Na prípravu tlmivých roztokov sa používajú činidlá chemickej kvality. a analytickej kvality, špeciálne pripravené. Príprava reakčných činidiel sa uskutočňuje nasledovne.
Monosubstituovaný fosforečnan draselný, KH2PO4 , molekulová hmotnosť 136,09. 100 g drogy sa rozpustí zahriatím do varu v 150 ml vody. Roztok sa za horúca prefiltruje. Za stáleho miešania sa filtrát ochladí na 10 °C. Potom pridajte 150 ml etylalkoholu. Kryštály uvoľnené za stáleho miešania filtrátu sa odfiltrujú pomocou odsávacieho lievika a znova sa rekryštalizujú za rovnakých podmienok; kryštály sa sušia do konštantnej hmotnosti pri 105…110 ºС. Ak existuje liečivo s obsahom hlavnej látky v rozmedzí 99,9...100,0 %, predbežná príprava látky sa nevykonáva.
Disubstituovaný fosforečnan sodný, Na2HP04. 12H20, molekulová hmotnosť 358,12. Existujú dva spôsoby prípravy lieku.
a) 150 g drogy sa pri zahriatí na 100 0 C rozpustí v 150 ml vody. Roztok sa za horúca prefiltruje a po ochladení sa odfiltrujú vyzrážané kryštály. Rekryštalizácia sa opakuje zahriatím na 100 ºС. Rekryštalizovaná droga sa zahrieva v porcelánovej šálke vo vodnom kúpeli za stáleho miešania až do úplného vyschnutia drogy. Výsledná soľ sa suší v exsikátore nad roztaveným chloridom vápenatým počas 24 hodín. Skontroluje sa obsah hlavnej látky v rekryštalizovanom prípravku (Na 2 HPO 4 · 2H 2 O). K tomu sa asi 0,5000 g liečiva rozpustí v 50 ml vody, pridajú sa 2...3 ml nasýteného roztoku chloridu sodného a titruje sa 0,1 N roztokom kyseliny chlorovodíkovej za prítomnosti indikátora metylovej červene. Ak je to potrebné, upravte veľkosť vzorky. 1 ml presne 0,1 N roztoku kyseliny chlorovodíkovej zodpovedá 0,0178 g Na2HP04.2H20.
b) 75 g liečiva sa rozpustí v 250 ml vody zohriatej na 60 ºС. Roztok sa za horúca prefiltruje, filtrát sa za stáleho miešania ochladí na 10 °C. Vyzrážané kryštály sa odfiltrujú pomocou odsávacieho lievika a znova sa rekryštalizujú za rovnakých podmienok. Výsledná soľ sa najskôr suší pri teplote nepresahujúcej 30 °C počas 24 hodín, potom sa pokračuje v sušení v sušiarni pri teplote 50 °C počas 3...4 hodín a nakoniec pri teplote 120 ± 5 °C do konštantnej hmotnosti, čím sa zabráni soli. z topenia. Po vysušení má soľ zloženie Na2HP04.
Po príprave činidiel pripravte počiatočné roztoky monosubstituovaného fosforečnanu draselného a hydrogenfosforečnanu sodného.
Vzorka bezvodého fosforečnanu draselného monosubstituovaného KH2P04 s hmotnosťou 9,078 g sa rozpustí vo vode a objem roztoku sa upraví na 1 liter. Na stabilizáciu roztoku pridajte 3...4 kvapky toluénu.
Vzorka fosforečnanu sodného disubstituovaného Na2HP04.12H20 s hmotnosťou 11,876 g sa rozpustí vo vode a objem roztoku sa upraví na 1 liter. Na stabilizáciu roztoku pridajte 3...4 kvapky toluénu.
Fosfátové tlmiace roztoky s pH od 4,94 do 9,18 sa pripravia z počiatočných roztokov podľa tabuľky A.2.
Tabuľka A.2 - Fosfátový tlmivý roztok s pH 4,94...9,18
| pH | roztok Na2HP04 12H20, ml | roztok KH2P04, ml |
| 4,94 | 1,0 | 99,0 |
| 5,29 | 2,5 | 97,5 |
| 5,59 | 5,0 | 95,0 |
| 5,91 | 10,0 | 90,0 |
| 6,24 | 20,0 | 80,0 |
| 6,47 | 30,0 | 70,0 |
| 6,64 | 40,0 | 60,0 |
| 6,81 | 50,0 | 50,0 |
| 6,98 | 60,0 | 40,0 |
| 7,17 | 70,0 | 30,0 |
| 7,38 | 80,0 | 20,0 |
| 7,73 | 90,0 | 10,0 |
| 8,04 | 95,0 | 5,0 |
| 8,34 | 97,5 | 2,5 |
| 8,67 | 99,0 | 1,0 |
| 9,18 | 100,0 | 0,0 |
Dátum pridania: 2015-08-06 | Zobrazenia: 4058 |
Aplikácia
Pufor fosforečnan sodný je široko používaný, pretože je izotonický a netoxický pre bunky. PBS sa používa na rozpúšťanie látok na oplachovanie nádob obsahujúcich bunky.
