych buniek), ktoré produkujú enterotoxíny hnačkového typu. Toxikóze podobná (vracajúca) forma otravy jedlom má extrémne krátku inkubačnú dobu 0,5-6 hodín. Charakterizuje ju nevoľnosť a zvracanie, ktoré trvá až 24 hodín a zvracať. Výskyt špecifickej formy otravy jedlom závisí od podmienok, v ktorých Bacillus cereus rastie. Vracajúca forma ochorenia je zvyčajne spojená s kontamináciou obilnín, zemiakov a cestovín, šalátov, pudingov a omáčok. Vo všetkých prípadoch je intenzívna akumulácia baktérií a stimulácia tvorby toxínov uľahčená porušením teplotných podmienok a trvanlivosti hotových jedál a potravín podliehajúcich skaze. Zároveň dochádza k intenzívnemu rozmnožovaniu Bacillus cereus v takýchto produktoch pri teplotách nad 15°C.

Detekčné metódy

Klasická metóda
Metóda je založená na izolácii Bacillus cereus z kolónií získaných povrchovou inokuláciou produktu alebo jeho zriedením na selektívnych médiách. Príslušnosť izolovaných kolónií k Bacillus cereus je určená morfologickými a biochemickými vlastnosťami [GOST 10444.8-88].

Liek Baktisubtil bol vytvorený špeciálne v rámci programu mikrobiologickej bezpečnosti francúzskou farmaceutickou spoločnosťou Patheon France. Probiotikum je účinné ako pri liečbe gastrointestinálnych ochorení, tak aj na preventívne účely. Podporuje rýchlu obnovu narušenej črevnej mikroflóry, normalizuje metabolické procesy v tele a zlepšuje imunitu.

Účinnosť Baktisubtilu bola preukázaná klinickými štúdiami. Liečivo má silný účinok, úplne obnovuje štruktúru narušenej mikroflóry gastrointestinálneho traktu a má široké spektrum účinku.

Prípravok obsahuje baktérie kmeňa Bacillus cereus IP 5832 v sušenej forme. Spóry prospešných baktérií sú odolné voči žalúdočnej šťave, takže sa v aktívnej forme voľne dostávajú do tenkého a hrubého čreva. Potlačiť oportúnne a patogénne mikroorganizmy.
Okrem toho výrobok obsahuje uhličitan vápenatý a kaolín. Obal kapsuly je vyrobený z oxidu titaničitého a jedlej želatíny. Želatínové kapsuly sú biele.

Akcia Baktisubtil

1. Normálna mikroflóra gastrointestinálneho traktu sa účinne a rýchlo obnoví. Probiotikum má bakteriálny protihnačkový a antimikrobiálny účinok.
2. Zvyšuje sa obranyschopnosť organizmu. Predchádza sa ochoreniam čriev, dýchacích orgánov, pankreasu a žalúdka.
3. Narušené potravinové procesy sú normalizované.
4. Toxíny a produkty rozkladu sú odstránené.
5. Redukujú sa prejavy peptických vredov, pankreatitídy, gastritídy, črevnej a vaginálnej dysbiózy.
6. Zabraňuje narušeniu syntézy.
7. Má detoxikačný účinok.
8. Podporuje tvorbu vitamínov B
9. Výskyt infekčných a respiračných ochorení klesá.
10. Liek je indikovaný na liečbu a prevenciu chorôb u detí od prvých dní života.

Indikácie na použitie

• hnačka, vrátane liečby dysbiózy;
• narušený metabolizmus;
• stav imunodeficiencie;
• bakteriálne ochorenia gastrointestinálneho traktu;
• na odstránenie príznakov črevnej a vaginálnej nerovnováhy v ktorejkoľvek fáze;
• hepatitída, peptický vred;
• so syndrómom bakteriálneho prerastania;
• namáhané črevo;
• enteritída, enterokolitída;
• zvýšená tvorba plynu;
• alergie na chemické látky, dráždidlá pre domácnosť, potraviny, rastliny;
• s nadmernou telesnou hmotnosťou;
• chronická zápcha;
• v prípade otravy vrátane alkoholu;
• pre syndróm chronickej únavy;
• po radiačnej terapii alebo priebehu liečby antimikrobiálnymi liekmi, antibiotikami.

Priebeh liečby je od 1 do 4 týždňov, v závislosti od závažnosti symptómov. V prípade potreby je možné kurz na odporúčanie ošetrujúceho lekára zvýšiť.

Pri akútnom črevnom ochorení - jedna kapsula 4-6 krát denne, počnúc 12. rokom života. V akútnych prípadoch ochorenia užívajte až 10 kapsúl denne, ale nie viac.

1. Deti od 3 do 12 rokov - 1 kapsula 3-4 krát denne.
2. Deti do troch rokov - 1-2 kapsuly denne.
3. Pri chronických ochoreniach alebo na preventívne účely - 1 kapsula 2-krát denne.

Vlastnosť: Dojčatá potrebujú rozriediť obsah kapsuly v malom množstve materského mlieka, vody izbovej teploty, dojčenskej výživy alebo šťavy. Neriediť v horúcom nápoji!

Vedľajšie účinky

Alergia na niektorú zo zložiek obsiahnutých v probiotiku - vyrážky, svrbenie, alergická nádcha, opuch hrtana, začervenanie kože.

Bactisubtil v odporúčaných dávkach nespôsobuje vedľajšie účinky.

Kontraindikácie

1. Precitlivenosť na účinnú látku lieku.
2. AIDS.
3. Počas transplantácie.

Interakcie s liekmi

Probiotikum sa môže užívať súčasne so sulfónamidovými liekmi alebo antibiotikami.
Pri interakcii s etanolom sa účinok lieku znižuje, preto sa počas liečby Bactisubtilom neodporúča piť alkoholické nápoje.

Použitie produktu počas tehotenstva a laktácie

Bactisubtil je jedným z mála liekov, ktorý nemá žiadne kontraindikácie počas tehotenstva alebo dojčenia. Vysvetľuje to skutočnosť, že zložky obsiahnuté v jeho zložení nemajú schopnosť akumulovať sa v tele, takže je vylúčená možnosť ich preniknutia do materského mlieka alebo placenty.

Analógy

Pokiaľ ide o štruktúru, ktorá je čo najbližšie k Bactisubtilu, neexistujú žiadne analógy. Existujú však probiotiká, ktoré majú podobné farmakologické účinky a poskytujú nemenej pozitívne liečivé účinky.

Pri výbere analógov by sa mali brať do úvahy tieto vlastnosti:

• ak je porucha gastrointestinálneho traktu vírusovej povahy, je potrebné vybrať produkty s vysokým obsahom laktobacilov;
• pri podozrení na bakteriálnu infekciu sú vhodné kombinované synbiotické prípravky s obsahom bifidobaktérií aj laktobacilov;
• pri hubových infekciách gastrointestinálneho traktu sú predpísané produkty obsahujúce bifidobaktérie.

Probiotiká sa líšia svojim účinkom na telo, kvantitatívnym a kvalitatívnym zložením prospešných mikroorganizmov a cenou.

