Čo je súčasťou Ifa? Enzýmová imunoanalýza (EIA). Alternatívna metóda ELISA

Enzýmová imunoanalýza deteguje špecifické protilátky alebo antigény na množstvo chorôb. Vďaka diagnostickej technológii sa zisťujú látky proteínového pôvodu. Ošetrujúci lekár vysvetľuje, prečo je test ELISA pozitívny a čo to znamená. Na stanovenie diagnózy sa berú do úvahy výsledky testov a anamnéza pacienta.

Čo to znamená

Metóda výskumu sa začala používať pred niekoľkými desaťročiami. Odvtedy sa technológia zlepšila a presnosť výsledkov sa zvýšila. Výhodou diagnostiky je vysoká citlivosť. Je tu aj nevýhoda – technika zahŕňa vyhľadávanie daného agenta, t.j. je potrebné predpokladať jeho prítomnosť v tele.

Cudzia častica (antigén) vstupuje do tela spolu s infekčným agensom (agens). Antigén môže byť aj častica krvi niekoho iného, ktorá sa nezhoduje so skupinou. Prítomnosť takýchto faktorov spôsobuje imunitnú reakciu. V dôsledku zložitých nervových procesov sa produkujú imunoglobulíny. Spájajú sa s cudzími molekulami a vytvárajú imunitný komplex. V tejto forme telo ľahšie rozpozná častice a pomocou imunitného systému ich zničí. Každý typ mikroorganizmu produkuje špecifické protilátky.

Na testovanie sa krv odoberá zo žily. Vzniknuté zlúčeniny, ktoré môžu interferovať s výskumom, sa potom z materiálu odstránia. Niekedy sa odoberajú vzorky sliznice alebo cerebrospinálneho moku ako biologický materiál, v niektorých prípadoch sa analyzuje plodová voda. Laboratórium používa špeciálne platne, v ktorých jamkách sú pripravené častice patogénnych mikroorganizmov. Laborant tam umiestni zozbieraný materiál a pozoruje, či sa tvoria imúnne zlúčeniny.

Ak chcete získať presné výsledky, musíte vykonať test na prázdny žalúdok. 2 týždne pred odoslaním materiálu by ste mali prestať užívať antivírusové lieky a antibiotiká.

Analýza vám umožňuje potvrdiť nasledujúce choroby:

toxoplazmóza;
herpes rôznych typov;
cytomegalovírus;
salmonelóza;
úplavica;
infekcia Helicobacter pylori;
osýpky;
kliešťová encefalitída;
rubeola;
choroby reprodukčného systému;
hepatitída.

Toto je neúplný zoznam receptov, zahŕňa aj ovčie kiahne, syfilis a iné choroby, vrátane tých, ktoré spôsobujú rôzne koky.

Detekcia aspoň jedného imunoglobulínu naznačuje, že výsledok ELISA je pozitívny:

Detekcia IgM naznačuje akútne štádium infekčnej patológie. To potvrdzuje súčasnú prítomnosť IgA. Negatívny výsledok v niektorých prípadoch môže naznačovať chronicitu ochorenia.
Pozitívny indikátor IgA naznačuje latentnú chorobu alebo prítomnosť chronického procesu.
Detekcia IgG v rôznych prípadoch môže naznačovať prítomnosť chronickej formy ochorenia alebo naznačovať remisiu.

Formulár môže obsahovať iba informácie o prítomnosti alebo neprítomnosti patogénu. V niektorých prípadoch je uvedený kvantitatívny ukazovateľ. Niekedy je štúdia zameraná na určenie úrovne koncentrácie protilátok. Na tento účel sa stanoví miera pozitivity ELISA. Tento indikátor vám umožňuje určiť, ako dlho trvá patologický proces v tele.

Čo robiť

Infekčný lekár sa zaoberá diagnostikou a liečbou infekčných ochorení, takže vo väčšine prípadov tento špecialista predpisuje štúdiu.

Ak ELISA ukáže pozitívny výsledok, mali by ste sa poradiť s lekárom. Je neprijateľné robiť závery alebo vykonávať liečbu sami. Je ťažké porozumieť indikátorom samostatne, dekódovanie výsledkov je potrebné získať od špecialistu.