Príprava
Existuje mnoho spôsobov prípravy pufra fosforečnanu sodného. Niektoré prípravky neobsahujú draslík, iné obsahujú vápnik alebo horčík.
Na prípravu 1 litra jednorazového pufra fosforečnanu sodného použite:
- 8,00 g NaCl
- 0,20 g KCl
- 1,44 g Na2HP04
- 0,24 g KH2P04
- rozpustený v 800 ml destilovanej vody
- upravte pH na 7,4 pomocou kyseliny chlorovodíkovej alebo hydroxidu sodného
- pridajte destilovanú vodu do 1 litra.
Desať litrov desaťnásobného zásobného roztoku PBS možno pripraviť rozpustením 800 g NaCl, 20 g KCl, 144 g Na2HP04 a 24 g KH2PO4 v ôsmich litroch destilovanej vody, čím sa objem zvýši na desať litrov. pH výsledného roztoku bude približne 6,8, ale po zriedení 1X PBS bude 7,4. Po príprave roztoku skontrolujte hodnotu pH pomocou pH metra. V prípade potreby môžete upraviť pH pomocou kyseliny chlorovodíkovej alebo hydroxidu sodného.
Najjednoduchším spôsobom prípravy pufra fosforečnanu sodného je použitie komerčne dostupných tabletových prípravkov. Takéto tablety sa zriedia destilovanou vodou na daný objem a získa sa roztok danej koncentrácie.
Pre bunkové kultúry by mal byť roztok rozdelený na alikvóty a sterilizovaný autoklávovaním (20 minút pri 121 °C, kvapalný režim). Sterilizácia nie je potrebná v závislosti od aplikácie. Je možné skladovať tlmivý roztok fosforečnanu sodného pri izbovej teplote, ale na zabránenie rastu baktérií sa odporúča dlhodobé skladovanie nesterilného tlmivého roztoku v chladničke. Soli v koncentrovaných zásobných roztokoch sa môžu po ochladení vyzrážať, preto sa pred použitím odporúča zohriať koncentrovaný roztok na izbovú teplotu a počkať, kým sa zrazenina úplne nerozpustí.
Poznámky
pozri tiež
Nadácia Wikimedia. 2010.
Fosfátovo-fyziologický premývací pufor s Tween-20 pre imunohistochémiu je koncentrát (20x), ktorý sa po zriedení používa na premývanie sklíčok reagencií a krátkodobé skladovanie imunohistochemických vzoriek medzi jednotlivými postupmi. Po zriedení má 0,01 M roztok pripravený na použitie pH 7,4 ± 0,1. Použitie tohto fosfátom pufrovaného fyziologického roztoku umožňuje nielen zabezpečiť kvalitné premytie, ale aj zachovať morfologické charakteristiky použitých protilátok a ich epitopov, čo uľahčuje špecifickú väzbu potrebnú pre imunohistochemickú reakciu. Pridanie Tween-20 do fyziologického roztoku s fosfátovým pufrom podporuje efektívnejšie umývanie a zabraňuje nešpecifickému zafarbeniu.
|
|
|
Naše výhody:
V súčasnosti spolupracujeme s poprednými zahraničnými výrobcami laboratórnych činidiel. Našimi klientmi sú mimovládne aj vládne inštitúcie, vrátane lekárskych organizácií v Moskve a ďalších ruských mestách. Pre stálych zákazníkov je poskytovaný systém zliav.
2. Fosfátový pufor (0,1 m, pH 5,8-8,0)
|
Na2HP04 0,2 M, ml |
Na2H2P04 0,2 M, ml | ||
3. Tris pufor (0,1 m, pH 7,1-9,2)
24,2 g tris-(hydroxymetyl)aminometánu sa rozpustí v 1-litrovej odmernej banke (v 500 ml H20). Na získanie požadovanej hodnoty pH pridajte objem 1 M HCl uvedený v tabuľke a upravte objem destilovanou vodou na 1000 ml.
