Вирусный, или инфекционный, или трансмиссивный, гастроэнтерит свиней – вирусная болезнь, характеризующаяся воспалением слизистой оболочки желудка и тонкого отдела кишечника, проявляющаяся диареей, рвотой, дегидратацией (потерей жидкости организмом). Заболевание наносит свиноводству большой экономический ущерб, обусловленный гибелью животных, снижением их привесов, затратами на проведение лечебно-профилатических мероприятий.
Возбудитель – коронавирус, который в условиях внешней среды быстро утрачивает вирулентность – при 50-60 °С инактивируется в течение 1 ч, при 80-100 °С – через 5 мин. Вирус устойчив к фенолу, антибиотикам; инактивируется 4%-ным раствором формальдегида за 10 мин, 2%-ным раствором едкого натра – за 20-30 мин, хлорной известью – за 6 мин.
Источник возбудителя инфекции – больные свиньи. К вирусному гастроэнтериту восприимчивы свиньи всех возрастов, но чем моложе животное, тем более чувствительно оно к вирусу, особенно чувствительны поросята-сосуны до 10-суточного возраста. Животные выделяют возбудителя из организма с фекалиями и рвотными массами в течение 2-3 мес после переболевания, обсеменяя корм, воду и другие объекты внешней среды. Переносчиками коронавируса являются грызуны, собаки, кошки, скворцы и другие птицы. Заражение происходит в основном алиментарным путем. Если болезнь возникает впервые в хозяйстве, то вызывает гибель почти 100% поросят в первые дни жизни, 30-40% молодняка постарше и 3% взрослых особей.
Инкубационный период болезни составляет 2-5 сут. Основными признаками инфекции являются диарея, кратковременная лихорадка, отсутствие или снижение аппетита, исхудание, у подсосных свиноматок – агалактия (отсутствие секреции молока). У поросят до 10-дневного возраста наблюдаются вялость, рвота, отказ от сосания. Они скучиваются. Фекалии серо-зеленого цвета выделяются непроизвольно. Почти весь приплод гибнет на 3-и-5-е сут болезни.
Диагноз ставят на основании клинико-эпизоотологических данных, результатов лабораторного исследования тощей и подвздошной кишок от павших особей, дифференцируя от колибактериоза, чумы, сальмонеллеза и др.
Для лечения свиней применяют нитрофураны (фурацилин по 0,05 г внутрь 2-3 раза в сутки в течение 3-5 дней, фуразонал – по 2-3 мг/кг веса 2-3 раза в день 6-8 дней), антибиотики (хлортетрациклин, тетрациклин по 20-30 мг/кг веса, морфоциклин, дибиомицин, неомицин – 10-20 мг/кг веса и др.). Дополнительно в рацион вводят витаминно-минеральные добавки в форме жидкостей.
Для профилактики заноса вируса в хозяйство карантинируют вновь поступающее поголовье, обезвреживают пищевые и боенские отходы, скармливаемые свиньям. При возникновении болезни изолируют и лечат больных, помещения дезинфицируют 2-3%-ным раствором едкого натра, вакцинируют орально или внутримышечно супоросных свиноматок за 35-40 сут и 15-21 сут до опороса. Новорожденным поросятам с первых дней жизни в течение 5-6 дней дают пробиотики, содержащие в своем составе бифидобактерии.
Вирусные инфекции свиней трансмиссивный гастроэнтерит свиней (Gastroenteritis infectiosa suum)
Определение. Трасмиссивный гастроэнтерит свиней (ТГС) - высококонтагиозное, остро протекающее инфекционное кишечное заболевание, которое характеризуется рвотой, изнурительной диареей, быстрым обезвоживанием организма животных и сопровождается падежом животных, особенно поросят до 10--14-дневного возраста.
Заболевание возникает внезапно, к нему восприимчивы свиньи всех возрастных групп. Однако наиболее восприимчивы поросята до двухнедельного возраста. Падеж колеблется в зависимости от возраста животных. Среди 1--7-дневных поросят он составляет 90--100 %, среди поросят 28-дневного возраста не превышает 25-50 % (25).
Историческая справка . Трансмиссивный гастроэнтерит впервые описали американские исследователи Дойл и Хатчингс в 1946 г. у свиней, доказали его вирусную природу и патогенность вируса для поросят. В дальнейшем вспышки отмечены в Японии (1956), Великобритании (1957), Канаде (1964) и во многих странах Европы, Азии и Африки. Распространенность в странах Европы составляет около 100%.
Эпизоотологические данные. Трансмиссивному гастроэнтериту свиней свойственны те биологические закономерности, которые присущи многим инфекционным заболеваниям, т.е. присутствие трех звеньев эпизоотического процесса: источника возбудителя инфекции, путей (механизма) передачи и заражения свиней восприимчивых животных.
Источником возбудителя инфекции являются больные и переболевшие животные - вирусоносители. Больные животные в течении двух месяцев после переболевания выделяют вирус с фекалиями. Концентрация вируса в экскрементах особенно высока в начале болезни, когда водянистые фекалии загрязняют окружающие предметы. Вирус ТГС сохраняется в субпродуктах и охлажденном до 3-5°С мясе, полученном после убоя больных и переболевших свиней в течение 15 дней.
Заражение происходит преимущественно алиментарным путем, реже - аэрогенным. Передача вируса происходит при контакте здоровых животных с больными, через корма, воду, обслуживающий персонал, транспорт. Не исключено заражение животных воздушно-капельным путем. Наши наблюдения показывают, что в благополучные хозяйства в большинстве случаев возбудитель ТГС передается (завозится) с больными и переболевшими животными - вирусоносителями, а также с необезвреженными субпродуктами и боенскими отходами. Это - главные пути заноса возбудителя ТГС в благополучные хозяйства.
По сообщению зарубежных и отечественных ученых лабораторные животные не чувствительны к вирусу ТГС. Однако после искусственного заражения собак и лисиц возбудителем ТГС коронавирус выделялся с фекалиями до 2 недель. У собак после введения вируса обнаруживаются вируснейтрализующие антитела. Установлено, что скворцы выделяют вирус ТГС после скармливания им кусочков кишечника больных гастроэнтеритом поросят до двух суток. Возникновение очагов ТГС ученые часто связывали с перелетом скворцов.
Трансмиссивный гастроэнтерит протекает в виде эпизоотии или энзоотии. Эпизоотическая форма ТГС наблюдается при заносе инфекции в свиноводческие хозяйства, в которых животные не имеют иммунитета к вирусу ТГС и являются восприимчивыми к этому заболеванию. Вспышки ТГС появляются через несколько дней после завоза свиней из неблагополучного хозяйства, в частности после завоза племенных свинок и хряков, а также кормов, продуктов животного происхождения. Обычно в течение нескольких дней болезнь охватывает свиней всех возрастных групп. Заболевание характеризуется диареей, которая появляется внезапно и быстро распространяется среди животных всех возрастов, охватывая практически 100 % поголовья свиней. Новорожденные поросята и подсосные свиноматки болеют ТГС в тяжелой форме. Падеж среди новорожденных поросят до 10-дневного возраста составляет 80--90%, 2--3-недельного - 20--30 %, поросят-отъемышей - 3--4 %, взрослых животных - менее 1 %.
К.Н. Груздев, И.И. Скворцова (1995) в опыте показали высокую чувствительность поросят к вирусу ТГС в зависимости от их возраста. Заболеваемость новорожденных поросят в возрасте 1, 7, 14, 28 и 45 дней при экспериментальном заражении эпизоотическим штаммом вируса ТГС "Миллер" составила 100%. Падеж поросят, экспериментально инфицированных вирусом ТГС, составил: в возрасте от 1 до 7 дней -- 100 %, в возрасте 14, 28 и 45 дней - соответственно 70, 50 и 30 %. Возрастная устойчивость поросят к ТГС показана на рисунке 1. По данным А.И. Собко и Е.А. Краснобаева (1987) падеж среди новорожденных поросят моложе 10-дневного возраста составляет 80--90 % и более, 2--3-недельного - 20--30 %, отъемышей - 3--4 %, взрослых свиней - менее 1%.
Наши наблюдения за заболеваемостью и падежом новорожденных поросят при их экспериментальном заражении вирулентным штаммом вируса ТГС и при естественном заражении при вспышках заболевания в свиноводческих хозяйствах показали высокую контагиозность возбудителя трансмиссивного гастроэнтерита для этого возраста животных. В одном из свиноводческих хозяйств Гродненской области в 1990 году при первичной острой вспышке ТГС в течение 5-7 дней погибло 90--100 % новорожденных поросят от 200 опоросившихся свиноматок.
Одной из особенностей ТГС является сезонность его появления. Заболевание чаще всего регистрируют в осенне-зимне-весенние месяцы. Это связано, по всей вероятности, с тем, что в холодное время года вирус более устойчив к воздействию внешних факторов, чем летом при высокой температуре.
Продолжительность эпизоотии ТГС бывает различной в зависимости от типа и величины свиноводческого хозяйства. При поточной системе воспроизводства в крупных хозяйствах эпизоотия заболевания растягивается на многие месяцы (и даже годы) в связи с беспрерывными круглогодовыми опоросами свиноматок и получением восприимчивого к ТГС молодняка. В небольших свиноводческих хозяйствах продолжительность эпизоотии ТГС ограничивается 3--4 неделями. Свиноматки, инфицированные в начале возникновения болезни, через 3 недели приобретают иммунитет, который они передают новорожденным поросятам через молозиво и молоко. Поросята, полученные от переболевших ТГС свиноматок, обычно устойчивы к болезни до 1--1,5 месяца. В послеотъемный период они могут заболевать гастроэнтеритом в связи с потерей колострального иммунитета.
По наблюдению П.И. Притулина (1975), ТГС может возникнуть в любое время года. Вспышки в свиноводческих хозяйствах повторялись, как правило, в периоды массовых опоросов и отъема поросят от свиноматок. Возникновению и распространению трансмиссивного гастроэнтерита способствуют неудовлетворительные условия содержания, неполноценное кормление животных, резкая смена рационов, переохлаждение и перегревание, длительные их транспортировки. Все названные выше стресс-факторы снижают резистентность организма, способствуют возникновению и отягощают течение вирусного гастроэнтерита свиней.
Энзоотии ТГС наблюдаются в крупных свиноводческих комплексах, где свиноматки приобрели иммунитет в результате предшедствующей ТГС - инфекции. Через несколько месяцев его напряженность снижается и у поросят старше 6--7-дневного возраста регистрируется гастроэнтерит, причем у отдельных поросят помета заболевание протекает в легкой форме. У больных не всегда отмечается рвота. Падеж при такой форме ТГС не превышает 10--20 % . Свиноматки обычно не болеют. Энзоотия вирусного гастроэнтерита связана, как правило, с персистенцией вируса в хозяйстве, наличием высоко восприимчивых поросят (система непрерывных опоросов) или частого завоза не иммунных, чувствительных к вирусу ТГС свиней.
Особенностью энзоотической формы ТГС является периодическое появление вспышек гастроэнтеритов среди новорожденных поросят. Отмечано, что наиболее часто болеет молодняк, полученный от свиноматок - первоопоросок, у которых низкий уровень специфических антител к вирусу ТГС (особенно при раннем отъеме). Если опоросы от свиноматок-первоопоросок идут одновременно с опоросами более старых свиноматок, то заболевание гастроэнтеритом от больных поросят, полученных от первой категории животных, может передаваться поросятам, полученным от другой категории свиноматок. В этой связи В.И. Варганов с соавт. (1979) при оздоровлении хозяйств, неблагополучных по ТГС, считает целесообразным удлинить сроки использования основных свиноматок до 6--7 опоросов и проводить обособленный от общего стада опорос свиноматок-первоопоросок.