Výsledky krvných testov môžu byť ovplyvnené faktormi, ako je fajčenie, konzumácia alkoholu a užívanie určitých skupín drog. Lekár môže nariadiť opakované vyšetrenie, aby sa vylúčili chyby vo výsledkoch. Niekedy sú na potvrdenie diagnózy predpísané ďalšie typy štúdií.

Ak je test pozitívny, nemali by ste predčasne vyvodzovať závery. Včasná štúdia vám však umožní identifikovať ochorenie a predpísať potrebnú liečbu.

V kontakte s

Diagnostická metóda (ELISA) je informatívna a nie je príliš drahá, preto mnohé laboratóriá ponúkajú svojim klientom túto metódu (enzýmový imunotest krvi). Štúdia sa uskutočňuje na prázdny žalúdok, krv na analýzu sa odoberá z ulnárnej žily pacienta. Pred testom ELISA sa odporúča nefajčiť a nepiť alkohol.

Čo je krvný test vykonaný metódou ELISA?

Medzi metódami krvných testov, ktoré hodnotia schopnosť tela odolávať infekčným ochoreniam a ukazujú fázu ochorenia, zaujíma dôležité miesto enzýmová imunoanalýza (ELISA). Vykonanie tejto štúdie vám umožňuje komplexne posúdiť aktivitu ochrannej funkcie krvi a identifikovať stav imunodeficiencie pri infekčných patológiách, ako aj krvných ochoreniach, autoimunitných procesoch a hormonálnych problémoch.

Ide o laboratórne vyšetrenie, ktoré umožňuje určiť prítomnosť špecifických protilátok (ochranné krvné faktory proteínovej povahy) proti určitým antigénom (patogénne agens). Spomedzi protilátok majú primárny význam imunoglobulíny, ktoré môžu existovať vo forme imunokomplexov.

Imunoglobulíny sú produkované ako výsledok komplexných neurohumorálnych reakcií ľudského imunitného systému, ktoré sa vyskytujú ako odpoveď na zavedenie cudzích antigénov. Každý typ patogénneho agens produkuje svoje vlastné špecifické protilátky. Pôsobia tak, že sa „naviažu“ antigén alebo patologický mikroorganizmus, vytvoria komplexnú zlúčeninu „antigén-protilátka“, po ktorej nasleduje neutralizácia, enzymatická lýza, fagocytózové reakcie a odstránenie z tela práve prítomnosťou určitých komplexov typ patogénu alebo škodlivej látky prítomnej u pacienta.

Stojí za to pripomenúť, že po ukončení liečby môžu protilátky v našom tele zostať veľmi dlho, a to aj po odchode infekcie z nášho tela, t.j. zostáva takzvaná „sérologická jazva“. Vezmime si príklad: na nočnej oblohe sú tisíce hviezd. Mnohé z týchto hviezd už dávno zomreli, no ich svetlo k nám stále dopadá, po stáročia. V podstate vidíme len stopu hviezdy. Je svetlo, ale hviezda je už dávno preč.

Ale ak tam nie je svetlo, neznamená to, že tam hviezda nebola. Rovnako je to s protilátkami. Ich prítomnosť nezaručuje prítomnosť požadovaného infekčného agens v tele. Neprítomnosť protilátok neznamená, že neexistuje infekcia. Ak je výsledok testu ELISA pozitívny, znamená to, že musíte vyhľadať infekciu pomocou špecifickejších a nákladnejších metód - PCR, bakteriologické kultúry. Falošne pozitívny výsledok je možný, ak niekoľko mikróbov má podobnú antigénnu štruktúru, potom sa budú produkovať „podobné“ protilátky proti rôznym mikróbom.

Čo sú imunoglobulíny?

Bolo objavených a študovaných 5 hlavných tried imunoglobulínov – IgA, IgM, IgG, IgD, IgE. úloha zvyšku ešte nie je úplne objasnená a je predmetom vedeckého výskumu.

Hlavnou úlohou imunoglobulínu A (IgA) sú ochranné funkcie slizníc dýchacích ciest, gastrointestinálneho traktu a močového systému. Pri akútnom nástupe ochorenia je nemožné ich identifikovať. Tieto ochranné komplexy sa objavujú až od 2. týždňa nástupu ochorenia, niekedy aj neskôr. Väčšina imunoglobulínu A sa koncentruje v mukóznych tkanivách. Približne 80 %. Zvyšné protilátky cirkulujú v krvi.