Porovnávacie charakteristiky niektorých analógov Baktisubtilu

1. Linux. Rovnako ako Baktisubtil podporuje rýchlu obnovu poškodenej mikroflóry. Linex má tieto rozdiely: súčasne obsahuje tri zložky - bifidobaktérie, laktobacily a enterokoky. Preto je uznávaný ako účinnejší liek pri liečbe dysbiózy.
2. Bifiform. Obsahuje bifidobaktérie a enterokoky. Má podobný rozsah akcií. Kontraindikácie - precitlivenosť na ktorúkoľvek zložku.
3. Enterofuril. Vzťahuje sa na antimikrobiálne lieky predpísané pri liečbe infekčných črevných ochorení. Účinnejšie pri hnačke, ale menej účinné pri liečbe dysbiózy.
4. Bactistatín. Komplexné probiotikum vyrobené z lyofilizovaných kvasníc. Rýchlo potláča hnilobné procesy, urýchľuje odumieranie škodlivých baktérií a plesní. Odporúča sa pri hnačke akéhokoľvek pôvodu. Neúčinné proti dysbakterióze.
5. Probifor. Antimikrobiálny liek so širokým spektrom účinku. Aktívne proti mnohým grampozitívnym enterobaktériám. Indikované pri liečbe bakteriálnych infekcií, hnačky.
6. laktobakterín. Obsahuje vysoké množstvo laktobacilov. Odporúča sa pri somatických ochoreniach tráviaceho traktu, komplikovaných dysbakteriózou, pri ulceróznej a chronickej kolitíde, v prenatálnej príprave na elimináciu rizika vzniku septických komplikácií.
7. Primadophilus. Biologicky aktívny doplnok stravy s regeneračnými vlastnosťami, širokospektrálne synbiotikum. Liek zabraňuje rozvoju hnilobnej a pyogénnej flóry v črevách, zlepšuje peristaltiku a stimuluje tvorbu vitamínov. Odporúča sa pri vaginálnej a črevnej dysbióze, hnačke, po dlhom užívaní antibiotík, rotavírusových infekciách, potravinových alergiách, nevyváženej výžive a akýchkoľvek formách diatézy u detí.

Nasledujúce lieky sú tiež alternatívami Bactisubtilu:

• kolibakterín;
• Gastrofarm;
• acylakt;
• Flonivin BS;
• Regulin;
• Advantan;
• Vytočiť číslo;
• Algilak;
• Uzara;
• Symbiolact;
• biosporin;
• Legkolaks;
• Enterol;
• stoperan;
• Hnačka;
• Acipol;
• karbolong;
• Florin ForteSeñor;
• Stopdiar;
• Eubicor;
• Orsol.

V priebehu klinických a mikrobiologických štúdií Baktisubtilu sa dospeli k záverom: liek rýchlo mení intrakavitárne prostredie hrubého čreva, podporuje pozitívne zmeny v mikrobiocenóze gastrointestinálneho traktu a je účinný pri liečbe a prevencii dysbiotických porúch.

(lat. Bactisubtil®) je bakteriálny liek proti hnačke.

Aktívnou zložkou bactisubtilu sú bacily kmeň IP 5832 (ATCC 14893) druhu Bacillus cereus- mikroorganizmus blízky Bacillus subtilis.

Jedna kapsula bactisubtilu obsahuje 35 mg (10 9 spór) sušeného prášku bakteriálneho kmeňa Bacillus cereus IP 5832.

Mechanizmus účinku bactisubtilu

Spóry Bacillus Bacillus cereus sú odolné voči žalúdočnej šťave, neporušené prechádzajú do čriev, kde sa premieňajú na aktívne formy, ktoré uvoľňujú širokospektrálne antibakteriálne látky, ktoré potláčajú rozvoj patogénnych a podmienene patogénnych baktérií, majú antimikrobiálny, protihnačkový účinok a obnovujú črevnú mikroflóru .

Baktisubtil má antimikrobiálnu aktivitu a možno ho použiť pri bakteriálnych infekciách, keď nie je možné užívať antibiotiká, alebo na selektívnu dekontamináciu tenkého čreva pri syndróme prerastania baktérií. Spóry týchto baktérií, ktoré sa v hrubom čreve menia na aktívne formy, počas svojho života produkujú kyslé metabolity - organické kyseliny. Zároveň sa pH posúva na kyslú stranu a potláča sa rast patogénnych a oportúnnych mikroorganizmov (E.A. Belousová, A.R. Zlatkina).

Indikácie na použitie bactisubtilu

• akútna a chronická hnačka rôznej povahy, vrátane infekčnej
• črevná dysbióza, vrátane tých, ktoré sú spôsobené užívaním antibiotík
• enteritída a enterokolitída
• prevencia a liečba črevných porúch spôsobených chemoterapiou alebo rádioterapiou.

Ako užívať bactisubtil a dávkovanie

Bactisubtil sa užíva jednu hodinu pred jedlom. Pite iba studenú tekutinu. Bactisuptil sa nemá užívať v kombinácii s alkoholom. Trvanie liečby bactisubtilom je 7-10 dní.

Dospelí a dospievajúci užívajú 2 kapsuly bactisubtilu 2-4 krát denne.
Deti staršie ako 7 rokov užívajú 1-2 kapsuly bactisubtilu 2-3 krát denne.

Ak po liečbe bactisubtilom nedôjde k zlepšeniu do troch dní, ďalšie užívanie sa neodporúča.

všeobecné informácie

Bactisubtil je liek na predpis. Liečba bactisubtilom je prípustná len podľa predpisu lekára.

Vynález sa týka oblasti medicíny, menovite mikrobiológie, a môže byť použitý v bakteriologických laboratóriách na detekciu antagonistickej aktivity kmeňa Bacillus cereus IP 5832 (ATCC 14893). Koinkubácia sa uskutočňuje vo fyziologickom roztoku izolovaného kmeňa Bacillus cereus IP 5832 (ATCC 14893) v čistej kultúre a izolovanej čistej kultúre oportúnneho patogénneho mikroorganizmu (OPM) zo stolice pacienta. Výsledná zmes sa vysieva s použitím zlata na živný agar s penicilínom a bez penicilínu v koncentrácii 0,01 U/ml, a ak sa zistí pokles množstva UPM na médiu s penicilínom v porovnaní s množstvom UPM na médiu bez penicilínu sa stanoví prítomnosť antagonistickej aktivity kmeňa Bacillus cereus IP 5832 (ATCC 14893) proti kmeňu UPM, zatiaľ čo eubiotikum sa hodnotí ako účinné proti kmeňu UPM izolovanému od pacienta počas testovania na črevnú dysbiózu. Vynález poskytuje potlačenie kmeňa Bacillus cereus IP 5832 (ATCC 14893) bez ohrozenia klíčenia testovaných kultúr UPM. 3 stoly

Vynález sa týka oblasti medicíny, konkrétne mikrobiológie, a môže byť použitý v bakteriologických laboratóriách na identifikáciu antagonistickej aktivity kmeňa Bacillus cereus IP 5832 (ATCC 14893) za účelom individuálneho hodnotenia účinnosti eubiotík, hlavnej aktívnej látky. ktorého princípom je kmeň Bacillus cereus IP 5832 (ATCC 14893), vo vzťahu k oportúnnym mikroorganizmom izolovaným od pacienta počas štúdie črevnej dysbiózy. Vynález je možné využiť aj v gastroenterológii na individuálny výber eubiotík, ktorých hlavnou účinnou látkou je Bacillus cereus kmeň IP 5832 (ATCC 14893), pri liečbe črevnej dysbiózy.

Medzi liekmi na úpravu zmenenej črevnej mikrobiocenózy zaujímajú významné miesto eubiotiká, určené na potlačenie patogénnych a oportúnnych mikroorganizmov. Medzi eubiotiká patria najčastejšie zástupcovia rodu Bacillus, ktorí nie sú zástupcami normálnej črevnej mikroflóry, sú eliminovaní čoskoro po vysadení a sú silnými antagonistami nepríbuzných mikroorganizmov v dôsledku produkcie lyzozýmu, proteolytických enzýmov a bakteriocínov. Je známe, že bacily najúčinnejšie potláčajú patogénne enterobaktérie a niektoré oportúnne mikroorganizmy, ktoré kolonizujú črevný biotop: S. aureus, Candida spp., E. coli, P. aeruginosa, K. pneumoniae a ďalšie oportúnne enterobaktérie.