4. Acetátový pufor (0,2 m, pH 3,6-5,8)
|
Octan sodný 0,2 M, ml |
Kyselina octová 0,2 M, ml |
Octan sodný 0,2 M, ml |
Kyselina octová 0,2 M, ml | ||
5. Glycínový pufor (0,05 m, pH 8,6-10,6)
Zmiešajte uvedené objemy glycínu a hydroxidu sodného a upravte objem destilovanou vodou na 200 ml
|
Glycín 0,2 M, ml |
NaOH 0,2 M, ml |
Glycín 0,2 M, ml |
NaOH 0,2 M, ml |
||
3. Príprava niektorých činidiel
Aktivačný roztok. Vložte 155 mg redukovaného glutatiónu a 400 mg kryštalického albumínu do 100 ml odmernej banky, rozpustite ich v 50 ml destilovanej vody a upravte pH na 8,2 pomocou 1 M roztoku NaOH. Potom pridajte vodu po značku.
Amoniakálny roztok dusičnanu strieborného. K 2-3 % roztoku striebra sa pridáva koncentrovaný roztok amoniaku, kým sa zrazenina nerozpustí.
Acetátový tlmivý roztok pH 3,6. Pripraví sa zmiešaním 463 ml roztoku A a 37 ml roztoku B, zriedi sa po značku vodou v odmernej banke na 1 liter. Roztok A: 11,55 ml ľadovej kyseliny octovej sa zriedi vodou v 1 litrovej odmernej banke. Roztok B: 27,2 g octanu sodného sa rozpustí vo vode v 1 litrovej banke.
Biuretové činidlo (Benediktovo činidlo). 173 g citranu sodného a 100 g uhličitanu sodného sa rozpustí vo vodnom kúpeli v 300 ml destilovanej vody. Oddelene sa rozpustí 17,3 g síranu meďnatého v 300 ml vody. Oba roztoky sa vypustia a celkový objem sa upraví na 1 liter.
Tlmivého roztoku. 2,76 g veronalu a 2,06 g medinalu sa rozpustí v 1 litri destilovanej vody. Uchovávajte v chladničke, ak sa objaví sediment, roztok nie je vhodný na použitie.
Suspenzia uhlia. 0,25 g aktívneho uhlia sa umiestni do 100 ml odmernej banky a zriedi sa acetátovým tlmivým roztokom pH 3,6. Pred použitím dôkladne pretrepte.
Redukčné činidlo. 1% roztok kyseliny askorbovej pripravený s 0,016% roztokom síranu meďnatého.
Hemoglobín, 4% roztok v acetátovom pufri (pH 4,0). Najprv pripravte 8% roztok hemoglobínu v 8 mol/l roztoku močoviny, podržte ho v termostate pri 60˚C počas 2 hodín a pred použitím ho 2-krát zrieďte acetátovým tlmivým roztokom.
Glycyl-glycín. 0,55 mmol/l, pH – 8,3. Vložte 3,63 g glycyl-glycínu do 50 ml odmernej banky a pridajte vodu po značku (tlmivý roztok).
Denaturačný roztok
Diazoreagens na stanovenie bilirubínu. Pripravte si dva roztoky. Prvý roztok: 3 g kyseliny sulfanilovej sa rozpustí v 500 ml destilovanej vody, pridá sa 15 ml koncentrovanej kyseliny chlorovodíkovej (v horúcom kúpeli), objem sa doplní vodou na 1 liter. Druhý roztok: 0,5 % vodný roztok dusitanu sodného. Pred použitím zmiešajte 5 ml prvého roztoku a 0,25 ml druhého roztoku.
Diacetyl, pracovný roztok. 1 ml diacetylu sa zriedi destilovanou vodou v 100 ml odmernej banke (roztok sa uchováva v chladničke). Pracovný roztok diacetylu sa pripraví pred použitím pridaním 24 ml destilovanej vody k 1 ml zásobného roztoku diacetylu.
Difenylamínové činidlo. 1 g difenylamínu sa rozpustí v 100 ml ľadovej kyseliny octovej. K roztoku sa pridá 2,75 ml koncentrovanej kyseliny sírovej.
Kalibračný roztok. Zásaditá - 0,75 mmol/l ALA (100 μg/ml) v prepočte na zásadu: 0,00635 g ALA hydrochloridu sa rozpustí v acetátovom pufri pH 3,6 v 50 ml odmernej banke. Uchovávajte v chladničke nie dlhšie ako mesiac. Z hlavného roztoku sa pripraví pracovný kalibračný roztok, 1 µg/ml. Pred použitím zrieďte zásobný roztok acetátovým tlmivým roztokom 100-krát.
Kalibračný roztok. 22,5 mg dihydroxyacetónu sa pri zahrievaní rozpustí v 25 ml vody. 1 ml takéhoto roztoku obsahuje 10 µmol dioxyacetónu. Do série skúmaviek (pozri prácu) sa naleje kalibračný roztok dioxyacetónu, doplní sa na požadovaný objem a potom prebieha reakcia ako pri stanovení aktivity enzýmu.