Трансмиссивный гастроэнтерит наносит свиноводческим хозяйствам значительный экономический ущерб, который складывается из падежа поросят-сосунов до 80--90 %. Переболевшие животные отстают в росте и развитии, снижаются привесы.
Биологические свойства возбудителя. Возбудитель трансмиссивного гастроэнтерита (Transmissible gastroenteritis virus of swine) относится к семейству Coronaviridae, рода Coronavirus. Его вирионы морфологически имеют вид плеоморфных частиц округлой или овальной формы, состоят из нуклеокапсида спиральной симметрии, в котором заключен вирусный геном, липопротеиновой оболочки, на поверхности которой расположены булавовидные (грушевидные) отростки (шипы), далеко отстоящие друг от друга и напоминающие солнечную корону. Отсюда название коронавирус. Геномом вируса является цельная одноцепочная линейная нефрагментированная молекула РНК. В ультратонких срезах инфицированных эпителиальных клеток вирионы вируса ТГС имеют диаметр 65--95 нм. Эталонным штаммом вируса ТГС является штамм Purdue, выделенный в США Дойлем и Хатчингсом.
Вирус ТГС чувствителен к растворителям липидов (эфиру, хлороформу), дезоксихолату натрия, термолабилен и инактивируется при температуре 56°С в течение 30 мин, при 50°С - в течение 60 мин. Вирус не изменяет своих вирулентных свойств при рН от 4 до 9,0. При хранении в замороженном состоянии остается жизнеспособным в течение многих недель.
Вирус ТГС чувствителен к свету, а также к действию дезинфектантов: 0,5%-ный формальдегид, 2%-ная натрия гидроокись, 20%-ная взвесь свежегашенной и взвесь хлорной извести, содержащей 2,5% активного хлора, губительны для возбудителя ТГС. При комнатной температуре в темноте инфекционная активность вируса не изменяется на протяжении 3-х дней, тогда как на свету она снижается за один день на 99%. Вирус стабилен в течение 1--2 лет при температуре минус 20--70°С, не чувствителен к антибиотикам (пенициллину, стрептомицину, нистатину и др.).
Вирус ТГС патогенен для свиней. Наиболее чувствительны новорожденные поросята 1--7-дневного возраста и поросята-гнотобиоты. Новорожденные поросята в 1000 раз чувствительнее к вирусу ТГС, чем взрослые особи.
Отдельные эпизоотические штаммы и изоляты вируса ТГС могут различаться по вирулентности к животным. Серийное пассирование вируса в клеточных культурах свинного происхождения снижает вирулентность и делает его аттенуированным. Нередко при пассажах аттенуированных штаммов вируса ТГС на новорожденных поросятах патогенность возвращается в исходное состояние (реверсия).
Для культивирования вируса ТГС заражают поросят с последующим взятием от них тонкого отдела кишечника или используют чувствительные клеточные культуры. У больных животных вирус локализуется в эпителиальных клетках, выстилающих ворсинки тонкого отдела кишечника (тощая, 12-перстная кишка). В 1 г ткани 12-перстной или тощей кишки инфицированного вирусом ТГС поросенка содержится 10 6 инфекционных доз возбудителя.
Культивирование возбудителя. Отсутствие цитопатогенного действия (ЦПД) вируса в клеточной культуре на первых порах тормозила изучение его свойств. После сообщения о выделении в Японии штамма SHizuoka, который вызывал ЦПД в культуре клеток свиных почек, проведено большое количество исследований по размножению вируса в клетках свиных тестикулов, почек плодов свиней, щитовидной железы. Наиболее чувствительными к вирусу ТГС и приемлемыми для его выделения оказались первично трипсинизированные клетки тестикул и почки поросят. Перевиваемая культура клеток СПЭВ и IBRS оказались непригодными для выделения коронавируса.
Установоено стимулирующее действие трипсина на вирус ТГС при формировании бляшек. Число бляшек, образованных штаммами коронавируса ТО-163, Укиха и Ниигата, повышалось в 2,6--3,5 раза при внесении трипсина в вирус после его адсорбции при 4°С в течение 2-х часов при инкубации при 37°С в течение 1 часа.
Цитопатогенное действие эпизоотических штаммов вируса ТГС на культуре клеток может отсутствовать или быть незначительным в первых пассажах. Это зависит от чувствительности культуры клеток к изоляту вируса ТГС. Выраженное цитопатогенное действие вируса на чувствительной культуре клеток проявляется чаще всего после проведения нескольких последовательных пассажей. ЦПД характеризуется округлением клеток и отделением их от монослоя.
Выделенные в разных лабораториях вирусы ТГС, как правило, идентичны или близки в антигенном отношении к эталонным штаммам. Однако в литературе имеется сообщение о том, что изолированный от больных свиней вирус CV-777, похожий на коронавирус, вызывает у поросят поражение кишечника, но репродуцируется медленнее. В свете современных данных названный штамм коронавируса вызывает эпизоотическую диарею свиней. Его антигенные свойства отличаются от антигенных свойств вируса ТГС.
Патогенез трансмиссивного гостроэнтерита. Вирус ТГС проникает в пищеварительный тракт орально или нозо -- орально. Не исключен и аэрогенный путь заражения животных. Устойчивость вируса к кислотам позволяет ему оставаться жизнеспособным в кислой среде желудка, где он не размножается. Репликация вируса происходит в эпителиальных клетках, покрывающих ворсинки тонкого отдела кишечника через 5--6 часов после заражения. Эти эпителиальные клетки кишечных ворсинок обеспечивают всасывание питательных веществ. В результате репликации вируса в эпителиальных клетках ворсинок происходит их разрушение. Ворсинки атрофируются и сокращаются, их эпителии заменяется на кубический. В клетках кубического эпителия вирус не размножается. Разрушение вирусом ТГС эпителиальных клеток, ответственных за адсорбцию питательных веществ, атрофия ворсинок приводит к нарушению пищеварения и усвоения организмом белков, жиров, углеводов, воды и т.д. В результате через 12--24 часов после заражения возникает диарея.
Больные поросята теряют большое количество жидкости, что приводит к тяжелому обезвоживанию организма. В результате нарушается обмен веществ, развивается ацидоз. У поросят, пораженных ТГС, развивается дисбактериоз, который сопровождается уменьшением количества молочно-кислых бактерий и увеличением гнилостной микрофлоры. Осложнения ТГС обусловлены энтеропатогенной кишечной палочкой, клостридиями и другой микрофлорой.
Гибель животных происходит через 1--5 дней после заболевания в результате обезвоживания и интоксикации. У выздоровевших поросят регенерация эпителиальных клеток ворсинок тонкого отдела кишечника происходит через 3--4 дня после заражения, в последующие 2--3 дня понос прекращается.
Особенностью патогенеза трансмиссивного гастроэнтерита свиней, объясняющей возможность передачи вируса аэрогенным путем, является способность коронавируса размножаться в респираторном тракте свиней -- в эпителиальных клетках слизистой оболочки носовой полости и в легких. Вследствие репликации коронавируса в дыхательных путях развивается пневмония.
Клинические признаки трансмиссивного гастроэнтерита свиней. Инкубационный период при естественном инфицировании поросят вирусом трансмиссивного гастроэнтерита колеблется от 12 часов до 5 дней. В среднем он равен 1-3 дням. У взрослых животных он составляет 1-7 дней. Клинические признаки ТГС и его течение прямо зависят от возраста животных. Типичным клиническим признаком заболевания у поросят является внезапная рвота, которая сопровождается быстро наступающей диареей, отказом от соска, вялостью и скучиванием.
Первые клинические признаки заболевания у них можно обнаружить уже через несколько часов после рождения, но чаще -- на 2-3 сутки. Фекалии, как правило, водянистые, желто-зеленого, реже серого цвета. В испражнениях могут присутствовать сгустки свернувшегося молока. Щетина поросят испачкана фекалиями, вследствие чего кожа становится грязной и липкой. Отмечается быстрая потеря массы животных, обезвоживание и исхудание, высокий процент заболеваемости и падежа поросят до 2-недельного возраста. Выраженность клинических признаков болезни, ее продолжительность и исход прямо пропорциональны возрасту животных. Так, падеж поросят при инфицировании до 5-дневного возраста составляет 100 %, а в 6--10-дневном – 67 %, в 11--15-дневном - 30, 15-105-дневном - 3,5 % (66). Таким образом, основная масса поросят погибает от ТГС со 2-го по 7-й день после появления клинических признаков болезни.
Клинические признаки ТГС у поросят старших возрастов и взрослых свиней характеризуются угнетением, частичной или полной потерей аппетита и кратковременной диареей и рвотой у части животных. Заболевание продолжается 1--5 дней, реже -- 1--2 недели и, как правило, заканчивается выздоровлением. У больных свиноматок отмечают угнетение, уменьшении или полное прекращение секреции молока. Гипо- или агалактия начинается у них с 3--7-го дня после заболевания. У переболевших животных восстанавливается аппетит и нормализуется общее состояние.
Диагноз на трансмиссивный гастроэнтерит ставят комплексно на основании клинико-эпизоотологических данных, патолого-анатомических изменений и лабораторных исследований.
Предварительный диагноз на ТГС может быть поставлен на основании клинических, эпизоотологических и патологоанатомических данных заболевания. Клинические признаки при трансмиссивном гастроэнтерите у поросят, как уже нами описывалось ранее, характеризуются у части животных рвотой, гастроэнтеритом (фекалии водянистые, желто-зеленого цвета), скучиванием, загрязнением и потемнением щетины и кожи поросят, быстрым обезвоживанием организма животных.
При анализе эпизоотологических данных принимают во внимание фактор внезапного возникновения рвоты и диареи среди свиней различных возрастных групп в любое время, часто независимо от условий кормления и содержания животных. Однако необходимо отметить, что различные нарушения условий кормления и содержания животных часто являются "пусковым" механизмом для возникновения заболевания. Учитывают высокую контагиозность заболевания и быстрое его распространение, большой процент заболеваемости и падежа новорожденных поросят в первые дни жизни (до 10--14-дневного возраста). Необходимо учитывать и то, что острое течение трансмиссивного гастроэнтерита, как правило, через 3-4 недели сменяется подострой, энзоотической формой. Процент заболеваемости и падежа снижается до 50%.
При патологоанатомическом вскрытии трупов поросят, павших от этой болезни, в желудке содержится не свернувшееся молоко, слизистая дна желудка - темно-красного цвета с наличием на отдельных участках единичных кровоизлияний. Слизистая оболочка 12-перстной, тощей и частично подвздошной кишок отечная, покрасневшая. Мезентериальные лимфатические узлы сочные, увеличены, гиперемированы. В паренхиматозных органах (сердце, легкие, печень) видимых патологоанатомических изменений не обнаруживают. Часто под капсулой почек, которая с трудом отделяется, обнаруживают мелкие точечные кровоизлияния.
При гистологическом исследовании материала из тонкого отдела кишечника (тощая, подвздошная кишка) поросят, павших от ТГС, находят дистрофию и поверхностный некроз эпителия ворсинок тонкого кишечника. У взрослых свиней при вскрытии находят картину катарального гастроэнтерита.