Hlavnou funkciou je neutralizácia a ničenie mikroorganizmov. Po odznení akútnych prejavov ochorenia začne množstvo týchto imunoglobulínov klesať a úplne vymizne až 8 týždňov po nástupe ochorenia. Ak sa IgA zistí neskôr, znamená to chronický proces.

Hlavnými a prvými markermi akútnej fázy vývoja patológie sú imunoglobulíny triedy M (IgM). Odhalia sa do 5. dňa nástupu ochorenia. Ich prítomnosť v krvi sa dá zistiť približne do 6 týždňov. Potom začnú rýchlo miznúť.

Reziduálna imunitná odpoveď je charakterizovaná prítomnosťou imunoglobulínov G (IgG) v krvi. Výskyt týchto faktorov v krvi sa zistí približne mesiac po nástupe ochorenia. V budúcnosti môžu byť určené na mnoho mesiacov, rokov a dokonca aj na celý život, pričom vykonávajú ochrannú funkciu proti návratu (recidíve) choroby a v niektorých prípadoch znemožňujú sekundárny vývoj patológie.

Ak sa množstvo imunoglobulínu G opäť začne zvyšovať, potom je možné predpokladať opätovnú infekciu. Podobný záver možno vyvodiť vykonaním dvoch alebo troch vzoriek odobratých v intervale 2 týždňov.

Ako sa vykonáva krvný test ELISA?

Na enzýmový imunotest sa vo väčšine prípadov používa krv pacienta, niekedy sa odoberá sklovcové tkanivo, tekutina z miechového kanála a plodová voda.

Krv sa odoberá injekčnou ihlou do injekčnej striekačky z kubitálnej žily. Štúdia sa uskutočňuje na prázdny žalúdok. Malo by sa pamätať na to, že užívanie určitých liekov môže ovplyvniť výsledok testu. Pred darovaním krvi sa musíte zdržať fajčenia a pitia alkoholu. Užívanie drog môže skresliť výsledky.

V prípade negatívnych hodnôt imunoglobulínov IgM, IgG, IgA môžeme hovoriť o absencii ochorenia alebo jeho počiatočnej fáze je možný aj negatívny výsledok s úplným zotavením po značnom čase.

Ak sa nezistia IgA a IgM a IgG je pozitívny, potom s najväčšou pravdepodobnosťou hovoríme o vytvorenej imunite po infekčnom ochorení alebo po očkovaní.

Ak sa nezistia IgA a IgM a IgG je pozitívny, potom s najväčšou pravdepodobnosťou hovoríme o vytvorenej imunite po infekčnom ochorení alebo po očkovaní

V prípade vysokého titra IgM s negatívnymi hodnotami IgG a IgA možno konštatovať, že ide o akútne infekčné ochorenie.

Simultánne pozitívne hodnoty výsledkov imunoglobulínov - IgA, IgM, IgG sú charakteristické pre akútnu fázu relapsu existujúceho chronického ochorenia.

Čo poskytuje prezentovaná technológia: stanovenie prítomnosti helmintov v krvi; hľadanie iných patogénov v tele; môžete zistiť dôvody zhoršenia vášho zdravia; liečba je tiež založená na testoch získaných týmto spôsobom; môžete sledovať stav svojho imunitného systému.

Ďalšou dobrou vlastnosťou je možnosť sledovať markery rakoviny bez ohľadu na ich pôvod, samozrejme za predpokladu, že sú v tele prítomné. Tento test je vhodný aj na popis stavu ľudského reprodukčného systému. Prítomnosť určitých proteínov, hormónov a peptidov umožňuje posúdiť potenciál partnera z hľadiska počatia dieťaťa, ako aj predpokladanú kvalitu budúceho plodu.

Krvný test na Giardiu je medzi modernými lekármi pomerne populárna prax. Okrem toho je táto výskumná metóda vynikajúcim nástrojom pre biomedicínsku analytiku a kvantitatívnu štatistiku z hľadiska špecifických antigénov.

Ako sa používa enzýmová imunoanalýza?