Kalibračný (štandardný) roztok železa (30 µmol/l).
Najprv sa pripravia Mohrove soli.
Kofeínové činidlo. 1 g čistého kofeínu, 7,5 g benzoanu sodného, 12,5 g octanu sodného sa rozpustí v 90 ml destilovanej vody, zahreje na 50-60 °C, mieša, ochladí a doplní na 100 ml destilovanou vodou.
Molybdenan amónny v kyseline dusičnej. 7,5 g molybdénanu amónneho sa rozpustí v 100 ml vody a pridá sa 100 ml 32 % kyseliny dusičnej.
Moč na alkaptonúriu. Pri absencii patológie sa hydrochinón pridáva do normálneho moču rýchlosťou 20 g / l.
Moč s hyperaminoacidúriou. Pri absencii patológie sa glycín pridáva do normálneho moču rýchlosťou 1,0 g/l.
Moč pri mukopolysacharidóze. Pri absencii patológie sa do normálneho moču pridáva honsurid alebo heparín v množstve 0,05-0,1 g/l.
Moč s pentozúriou. Ak nie je žiadna patológia, do moču sa pridáva xylulóza alebo ribóza v množstve 1,0 g/l.
Moč s tyrozinózou. Pri absencii patológie sa tyrozín pridáva do normálneho moču rýchlosťou 0,4-0,5 g/l.
Moč s fruktozúriou. Pri absencii patológie sa fruktóza pridáva do normálneho moču rýchlosťou 0,3-0,4 g / l.
Moč s cystinúriou. Pri absencii patológie sa cystín pridáva do normálneho moču rýchlosťou 0,4-0,5 g/l.
3-vodný nasýtený roztok octanu sodného. 375 g octanu sodného 3-voda (alebo 226 g bezvodej soli) sa rozpustí v 250 ml teplej vody ochladenej na teplotu miestnosti. Skladujte pri izbovej teplote. Roztok by mal byť bezfarebný a priehľadný.
Fosforečnan sodný disubstituovaný 0,25 mol/l. Pripravte rozpustením 9,7 g Na 2 HPO 4 ∙ 12H 2 O alebo 18 g Na 2 HPO 4 ∙ 12 H 2 O vo vode v 200 ml banke. Po pridaní 2 ml tohto roztoku do 1 ml roztoku kyseliny trichlóroctovej by pH malo byť medzi 5,0-6,0.
Základný kalibračný roztok kreatinínu, 10 mmol/l. 113,1 mg kreatinínu sa upraví na 100 ml 0,1 mol/l roztokom kyseliny chlorovodíkovej. Pri zostavovaní kalibračného grafu sa zo zásobného roztoku pripraví pracovný roztok 100-násobným zriedením zásobného roztoku vodou 1 ml roztoku obsahuje 0,1 mmol kreatinínu. Na základe toho sa získa séria skúmaviek s vhodnými koncentráciami kreatínu.
Oxidačná zmes na stanovenie tiamínu. K 8 ml 1 % hexakyanoželezitanu draselného (III) pridajte 20 ml 30 % roztoku NaOH a dôkladne premiešajte. Pred použitím pripravte.
Orcine činidlo. Pridajte 500 ml 30% kyseliny chlorovodíkovej (hustota 1,15 g/cm3) k 1 g orcínu. Miešajte do rozpustenia a pridajte 4-5 ml 10% roztoku chloridu železitého FeCl 3. Činidlo sa uchováva v tesne uzavretej tmavej fľaši.
p-nitroanilínový základný kalibračný roztok. 0,0829 g p-nitroanilínu sa vloží do 100 ml odmernej banky, zriedi sa vodou po značku a rozpustí sa.
Zrážajúci roztok. Rozpustite 561 g síranu amónneho v 1 litri destilovanej vody a po 24 hodinách prefiltrujte.
Základný fosfátový tlmivý roztok a jeho pracovné roztoky č. 1-4. V 500 ml odmernej banke sa rozpustí 33,5 g NaOH v 400 ml vody a pridá sa 226,8 g KH 2 PO 4, pretrepáva sa do úplného rozpustenia, ochladí sa a doplní sa vodou po značku. Na prípravu pracovných roztokov zásaditého fosfátového tlmivého roztoku sa do 100 ml odmerných baniek odmerajú tieto objemy zásaditého fosfátového tlmivého roztoku (v ml): č. 1 – 92,51; č. 2 – 74,91; č. 3 – 59,18 a č. 4 – 48,68, po ktorých sa ich obsah privedie po značku vodou.