Трансмиссивный гастроэнтерит по клиническим, эпизоотологическим и патолого--анатомическим признакам сходен с другими инфекционными заболеваниями вирусной этиологии (эпизоотическая вирусная диарея, ротавирусная болезнь, энтеровирусный гастроэнтерит свиней), протекающими с синдромом диареи. Все они клинически проявляются гастроэнтеритом. Поэтому практически затруднительно по клиническим, эпизоотологическим и патолого--анатомическим данным различать вирусные гастроэнтериты. В этой связи возникает необходимость в проведении лабораторных исследований и использовании лабораторных методов диагностики.
Достоверный диагноз на ТГС может быть поставлен путем постановки биологической пробы на новорожденных поросятах в возрасте до 10 дней, находящихся под свиноматкой или искусственно вскармливаемых коровьим молоком или теплой молочной смесью типа "Детолакт". Для этой цели поросят завозят из хозяйства, заведомо благополучного по трансмиссивному гастроэнтериту от серонегативных свиноматок. Поросятам инокулируют 20 %-ную стерильную безмикробную суспензию или фильтрат патологического материала от убитых больных животных. Биопробу считают положительной в случае, если подопытные поросята заболевают на 2--3-й день после заражения, проявляя клинические признаки, характерные для ТГС (рвота, понос, обезвоживание). На 3-5 день животные обычно погибают. Контрольным поросятам вводят стерильный раствор Хенкса. Они не должны заболеть и остаются здоровыми.
Биопроба является дорогостоящим методом диагностики ТГС, и ее постановку осуществляют при необходимости с разрешения Главного управления ветеринарии Минсельхозпрода Республики Беларусь или Департамента ветеринарии Минсельхозпрода Российской Федерации..
Лабораторные методы диагностики трансмиссивного гастроэнтерита основаны на обнаружении антигена вируса ТГС в РИФ, РДП, выделении вируса ТГС от больных гастроэнтеритом животных на культуре клеток и обнаружении специфических антител к вирусу ТГС в РН или РНГА.
Реакция иммунофлуоресценции (РИФ) основана на взаимодействии антигена вируса ТГС со специфическими антителами к нему, которые конъюгируют с флуорохромом (флуоресценцин изотиоционат -- ФИТЦ). Образовавшийся комплекс антиген-антитело под воздействием ультрафиолетовых лучей в люминесцентном микроскопе светиться зеленым светом.
Для диагностики трансмиссивного гастроэнтерита нами в БелНИИЭВ разработана тест-система по обнаружению антигена вируса ТГС в РИФ, включающая набор диагностикумов для этой реакции. В набор входят: кроличий специфический иммуноглобулин G к вирусу ТГС, меченный ФИТЦ; нормальный глобулин класса G кролика, меченный ФИТЦ; специфическая сыворотка кролика к вирусу ТГС; нормальная сыворотка кролика.
В качестве препаратов для выявления антигена вируса ТГС в РИФ являются мазки-отпечатки из стенок тонкого отдела кишечника, брыжеечных лимфатических узлов поросят, убитых с диагностической целью, которые готовили прикладывая обезжиренные предметные стекла к поверхности разреза ткани кишечника или лимфоузла. Кроме того, для этой цели использовали препараты из культуры клеток, выращенных на покровных стеклах и инфицированных 20%-ной суспензией из кишечника и паренхиматозных органов (легкие, селезенка, почки, брыжеечные лимфатические узлы) больных поросят. Через 24--48 часов после инфицирования культуры клеток покровные стекла с клетками извлекали из пробирок и монтировали на предметных стеклах.
Установлено также, что время отбора материала для исследования от начала заболевания поросят ТГС существенно влияло на результативность исследования. В том случае, если патматериал (отрезки тонкого отдела кишечника, брыжеечные лимфоузлы) отбирали у поросят, убитых не позже первых суток после проявления клинических признаков ВТГС, свечение на 3--4 креста обнаруживали в 70,8 % случаев. Если же материал отбирали от поросят, убитых через 6--7 суток после заболевания, положительные результаты обнаруживали только в 23 % случаев. Это связано, по-видимому, с тем, что у больных поросят происходит разрушение цилиндрического эпителия ворсинок тонкого отдела кишечника и замена его кубическим эпителием, в которых вирус не внедряется и, следовательно, в нем не обнаруживается.
К числу других экспресс-методов диагностики ТГС относится и тест-система диагностики трансмиссивного гастроэнтерита в реакции диффузионной преципитации в агаровом геле (РДП). Сущность реакции заключается в том, что специфические антигены и антитела диффундируют в агаровом геле из мест локализации навстречу друг другу и, взаимодействуюя, между собой, образуют в агаре полосы (линии) преципитации. Скорость диффузии компонентов реакции зависит от их молекулярной массы. Чем больше их молекулы, тем медленнее идет диффузия, и наоборот. Реакция проявляется при определенном количественном соотношении антигена и антител к нему. Для постановки реакции необходимы: 1%-ный агаровый гель, специфическая кроличья преципитирующая сыворотка к вирусу ТГС, положительный специфический антиген, нормальная сыворотка кролика, отрицательный (контрольный) антиген и испытуемые антигены.
Реакцию ставят в 2 вариантах: макро- и микрометодом. Макровариант реакции осуществляется на агаре в чашках Петри, микровариант - на предметных стеклах. Более приемлемым является макровариант РДП. Для этого в чашки Петри вносят 25,0 мл расплавленного агара. В слое застывшего агара с помощью специального штампа делали лунки диаметром 5--6 мм: 1 лунка -- центральная, 6 лунок -- периферических. Расстояние между лунками – 4--5 мм. На дно каждой лунки вносили по 1 капле расплавленного агара для предупреждения подтекания компонентов под слой агара.
Реакцию считают положительной при наличии выраженной линии преципитации между лункой со специфической преципитирующей сывороткой и испытуемым антигеном, которая плавно переходит в линию преципитации между лункой со специфической сывороткой и положительным антигеном, образуя в геле замкнутый шестиугольник. В контроле (специфическая преципитирующая сыворотка и отрицательный антиген; нормальная кроличья сыворотка и положительный преципитирующий антиген) линии преципитации отсутствуют.
РДП по обнаружению антигена вируса ТГС является специфичной и достаточно чувствительной реакцией и в комплексе с клиническими, эпизоотологическими, патолого-анатомическими данными позволяет ставить диагноз на трансмиссивный гастроэнтерит.
С целью изоляции вируса ТГС проводят вирусологические исследования патматериала на чувствительной к вирусу ТГС линии культуры клеток. Чаще всего для этой цели используют первично трипсинизированную культуру клеток почки поросенка, тестикул, щитовидной железы поросят. Важное значение имеет методика отбора проб патологического материала для изоляции вируса. В лабораторию направляют в сосуде Дьюара с жидким азотом или термосе со льдом участки пораженного тонкого отдела кишечника, кусочки легкого, селезенки, почек и печени убитых больных диареей поросят. Из патматериала готовят 20%-ную суспензию на растворе Хенкса, центрифугируют при 3--4 тыс. об/мин. в течение 30 мин. В надосадочную жидкость вносят антибиотики. Выдерживают при температуре 4 0 С 6 часов, центрифугируют при 6000 об/мин в течение 30 мин. Надосадок после проверки на стерильность используют для заражения культуры клеток. Вносят по 0,2 см 3 материала каждой пробы в 4 пробирки с культурой клеток, из которых предварительно удаляют ростовую среду и промывают монослой клеток раствором Хенкса. После инкубирования материала в термостате при 37 0 С в течение 30--60 мин вносят в каждую пробирку 0,8--1,0 см 3 поддерживающей среды (среда 199). Для выявления цитопатогенного действия (ЦПД) возбудителя ТГС культуру клеток ежедневно микроскопируют в течение 5--7 суток.
При отсутствии ЦПД в 1-м пассаже материала проводят ряд последовательных пассажей на культуре клеток. ЦПД обычно проявляется в 3--7-м пассажах и характеризуется набуханием, округлением клеток и отторжением их от стекла. В случае выделения изолята вируса проводят его идентификацию в реакции нейтрализации на культуре клеток с использованием антисывороток.
Однако изоляция вируса еще не является доказательством того, что он является причиной гастроэнтерита у поросят. Необходимо воспроизвести заболевание на поросятах путем экспериментального заражения поросят изолятом вируса ТГС. Таким путем доказывают, что выделенный от больных животных вирус патогенен для поросят и является этиологическим агентом в возникновении гастроэнтерита.
Для диагностики ТГС достаточно обнаружить антиген вируса. Для этой цели используют РИФ, РДП и ИФА.
Обнаружение антител к вирусу ТГС является ретроспективным методом диагностики заболевания. Для этой цели используют реакцию нейтрализации (РН) на культуре ткани с сыворотками крови больных и переболевших свиней и вирусом ТГС. В РН исследуют сыворотки крови не менее чем от 10 свиноматок, взятые через 2--3 недели от начала заболевания и повторно с интервалом 14--21 день. Максимальный титр вируснейтрализующих антител к вирусу ТГС появляется через 3 недели после начала болезни. В организме переболевших животных вируснейтрализующие антитела сохраняются от 3 до 12 мес.
Для ретроспективной диагностики ТГС используют также реакцию непрямой гемагглютинации (РНГА). Определяют специфические антитела в парных сыворотках крови больных и переболевших свиней.
Вирусный гастроэнтерит свиней (трансмиссивный гастроэнтерит свиней, болезнь Дойла и Хитчингса) – Transmisille gastroenteritis – высококонтагиозная вирусная болезнь, проявляющаяся рвотой, тяжелой диареей и высокой смертностью среди поросят до 2-недельного возраста.
Этиология. Возбудитель болезни РНК-содержащий вирус (Porcine transmissille gastroenteritis virus), относящийся к семейству Coronaviridae, роду Coronavirus. Вирус трансмиссивного гастроэнтерита имеет 1 серотип и не имеет связи с вирусом энзоотической диареи свиней, хотя с ним тесно родственны. Главным отличием вируса энзоотической диареи является исключительный пневмотропизм при отсутствии энтеропатогенности.
Возбудитель устойчив к замораживанию. При – 18 °С сохраняется до 18 месяцев, при -20 °Си ниже – до 365 дней. При нагревании до 56 °С инактивируется за 30 мин.
Эпизоотологические данные. Источником возбудителя являются больные или переболевшие свиньи вирусоносители, которые могут выделять вирус с испражнениями, мочой и носовыми истечениями в течение 2 – 3 месяцев после переболевания. Особенно высокая концентрация вируса отмечается в фекалиях в начале болезни, поэтому инфекция распространяется очень быстро. Вирус переносится с продуктами убоя больных и переболевших свиней, спецодеждой и обувью обслуживающего персонала, инфицированными кормами, водой, предметами ухода за животными и транспортными средствами, инфицированными вирусом. Заражение происходит через пищеварительный тракт и дыхательные пути. Если болезнь возникает в хозяйстве впервые, то она протекает в виде эпизоотии, которая в течение 2 – 4 дней охватывает все восприимчивое поголовье свиней. Если хозяйство продолжает оставаться неблагополучным по вирусному (трансмиссивному) гастроэнтериту, то болезнь протекает энзоотически и возникает при завозе новых восприимчивых свиней или при получении беспрерывных опоросов. В данном случае заболевают преимущественно поросята первых пяти дней жизни, смертность среди которых составляет не более 30%. При первичном заносе возбудителя смертность новорожденных поросят достигает до 100%. Болезнь возникает в любое время года, но наиболее часто регистрируется в холодное время.