Jedným z najpoužívanejších eubiotických liekov v mnohých krajinách je liek „Baktisubtil“ (Francúzsko), ktorého hlavnou účinnou látkou je Bacillus cereus kmeň IP 5832 (ATCC 14893). Známy je aj eubiotikum „Flonivin“, ktorého hlavnou účinnou látkou je tiež Bacillus cereus kmeň IP 5832 (ATCC 14893), BS Výrobca: Galenika, A.D., Srbsko.

Priemyselné kmene rodu Bacillus netvoria biofilmy, pretože ich adhézne vlastnosti k bunkám črevného epitelu sú slabé. Na základe skutočnosti, že aktivita kmeňa Bacillus cereus sa vyskytuje v črevnom lúmene a je spojená predovšetkým s vysokou antagonistickou aktivitou tohto kmeňa, a nie s konkurenčnými vzťahmi o miesta pripojenia na sliznicu, potom účinnosť eubiotík, ktorého hlavnou účinnou zložkou je kmeň Bacillus cereus IP 5832 (ATCC 14893), vo vzťahu k oportúnnym mikroorganizmom izolovaným od pacienta počas diagnózy črevnej dysbiózy, možno posúdiť podľa prítomnosti alebo neprítomnosti antagonistickej aktivity kmeňa Bacillus cereus IP 5832 (ATCC 14893).

Bakteriocíny alebo látky podobné bakteriocínu produkujú bacily hlavne extracelulárne a sú schopné akumulovať sa v živnom médiu. Vďaka tomu možno teoreticky zisťovať antagonistickú aktivitu bacilov pomocou rôznych modifikácií metód priameho alebo oneskoreného antagonizmu, ktoré sa tradične používajú len na detekciu antagonizmu probiotických lakto- a bifidobaktérií: metóda streak, metóda Frederickovho oneskoreného antagonizmu so stredným usmrcovaním produkčný kmeň s chloroformom, metóda dvojvrstvového agaru .

Na identifikáciu antagonistickej aktivity kmeňa Bacillus cereus IP 5832 (ATCC 14893) sme použili vyššie uvedené metódy.

Na vyhodnotenie antagonistickej aktivity bacilov metódou priameho antagonizmu sa suspenzia dennej kultúry B. cereus rozotrela cez priemer Petriho misky s výživným agarom v koncentrácii 1 x 109 podľa štandardu optického zákalu GISC. pomenovaný po. L.A. Tarasevič. Kultúry oportúnnych mikroorganizmov izolované počas diagnostiky črevnej dysbiózy boli vysiate kolmo. Inkubuje sa pri 37 °C počas 24 hodín. Prítomnosť antagonistickej aktivity bola braná do úvahy prítomnosťou retardácie rastu v testovaných kmeňoch.

Pri hodnotení antagonistickej aktivity bacilov metódou oneskoreného antagonizmu sa testovacie kultúry oportúnnych mikroorganizmov naočkovali 24 a 48 hodín po inokulácii bacilov.

V zvažovaných možnostiach hodnotenia antagonizmu kmeňa Bacillus cereus IP 5832 (ATCC 14893) podľa našich vlastných údajov kmeň nevykazoval antagonistickú aktivitu voči testovacím kultúram oportúnnych mikroorganizmov (80 kmeňov). Niektoré aktívne pohyblivé kmene oportúnnych mikroorganizmov (P. aeruginosa, E. coli) rástli na povrchu bacilárnych kolónií.

Predpokladá sa, že metabolity bacilov majú silnejší antagonistický účinok ako živé kultúry. Preto sme použili aj metódu oneskoreného antagonizmu so stredným usmrtením produkčného kmeňa chloroformom. Bacillus cereus kmeň IP 5832 (ATCC 14893) sa naočkoval do stuhnutého 1,5 % živného agaru naliateho do Petriho misiek a nechal sa rásť 48 hodín pri 37 °C. Po inkubácii sa výsledná kultúra usmrtila parami chloroformu a navrstvila sa suspenzia testovanej kultúry oportúnneho mikroorganizmu. Za týmto účelom zmiešajte 0,1 ml kultúry v konečnej koncentrácii 108 buniek podľa štandardu optického zákalu s 2,5-3 ml 0,7% polotekutého agaru roztopeného a ochladeného na teplotu 46-48°C. Ak existuje schopnosť produkovať bakteriocíny, mala by sa okolo kolónie kmeňa Bacillus cereus IP 5832 (ATCC 14893) pozorovať zóna inhibície rastu testovaného kmeňa. Antagonistická aktivita bacilov nebola zistená, pretože rast testovacích kultúr UPM „trávnika“ bol zaznamenaný na povrchu média s predpokladanými bakteriocínmi.

Podobné údaje sme získali modifikovanou metódou dvojvrstvového agaru s inokuláciou bacilov trávnikom s následným usmrtením a vrstvením testovacej kultúry UPM.

Technickou podstatou je nárokovanému spôsobu najbližšia metóda na inverznom agare, ktorá je opísaná na identifikáciu antagonistickej aktivity probiotík obsahujúcich Bacillus subtilis a Escherichia coli proti oportúnnym kvasinkám. Za týmto účelom sa kmene Bacillus subtilis a Escherichia coli vysejú na pevnú živnú pôdu, po 2 dňoch sa agar prevráti a na jeho rubovú stranu sa vysije predtitrovaná dávka kvasníc. Inkubujte 24 hodín za aeróbnych podmienok pri 37 °C. Prítomnosť antagonizmu sa kvantitatívne zisťuje potlačením rastu kvasiniek v porovnaní s podobnou inokuláciou bez probiotických kmeňov.

Metóda invertovaného agaru je opísaná a testovaná na vyhodnotenie antifungálnych účinkov probiotík obsahujúcich Bacillus subtilis a Escherichia coli. Antagonistický účinok na iné oportúnne mikroorganizmy (nie oportúnne kvasinky) však nebol hodnotený. Okrem toho pôvodný spôsob zahŕňa výber takej dávky kvasiniek, pri ktorej by na agare nerástlo viac ako 70 kolónií. To si vyžaduje titráciu a ďalší výskum pri testovaní každého kmeňa. Testovanie tejto metódy pomocou eubiotického producentského kmeňa Bacillus cereus IP 5832 (ATCC 14893) a 80 testovacích kultúr oportúnnych mikroorganizmov izolovaných počas diagnostiky črevnej dysbiózy nám neumožnilo identifikovať jediný prípad antagonistickej aktivity kmeňa Bacillus cereus IP 5832 ( ATCC 14893).

Na posúdenie antagonistickej aktivity probiotík obsahujúcich lakto a bifido sú tiež opísané spôsoby kokultivácie v tekutom médiu s rôznymi nepriamymi metódami hodnotenia, ktoré nezahŕňajú následné vysiatie na pevné živné médium na určenie počtu potlačených UPM.

Žiadna zo známych metód detekcie antagonistickej aktivity probiotických lakto- a bifidobaktérií nám teda podľa autorov neumožnila zistiť antagonistickú aktivitu Bacillus cereus kmeň IP 5832 (ATCC 14893) proti oportúnnym mikroorganizmom izolovaným od pacienta počas štúdia o črevnej dysbióze.

V literatúre sme tiež nenašli spôsob, ako individuálne posúdiť účinnosť lieku "Baktisubtil" alebo iných eubiotických liekov, ktorých hlavnou účinnou látkou je Bacillus cereus kmeň IP 5832 (ATCC 14893), proti oportúnnym mikroorganizmom izolovaným z konkrétneho pacienta počas štúdie dysbakteriózy čriev.

Cieľom vynálezu je identifikovať antagonistickú aktivitu Bacillus cereus kmeň IP 5832 (ATCC 14893) proti oportúnnym mikroorganizmom izolovaným od konkrétneho pacienta počas štúdie črevnej dysbiózy.