Kyselina pikrová, nasýtený roztok. Komerčná kyselina pikrová obsahuje 15-20% vlhkosti, nesušte kyselinu. Výbušné! Za zahrievania v horúcom kúpeli rozpustite 2 g kyseliny pikrovej v 100 ml vody. Potom sa roztok nechá stáť 24 hodín za občasného miešania. Roztok sa potom prefiltruje. Roztok je stabilný a skladuje sa v nádobách z tmavého skla.
Pyrofosfátový pufor 0,05 M pH 8,2. Preneste 4,46 g pyrofosforečnanu sodného do 200 ml odmernej banky, rozpustite ho v približne 100 ml vody, upravte pH na 8,2 pomocou 0,1 M roztoku HCl a doplňte destilovanou vodou po značku.
Pyrofosfátový pufor 0,1 M pH 8,5. Preneste 4,46 g pyrofosforečnanu sodného do 100 ml odmernej banky, rozpustite ho v 50 ml vody, upravte pH na 8,5 pomocou 0,1 M roztoku HCl a pridajte destilovanú vodu po značku.
Pracovné činidlo. Pripraví sa v deň stanovenia zmiešaním 30 dielov 0,3 N hydroxidu sodného. 2 diely 0,5% roztoku fenolftaleínu a 1 diel 0,12% roztoku síranu meďnatého.
Roztok acetónkyanohydrínu. Rozpustite 1 ampulku acetónkyanohydrínu (0,5 ml - 0,47 g zo súpravy na stanovenie hemoglobínu v krvi) v 1 litri destilovanej vody.
Roztok feracetónkyanohydrínu. V 1 litri destilovanej vody rozpustite 200 mg sulfidu draselného a 1 ampulku (0,5 ml - 0,47 g) acetónkyanohydrínu: je možné použiť zo sady činidiel na prípravu transformačného roztoku na stanovenie hemoglobínu v krvi. Pri skladovaní v tmavých sklenených nádobách pri izbovej teplote je stabilný niekoľko mesiacov.
Roztok glukoxidázy. Obsahuje cca 300 jednotiek. v 1 mg. Pripravíme rozpustením príslušného množstva suchej drogy v 10 ml vody.
Roztok sulfónovaného batho-fenantrolínu. V skúmavke sa k 100 mg batho-fenantrolínu pridá 0,5 ml kyseliny chlórsulfónovej, zahrieva sa 30 s vo vriacom vodnom kúpeli, ochladí sa a pomaly sa pridáva 10 ml dvakrát destilovanej vody, opäť sa zahrieva vo vodnom kúpeli 5 minút. Zmes sa prenesie do 200 ml banky, pridá sa 100 ml vody, pH roztoku sa upraví na 4-5 N NaOH a pridá sa voda na objem 200 ml.
Roztok jódu v jodide draselnom (Lugolov roztok). 20 g jodidu draselného a 10 g jódu sa rozpustí v 100 ml destilovanej vody. Pred použitím sa roztok zriedi 5-krát.
roztok p-nitrózodimetylanilínu (NDMA).. Komerčne dostupný prípravok NDMA sa rekryštalizuje z etyléteru. Na meranie alkoholdehydrogenázy sa 1 mg NDMA rozpustí v 100 ml 0,1 M pyrofosfátového pufra (pH 8,5). Výsledný roztok sa prefiltruje cez papierový filter a filtrát sa 2-krát zriedi týmto pufrom. Skladujte pri teplote 4˚C dva mesiace.
Ilkovo činidlo. K 5 objemovým dielom anhydridu kyseliny octovej pridajte 1 diel ľadovej kyseliny octovej, potom postupne prilejte 1 diel koncentrovanej kyseliny sírovej. Udržujte činidlo v chlade!
Millonovo činidlo. (Varenie pod tlakom! ) 40 g ortuti sa rozpustí v 57 ml koncentrovanej kyseliny dusičnej, najskôr za studena a potom sa zahreje vo vodnom kúpeli. Výsledný roztok sa zriedi 2 objemami vody, nechá sa usadiť a vypustí sa zo sedimentu. Uchovávajte vo fľaši z tmavého skla.
Činidlo molybdénanu amónneho. 2,5 g molybdénanu amónneho sa rozpustí v 60 ml destilovanej vody a prefiltruje sa. Roztok sa pridá do 100 ml banky. V ďalšej banke sa 7,5 ml koncentrovanej kyseliny sírovej pridá k 25 ml destilovanej vody. Druhý roztok sa naleje do prvého, ochladí a upraví po značku destilovanou vodou. Riešenie je vhodné na mesiac.
Činidlo "NADI". 1 % roztok dimetyl-p-fenyléndiamínu sa zmieša s rovnakým objemom 1 % roztoku a-naftolu v alkohole a 1,5 % roztoku uhličitanu sodného. Roztok je tmavohnedý a nemal by mať ružový odtieň. Pripravte sa 1 hodinu pred vyučovaním.