Je pravda, že ide o zložitejšie prípady, takže kvalita takejto analýzy bude vo veľkej miere závisieť od laboratórnych pracovníkov vykonávajúcich testovanie. Vlastnosti technológie a jej rozdiel od starých laboratórnych štúdií:

teraz sa namiesto vzorky stolice používa krv na určenie prítomnosti helmintov;
Vzorka sa v laboratóriu študuje veľmi rýchlo a úplné informácie možno získať hneď nasledujúci deň;
náklady na laboratórny výskum sú lacné, pretože teológia je veľmi jednoduchá;
Krvný test na helminty poskytuje vysokú presnosť.

Testy na imunologickú analýzu krvi pomocou ELISA

Málokto vie, aké krvné testy existujú z hľadiska ľudského imunologického systému, keďže tieto testy nie sú také bežné. Takýto krvný test spravidla poskytuje informácie o víruse imunodeficiencie v ľudskom tele a je anonymný, pretože sa vykonáva na žiadosť pacienta.

Na odber vzoriek sa používa krv odobratá zo žily nalačno, z ktorej sa centrifugáciou získava sérum na testovanie. Štúdium krvného séra navyše dokáže odhaliť množstvo pohlavne prenosných chorôb (syfilis, herpes, chlamýdie), ako aj všetky typy hepatitídy, osýpok, ružienky, mumpsu a toxoplazmózy.

Pre analýzu ELISA je skúmaným biologickým materiálom v zásade krv, možno však skúmať cerebrospinálny mok, obsah sklovca, plodovú vodu atď.

Imunoglobulíny sú imunitné molekuly, ktoré sa dokážu viazať a neutralizovať väčšinu infekčných patogénov a toxínov v tele. V tomto prípade je najdôležitejšou charakteristikou imunoglobulínov ich špecifickosť, to znamená schopnosť viazať sa na špecifický antigén. Práve táto vlastnosť sa používa na vykonávanie krvného testu na imunoglobulín.

Existuje päť typov imunoglobulínov, ale najviac skúmané sú imunoglobulíny A, M a G. Imunoglobulíny M a G vykazujú svoju aktivitu v krvi. Imunoglobulíny A sú akousi bariérou na povrchu slizníc, keďže sú tam prítomné vo veľkom množstve.

Imunologický krvný test vám umožňuje určiť typ imunoglobulínov, vďaka čomu vám ELISA umožňuje nielen diagnostikovať ochorenie, ale aj určiť štádium ochorenia a sledovať dynamiku ochorenia:

v prvých 2 týždňoch ochorenia sa zisťujú iba imunoglobulíny A;
od 2. do 3. týždňa ochorenia sa v krvi zisťujú imunoglobulíny A a M;
CC3 do 4. týždňa krvný test na imunoglobulín zisťuje všetky tri typy;
po zotavení imunoglobulíny M zmiznú z krvi a množstvo A a G sa zníži 2-4 krát;
v prítomnosti chronického procesu sú v krvi nevyhnutne prítomné imunoglobulíny G, chýbajú imunoglobulíny M, imunoglobulíny A môžu alebo nemusia byť prítomné.

Rozsah použitia imunologického rozboru krvi pomocou ELISA

Diagnóza vírusových ochorení: hepatitída, herpes, vírus Epstein-Barrovej, cytomegalovírus atď.;
sexuálne prenosné infekcie: chlamýdie, kvapavka, trichomonas, mykoplazma, ureaplazma;
syfilis; endokrinológia (stanovenie hladín hormónov);
nádorové markery (diagnostika rakoviny); imunológia (diagnostika imunodeficiencie);
alergológia (diagnostika a liečba alergií).

Sérologický krvný test je laboratórna metóda vyšetrenia krvi, ktorá sa používa na diagnostiku infekčných ochorení a určenie štádia infekčného procesu. Sérologická reakcia je založená na interakcii protilátok a antigénov.

Stanovenie antigénov sa používa na určenie rodu a druhu mikroorganizmov. Táto metóda výskumu sa používa v urológii a venerológii. Krv na sérologické vyšetrenie krvi sa odoberá ráno nalačno zo žily.

Indikácie na použitie a choroby zistené testom ELISA

Hlavným biomateriálom pre ELISA je krvné sérum: v laboratóriu sa pacientovi odoberie vzorka krvi zo žily, z ktorej sa následne odstránia vzniknuté prvky, ktoré sťažujú analýzu. V niektorých iných prípadoch sa na analýzu používa cerebrospinálny mok, plodová voda, nátery slizníc atď.