Technickým výsledkom vynálezu je potlačenie eubiotického kmeňa Bacillus cereus IP 5832 (ATCC 14893) bez ohrozenia klíčenia testovaných kultúr.

Technický výsledok sa dosiahne izoláciou čistej kultúry oportúnnych mikroorganizmov z výkalov subjektu, následnou izoláciou Bacillus cereus kmeň IP 5832 (ATCC 14893) v čistej kultúre, po ktorej je spolu Bacillus cereus kmeň IP 5832 (ATCC 14893). - inkubované s každým z kmeňov oportúnnych mikroorganizmov vo fyziologickom roztoku, po čom nasleduje naočkovanie zlata na živný agar s penicilínom v koncentrácii 0,01 U/ml a bez neho a pri identifikácii poklesu počtu oportúnnych mikroorganizmov na médiu s penicilínu v porovnaní s počtom oportúnnych mikroorganizmov mikroorganizmov na médiu bez penicilínu sa zisťuje prítomnosť antagonistickej aktivity kmeňa Bacillus cereus IP 5832 (ATCC 14893) proti kmeňu oportúnneho mikroorganizmu, pričom eubiotikum sa hodnotí ako účinné proti kmeň oportúnneho mikroorganizmu izolovaného od daného pacienta v štúdii črevnej dysbiózy.

Metóda sa vykonáva takto:

Štandardnými metódami sa izoluje čistá kultúra oportúnnych mikroorganizmov zo stolice pacienta a Bacillus cereus kmeň IP 5832 (ATCC 14893) v čistej kultúre, ktorá je hlavnou účinnou zložkou eubiotika. Z eubiotika „Baktisubtil“ sme izolovali čistú kultúru Bacillus cereus kmeň IP 5832 (ATCC 14893). 1 ml suspenzie testovacej kultúry oportúnneho mikroorganizmu vo fyziologickom roztoku v konečnej koncentrácii 10 9 buniek podľa štandardu optického zákalu sa zmieša s 1 ml suspenzie Bacillus cereus v rovnakej koncentrácii. Zmes sa inkubuje 48 hodín pri 37 °C. Potom sa výsev vykonáva podľa Golda. Na tento účel sa kvantitatívny výsev uskutočňuje pomocou meracej slučky s priemerom 3 mm a kapacitou 2 μl na živnom agare s penicilínom v koncentrácii 0,01 U/ml na potlačenie bacilov a na médium bez antibiotík na kontrolu rast oboch typov kultúr. Na vylúčenie iných možných faktorov potláčajúcich rast UPM a bacilov (nedostatok živnej bázy) sa paralelne po inkubácii za podobných podmienok vykonáva kontrolný výsev monokultúr. Počet narastených mikroorganizmov sa vypočíta podľa tabuľky 1 - Výpočtová tabuľka na stanovenie počtu baktérií v 1 ml tekutiny. Ak sa vo výkaloch pacienta zistí viac ako jeden UPM, opísaný postup sa vykoná s každým z UPM. Ak sa na médiu s penicilínom zistí pokles počtu oportúnnych mikroorganizmov v porovnaní s kontrolným výsevom, stanoví sa prítomnosť antagonistickej aktivity kmeňa Bacillus cereus IP 5832 (ATCC 14893) voči kmeňu oportúnneho mikroorganizmu izolovaného z pacienta počas štúdie na intestinálnu dysbiózu. Prítomnosť alebo neprítomnosť antagonistickej aktivity Bacillus cereus kmeň IP 5832 (ATCC 14893) je hodnotiacim kritériom na určenie účinnosti eubiotík, ktorých hlavnou účinnou látkou je Bacillus cereus kmeň IP 5832 (ATCC 14893), proti kmeňu oportúnny mikroorganizmus izolovaný od daného pacienta počas štúdie na intestinálnu dysbiózu. V prítomnosti antagonistickej aktivity kmeňa Bacillus cereus IP 5832 (ATCC 14893) sa eubiotikum hodnotí ako účinné proti kmeňu oportúnneho mikroorganizmu izolovaného od tohto pacienta počas testu na intestinálnu dysbiózu.

Základné charakteristické črty navrhovanej metódy sú:

Izolujte čistú kultúru oportúnnych mikroorganizmov z výkalov subjektu;

Izoluje sa čistá kultúra Bacillus cereus kmeň IP 5832 (ATCC 14893), ktorá je hlavnou účinnou zložkou eubiotika;

Potom sa kmeň Bacillus cereus IP 5832 (ATCC 14893) spoločne inkubuje s každým z kmeňov oportúnnych mikroorganizmov vo fyziologickom roztoku;

Následný výsev zmesi na živnú pôdu podľa Golda;

Výsev sa uskutočňuje na živnom agare s penicilínom a bez penicilínu v koncentrácii 0,01 U/ml;

Ak sa zistí pokles počtu oportúnnych mikroorganizmov na médiu s penicilínom v porovnaní s počtom oportúnnych mikroorganizmov na médiu bez penicilínu, prítomnosť antagonistickej aktivity kmeňa Bacillus cereus IP 5832 (ATCC 14893) proti kmeňom oportúnnych mikroorganizmov je určený;

V prítomnosti antagonistickej aktivity kmeňa Bacillus cereus IP 5832 (ATCC 14893) proti kmeňom oportúnnych mikroorganizmov sa eubiotikum hodnotí ako účinné proti kmeňu oportúnneho mikroorganizmu izolovaného od daného pacienta počas testovania na črevnú dysbiózu.

Vzťah príčiny a následku medzi podstatnými rozlišovacími znakmi a dosiahnutým výsledkom:

Individualita identifikácie antagonistickej aktivity kmeňa Bacillus cereus IP 5832 (ATCC 14893) voči oportúnnym mikroorganizmom a následne individualita hodnotenia účinnosti eubiotík, ktorých hlavnou účinnou látkou je Bacillus cereus kmeň IP 5832 (ATCC 14893) proti oportúnnym mikroorganizmom mikroorganizmy izolované od pacienta počas štúdie na črevnú dysbiózu sú zabezpečené izoláciou oportúnnych mikroorganizmov v čistej kultúre z výkalov subjektu a izoláciou čistej kultúry Bacillus cereus kmeň IP 5832 (ATCC 14893), po ktorej nasleduje spoločná inkubácia vo fyziologickom roztoku a platne podľa Golda na živnú pôdu .

Výsev podľa Golda na živnú pôdu je potrebný na určenie počtu potlačených UPM.

Živný agar s penicilínom v koncentrácii 0,01 U/ml umožňuje potlačiť eubiotický kmeň Bacillus cereus IP 5832 (ATCC 14893), bez ohrozenia klíčenia testovacích kultúr, čo umožňuje odhaliť antagonistickú aktivitu B. cereus proti oportunistickým mikroorganizmom.

Ako testovacie kultúry sme študovali kmene oportúnnych mikroorganizmov izolovaných od pacientov s črevnou dysbiózou – po 20 izolátoch S. aureus, S. epidermidis, Klebsiella spp., E. coli s typickými vlastnosťami, E. coli so zmenenou enzymatickou aktivitou, Enterobacter spp. Citrobacter spp., P. aeruginosa.