Činidlo Naše. Do 100 ml banky sa pridá 15,4 g octanu amónneho, 0,3 g ľadovej kyseliny octovej a 0,2 g acetylacetónu, rozpustí sa v destilovanej vode a doplní sa po značku.
Nesslerovo činidlo. V 500 ml odmernej banke zmiešajte 150 g jodidu draselného, 110 g jódu, 100 ml destilovanej vody a asi 140 – 150 g kovovej ortuti a 15 minút intenzívne pretrepávajte. V tomto prípade sa roztok samovoľne zahreje a farba spôsobená rozpusteným jódom postupne vybledne. Potom sa zmes začne chladiť pod tečúcou vodou, kým nezostane zreteľná červená farba, potom sa obsah pretrepáva, kým sa červená farba nezmení na zelenkastú. Po dekantácii sa zrazenina ortuti dôkladne premyje vodou. Spojte roztok a premývacie vody, zrieďte ich vodou na 2 litre. 75 ml výsledného roztoku sa odoberie do 0,5-litrovej odmernej banky obsahujúcej 75 ml vody a 350 ml 10 % roztoku hydroxidu sodného a zriedi sa vodou po značku.
Fehlingovo činidlo. Pripravte dva roztoky oddelene. Riešenie 1: v 1-litrovej odmernej banke rozpustite 200 g Rochellovej soli a 150 g NaOH a doplňte vodou po značku. Roztok 2: v 1-litrovej odmernej banke rozpustite 40 g síranu meďnatého vo vode a doplňte vodou po značku. Pred použitím zmiešajte rovnaké objemy týchto roztokov.
Folinovo činidlo. V 1-litrovej banke rozpustite 1 g volfrámu sodného a 20 g kyseliny fosfomolybdénovej v 750 ml vody. Banku uzatvorte spätnou zátkou a po zapnutí prietoku vody v chladničke varte obsah 10 hodín; potom sa ochladí, naleje do odmernej banky a vodný objem činidla sa upraví na 1 liter.
Ehrlichovo činidlo. 0,7 g p-dimetylaminobenzaldehydu sa rozpustí v 150 ml koncentrovanej kyseliny chlorovodíkovej, pridá sa do 100 ml vody a premieša sa. Roztok by mal byť bezfarebný alebo slabo žltý. Skladujte v nádobách z tmavého skla. Činidlo je stabilné.
Ehrlichovo činidlo. 1 g p-dimetylaminobenzaldehydu sa rozpustí v 50 ml odmernej banke v 35 ml ľadovej kyseliny octovej, pridá sa 8 ml 57 % kyseliny chloristej a doplní sa po značku ľadovou kyselinou octovou. Uchovávajte v nádobe z tmavého skla v chladničke nie dlhšie ako týždeň.
Alkoholový roztok tymolu (10%). 10 g čisteného tymolu sa rozpustí v 100 ml 96˚ etylalkoholu. Príprava purifikovaného tymolu sa uskutočňuje nasledujúcim spôsobom. 100 g tymolu sa rozpustí v 100 ml 96˚ etylalkoholu a prefiltruje sa. K filtrátu pridajte 1 liter studenej destilovanej vody, dôkladne pretrepte a nechajte 20 minút odstáť. Filter a kryštály zostávajúce na filtri sa dvakrát premyjú studenou destilovanou vodou. Sušte najskôr na filtračnom papieri, potom 2-3 dni v exsikátore nad bezvodým chloridom vápenatým do konštantnej hmotnosti.
Štandardné riešenie. Príprava štandardného roztoku sa uskutočňuje zmiešaním dvoch roztokov: 1) 0,0962 N roztok chloridu bárnatého: 1,175 g kryštalického BaCl 2 ∙2H 2 O sa rozpustí v 100 ml vody v odmernej banke. 2) 0,2 N roztok kyseliny sírovej. Ďalej sa získa suspenzia síranu bárnatého: 3 ml 0,0962 N roztoku chloridu bárnatého sa nalejú do 100 ml odmernej banky a objem sa upraví 0,2 N roztokom kyseliny sírovej pri teplote +10 °C ( pri tejto teplote poskytujú veľkosti častíc vyzrážaného síranu bárnatého relatívne stabilný výsledok).