Течение и симптомы. Инкубационный период весьма короткий и исчисляется часами. Иногда он длится до 3 дней. Болезнь у поросят в начале проявляется рвотой, сразу после приема молозива или молока. Затем появляется диарея. Фекалии водянистые, зелено-желтого цвета, неприятного запаха.
Поросята становятся малоподвижными, кожный покров у них влажный и они скучиваются под обогревательной лампой. По мере развития болезни диарея становится профузной, фекалии непроизвольно вытекают из анального отверстия. Температура тела обычно в пределах нормы. Гибнут поросята на 2 – 3 день с момента появления клинических признаков.
У лактирующих свиноматок внешние симптомы болезни обычно отсутствуют. У некоторых из них наблюдаются диарея, угнетенное состояние, резкое уменьшение или полнее прекращение молока и истощение. Выздоравливают свиноматки быстро, однако секреция молока не восстанавливается, что резко отражается на состоянии здоровья подсосных поросят.
Патологоанатомические изменения. Трупы поросят истощены, кожа темно-серого цвета, видимые слизистые оболочки цианотичны. Желудок растянут и заполнен свернувшимся молоком. Слизистая дна желудка гиперемирована. Тонкий отдел кишечника вздут, содержимое его водянистое, зеленовато-желтого цвета. Стенка кишечника истощена. Слизистая оболочка гиперемирована.
Встречается катаральное и десквамативно-некротическое воспаление. Толстый отдел кишечника катарально воспален. Сосуды брыжейки кровенаполнены, пакеты мезентериальных лимфатических узлов набухание, гиперемированные, на разрезе сочные. Под капсулой почек выявляют мелкоточечные кровоизлияния, граница между корковым и мозговым слоями сглажена. Иногда выявляют скопления экссудата желтоватого цвета или ураты в почечной лоханке. Сердце дряблое, сероватого цвета. В веночной бороздке сердце часто находят петехии. В селезенке могут обнаруживаться застойные явления, напоминающие инфаркты.
Диагноз. Ставят на основании эпизоотологических данных, симптомов болезни и результатов лабораторных исследований, включающих изоляцию вируса на первичных и перевиваемых линиях клеток поросят с последующей идентификацией вируса в РНФ, РН, ВИЭОФ, ELISA и определении титра антител в сыворотке крови реконвалесцентов.
В лабораторию направляют тонкую и подвздошную кишку с содержимым и мезентериальные лимфоузлы от поросят, взятые в первые часы после появления диареи. Материал необходимо брать от 8 – 9 поросят пораженных пометов (по 2 – 3 поросенка из помета). Доставляют патматериал в стеклянных сосудах помещенных в сосуд Дюара с жидким азотом или в термос с сухим льдом.
Дифференциальный диагноз. Дифференцируют вирусный (трансмиссивный) гастроэнтерит от ротавирусной инфекции, колибактериоза, анаэробной энтеротоксемии, сальмонеллеза.
Лечение. Эффективных лечебных средств нет. Используют сыворотку крови реконвалесцентов, аллогенную сыворотку, миксоферрон и симптоматические средства, направленные на борьбу с обезвоживанием, дезинтоксикацию организма и восстановление функционального состояния кишечника. Для подавления бактериальной микрофлоры применяют антибиотикотерапию. Подсосным свиноматкам вводят препараты, предупреждающие развитие агалактии.
Профилактика и меры борьбы. Общие профилактические мероприятия должны быть направлены на недопущение заноса возбудителя болезни, обеспечение свинопоголовья полноценными кормами, обращая внимание на их доброкачественности. Супоросным свиноматкам и новорожденным поросятам должны быть созданы условия, предусмотренные технологией.
При возникновении ВГЭС хозяйство объявляется неблагополучным, и в нем вводятся ограничения регламентированной инструкцией профилактике и мерам борьбы с этой болезнью.
Для специфической профилактики применяют свиноматкам аттенуированные, авирулентные и субъединичные вакцины орально, интраназально и внутримышечно. Поросят-сосунов целесообразно вакцинировать орально, чтобы индуцировать быструю защиту посредством интерференции или стимулирование локального иммунитета, обеспечивающего синтез секреторных Ig A.
Сап и мыт лошадей.
Мыт – острая инфекционная болезнь лошадей, характеризующаяся гнойно-катаральным воспалением слизистой носоглотки и подчелюстных лимфатических узлов. Летальность колеблется от 4,5 до 70 %.
Возбудитель болезни – так называемый мытный стрептококк, обладающий значительной устойчивостью во внешней среде – в высохшем гное сохраняется до 6 мес, в навозе – до 4 нед, на волосяном покрове лошади – до 22 сут. Солнечный свет убивает его через 6–8 ч, нагревание до 70–75 °C – через 1 ч, кипячение – немедленно. Устойчив к действию дезинфицирующих средств.
Мытом болеют чаще жеребята и молодые особи. Источник возбудителя – больные и переболевшие животные, а также здоровые лошади – носители возбудителя. Факторы передачи возбудителя – корм, вода, предметы ухода, кормушки и стены помещений, загрязненные гноем и носовыми истечениями больных лошадей. Заражение происходит алиментарным или воздушно-капельным путем. Вспышки болезни преимущественно отмечаются поздней весной, после переохлаждения, длительного перегона и перевозки.
Инкубационный период болезни составляет 4-12 сут. Как правило, мыт протекает остро, проявляясь в типичной, атипичной или осложненной форме. Типичная форма характеризуется лихорадкой (температура тела достигает 40–41 °C), угнетением, вялостью, снижением аппетита. Носовая полость гиперемирована (покрасневшая), с истечениями, подчелюстные лимфатические узлы увеличены, горячие на ощупь и болезненные (рис. 22). Позже в лимфатических узлах возникают абсцессы, которые вскрываются. Гной вытекает наружу, и животное выздоравливает. Длительность болезни – 15–25 сут.
Рис. 22. Увеличение подчелюстных лимфатических узлов у лошади при мыте
Атипичная форма проявляется нерезко выраженными клиническими признаками – температурой тела 39–39,5 °C, незначительным увеличением подчелюстных лимфатических узлов без нагноения, небольшими истечениями из носовой полости. Болезнь заканчивается выздоровлением.
При осложненной форме мыта, наряду с подчелюстными лимфатическими узлами, поражаются заглоточные, шейные, предлопаточные и др. Возникают гнойная бронхопневмония, иногда колики, расстройство деятельности желудочно-кишечного тракта, артриты, поражаются мозг, печень, почки, что приводит к гибели животного. Переболевшие животные приобретают иммунитет.
Диагноз ставят на основании клинико-эпизоотологических данных и результатов лабораторного исследования гноя.
Для ускорения созревания абсцессов в подчелюстных лимфатических узлах применяют согревающие компрессы, теплое укутывание. Рекомендуется своевременное вскрытие абсцесса. Хорошее лечебное действие оказывает пенициллин, который вводят внутримышечно 2 раза в сутки по 1000–2000 ЕД/кг живого веса. При поражении внутренних органов внутривенно вводят 33 %-ный спирт на 30 %-ном растворе глюкозы с 1 %-ным норсульфазолом по 150–200 мл в сутки в течение 4–5 дней подряд, а также применяют антибиотики.
Для предупреждения мыта карантинируют вновь поступивших лошадей, обращают особое внимание на условия содержания жеребят, молодых лошадей, предохраняя их от резких колебаний температуры и влажности. При появлении больных их изолируют и лечат, кормя и давая воду строго индивидуально. Помещение чистят и дезинфицируют.
Сап – инфекционная, преимущественно хронически протекающая болезнь лошадей, ослов, мулов, лошаков, реже верблюдов и животных из семейства кошачьих, а также человека, характеризующаяся развитием в легких и других внутренних органах, на слизистых оболочках и коже специфических сапных узелков, при распаде которых образуются язвы.
Возбудитель болезни – так называемая сапная бактерия, которая в воде и гниющих субстратах погибает через 14–30 сут, в высушенных носовых истечениях – через 7-15 сут, в моче – через 4 ч. Солнечный свет убивает ее через 24 ч, нагревание при температуре 80 °C – через 5 мин. Раствор хлорной извести, содержащий 5 % активного хлора, 2 %-ный раствор фенола, 1 %-ный раствор едкого натра, 3 %-ный раствор креолина убивают сапную бактерию в течение 1 ч.
Источник возбудителя – больные животные, выделяющие его во внешнюю среду с носовыми истечениями, при кашле, а также с гноем из кожных покровов. Факторы передачи – инфицированные выделениями корма, навоз, предметы ухода и конского снаряжения. Заражение происходит при прямом контакте с больными, через пищеварительный тракт, реже через дыхательные пути. При пастбищном содержании болезнь распространяется медленно, а в тесных конюшнях с недостаточной вентиляцией – очень быстро. Болезнь внесезонна, но больных чаще выявляют в осенне-зимний период.
Инкубационный период сапа составляет от 3 сут до 2–3 нед. Болезнь протекает остро, хронически и латентно. При остром течении наблюдают повышение температуры тела до 41–42 °C, озноб, гиперемию слизистых оболочек глаз и носа, резкое угнетение животного. Через 2–3 сут на слизистой оболочке носа появляются мелкие желтоватые узелки, которые в течение нескольких часов сливаются и подвергаются некротическому распаду. На их месте образуются язвы с неровными краями.
Подчелюстные лимфатические узлы вначале припухшие, горячие, а потом плотные. Иногда поражается кожа на внутренней поверхности бедер, в области препуция, мошонки, головы, шеи (рис. 23). Помимо этого, отмечают слоновость пораженных конечностей. Длительность острого течения болезни – 2–4 нед. Исход чаще летальный.
Рис. 23. Поражение кожи на голове лошади при сапе
При хроническом течении сапа наблюдаются периодическое повышение температуры тела, исхудание животного, кашель, истечения из носа, увеличение подчелюстных лимфатических узлов. На слизистой оболочке носа появляются рубцы и язвы звездчатой формы. Длится эта форма заболевания от нескольких месяцев до нескольких лет.
Латентный сап может продолжаться пожизненно. У животных нет отклонений от нормы, внешне они выглядят здоровыми.
Диагноз ставят на основании эпизоотологического, клинического, аллергического, серологического и гистологического исследования. Основной метод диагностики – аллергический, который применяют главным образом в виде глазной маллеинизации (введение в конъюнктивальный мешок 4–5 капель маллеина – фильтрата убитой нагреванием бульонной культуры бацилл сапа). У больного животного конъюнктива краснеет, отекает, из внутреннего угла глаза вытекает в виде шнура сначала слизистая, затем гнойная масса (положительная реакция) (рис. 24). Повторно вводят маллеин в глаз всем лошадям, независимо от результата, через 5–6 сут. Больной признается лошадь, у которой дважды проявилась положительная реакция.
Рис. 24. Положительная реакция при глазной малеинизации
Лечение сапа невозможно. Больных животных уничтожают.
Для предупреждения сапа проводят карантинирование вновь поступающих в хозяйство лошадей, их клинический осмотр и поголовную маллеинизацию лошадей 2 раза в год. При обнаружении заболевания на хозяйство накладывают карантин, а лошадей делят на 4 группы в зависимости от степени проявления клинических признаков. Конюшни и предметы ухода дезинфицируют, навоз сжигают. Карантин снимают через 45 сут после последнего случая выявления больной лошади.