1 ml suspenzie testovacích kultúr UPM vo fyziologickom roztoku v konečnej koncentrácii 109 buniek podľa štandardu optickej turbidity sa zmiešal s 1 ml suspenzie Bacillus cereus kmeň IP 5832 (ATCC 14893) v rovnakej koncentrácii. Aby sa zabránilo množeniu bacilov alebo oportúnnych baktérií, použitie akéhokoľvek tekutého kultivačného média na spoločnú inkubáciu sa považovalo za nevhodné. Zmes sa inkubovala 48 hodín pri 37 °C. Predpokladalo sa, že počas tejto doby UPM odumieralo pod vplyvom metabolitov bacilov. Kvantitatívne očkovanie sa uskutočnilo pomocou meracej slučky s priemerom 3 mm a kapacitou 2 μl podľa Golda. Boli vysiate na živný agar s antibiotikami na potlačenie bacilov a na médium bez antibiotík na kontrolu rastu oboch typov kultúr. Aby sa vylúčili ďalšie možné faktory potláčajúce rast UPM a bacilov (nedostatok živnej bázy), paralelne sa po inkubácii za podobných podmienok uskutočnil kontrolný výsev monokultúr. Počet narastených mikroorganizmov bol vypočítaný podľa tabuľky 1 - Výpočtová tabuľka pre stanovenie počtu baktérií v 1 ml tekutiny 1.

Na potlačenie rastu bacilov na očkovacom médiu bola predtým vybraná selektívna prísada - antibiotikum v koncentrácii, ktorá potláča bacily, ale neinhibuje rast mikroorganizmov, na základe údajov o rozšírenej rezistencii na penicilín a streptomycín medzi testované oportúnne baktérie (najmä enterobaktérie). Rôzne koncentrácie antibiotík sa pridali do živného agaru roztopeného a ochladeného na 46-48 °C. Pri testovaní média so streptomycínom sa liečivo pridalo v koncentráciách 1,0 U/ml, 0,5 U/ml, 0,25 U/ml média. 25 kultúr UPM a Bacillus cereus kmeň IP 5832 (ATCC 14893) sa inokulovalo v koncentrácii 109 buniek/ml na médium s antibiotikami a bez nich. Rast bacilov však nebol úplne potlačený - od 109 do 104 buniek/ml pri maximálnej koncentrácii streptomycínu 1,0 U/ml média. Zároveň kultúry UPM (Klebsiella spp., Enterobacter spp., atypické E. coli, Citrobacter spp., S. aureus) izolované počas diagnostiky dysbiózy boli v rôznej miere potlačené streptomycínom v 74 (96 %) testoch ( Tabuľka 2 - Selekčné antibiotikum na potlačenie Bacillus cereus kmeň IP 5832 (ATCC 14893) a simultánny rast oportúnnych mikroorganizmov).

Pri testovaní média s penicilínom sa liečivo pridalo v koncentráciách 0,001 U/ml, 0,01 U/ml, 0,1 U/ml, 1,0 U/ml média. Výsev a zaznamenávanie výsledkov sa uskutočnilo podobne. Oportúnne enterobaktérie neboli potlačené ani maximálnou koncentráciou penicilínu 1,0 U/ml média. Pozorovalo sa intenzívnejšie potlačenie S. aureus. Prijateľná úroveň klíčenia oportúnnych baktérií, vrátane S. aureus, so súčasným úplným potlačením kmeňa Bacillus cereus IP 5832 (ATCC 14893) bola pozorovaná pri koncentrácii penicilínu 0,01 U/ml živného média (tabuľka 2 - Výber antibiotika na potlačenie Bacillus kmeňa cereus IP 5832 (ATCC 14893) a simultánny rast oportúnnych mikroorganizmov).

V prítomnosti antagonistickej aktivity Bacillus cereus kmeň IP 5832 (ATCC 14893) proti oportúnnym mikroorganizmom sa eubiotikum hodnotí ako účinné proti kmeňu oportúnneho mikroorganizmu izolovaného od daného pacienta počas testovania na črevnú dysbiózu.

Antagonistickú aktivitu kmeňa Bacillus cereus IP 5832 sme zvolili ako hodnotiace kritérium pre individuálne posúdenie účinnosti eubiotík, ktorých hlavnou účinnou látkou je Bacillus cereus kmeň IP 5832 (ATCC 14893), vo vzťahu ku kmeňu oportúnneho mikroorganizmu. izolovaný od tohto pacienta počas štúdie črevnej dysbiózy (ATCC 14893). To sa vysvetľuje skutočnosťou, že aktivita kmeňa Bacillus cereus sa vyskytuje v črevnom lúmene a je spojená predovšetkým s vysokou antagonistickou aktivitou tohto kmeňa, a nie s konkurenčnými vzťahmi pre miesta pripojenia k sliznici.

Súbor podstatných charakteristických čŕt navrhovanej metódy je nový a umožňuje potlačiť eubiotický kmeň Bacillus cereus IP 5832 (ATCC 14893) bez ohrozenia klíčenia testovacích kultúr, čo zase zabezpečuje identifikáciu antagonistickej aktivity eubiotický kmeň Bacillus cereus IP 5832 (ATCC 14893) vo vzťahu k oportúnnym mikroorganizmom izolovaným počas štúdie črevnej dysbiózy od pacienta, ktorý možno použiť na individuálne posúdenie účinnosti eubiotík, ktorých hlavnou účinnou látkou je Bacillus cereus kmeň IP 5832 (ATCC 14893), vo vzťahu k oportúnnym mikroorganizmom izolovaným z pacienta pri vyšetrovaní intestinálnej dysbiózy.

Príklady konkrétnej implementácie:

Bakteriologické vyšetrenie stolice na črevnú dysbiózu (č. 247) odhalilo Citrobacter freundii v množstve 5×106 CFU/g.

1 ml suspenzie čistej kultúry Citrobacter freundii, izolovanej zo stolice pacienta, vo fyziologickom roztoku v konečnej koncentrácii 10 buniek podľa štandardu optického zákalu sa zmiešal s 1 ml suspenzie čistej kultúry Bacillus cereus. kmeň IP 5832 (ATCC 14893), izolovaný z eubiotika „Baktistatín“, v rovnakej koncentrácii. Zmes sa inkubovala 48 hodín pri 37 °C. Potom sa pomocou meracej slučky s priemerom 3 mm a kapacitou 2 μl zlata uskutočnilo kvantitatívne naočkovanie na výživný agar s penicilínom v koncentrácii 0,01 U/ml na potlačenie bacilov a na médium bez antibiotík na kontrolu rastu. oboch typov kultúr. Počet narastených mikroorganizmov bol vypočítaný podľa tabuľky 1 - Výpočtová tabuľka na stanovenie počtu baktérií v 1 ml kvapaliny.

V kontrolnom variante bola koncentrácia Citrobacter freundii 108 CFU/g, v experimentálnom variante 5 x 10 CFU/g. Bola odhalená antagonistická aktivita kmeňa Bacillus cereus IP 5832 (ATCC 14893) proti kmeňu Citrobacter freundii (č. 247). Zistilo sa, že liek "Baktisubtil" je účinný proti kmeňu Citrobacter freundii izolovanému od pacienta počas štúdie črevnej dysbiózy.

Bakteriologické vyšetrenie stolice na črevnú dysbiózu (č. 512) odhalilo S aureus v množstve 10 6 CFU/g.

1 ml suspenzie čistej kultúry S aureus izolovanej z pacientovej stolice vo fyziologickom roztoku v konečnej koncentrácii 109 buniek/ml podľa štandardu optického zákalu sa zmiešal s 1 ml suspenzie čistej kultúry Bacillus. cereus kmeň IP 5832 (ATCC 14893), izolovaný z eubiotika „Baktisubtil“ “, v rovnakej koncentrácii. Zmes sa inkubovala 48 hodín pri 37 °C. Potom sa pomocou meracej slučky s priemerom 3 mm a kapacitou 2 μl zlata uskutočnilo kvantitatívne naočkovanie na výživný agar s penicilínom v koncentrácii 0,01 U/ml na potlačenie bacilov a na médium bez antibiotík na kontrolu rastu. oboch typov kultúr. Počet narastených mikroorganizmov bol vypočítaný podľa tabuľky 1 - Výpočtová tabuľka na stanovenie počtu baktérií v 1 ml kvapaliny.