Substrátový tlmivý roztok: nalejte 10 ml vody do skúmavky a pridajte 0,028 g L-glutamyl-p-nitroanilínu a 0,082 g chloridu sodného a bez prerušenia miešania rozpustite obsah skúmavky vo vriacom vodnom kúpeli počas 60 sekúnd . Potom sa roztok ochladí na 37 °C a pridá sa 2,5 ml tlmivého roztoku. Počas prevádzky sa pripravený roztok substrátu skladuje vo vodnom kúpeli pri 37˚C. Nepoužitý roztok substrátu možno skladovať v chladničke až týždeň. Substrát je slabo rozpustný a pri izbovej teplote sa vyzráža. Preto sa pred použitím vykryštalizovaný substrát rozpustí zahrievaním vo vriacom vodnom kúpeli. Zahrievanie a rozpúšťanie substrátu je možné opakovať najviac dvakrát.
Substrátový roztok na stanovenie ALT (roztok č. 1). Na analytických váhach sa odvážia vzorky 29,2 mg kyseliny a-ketoglutarovej a 1,78 g alanínu (0,89 g a-alanínu) a rozpustia sa v 1 M roztoku hydroxidu sodného, kým sa zrazenina úplne nerozpustí (pH 7,4). Roztok sa naleje do 100 ml banky a objem sa upraví po značku 0,1 M fosfátovým pufrom (pH 7,4). Pridajte 1 kvapku chloroformu. Roztok sa uchováva zmrazený v chladničke.
Substrátový roztok na stanovenie AST (roztok č. 2). Na analytických váhach sa odvážili vzorky 29,2 mg kyseliny a-ketoglutárovej a 2,66 g kyseliny a-asparágovej (1,33 g kyseliny a-asparágovej). Ďalej sa roztok pripraví rovnakým spôsobom ako roztok č.
Substrátový roztok na stanovenie glukózofosfátizomerázy. Pripravte medinal-acetátový tlmivý roztok s pH 7,4 (9,714 g octanu sodného a 14,714 g medinalu sa rozpustí vo vode a objem sa upraví na 500 ml). Zmiešajte 8,33 ml 0,03 M roztoku dvojsodnej soli glukóza-6-fosfátu s 25 ml medinal acetátového tlmivého roztoku; k zmesi sa pridá 25 ml 0,1 M roztoku kyseliny chlorovodíkovej a zriedi sa vodou na 100 ml. Skladujte v chlade.
Substrátový roztok na stanovenie laktátdehydrogenázy. Zmiešajte 1 ml 1 M roztoku laktátu sodného, 9 M roztoku NaCl, 0,05 M Cl 2, roztoku NAD s koncentráciou 10 g/l. K obsahu pridajte 2,5 ml 0,5 M fosfátového tlmivého roztoku (pH 7,4) a 1 g/l roztoku nitrotetrazóliovej modrej. Pred použitím do zmesi pridajte 0,25 ml roztoku metasulfátu fenanzínu s koncentráciou 1 g/l.
Substrátový roztok na stanovenie fruktózabisfosfátaldolázy. 270 mg bárnatej soli fruktózabisfosfátu sa rozpustí v 3,5 ml 1 M roztoku kyseliny chlorovodíkovej. Pridá sa 1 ml 14 % roztoku síranu sodného a výsledná zrazenina sa odstráni odstredením. Pridajte 1 kvapku síranu sodného do supernatantu. Výskyt zákalu naznačuje nedostatočne úplné vyzrážanie iónov bária. V tomto prípade pridajte viac síranu sodného a znova odstreďte. Centrifugát sa upraví pomocou 3% roztoku hydroxidu sodného na pH 7,4-7,6, prenesie sa do 25 ml banky a objem sa upraví po značku. Výsledný roztok sa zmieša s 25 ml 0,56 M roztoku hydrazínchloridu, 25 ml 0,002 M roztoku kyseliny monojódoctovej, 100 ml 0,5 % roztoku uhličitanu sodného a 25 ml destilovanej vody. Uchovávajte v chladničke.
Thymol-veronalový pufor. V 100 ml odmernej banke zmiešajte 80 ml tlmivého roztoku a 1 ml 10 % alkoholového roztoku tymolu, pretrepte a pridajte tlmivý roztok po značku. Hodnota pH by mala byť 7,55.
o-toluidínové činidlo. 0,15 g tiomočoviny sa rozpustí v 94 ml ľadovej kyseliny octovej a zmieša sa so 6 ml destilovaného O-toluidínu. Uchovávajte v tmavej fľaši.
Fenol, nasýtený vodou. Pridajte 35 ml vody k 100 g destilovaného fenolu a premiešajte, pričom zmes mierne zahrejte, aby sa urýchlilo rozpustenie fenolu.