Болезнь Марека.
Болезнь Марека (Morbus Marek) - хронически протекающая вирусная болезнь птицы от-ряда куриных, характеризующаяся неопластическими процессами в паренхиматозных органах и воспалением периферической нервной системы.
Историческая справка . Впервые болезнь описал венгерский исследователь Марек (1907) под названием полиневрита. В последующие годы ее стали регистрировать в различных странах под другими названиями (нейролимфоматоз, паралич птиц, неврит, инфекционный нейрогрануло-матоз и др.). Кроме параличей и парезов, у птиц были обнаружены лимфоидные опухоли во внут-ренних органах, преимущественно в яичнике, и по этому признаку болезнь стали называть висце-ральным лимфоматозом (Паппенгеймер и др., 1926). В 1960 г. было рекомендовано эту болезнь назвать в честь первооткрывателя болезнью Марека. В СССР болезнь Марека установлена в 1930 г. Ее изучали Л. М. Крапивнер, И И. Касьяненко, В. П. Иванов, Р. Н. Коровин и др.
Возбудитель - ДНК-содержащий вирус - Herpesvirus galli-2 из рода Herpesvirus семей-ства Herpetoviridae В. Размер вириона 150 - 250 нм. Возбудитель содержит 6 различных антиге-нов, главные из них обозначают буквами А, В, С. Наличие общего антигена у всех патогенных штаммов обеспечивает иммунологическое родство возбудителя. Вирус болезни Марека культиви-руют в куриных эмбрионах, культуре клеток фибробластов и почек куриных и утиных эмбрионов. Возбудитель может находиться в тесно связанном с клеткой состоянии и в свободном от клеточных структур. Вирус патогенен для кур, индеек, японских перепелов. Высоковирулентные штаммы вызывают сравнительно острое течение болезни, а менее вирулентные - хроническое. Патогенность его варьирует в значительных пределах (Бигс, 1969).
Устойчивость . Вирус во внешней среде погибает при температуре 18 - 20°С. В отторгну-тых эпителиях перьевых фолликулов вирус не теряет вирулентных свойств в условиях внешней среды до 8 мес.
Эпизоотологические данные . В естественных условиях к болезни Марека наиболее чувствительны куры. Имеются сведения о восприимчивости индеек, перепелов, фазанов, уток, лебедей и куропаток (Бигс, 1967). Эти виды птиц имеют определенное эпизоотическое значение, как резервуар возбудителя. Отчетливо проявляется возрастная устойчивость птицы. Наиболее восприимчивы цыплята в первые 2 нед жизни, среди которых могут заболеть до 85%. Поголовное инфицирование происходит к 8 - 20-недельному возрасту.
Хотя болезнь Марека и является высококонтагиозной инфекцией, заболеваемость и выраженность патологического процесса во многом зависит от возраста, пола, наследственной устойчивости определенных линий и семейств птицы, состоянии пассивного иммунитета, вирулентности, дозы вируса и способа заражения.
Больная птица, являясь источником возбудителя инфекции, выделяет вирус во внешнюю среду через 7-21 день после заражения. Макроскопические изменения во внутренних органах возникают лишь спустя 4-5 нед. Вирусоносительство продолжается 16 - 24 мес и даже пожиз-ненно. В стадах с клинически больной птицей удавалось обнаружить вирус в 88,7% случаев.
Болезнь Марека экспериментально воспроизводят при любом способе введения вируса в организм птицы. В естественных условиях вирус проникает через дыхательный и пищеварительный тракты, перьевые фолликулы кожи. Наиболее опасным в распространении является вирус, содержащийся в эпителии перьевых фолликулов. В неблагополучных хозяйствах его удается выделить у 30 - 95% убитых на мясо бройлеров. Каждые 0,015 м3 воздуха помещения, где размещена больная птица, содержат достаточное количество вируса для заражения 10 цыплят. Резервуаром вируса могут быть насекомые, клещи, жуки. Вирус обнаружен на скорлупе яиц. Возможность передачи его с содержимым яйца остается невыясненной. Заболеваемость высокая - 40- 85 % смертность - 3 - 80 %.
Патогенез . После проникновения вирус адсорбируется лейкоцитами крови, разносится по организму и локализуется в тканях лимфо-идных органов. Его репродукция вызывает пролиферацию лимфоидных клеток с последующей инфильтрацией периферических нервов, мозга, глаз, мышц, внутренних органов. При тяжелом развитии пролифератив-ных процессов может наступить гибель птицы, а при слабом - она может выздороветь. Вирус обнаруживают в пораженных органах. Он индуцирует образование вируснейтрализующих и преципитирующих антител.
Течение и симптомы . Инкубационный период 13 - 150 дней и более. Чем выше генетический потенциал породы и моложе птицы, тем большая предрасположенность у них к болезни Марека и короче инкубационный период. Длительное время различали и описывали три клинические формы болезни: а) невральную с поражением периферической нервной системы; б) окулярную (глазную), протекающую с изменениями цвета радужной оболочки и просвета зрачка; в) висцеральную, характеризующуюся образованием опухолей в паренхиматозных органах. В настоящее время принята классификация, выделяющая классическую и острую формы болезни Марека (И. И. Касьяненко, В. П. Иванов, 1969).
Классическая форма протекает медленно, преимущественно проявляясь нервным синдро-мом, иногда - поражением глаз, висцеральным и смешанным процессами. В результате пораже-ния периферической нервной системы возникают хромота, отвисание крыльев и хвоста, скрючива-ние шеи. У отдельных особей регистрируют проходящие полупараличи, оканчивающиеся выздо-ровлением. К этой форме болезни также относят изменение цвета радужной оболочки (иридоцик-лит) с частичной или полной потерей зрения. Просвет зрачка изменяется, становясь узким, звезд-чатым, грушевидным; при этом теряется реакция на свет. Обычно птица погибает через 1 - 16 мес после появления первых признаков болезни. Летальность птицы при данной форме болезни колеб-лется от 1 до 30%.
Для острой формы болезни Марека свойственны клинические признаки, напоминающие лейкоз птиц. Поэтому эту форму болезни Марека правильнее называть лейкозоподобной формой с образованием неопластических опухолей. Ею заболевают птицы в возрасте 30-160 дней. Болезнь возникает внезапно, сопровождается массовой гибелью птицы и падением продуктивности. В те-чение 1-2 нед переболевают все птицы, находящиеся в стаде. У отдельных особей могут развить-ся парезы и параличи. Ведущими клиническими признаками являются расстройство пи-щеварения, потеря массы, отказ от корма, упадок сил, ненормальная постановка тела, головы, крыльев, ног, хвоста. Эти признаки вызваны образованием во внутренних органах опухолей, при-водящих к общему нарушению состояния организма птицы.
Патологоанатомические изменения . В трупах при классической форме обнаруживают диффузные или очаговые утолщения нервных стволов, изменение их цвета; в 2 - 10% случаев выявляются опухоли в яичнике и семенниках (Цанелла, 1969). Пораженные нервы иногда опухоле-видно изменены. При остром течении часто обнаруживают плотные очаговые опухоли в различ-ных внутренних органах, расширение зоба. Легкие имеют сероватый цвет с диффузными опухолевыми очагами. Лейкозоподобные неоплазии тканей и органов находят в 2 - 11% случаев.
Диагноз
. Учитывают эпизоотологические данные, клинические признаки, патологические изменения, результаты лабораторного исследования и биопробы.
Биопроба на цыплятах. Суточных цыплят, свободных от антител, заражают подкожно или внутримышечно суспензией патматериала, взятого от больной птицы. Результаты оценивают через 3 нед по наличию вирусспецифического антигена в коже.
Биопроба на куриных эмбрионах. В первом варианте заражают 11 -12-дневные куриные эмбрионы в хориоаллантоисную оболочку. При положительной биопробе появляются пустулы и очаги пролиферации. Во втором варианте заражают 4-дневные эмбрионы в желточный мешок. В положительных случаях у 30% инфицированных эмбрионов через 12-14 дней на хориоалланто-исной оболочке развиваются пустулы.
Пробы в культуре клеток. Заражают также культуры клеток почки куриных эмбрионов или фибробласты утиных (куриных) эмбрионов. Вирус вызывает характерные цитопатические измене-ния.
Из серологических методов используют РДП для обнаружения в перьевых фолликулах специфического антигена и РИГА для обнаружения специфических антител, наивысший титр ко-торых (1:128-1:1024) достигает к 10-13 нед. Для экспресс-диагностики используют РИФ.
Дифференциальный диагноз . Необходимо исключить лейкоз, вирусный энцефаломиелит, гиповитаминозы В и Е.
Лечение не разработано.
Иммунитет . Переболевшая птица приобретает нестерильный иммунитет. Для специфиче-ской профилактики в неблагополучных хозяйствах применяют сухую культуральную вирусвакци-ну из штамма ФС-126 герпеса индеек. Цыплят прививают однократно в инкубатории перед завозом на ферму. Вакцину вводят внутримышечно в область бедра в дозе 0,2 мл. Иммунитет формируется на 21 -28-й день. Эпизо-отологическая эффективность вакцинации 86 - 92 %. Прошла производ-ственное испытание вакцина из штамма М 22/72.
Профилактика и меры борьбы . Основной профилактической мерой является соблюдение ветеринарно-санитарных требований в инкубаторе и птичниках, проведение тщательной дезинфекции и дезинвазии перед завозом нового поголовья. Малопродуктивную и подозреваемую в заболевании птицу выбраковывают и уничтожают. Рекомендуется вести отбор линий кур, устойчивых к болезни Марека.
В неблагополучных хозяйствах вводят ограничения. При поражении 5 - 10% поголовья классической формой болезни Марека целесообразно убивать всю неблагополучную группу пти-цы. Осуществляют профилактический перерыв в воспроизводстве стада с. полной санацией птич-ников и оборудования.
При массовом распространении болезни запрещают реализацию инкубационных яиц и вы-ращивание молодняка. Воспроизводство молодняка начинают через месяц после ликвидации пти-цы и санации хозяйства во всех технологических звеньях производства. Весь молодняк вакцини-руют в суточном возрасте.
При наличии в хозяйстве единичных случаев болезни, без тенденции к широкому распро-странению, разрешают инкубацию яиц внутри хозяйства после 4-кратной дезинфекции парами формальдегида. Дезинфекцию пуха, пера, инкубационных яиц и помещений проводят обычными общепринятыми средствами. Ограничения с хозяйства снимают при отсутствии болезни Марека у птицы.
Болезнь Ньюкасла.
Инфекционный гастроэнтерит свиней (ИГС) (трансмиссивный гастроэнтерит свиней - ТГС, болезнь Дойла и Хитчингса) - остропротекаюшая высококонтагиозная болезнь, главным образом поросят до 3-месячного возраста, проявляющаяся рвотой, тяжелой диареей и высокой смертностью (часто до 100 %) среди поросят до 2-не-дельного возраста.