V kontrolnom variante bola koncentrácia S aureus 5x106 CFU/g, v experimentálnom variante - 106 CFU/g. Antagonistická aktivita kmeňa Bacillus cereus IP 5832 (ATCC 14893) proti kmeňu S aureus nebola zistená (č. 512). Zistilo sa, že liek "Baktisubtil" je neúčinný proti kmeňu S aureus izolovanému od pacienta počas testu na črevnú dysbiózu.

Bakteriologické vyšetrenie stolice na črevnú dysbiózu (č. 429) odhalilo Klebsiella pneumoniae v množstve 10 4 CFU/g, Enterobacter agglomerans v množstve 10 6 CFU/g, Citrobacter freundii v množstve 10 6 CFU/g, Staphylococcus aureus v množstve 104 CFU/g.

1 ml suspenzie čistej kultúry každého z kmeňov oportúnnych mikroorganizmov izolovaných od pacienta vo fyziologickom roztoku v konečnej koncentrácii 109 buniek podľa štandardu optického zákalu sa zmiešal s 1 ml suspenzie čistá kultúra Bacillus cereus kmeň IP 5832 (ATCC 14893), izolovaná z eubiotického "Baktisubtil" v rovnakej koncentrácii. Takto sa získali 4 zmesi kmeňov oportúnnych mikroorganizmov a bacilov. Zmesi sa inkubovali 48 hodín pri 37 °C. Potom sa pomocou meracej slučky s priemerom 3 mm a kapacitou 2 μl zlata uskutočnilo kvantitatívne naočkovanie na výživný agar s penicilínom v koncentrácii 0,01 U/ml na potlačenie bacilov a na médium bez antibiotík na kontrolu rast každej z izolovaných kultúr. Počet narastených mikroorganizmov bol vypočítaný podľa tabuľky 1 - Výpočtová tabuľka na stanovenie počtu baktérií v 1 ml kvapaliny.

V kontrolnom variante bola koncentrácia Klebsiella pneumoniae 108 CFU/g, v experimentálnom variante 106 CFU/g. V kontrolnom variante bola koncentrácia Enterobacter agglomerans 107 CFU/g, v experimentálnom variante 105 CFU/g. V kontrolnom variante bola koncentrácia Staphylococcus aureus 108 CFU/g, v experimentálnom variante 5×106 CFU/g. V kontrolnom variante bola koncentrácia Citrobacter freundii 107 CFU/g, v experimentálnom variante 106 CFU/g.

Bola odhalená antagonistická aktivita kmeňa Bacillus cereus IP 5832 (ATCC 14893) proti kmeňom Klebsiella pneumoniae, Enterobacter agglomerans, Staphylococcus aureus, Citrobacter freundii. Zistilo sa, že liek "Baktisubtil" je účinný proti týmto kmeňom izolovaným od daného pacienta počas štúdie dysbakteriózy.

Bakteriologické vyšetrenie stolice na črevnú dysbiózu (č. 449) odhalilo Enterobacter agglomerans v množstve 10 6 CFU/g, Klebsiella pneumoniae v množstve 5×10 4 CFU/g, Citrobacter freundii v množstve 10 6 CFU/. g.

1 ml suspenzie čistej kultúry každého z izolovaných kmeňov oportúnnych mikroorganizmov vo fyziologickom roztoku v konečnej koncentrácii 109 buniek podľa štandardu optického zákalu sa zmiešal s 1 ml suspenzie čistej kultúry Bacillus cereus. kmeň IP 5832 (ATCC 14893), izolovaný z eubiotika "Baktisubtil", v rovnakej koncentrácii. Takto sa získali 3 zmesi kmeňov oportúnnych mikroorganizmov a bacilov. Zmesi sa inkubovali 48 hodín pri 37 °C. Potom sa pomocou meracej slučky s priemerom 3 mm a kapacitou 2 μl zlata uskutočnilo kvantitatívne naočkovanie na výživný agar s penicilínom v koncentrácii 0,01 U/ml na potlačenie bacilov a na médium bez antibiotík na kontrolu rastu. každej z izolovaných kultúr. Počet narastených mikroorganizmov bol vypočítaný podľa tabuľky 1 - Výpočtová tabuľka na stanovenie počtu baktérií v 1 ml kvapaliny.

V kontrolnom variante bola koncentrácia Enterobacter agglomerans 108 CFU/g, v experimentálnom variante 5x107 CFU/g. V kontrolnom variante bola koncentrácia Klebsiella pneumoniae 107 CFU/g, v experimentálnom variante 5×106 CFU/g. V kontrolnom variante bola koncentrácia Citrobacter freundii 107 CFU/g, v experimentálnom variante 5x105 CFU/g.

Antagonistická aktivita kmeňa Bacillus cereus IP 5832 (ATCC 14893) proti kmeňu Citrobacter freundii bola zistená, antagonistická aktivita kmeňa Bacillus cereus IP 5832 (ATCC 14893) proti kmeňom Enterobacter agglomerans a Klebsiella pneumoniae nebola zistená; Zistilo sa, že liek "Baktisubtil" je účinný proti kmeňu Citrobacter freundii a neúčinný proti kmeňom Enterobacter agglomerans a Klebsiella pneumoniae izolovaným od tohto pacienta počas štúdie dysbakteriózy.

Bakteriologické vyšetrenie stolice na črevnú dysbiózu (č. 461) odhalilo Klebsiella pneumoniae v množstve 10 6 CFU/g a Citrobacter freundii v množstve 10 6 CFU/g.

1 ml suspenzie čistej kultúry každého z izolovaných kmeňov oportúnnych mikroorganizmov vo fyziologickom roztoku v konečnej koncentrácii 109 buniek podľa štandardu optického zákalu sa zmiešal s 1 ml suspenzie čistej kultúry Bacillus cereus. kmeň IP 5832 (ATCC 14893), izolovaný z eubiotika "Baktisubtil", v rovnakej koncentrácii. Takto sme získali 2 zmesi kmeňov oportúnnych mikroorganizmov a bacilov. Zmesi sa inkubovali 48 hodín pri 37 °C. Potom sa pomocou meracej slučky s priemerom 3 mm a kapacitou 2 μl zlata uskutočnilo kvantitatívne naočkovanie na výživný agar s penicilínom v koncentrácii 0,01 U/ml na potlačenie bacilov a na médium bez antibiotík na kontrolu rastu. všetkých izolovaných kultúr. Počet narastených mikroorganizmov bol vypočítaný podľa tabuľky 1 - Výpočtová tabuľka na stanovenie počtu baktérií v 1 ml kvapaliny.

V kontrolnom variante bola koncentrácia Klebsiella pneumoniae 107 CFU/g, v experimentálnom variante 5×105 CFU/g. V kontrolnom variante bola koncentrácia Citrobacter freundii 108 CFU/g, v experimentálnom variante 5x107 CFU/g.

Bola odhalená antagonistická aktivita kmeňa Bacillus cereus IP 5832 (ATCC 14893) proti kmeňu Klebsiella pneumoniae a antagonistická aktivita kmeňa Bacillus cereus IP 5832 (ATCC 14893) proti kmeňu Citrobacter freundii nebola zistená. Zistilo sa, že liek "Baktisubtil" je účinný proti kmeňu Klebsiella pneumoniae a neúčinný proti kmeňu Citrobacter freundii izolovanému od tohto pacienta počas štúdie dysbakteriózy.