Fenolftalén, pracovný roztok. Pripraví sa rozpustením 75 mg látky v 15 ml 0,1 N roztoku hydroxidu sodného, roztok by mal byť bezfarebný alebo slabo ružovkastý. Na zvýšenie stability činidla sa do neho pridávajú 3 mg trilonu, ktorý naviazaním solí ťažkých kovov zabraňuje autooxidácii fenolftaleínu vzdušným kyslíkom.
fibrín. Fibrín z hovädzej krvi sa niekoľko dní premýva z krvných pigmentov v tečúcej vode, kým sa nezíska biela zrazenina. Voda sa vytlačí a fibrín naplnený glycerínom sa uloží do tesne uzavretej nádoby. Pred použitím sa fibrín premyje z glycerínu.
Fosfor-vanilínové činidlo. 4 objemové diely koncentrovanej kyseliny ortofosforečnej sa zmiešajú s 1 dielom 0,6 % vodného roztoku vanilínu. Činidlo sa uchováva v nádobe z tmavého skla pri izbovej teplote.
Fruktóza 1,6-bisfosfát, sodná soľ. 2,0 ml 10% roztoku sodnej soli fruktóza-1,6-bisfosfátu sa zriedi v 25 ml banke vodou po značku. Stabilný pri skladovaní v chladničke.
Farebné činidlo pre močovinu. Tableta z testovacej súpravy na močovinu obsahujúca diacetylmonooxím a tiosemikarbazid sa za zahrievania rozpustí v 50 ml banke. Roztok je stabilný tri týždne. Pred použitím zmiešajte rovnaké objemy pripraveného roztoku a 9,6 % roztoku kyseliny sírovej.
Alkalický roztok β-glycerofosfátu. Do 100 ml odmernej banky pridajte 1 g β-glycerofosfátu sodného a 0,85 g medinalu, pridajte asi 30 ml destilovanej vody, rozpustite a doplňte vodou po značku. Do ďalšej 100 ml odmernej banky pridajte 50 ml pripraveného roztoku β-glycerofosfátu, 2,8 ml 0,1 M roztoku hydroxidu sodného a doplňte destilovanou vodou po značku (pH roztoku 8,6). Na kvapalinu sa navrstvia približne 3 ml toluénu. Roztok uchovávajte v chladničke nie dlhšie ako 10 dní.
Fosfátom pufrovaný fyziologický roztok: 1 1 10X
Popis
PBS: 1 1 10X (fosfátom tlmený fyziologický roztok) je koncentrovaný tlmivý roztok pripravený na zriedenie na pracovný roztok 1X PBS bežne používaný v biologickom výskume. Pufor PBS je ideálny na udržiavanie konštantného pH a keďže je izotonický a netoxický pre bunky, môže byť použitý v širokej škále biologických aplikácií. PBS sa často používa ako premývací a riediaci pufor a tiež sa používa na získanie referenčného spektra pri meraní adsorpcie proteínov.
Použitie
Pred použitím zrieďte na 1X roztok a prefiltrujte cez 0,22 µm filter do sterilnej banky. Vyrobí 10 1 1X PBS pufra s koncentráciou fosfátového pufra 0,01 M, 0,027 M chlorid draselný, 0,137 M chlorid sodný a 1,76 mM fosforečnan draselný. pH roztoku PBS bude približne 7,4.
. Ak sa pri aplikáciách bunkových kultúr používa pufor, môže byť potrebná sterilizácia roztoku. Vopred zriedený pufor sa môže rozdeliť na alikvóty a sterilizovať autoklávovaním (20 minút, 121 °C, kvapalinový cyklus).
. PBS možno skladovať pri izbovej teplote, ale nesterilné roztoky môžu vyžadovať chladenie, aby sa zabránilo rastu baktérií v priebehu času. Koncentrované zásobné roztoky sa môžu po ochladení vyzrážať a pred použitím by sa mali uchovávať pri izbovej teplote, kým sa zrazenina úplne nerozpustí.
Technická informácia
| pH: | Po zriedení na 1X koncentráciu bude pH ~7,4. |
| Ukladací priestor: | Skladujte pri izbovej teplote |
| Synonymum: | Fosfátom pufrovaný fyziologický roztok |
| Aplikácia: | Tlmivý roztok bežne používaný v biologickom výskume |
Informácie o objednávke
| Oblasť použitia: | Výroba: | Santa Cruz |
| metóda: | ||
| Objem: | 1 l | |
| Cat. číslo: | sc-24946 | |
| Cena (s DPH 20%): | NA ZNAMENIE | Pridať do košíka |
 Názov: PBS pufor (fyziologický roztok pufrovaný fosfátom), 10X, 1 l / fyziologický roztok pufrovaný fosfátom: 1 1 10X. Poznámka: Druhová špecifickosť: . Popis: . Aplikácia: . Dodávka na modrom ľade, skladovanie pri izbovej teplote, | ||