ИГС первыми описали Доил и Хитчингс (США) в 1946 г. Вирус инфекционного гастроэнтерита свиней (ВИГС) впервые выделил и описал японский исследователь Тайима (1970). Помимо ВИГС, к коронавирусам свиней также относятся ГА-вирус энцефаломиелита и вирус эпизоотической вирусной диареи. Последняя протекает несколько легче. Видимо, к группе эпизоотической вирусной диареи следует отнести вирус КВ-777, вызывающий массовые вспышки диареи у свиней разных возрастов и индуцирующий образование АГ в цитоплазме тонкого и толстого кишечника. При электронной микроскопии его обнаруживают в содержимом кишечника и фекалиях больных поросят. Вспышки вируса отмечены в Японии (1956), Великобритании (1957), Канаде (1964) и во многих странах Европы, в т. ч. в странах СНГ 19-54 % свиноферм Европы и Северной Америки серопозитивны по ТГС. Распространенность в большинстве европейских стран составляет около 100 %. Эта ситуация обусловлена респираторным вариантом вируса ИГС, названным респираторным коронавирусом свиней (РКВС), который быстро распространился с 1986 г. Экономические потери весьма значительны. Они складываются из высокой смертности новорожденных поросят, низкой эффективности лечения, сложности предупреждения заноса вируса в весеннее время, поскольку существенную роль в этом играют птицы, особенно скворцы. Эффективность коммерческих вакцин весьма ограничена.
Симптомы и патологоанатомические изменения. Вирус поражает поросят до 3-месячного возраста. В более старшем возрасте они переболевают без летального исхода. У больных кормящих свиноматок снижается продукция молока. Болезнь клинически проявляется отсутствием аппетита, рвотой, диареей (беловатые, желтоватые или зеленоватые пенистые фекалии), обезвоживанием, слабостью и высоким падежом. Инкубационный период у 1-5-дневных поросят длится 12-18 ч, погибают все заболевшие. У 6-10-дневных поросят инкубационный период - 18-36 ч, смертность среди них достигает 67 %. С возрастом животных инкубационный период увеличивается, смертность уменьшается. Относительно высокая чувствительность к вирусу ИГС может быть связана со снижением цитотоксичности лимфоцитов в отношении клеток, инфицированных вирусом у свиноматок при опоросе, а также отсутствием цитотоксичности лимфоцитов у поросят в течение 1-й недели после рождения. В этих условиях поросята могут быть защищены только AT матери, полученными с молозивом и молоком. Кроме энтероцитов, поражение которых сопровождается атрофией ворсинок тонкого отдела кишечника, клетками-мишенями для вируса могут служить альвеолярные макрофаги, а также клетки миндалин и других органов. В клетках миндалин больных поросят АГ ВИГС выявляли даже чаще, чем в клетках тощей кишки.
Различают три стадии болезни: предклиническую, клиническую и выздоровления. В предклинической стадии наблюдают снижение аппетита, сонливость, повышенную жажду, иногда лихорадку {41- 41,5 °С) ирвоту. Клинический период характеризуется сильной диареей с выделением газов. Фекалии серо-красного или жёлто-зелёного цвета, выделяются самопроизвольно. Стадия выздоровления более длительная. Заболевшие поросята испытывают сильную жажду, пьют много воды и сосут молоко, которое в непереваренном виде выходит с жидкими фекалиями. Потеря жидкости ведёт к сильному обезвоживанию организма, вследствие чего развиваются метаболический ацидоз и другие изменения в электролитическом балансе крови. Смерти обычно предшествует кома, наступающая на 3-й день. У выживших поросят через 3-4 дня начинается регенерация ворсинок, диарея прекращается. Болезнь длится 2-5 дней, смертность снижается по мере увеличения возраста поросят.
Возрастной фактор также влияет на продолжительность и тяжесть болезни. У свиноматок, зараженных при контакте с больными поросятами, повышается температура тела, исчезает аппетит, отмечаются депрессия, умеренная диарея и прекращение лактации. Выздоровление наступает через 7-10 дней. Выжившие поросята отстают в росте. Иногда к желудочно-кишечным расстройствам присоединяется энцефаломиелит с гиперестезией. От 43 до 98 % Взрослых свиней в различных странах имеют к вирусу ВНА. Материнские AT исчезают у поросят к 15 неделями жизни. Затем появляются активно выработанные AT за счет инаппарантно перенесенной инфекции под защитой материнских AT.
Вирусный гастроэнтерит, в основном, протекает в ассоциации с бактериальными инфекциями и чаще с колибактериозом (37,9 %), вызываемым шт. 0-138, 0-103, 0-78, 0-86 и 0-1. Необходимо учитывать, что РКВС обычно вызывает субклиническую респираторную инфекцию. Лихорадка наблюдалась после интратрахеального заражения, тогда как другие исследователи наблюдали пневмонию со смертельным исходом, а также выраженную потерю массы у 90-дневных поросят, что не наблюдалось у 15-недельных свиней.
Патизменения у поросят-сосунов, павших в первые 3 дня жизни, отмечают, главным образом, в желудке и тонком кишечнике. В желудке небольшое количество свернувшегося молозива, слизистая его набухшая, покрасневшая, местами ослизневшая. Аналогичные изменения и в тонком кишечнике. У поросят 2-недельного возраста картина вскрытия более выражена. Труп истощен, конъюнктива, слизистые носовой и ротовой полостей бледные, с синюшным оттенком, скелетные мышцы вялые, суховатые. На ушах, брюхе, шее часто появляются красно-фиолетовые пятна. Слизистая оболочка дна желудка резко гиперемирована, набухшая, покрыта слизью, иногда усеяна точечными кровоизлияниями, местами эрозирована и изъязвлена. Тонкий кишечник растянут газами, заполнен жидким содержимым, в состоянии катарального или катарально-геморрагического воспаления. Слизистая тонкого кишечника полнокровна или в состоянии катарально-геморрагического воспаления. Брыжеечные, портальные, почечные и желудочные лимфоузлы набухшие, сочные, селезенка полнокровна. Печень бледная или пятнисто окрашена, дрябловатой консистенции. Почки бледные, иногда с мелкими кровоизлияниями под капсулой. Слизистая мочевого пузыря набухшая, усеяна кровоизлияниями. Сердце увеличено, миокард серого цвета, дрябловатый, подэпи - и эндокардом по ходу сосудов мелкие кровоизлияния. Легкие без особых изменений или несколько полнокровные. Оболочки головного мозга гиперемированы, вещество мозга иногда размягчено, отечно, с мелкими кровоизлияниями. У подсвинков и взрослых свиней картина вскрытия сходна с таковой у 2-не-дельных поросят, но слабее выражена.
У поросят, погибших через 1-3 дня после рождения, в желудке и тонком кишечнике устанавливают слизистую дистрофию и некроз эпителиальных клеток, полнокровие и отек соединительно тканной пластинки и подслизистого слоя кишечника. У поросят 2-недельного возраста обнаруживают более глубокие изменения. В желудке - полнокровие и кровоизлияния, дистрофия покровных клеток, обширные эрозии и некрозы, окруженные клеточными инфильтратами из лейкоцитов. Часто отмечают серозный или фибринозный гастрит. В тонком кишечнике гиперемия, гиперсекреция, вакуолизация, некроз и десквамация эпителия ворсинок вплоть до полного их оголения. Большая часть ворсинок атрофирована и деформирована. Собственный и подслизистый слои гиперемированы, отечны, часто с кровоизлияниями, инфильтрированы лимфоидными, эозинофильными и плазматическими клетками. В толстом кишечнике гиперемия, иногда дистрофия и некроз клеток эпителия крипт. Селезенка и лимфоузлы инфильтрированы эритроцитами, строма их отечна. В печени гиперемия, зернистая дистрофия гепатоцитов и нарушение балочного строения, в почках зернистая дистрофия канальиевого эпителия, в сердце изменения тинкториальных свойств саркоплазмы мышечных волокон, отек межмышечной соединительной ткани. В головном мозге находят периваскулярные лимфоцитарные «муфты», очаги пролиферации глии.
Попадая в организм через ЖКТ или органы дыхания, вирус проникает в эпителий тонкого кишечника. Размножаясь в цитоплазме клеток ворсинок слизистой оболочки, он вызывает дегенерацию и некроз их. Под влиянием продуктов распада этих клеток и токсинов происходит нарушение гемодинамики и усиливается проницаемость стенок микроциркулярного русла, что способствует проникновению части вируса в кровь. Однако основная масса вируса локализуется в эпителии кишечника, вызывая дистрофию, некроз и десквамацию клеток ворсинок, из-за чего последние укорачиваются (атрофируются). Наиболее выраженный некроз клеток и атрофию ворсинок отмечают в каудальной части 12-перстной, тощей и подвздошной кишок. Названные изменения эпителиальных клеток являются причиной острого нарушения процессов пищеварения, диспепсии, диареи и обезвоживания, нарушения обмена веществ. Отмечают ацидоз, общую интоксикацию и гибель животных.
Распространение вируса ИГС по эпителию кишечника происходит путем выделения вируса из инфицированных клеток в просвет кишечника, а затем заражаются близлежащие клетки через апикальный домен. При инфекции РКВС атрофии сосочков тонкого кишечника не наблюдается. Однако в легких развивается интерстициальная пневмония у большинства инокулированных животных.
Морфология и химический состав. ВИГС оболочечный, плеоморфный, диаметром 60-160 нм, имеет один слой булавообразных отростков на поверхности проекции длиной 12-25 нм. Вирус содержит одну большую полиаденилированную плюс-РНК (>23кД). РНК, экстрагированная из вирионов, обладает инфекционностью. В процессе репликации синтезируется 5-7 субгеномных мРНК с общими З"-концами для продукции вирусных белков. Определена нуклеотидная последовательность по 3"- концу генома, соответствующая мРНК. Плавучая плотность вирионов в градиенте сахарозы составляет 1,18-1,20 г/см3. Фосфо - и гликолипиды, инкорпорированные в оболочку, имеют клеточное происхождение, таким образом, оболочка вириона клеточнозависимая. ВИГС содержит три главных структурных белка: нуклеокапсидный белок (N), мелкий оболочечный гликопротеин (М) и большой гликопротеин пепло-меров (S). В зрелом вирионе N-протеин «вплетен» в вирусную РНК, образуя рибонуклеопротеидный комплекс. Гетерофильный N-конец гликопротеина М выступает из вириона и имеет единственный доступный гликопротеиновый сайт и обеспечивает индукцию КСА и ВНА, а также интерферона. Гликопротеин S (или пепломерный белок) мол. м. 195-220 кД смотрится на электронограммах как корона вируса. Он отвечает за прикрепление вируса к клетке, расплавление мембраны и индукцию компле-ментнезависимых ВНА. Очищенный S-гликопротеин индуцирует образование ВНА, которые нейтрализуют репликацию вируса на всех стадиях.
Определена последовательность 3" главных 8300 нуклеотидов геномной РНК ВИГС шт. Perdue, адаптированного к клеткам. Этот участок генома содержит три главных структурных гена с согласованностью коронавирусной ориентации 5" - S - М - N -У И четыре больших открытых рамки считывания, которые кодируют потенциальные вирусные протеины.