Pomocou vyvinutého média s penicilínom v koncentrácii 0,01 U/ml sa študoval antagonizmus kmeňa Bacillus cereus IP 5832 (ATCC 14893) a 96 kultúr UPM izolovaných vo významných množstvách počas štúdie črevnej dysbiózy: Citrobacter spp. (16 kmeňov), Klebsiella spp. (17), S. aureus (18), Enterobacter spp. (15), typická E. coli (15), E. coli s atypickými vlastnosťami (15). Antagonistická aktivita eubiotika bola hodnotená počtom kmeňov testovaných mikroorganizmov, ktoré potlačil (v %) (tabuľka 3 - Antagonizmus Bacillus cereus kmeň IP 5832 (ATCC 14893) a oportúnnych mikroorganizmov).

Štúdie ukázali, že študovaný kmeň Bacillus cereus IP 5832 (ATCC 14893) potláča 17,7 % (17 izolátov) testovaných kmeňov UPM.

Pokles počtu oportúnnych mikroorganizmov bol však nevýrazný - o 0,5-2 lg. Ukázalo sa, že 79,0 % (81 izolátov) testovaných kmeňov je rezistentných a dokonca schopných reprodukcie v prítomnosti eubiotika.

Spôsob podľa vynálezu umožňuje potlačiť eubiotický kmeň Bacillus cereus kmeň IP 5832 (ATCC 14893) bez ohrozenia klíčenia testovaných kultúr, čo zase zaisťuje identifikáciu antagonistickej aktivity eubiotického kmeňa Bacillus cereus IP 5832 (ATCC 14893) proti kmeňu oportúnneho mikroorganizmu, izolovaného pri diagnostike črevnej dysbiózy u pacienta, ktorý možno použiť na individuálne posúdenie účinnosti eubiotík, ktorých hlavnou účinnou látkou je Bacillus cereus kmeň IP 5832 (ATCC 14893), proti oportúnnym mikroorganizmom izolovaným od pacienta počas štúdie črevnej dysbiózy.

stôl 1
Výpočtová tabuľka na určenie počtu baktérií v 1 ml kvapaliny
A	ja	II	III	Množstvo v 1 ml
1-6	-	-		<1000
8-20	-	-	-	3000
20-30	-	-	-	5000
30-60	-	-	-	10000
70-80	-	-	-	50000
100-150	5-10	-	-	100000
nepočítajúc	20-30	-	-	500000
-"-	40-60	-	-	1 milión
-"-	100-150	10-20	-	5 miliónov
-"-	nepočítajúc	30-40	-	10 miliónov
-"-	-"-	60-80	Jednotlivé kolónie	100 milionov
tabuľka 2
Výber antibiotika na potlačenie kmeňa Bacillus cereus IP 5832 (ATCC 14893) a súčasného rastu oportúnnych mikroorganizmov
Rast UMR pri danej koncentrácii antibiotika, CFU/ml	Počet kmeňov UPM pestovaných pri danej koncentrácii antibiotika, abs (%)
Streptomycín, jednotky/ml média	Penicilín, jednotky/ml média
1,0	0,5	0,25	1,0	0,01	0,01	0,001
10 8 (identické s ovládaním)	1 (4)	8 (32)	10 (40)	16 (64)	19 (76)	22 (88)	23 (92)
10 6	4 (16)	2 (8)	0	4 (16)	3 (12)	3 (12)	2 (8)
10 5	15 (60)	12 (48)	15 (60)	5 (20)	3 (12)	0	0
10 4	3 (12)	3(12)	0	0	0	0	0
<10 4	2 (8)	0	0	0	0	0	0
Rast Bacillus cereus pri danej koncentrácii antibiotika, CFU/ml	10 4	10 4	10 4	Ots.	Ots.	Ots.	10 4

Tabuľka 3
Antagonizmus Bacillus cereus kmeň IP 5832 (ATCC 14893) a oportúnne mikroorganizmy
Testovacie kultúry UPM	Počet kmeňov	Citlivé kmene abs (%)	Odolné kmene abs (%)*
Zníženie o 1 lg	Znížiť o 2 lg	Celkom odolné kmene	Z nich sú schopné rásť v prítomnosti eubiotika**
Klebsiella spp.	17	1 (5,9)	0	16(94,1)	1 (6.25)
Enterobacter spp.	15	4 (26,7)	1 (6,6)	10 (66,7)	1(10)
Citrobacter spp.	16	5(31,3)	0	11 (68,7)	1 (9,1)
typická E. coli	15	1 (6,7)	0	14 (93,3)	0
atypická E. coli	15	2(13,3)	0	13 (86,7)	1 (7,7)
S. aureus	20	3 (15,0)	0	17 (85,0)	6 (35,3)
* - počet UPM sa v porovnaní s kontrolou nezmenil alebo sa nezmenil o viac ako 0,5 lg ** - počet UPM sa zvýšil v porovnaní s kontrolou

Informačné zdroje

1. Osipova I.G., Mikhailova R.A., Sorokulová I.B., Vasilyeva E.A., Gaiderov A.A. Spórové probiotiká // Časopis mikrobiológie, virológie a imunológie. - 2003. - č. 3. - S.113-119.

2. Blinková L.P., Semeňová S.A., Butová L.G. a iné Antagonistická aktivita čerstvo izolovaných kmeňov baktérií rodu Bacillus // Journal of microbiology, virology and immunology. - 1994. - č. 5. - S.71-75.

3. Kmene baktérií Bacillus subtilis a Bacillus licheniformis, používané ako zložky lieku proti vírusovým a bakteriálnym infekciám a liek založený na týchto kmeňoch. / Patent RU 2142287, publ. 12/10/99. - Býk. N20.

4. Kmeň baktérie Bacillus subtilis so širokým spektrom antagonistickej aktivity. / Patent RU N2182172, publ. 05/10/02.

5. Gataullin A.G., Mikhailova N.A., Blinkova L.P., Romanenko E.E., Elkina S.I., Gaiderov A.A., Kalina N.G. Vlastnosti izolovaných kmeňov Bacillus subtilis a ich vplyv na črevnú mikroflóru experimentálnych myší // Journal of Microbiology, Virology and Immunology. - 2004. - č. 2. - S.91-94.

6. Davydov D.S., Mefed K.M., Osipova I.G., Vasilyeva E.A. Celosvetové využitie spórových probiotík v zdravotníckej praxi // Klinická výživa. - 2007. - č. 1-2. - S.A36.

7. Sorokulová I.B. Vplyv probiotík z bacilov na funkčnú aktivitu makrofágov // Antibiotiká a chemoterapia. - 1998. - č. 2. - S.20-23.

8. Blinková L.P. Bakteriocíny: kritériá, klasifikácia, vlastnosti, metódy detekcie // Journal of Microbiology, Virology and Immunology. - 2003. - č. 3. - S.109-113.

9. Postniková E.A., Efimov B.A., Volodin N.N., Kafarskaya L.I. Hľadanie sľubných kmeňov bifidobaktérií a laktobacilov pre vývoj nových biologických produktov // Journal of microbiology, epidemiology and immunology. - 2004. - č. 2. S.64-69.

10. Gratia A., Fredericq P. Deversite des souches antibiotiques de Escherichia coli et étendue varibile de leur champ d'action Tamže: 1031-1033.

11. Fredericq P. Actions antibiotiques reciproques chez les Enterobacteriaceae. REV. Belge Pathol. Med. Exp.1948, 19 (Suppl. 4): 1-107.

12. Ermolenko E.I., Isakov V.A., Zhdan-Pushkina S.Kh., Tets V.V. Kvantitatívne hodnotenie antagonistickej aktivity laktobacilov // Časopis mikrobiológie, virológie a imunológie. - 2004. - č. 5. - S.94-98.

13.Ushakova N.A., Chernukha B.A. Vplyv teplotného šoku na biologickú účinnosť probiotika Bacillus subtilis 8130 // Klinická výživa. - 2007. - č. 1-2. - S.A70.