5" часть генома кодирует вирусную репликазу/транскриптазу как и у вируса ИБК. Степень гомологии аминокислот среди структурных белков ВИГС и антигенно не связанных коронавирусов подтверждает, что эти коронавирусы имеют общее эволюционное происхождение. Однако методом перекрестной гибридизации нуклеиновой кислоты среди антигенно не связанных коронавирусов родства не наблюдается в связи с низкой базой гомологичных последовательностей. Недавно был секвенирован З"-конец геномной РНК РКВС. Сопоставление нуклеотидной и аминокислотной последовательностей РКВС и ВИГС выявляет 96 % гомологии. Геном РКВС содержит две отличающиеся карты: 1 - в гене S недостает 672 нуклеотидов в 5"-зоне, кодирует большой белок пепломеров; 2 - первая открытая рамка считывания от гена S имеет двойную делецию. Это генетическое изменение обусловливает измененный тканевый тропизм РКВС. О подобных изменениях фенотипа сообщалось относительно мелко-бляшечного варианта ВИГС. Хотя ген S мелкобляшечного варианта и дикого ВИГС похожи, большая делеция (462 нуклеотида), происходящая из S - гена, имеет место в мелкобляшечном варианте. Эта делеция выявляет открытую рамку считывания одного потенциально кодируемого белка и N-концевую часть второго потенциального вирусного белка. Очевидно, патогенность РКВС и мелкобляшечного варианта ВИГС снижается как результат этих генетических делеций.
Нуклеотидная последовательность S-гена вируса инфекционного перитонита кошек (ВИПК) определена и сравнивалась с таковой S-гена ВИГС. На основе нуклеотидной и аминокислотной гомологии идентифицированы два различающихся домена. Один домен (аминокислоты 1-274) имел нуклеотидную гомологию 39 %, тогда как гомология во 2-м домене (аминокислоты 275-1447) была 93 %. Возможная эксплантация для этих высоких дивергенций последовательности в 31-конце может быть такой, что ВИПК происходит при рекомбинации РНК-РНК ВИГС со связанным вирусом. Высокая частота РНК-РНК - рекомбинации также описана и для коронавирусов мышей.
Вирус чувствителен к эфиру, хлороформу и дезоксихолату натрия, устойчив к трипсину. Не подавляется ДНК-ингибиторами. Инактивируется 0,03 %-ньш раствором формалина, 1 %-ным Lysovet (смесь фенола и альдегида), 0,01 %-ным раствором р-пропио лактона, гипохлорита натрия, едкого натрия, йода. Изучена сравнительная термическая инактивация 2 двух штаммов вируса инфекционного гастроэнтерита Perdue и Д25. Возбудитель устойчив к замораживанию. В замороженном виде вируссодержащий материал сохраняется 5-8 недель, при -18 °С - до 18 месяцев, при -20, -40 или -80 °С - 365 дней; при нагревании до 56 °С инактивируется за 30 мин и до 50 °С в присутствии 1М MgCI2 - за 1 ч, при 37 °С полная потеря инфекционности наступала через 4 дня. Устойчив к рН (4-9). В жидком кале на солнце инактивируется за 6 ч, в тени - за 3 дня. Амантадин и пуромицин тормозят репродукцию вируса. ВИГС стабилен в желчи поросят при рН 3,0, сохраняющую его инфекционность в тонком кишечнике.
Антигенная структура. Сердцевина ВИГС представлена геномной РНК с ковалент-но связанным и фосфорилированным нуклеокапсидным белком (N) с мол. м. 47 кД. Вокруг нее располагается ведущий свое происхождение из эндоплазматического ре-тикулума клеток хозяина липидный белок, в котором локализованы вирусспецифи-ческие липопротеины двух типов: интегральный мембранный липопротеин (М) с мол. м. 28 кД и пепломерный гликопротеин (S) с мол. м. 200 кД, который формирует поверхностные отростки (пепломеры). В вирусе ТГС выявлены 4 АГ-сайта (А, В, С и D) и идентифицировано 11 эпитопов, 8 из которых вируснейтрализующие.
Нейтрализующие вирус ТГС монАТ против gpS не зависят от комплемента, тогда как AT против гликопротеина М тоже нейтрализуют вирус ТГС, но исключительно в присутствии комплемента. ВНА к S - и М-белкам свидетельствуют об АГ гетероло-гичности изолятов вируса ТГС. У коронавирусов свиней и собак в протективном белке обнаружено, по крайней мере, одна общая АГ-детерминанта, обеспечивающая практически одинаковую защиту поросят при иммунизации матерей гомо - и гетерологичным вирусом. По более ранним сообщениям вирионы ТГС содержат следующие белки: пепломерный белок Е2 (220 кД), белок Еч2 (175 кД), который является предшественником белка Е2, низкомолекулярный оболочечный белок Е1 (29 кД), нуклеопротеин N (47 кД). Сыворотка реконвалесцентов содержит ПА к S и М протеинам, часто к вирус-кодируемому внутриклеточному протеину мол. м. 14 кД. МонАТ получены к аттенуированному и вирулентному штаммам ВТГС и используются для характеристики протеинов вируса и карты эпитопов, которые выявляют AT Главные нетрализующие детерминанты связаны с S гликопротеином; эти эпитопы высококонсервативны у большинства штаммов ВИГС.
Антигликопротеин-М монАТ обладает низкой нейтрализующей активностью, или она полностью отсутствует, но может быть значительно увеличена комплементом. Использование нейтрализующих монАТ для определения эпитопной карты S-гликопротеина показало наличие 4-5 различных АГ-сайтов, содержащих в сайтах А и В высококонсервативные эпитопы, узнаваемые сильной нейтрализацией монАТ.
Антигенная вариабельность. Штаммы вируса, выделенные от животных в разных странах, серологически идентичны, хотя в последние годы появились варианты. Существует иммунологическое различие между кишечным и культуральным ВИГС. Кишечный вирус содержит АГ А. В 1977 г. установлено АГ-родство ВИГСс ВИПК, атак-же коронавирусом собак (КВС). Вирус ИГС имеет один серотип, не имеет связей с вирусом энзоотической диареи свиней и ГА-вирусом свиней. Выделенный недавно респираторный коронавирус свиней (RSCV/PKBC), получивший широкое распространение в ряде западноевропейских стран, оказался в АГ-отношении тесно родственным ВИГС. Главным отличием его является исключительный пневмотропизм при отсутствии энтеропатогенности. В АГ-отношении оба вируса сходны между собой и имеют одинаковые нейтрализующие эпитопы во всех вирионных белках (N, S, М). Однако монАТ, специфичные к белку S ВИГС, распознают РКВС. Вирус эпизоотической диареи свиней по всем свойствам является типичным коронавирусом, хотя и не обладает АГ-родством с другими представителями семейства коронавирусов. Исследована степень родства ВИГС и РКВС по уровню индукции специфических реакций клеточного иммунитета и защиты против контрольного заражения поросят.
ВИГС не имеет АГ-родства с двумя другими короновирусами свиней: ГА-вирусом энцефаломиелита (PEDV) и вирусом эпидемической диареи поросят (CV777). Энцефалит, обусловленный ГА-вирусом, регистрируется в Европе и на Тайване, AT выявлены на ограниченном поголовье взрослых свиней в США. ВИГС, КВС и ВИПК АГ связаны. Эти три вируса могут представлять ряд мутантов исходного вирусного штамма. Перекрестная реакция имеет место также на уровне структурных белков S, N и М в реакциях радиоиммунопреципитации, иммуноблотинга, ИФА. Аналогичные перекрестные реакции со структурными белками ВИГС и РК. ВС наблюдали с использованием поликлональной сыворотки в иммуноблотинге.
В клетках тонкого кишечника зараженного поросенка вирус размножается в течение 2 недель, а с калом выделяется 7-10 дней после клинического выздоровления. В достаточно высокой концентрации он накапливается в эпителии тонкого кишечника, содержимом ЖКТ и ткани лёгких. Вирус, попавший в организм с кормом, благодаря кислотоустойчивости, проходит в желудок и размножается в тонком кишечнике, разрушая эпителий ворсинок. Другие клетки не повреждаются. Вирус локализуется в цитоплазме цилиндрических клеток ворсинок тонкого кишечника. Пораженные клетки обнаруживают уже через 5 ч после заражения. Через 9-12 ч происходит повторный цикл его репликации, и через 16-18 ч в большинстве клеток отмечают специфическую ИФ. Через 24 ч происходит атрофия ворсинок, а спустя 3 дня - регенерация клеток, которая завершается на 7-й день.
Больные и переболевшие свиньи являются вирусовыделителями до 2 месяцев. Концентрация вируса в экскрементах особенно высока в начале болезни и в период её развития (106-107 ИДбо/мл). В крови и паренхиматозных органах его обнаруживают в продромальный период при первом повышении температуры тела. При развитии виремии он выявляется в паренхиматозных органах, а также в слизистой носа, трахеи, миндалинах, в более низком титре - в крови. У взрослых свиней вирус редко обнаруживают в органах пищеварения и дыхания, а также в региональных лимфоузлах. В лимфоцитах он не реплицируется. При экспериментальном заражении 3-дневных поросят на 2-е сутки после инокуляции вирус выделяют из легких, печени, поджелудочной железы, а также крови. В последующие 9 дней титр его еще высокий, но к 15-му дню его в органах уже не обнаруживают. У 3-недельных поросят вирус выделяют только из кишечника в течение 3-5 дней после заражения. Однако при заражении новорожденных поросят per os или интраназального вирус реплицируется в слизистой оболочке носа, миндалинах и тонком кишечнике, затем передвигается по нервным путям в перефирические ганглии и появляется в нейронах спинного и головного мозга. У поросят, полученных с помощью гистеректомии от экспериментально заражённых свиноматок на 74- и 95-й дни супоросности, обнаруживали кишечную локализацию вируса и атрофию ворсинок кишечника. Поросята имели AT к вирусу ВИГС. Недостаток цинка в корме отягощает болезнь.
Из организма больного животного вирус выделяется, в основном, с калом и в меньшей степени с мочой и экскретами. Во внутренних органах и лимфоузлах жи-вотных-реконвалесцентов он может переживать многие месяцы и годы. Равновесие вирус - хозяин может быть нарушено стрессовыми воздействиями. Поросята, зараженные в возрасте 5 недель, оставались вирусоносителями в течение 104 дней. Установлено, что заражение супоросных свиноматок за 2-3 недели до опороса приводит к массовому заболеванию и высокой смертности их поросят. При заражении маток за 1,5-2 месяца до опороса поросята остаются здоровыми в течение всего подсосного периода. После отъема от матерей они легко переболевают, смертность незначительная. У экспериментально зараженных поросят наблюдали вирусоносительство в течение 2,5 месяцев (срок наблюдения).
Антигенная активность. Вирус ИГС обладает выраженной АГ активностью и индуцирует синтез ВНА, активность которых обусловлена IgA, а при иммунизации - IgG. У свиней, зараженных per os вирулентным шт. Miller, появлялись AT IgA, а у зараженных парентерально аттенуированным культуральным шт. Purdue - IgG. Вирусный нук-леопротеин (N) не способен индуцировать синтез ВНА. В молозиве, а затем в молоке свиноматок-реконвалесцентов, такие AT присутствуют в течение нескольких недель.
Поросята от переболевших или ранее инфицированных в естественных условиях свиноматок устойчивы к заболеванию, если они сразу после рождения и не реже, чем через каждые 4 ч потребляют такое молозиво или молоко. Пассивный иммунитет против кишечной инфекции обусловлен IgA молока. Титры AT в молозиве и молоке инфицированных свиноматок выше, чем в сыворотке крови. Значительный уровень IgA обнаруживается в молозиве и молоке только после поедания свиноматками вируссо-держащего материала. Возможный механизм, объясняющий это явление, АГ-сенси-билизированные иммуноциты из Lamina propria кишечного тракта заселяют молочную железу. Субъединичный компонент ВИГС (гликопротеин), будучи выделенным из вирионов с помощью ультразвука и отделенным из остальных вирусных компонентов (с помощью изопикнического центрифугирования), способен при внутримышечном введении защищать поросят. У вакцинированных животных развивался гуморальный иммунный ответ . Главным механизмом нейтрализации является ингиби-ция прикрепления вируса к клетке.