14. Arzumanyan V.G., Mikhailova N.A., Gaiderov A.A., Basnakyan I.A., Osipova I.G. Kvantitatívna metóda na hodnotenie oneskoreného antagonizmu probiotických kultúr proti oportúnnym kvasinkám // Klinická laboratórna diagnostika. - 2005. - č. 5. S.53-54.

15. Metóda stanovenia antagonistickej aktivity probiotík. / RU patent č. 2187801, zverejnené. 20.08.2002.

16. Zykova N.A., Molokeeva N.V. Nový probiotický liek „Trilact“ // Klinická výživa. - 2007. - č. 1-2. - S.A42.

17. Smernice pre používanie jednotných mikrobiologických (bakteriologických) výskumných metód v klinických diagnostických laboratóriách: Príloha 1 k nariadeniu Ministerstva zdravotníctva ZSSR č. 535. - 1986.

18. Sanford Jay P., Gilbert David N., Moeliering Robert C. Jr., Sande Merle A. Dvadsiate deviate vydanie The Sanford Guide to antimicrobial therapy, 1999.

NÁROK

Metóda individuálneho hodnotenia účinnosti eubiotík, ktorej hlavnou účinnou látkou je Bacillus cereus kmeň IP 5832 (ATCC 14893), proti oportúnnym mikroorganizmom izolovaným od pacienta počas štúdie na črevnú dysbiózu, ktorá spočíva v izolácii oportúnnych mikroorganizmov v čistom kultiváciou z výkalov subjektu, potom sa Bacillus cereus KMEŇ IP 5832 (ATCC 14893) izoluje v čistej kultúre a potom sa kmeň Bacillus cereus IP 5832 (ATCC 14893) inkubuje spoločne s každým z kmeňov oportúnnych mikroorganizmov vo fyziologickom prostredí roztoku, nasleduje výsev podľa Golda na živný agar s penicilínom a bez penicilínu v koncentrácii 0,01 U/ml a ak sa zistí pokles počtu oportúnnych mikroorganizmov na médiu s penicilínom v porovnaní s počtom oportúnnych mikroorganizmov na a. médiu bez penicilínu sa zisťuje prítomnosť antagonistickej aktivity kmeňa Bacillus cereus IP 5832 (ATCC 14893) proti kmeňu oportúnneho mikroorganizmu, pričom eubiotikum sa hodnotí ako účinné proti kmeňu oportúnneho mikroorganizmu izolovaného od daného pacienta, keď testované na črevnú dysbiózu.

Bacillus cereus

Charakteristické znaky bacilov: predstavujú ich veľké rovné tyčinky, ktoré sa farbia pozitívne pre Grama, sú schopné vytvárať spóry v aeróbnych podmienkach, jediným patogénnym druhom pre človeka je Bacillus anthracis (anthrax bacillus), niektoré oportúnne druhy sú tiež schopné spôsobujúce intoxikáciu jedlom a nemocničné infekcie. Bacily sú izolované z pôdy, sladkej a morskej vody, ako aj z rastlín. Môžu rásť pri teplotách od 5 do 75 °C a ich prežitie v extrémnych podmienkach uľahčuje sporulácia. Nemocničné lézie (zápal pľúc, septikémia, endokarditída, meningitída atď.) spôsobujú B. subtilis, B. cereus a B. megaterium (obr. 4, pozri farebnú prílohu), B. alvei, B. laterosporus, B. pumilus, B. thuringiensis a B. sphaericus. Lézie sa zaznamenávajú pomerne zriedkavo a ich vývoj u ľudí uľahčuje rozšírená prevalencia baktérií a vysoká odolnosť ich spór voči rôznym vplyvom.

Bacillus cereus je všadeprítomná, grampozitívna, spórotvorná, pohyblivá tyčinka.

Systematické postavenie mikroorganizmu.

Rodina

Nefunkčné huby Eubacteriales Bacillaceae Bacillus subtilis

U ľudí spôsobujú žalúdočné ochorenia (hnačky a pod.), ďalej septikémiu, endokarditídu, poškodenie centrálneho nervového systému. Ochorenie je zvyčajne krátkodobé a zmizne bez akejkoľvek liečby, ale boli hlásené aj ojedinelé úmrtia. Otrava jedlom Bacillus cereus nie je hlásená z dôvodu relatívne nízkeho počtu ním spôsobených ochorení (do 1 % z celkového počtu). Výskyt ochorenia sa geograficky líši. V niektorých krajinách teda predstavujú menej ako 1 % všetkých otráv jedlom, zatiaľ čo v iných – viac ako 30 %. Bacillus cereus sa z produktov izoluje pomerne často, čo z tohto typu baktérií robí významný indikátorový testovací organizmus pre potravinársky priemysel. Potraviny najviac ohrozené kontamináciou sú mäso a mliečne výrobky, zelenina, polievky, koreniny a najmä detská výživa. Takmer všetky kmene Bacillus cereus produkujú toxíny. Takmer 95 % izolátov Bacillus cereus produkuje cytotoxické enterotoxíny. Z nich nehemolytický enterotoxín (NHE) produkuje viac ako 90 % kmeňov a hemolyzín BL (HBL) produkuje asi 55 % študovaných kmeňov. Predpokladá sa, že HBL a NHE sa tvoria v črevách pacienta po konzumácii potravín kontaminovaných vegetatívnymi bunkami alebo spórami Bacillus cereus. Okrem týchto dvoch toxínov produkujú niektoré kmene Bacillus cereus tepelne stabilný emetický enterotoxín (ETE). Predpokladá sa, že ETE enterotoxín sa spočiatku hromadí v potravinách, najčastejšie v potravinách obsahujúcich škrob, ako je ryža a cestoviny. Z týchto dôvodov je sledovanie obsahu enterotoxínov v týchto produktoch pomocou spoľahlivých zrýchlených testovacích metód čoraz dôležitejšie.

Patogenita, rozsah ochorenia

Bacillus cereus - Dextrózový kazeín-peptónový agar

Bacillus cereus je oportúnny mikroorganizmus, ktorý spôsobuje sporadickú otravu jedlom u ľudí. Bacillus cereus je v prírode všadeprítomný Etiologická úloha Bacillus cereus pri otravách jedlom bola pôvodne študovaná a opísaná Haugeom v roku 1950. Za zdroj otravy jedlom spôsobenej Bacillus cereus sa najskôr považovali kulinárske produkty obsahujúce zemiakový škrob. Potom boli popísané ohniská podobných otráv spôsobených rastlinami, mäsom, rybami a inými potravinovými produktmi. Bacillus cereus sa najrýchlejšie množí v drvených výrobkoch (mleté ​​mäso, rezne, klobása, smotany). V surovinách nie je povolených viac ako 100 buniek/g; prítomnosť Bacillus cereus v konzervách nie je povolená. V sterilizovaných mäsových konzervách sa pri dodržaní stanovených technologických podmienok nenachádzajú bunky tejto baktérie. Keď v konzerve zostanú životaschopné spóry, patogén sa môže množiť v podmienkach skladovania konzervovaných potravín pri 20 °C. Zároveň sa na povrchu produktu objavuje sivý povlak, mení sa jeho vôňa a konzistencia. Bacillus cereus môže tiež spôsobiť hnačkový syndróm u zvierat, vtákov a hmyzu 6-18 hodín po konzumácii kontaminovanej potravy. Je to spôsobené predovšetkým viacerými druhmi toxínov (NHE, HBL, bc-D-ENT) obsiahnutými v kontaminovaných potravinách a následne premnožením baktérií v črevách. Tento komplex toxínov Bacillus cereus spôsobuje cytotoxický účinok a sekréciu tekutín v čreve. Keď sa vykoná biologický test na myšiach, zvieratá pociťujú nekrózu kože v mieste vpichu a následnú smrť.