Экспериментальная инфекция. Вызывается введением вируса per os или интрана-залбно. Наиболее восприимчивы поросята - сосуны в возрасте от 1 до 15 дней, хотя во многих случаях болезнь удается воспроизвести и у взрослых животных. Заражение легко удается только при введении материала per os. Поросят 1-5-дневного возраста можно заразить интраназально; очевидно, что при интразанальной инстилляции материала около 90 % его попадает в ЖКТ. При парентеральных методах заражения воспроизвести болезнь обычно не удается или требуются для этого в 1000 раз большие дозы вируса, чем при оральном инфицировании. Морские свинки, белые мыши и мышата-сосунки 1-5-дневного возраста, кролики, хомячки к ВИГС нечувствительны. Инфекция поросят ВТГЭ приводит к быстрому и массивному выделению интер-ферона-сс (ИФН-а) в сыворотку и секреции. Поросят с помощью кесарева сечения лишенных молозива, заражали орально вирулентным штаммом Миллера ВТГЭ. Характеризовали продуцирующие ИФН-а клетки in situ иммуногистохимически, используя сыворотку кролика против ИФН-а свиней. Выявляли его исключительно в клетках кишечника и мезентериальных лимфоузлах, начиная с 6 ч после заражения. Пик наступал через 12-18 ч. Продуцирующие ИФН клетки локализовались между энтероцитами в тонком кишечнике (его эпителиальной поверхности), в lamina propria, вокруг Пейеровых бляшек и, с большой частотой, в мезентериальных лимфоузлах. Селезенка и подколенные лимфоузлы содержали очень мало продуцирующих ИФН клеток. Двойное иммуногистохимическое окрашивание маркеров лейкоцитов на мезентериальных лимфоузлах в их криогенных срезах показало, что продуцирующие ИФН клетки содержат лейкоцитарный антиген свиней класса II (SLA) и не окрашиваются моноклональными антителами против макрофагов. Вирусные антигены присутствуют в мезентериальных лимфоузлах и связаны с ИФН. Обнаружена экспрессия главного комплекса гистосовместимости класса II, который может противостоять в слизистой дендритным клеткам, способным продуцировать ИФН после заражения in vitro.
Культивирование. Вирус размножается в первичных культурах клеток тестикул, кожи, легких, щитовидной железы, тощей, подвздошной кишок, эпителии слизистой оболочки носовой полости и в перевиваемых клетках тестикул поросенка, не вызывая в первых пассажах ЦПД, а также в органных культурах пищевода. Редко полевые изо-ляты вызывают деструкцию клеток в первом пассаже; ЦПД появляется лишь после предварительной адаптации вируса. Адаптированный к культуре клеток, он быстро размножается и разрушает их в течение 2-4 дней, в зависимости от дозы. Вирус хорошо культивируется в суспензионной культуре линии клеток почки поросенка ППК.-666. Эта культура оказалась высокопродуктивной системой для крупномасштабного производства вакцинного штамма ВИГС. Степень стимуляции репродукции коронавируса КРС трипсином различна в зависимости от культуры клеток, тогда как коронавирус свиней в присутствии трипсина накапливается в высоком титре (108- 109ТЦД50/ыл) в двух постоянных линиях клеток свиней (СПЭВи ППС). Максимальные титры инфекционности при культивировании шт. «Правда», ВГНКИ №5 и V-91 в монослойной культуре клеток ППС составляли 106 ТЦДзо/ш, тогда как при вырашивании в суспензии эксплантатов кишечника и легких плода свиньи достигали 106-5-107-5 и 1О8.°ТЦД50/мл соответственно.
Для выделения вируса наиболее пригодны культура клеток щитовидной железы свиньи и перевиваемая линия РК-15. ВИГС интерферируете вирусом ВД-БС и ВБА. ЦПД вируса начинается с развития малого или большого синцития уже через 24 ч после инокуляции. В последствии мелкие синцитии сливаются и пораженные клетки отделяются от поверхности стекла. Большой синцитий с 20-40 ядрами можно наблюдать при заражении культуры клеток из щитовидной железы свиней, в то время как синцитий, обнаруживающийся в культуре клеток из почек свиней, чаще всего содержал 2-5 ядер, редко - больше. Тельца-включения не обнаруживались ни в цитоплазме, ни в ядре. В культуре клеток почки свиней ЦПИ менее выражены. Почти все изо-ляты вируса в первично-трипсинизированной культуре клеток щитовидной железы свиньи индуцируют образование бляшек, размеры которых колеблются от 1 до 5 мм в диаметре. Свежевыделенные изоляты индуцируют более мелкие бляшки, чем лабораторные штаммы. Бляшки образуются и в перевиваемой линии клеток семенников свиней. В монослойной культуре клеток щитовидной железы взрослой свиньи при рН 6,5 титр вируса в 10 раз выше, чем при рН 7,2, и в 100 раз выше, чем при рН 8.
Отмечены различия при культивировании ВИГС и КВС in vitro. Оба вируса размножались в культуре клеток почек собак или перевиваемой линии клеток кошек. Вирусы ИПК. и КВС не репродуцировались в клетках ST или культуре клеток щитовидной железы поросят, тогда как ВИГС в обеих культурах изолировался. В альвеолярных макрофагах репродуцировался только адаптированный к культуре клеток не вирулентный ВИГС. АГ ВИГС обнаруживается в цитоплазме МФА через 4-5 ч после заражения. Зрелые вирионы встречаются в цитоплазме почкующимися из цитоплазматического ретикулюма и вирусные частицы (диаметром 65-90 нм) часто наблюдаются в цитоплазматических вакуолях. Вирус виден прилегающим к мембране клетки-хозяина после выхода из зараженной клетки. Гликопротеины вируса идентифицируются на поверхности тестикулярных свиных клеток.
Установлена ГА активность вируса в отношении эритроцитов цыплят, морских свинок и КРС. Однако только вирус, размноженный в культуре клеток ППС, обладал ГА активностью, не влияющей на иммуногенность. Не установлено разницы в индукции ВНА и выраженности протективного иммунитета при использовании ГА и не ГА вируса. ГА активность коронавирусов связана с 4-м структурным белком НЕ(ГАэете-роз). ВИГС не имеет НЕ-гликопротеина. ГА активность ВИГС зависит от системы его репродукции и связана с пепломерным гликопротеином. При размножении вируса в перевиваемых линиях клеток 1BRS и щитовидной железы свиней вирус агглютинирует эритроциты морской свинки в титрах 1:64 и 1:256.
В цитоплазме клеток свиней, зараженных ВИГС, обнаруживают ферментативную активность, которая отсутствует в нормальной культуре клеток и не обнаруживается в очищенных вирионах. Для проявления ферментативной активности требуются ионы Mg2+.
Источники и пути передачи инфекции. Различают три формы инфекции: эпизоотию, энзоотию и инфекцию, обусловленную РКВС, серологически тестируемым как ИГС. Основной источник инфекции - животные, находящиеся в инкубационном периоде, больные и переболевшие (в течение месяца). Инфекция передается с кормами, тарой, транспортом, навозом и субпродуктами. Вирус выделяется из молока инфицированных животных в течение острой фазы заболевания. В носовых истечениях он обнаруживается в течение 10 дней после заражения. Особенно опасны фекалии больных животных. Инфекцию могут распространять собаки и лисицы, так как вирус размножается в кишечнике. Вирус может передаваться домашними мухами (Musca domestica). Из гомогенатов тонкого кишечника мух его удавалось выделять в течение 104 дней после заражения, из органов дыхания - 11 дней. В организме экспериментально зараженных поросят разновозрастных групп вирус выделяется из кишечника, печени, селезенки, фекалий, легких через 12 ч после заражения и сохраняется до 20 дней (срок наблюдения). Это свидетельствует о том, что поросята могут быть носителями вируса и источником инфекции.
Серологические исследования , проведенные в Бельгии в 1984 г. неожиданно показали значительное увеличение числа носителей AT к ВИГС на фоне отсутствия вак-циАаций или клинических признаков ИГС. Не энтеропатогенный вирус, АГ родственный ВИГС, оказался этиологическим агентом этого явления и был выделен в культуре клеток. Вирус инфицировал эпителиальные клетки респираторного тракта и альвеолярные макрофаги. При экспериментальном заражении инфицировал только некоторые не идентифицированные клетки тонкого кишечника, при этом вирус ограниченно обнаруживался или вовсе отсутствовал в кале. У поросят продуцировались AT, которые нейтрализовали ВИГС. Вирус распространен в Европе: Бельгии, Великобритании, Франции, Нидерландах, Германии, Дании и США. Инфекция РКВС персистирует в закрытых фермах с циклическими эпизоотическими вспышками даже на фоне пассивных сывороточных AT.
В естественных условиях к вирусу восприимчивы свиньи и собаки; новорожденные поросята в 2-1000 раз восприимчивее, чем свиньи, достигшие убойной кондиции. У собак отмечали потерю аппетита, понос, рвоту и гипертермию. Вирусом, выделенным от больных собак, заражали недельных поросят. Собаки могут быть носителем вируса и инаппарантным источником для восприимчивых свиней. КВС, ВИГС и ВИПК входят в одну группу антигенно-родственных агентов, отличающихся от других членов семейства коронавирусов по РН и ИФ. В естественных условиях установлено существование штаммов ВИГС различной вирулентности. Вирусы ИГС, ИПК и КВС отличаются по патогенности для новорожденных поросят. Вирулентный ВИПК вызывает такие же симптомы заболевания, как и ВИГС. КВС не вызывает клинические признаки заболевания. До сих пор нет сообщений о естественном заражении поросят ВИПК или КВС. У поросят, экспериментально зараженных ВИПК Или КВС, не образуются AT к ВИГС.
Иммунитет и специфическая профилактика. При ИГС имеет значение местный иммунитет кишечника, так как гуморальные AT не защищают животного от заражения. У переболевших свиней иммунитет сохраняется более 2 лет. У поросят он слабый и непродолжительный. Изучена роль респираторных и кишечных лимфоидных тканей в создании иммунитета против ВИГС. Вероятно, при защите от этой инфекции большое значение имеет появление IgA после перорального введения ВИГС. Специфическая профилактика ИГС, несмотря на свою многолетнюю историю, все еще остается актуальной проблемой.
Выделены пять мутантов HAD ВТГЭ, дефектных по гемагглютинации. В отличие от родительского ВТГЭ, мутанты не связываются со свиным муцином, богатым сиаловой кислотой. Мутанты имеют одиночные точечные мутации в белке S (C155F, М195V, R196S, D208N и L209P). Эти аминокислотные остатки влияют на связывание с сиаловой кислотой. С использованием МАт показано, что у четырех мутантов HAD затронут соседний антигенный сайт. Мутанты имеют пониженную устойчивость к детергенту оксилглюкозиду. Этот эффект зависит от клеточных сиалогликоконъюгатов, связанных с вирионами. После обработки нейраминидазой родительский ВТГЭ становится столь же устойчивым к оксиглюкозиду, как и мутанты HAD. Высказано предположение, что способность связываться с сиаловой кислотой помогает ВТГЭ бороться с детергентоподобными веществами, встречающимися во время прохождения через желудочно-кишечный тракт, и заражать эпителий кишечника.
При активной иммунизации важное значение имеют секреторные }