Aby sa predišlo skresleniu výsledkov, odporúča sa darovať krv nalačno a dva týždne pred testom (ak je cieľom diagnostika chronických, latentných infekčných ochorení) je potrebné prestať užívať antibiotiká a antivirotiká Nie je možné uviesť úplný zoznam indikácií pre ELISA.

Nespornými výhodami ELISA sú vysoká citlivosť a špecifickosť metódy. Citlivosť je schopnosť rozpoznať požadovanú látku, aj keď je jej koncentrácia vo vzorke nízka. Špecifickosť znamená bezchybnú diagnózu: ak je výsledok pozitívny, znamená to, že sa našla presne tá protilátka alebo antigén, ktoré sa očakávali, a nie nejaké iné.

ELISA do značnej miery nahradila „zlatý štandard“ mikrobiológie – bakteriologickú diagnostickú metódu, pri ktorej na identifikáciu patogénu bolo potrebné izolovať ho z tela a následne kultúru niekoľko dní pestovať na živnom médiu v skúmavke.

Po celú dobu vykonávania analýzy boli lekári nútení liečiť pacienta „naslepo“, pričom pôvod mikroorganizmu hádali podľa symptómov ochorenia. Stanovenie IgM pomocou ELISA umožňuje presnú diagnózu už v prvých dňoch ochorenia.

Vysoký stupeň technologickej účinnosti enzýmových imunoanalýz minimalizuje vplyv ľudského faktora, čím sa znižuje pravdepodobnosť chyby. Väčšina testovacích systémov a činidiel ELISA používaných v moderných laboratóriách sa vyrába v priemyselných podmienkach, čo zaručuje presné výsledky.

Nevýhody metódy ELISA

Bohužiaľ, na vykonanie testu ELISA musíte vedieť, čo presne hľadať: technika analýzy znamená, že lekár má vopred predpoklad o povahe ochorenia. Preto nemá zmysel predpisovať takýto test v nádeji, že náhodne „uhádnete“ diagnózu.

V prípade diagnostiky infekčných ochorení enzýmová imunoanalýza nemôže nájsť patogén a určiť jeho špecifické vlastnosti: indikuje iba prítomnosť protilátok v krvi pacienta, ktoré nepriamo naznačujú prítomnosť cudzieho mikroorganizmu v ľudskom tele. ELISA je mimoriadne presná, ale nie lacná metóda, takže ju musíte používať s rozumom a výsledky by mal interpretovať kvalifikovaný lekár.

Možné výsledky ELISA

V závislosti od obsahu analýzy môže formulár uvádzať údaje vo forme tabuľky so zoznamom všetkých protilátok alebo antigénov s poznámkami o negatívnej alebo pozitívnej reakcii, alebo bude uvedená kvantitatívna hodnota výsledku (negatívna, slabo pozitívna, pozitívna alebo silne pozitívne).

Posledná možnosť určuje, koľko protilátok je obsiahnutých v analyzovanej vzorke. Ďalším kvantitatívnym ukazovateľom je index avidity protilátok, vyjadrený v percentách. Udáva, koľko času uplynulo od začiatku infekčného procesu (čím vyšší index, tým viac).

Dnes sa vyrábajú tisíce typov testovacích systémov ELISA, ktoré umožňujú detekovať špecifické protilátky a antigény pre širokú škálu patológií. Preto sa táto analýza používa takmer vo všetkých medicínskych odvetviach. Diagnóza vykonaná pomocou ELISA je zárukou predpísania adekvátnej terapie a účinnej liečby ochorenia.

Ak máte potrebné reagencie a dobrú organizáciu laboratória, výsledok testu dostanete do 1–2 dní po odbere krvi. V niektorých prípadoch, ak je potrebné získať núdzovú reakciu, možno toto obdobie skrátiť na 2–3 hodiny.

ELISA je moderný laboratórny test, ktorý hľadá v krvi špecifické protilátky (alebo antigény) na konkrétne ochorenia s cieľom identifikovať nielen etiológiu, ale aj štádium ochorenia.

hľadanie špecifických protilátok proti akejkoľvek infekčnej chorobe;
hľadanie antigénov akýchkoľvek infekčných chorôb;
štúdium hormonálneho stavu pacienta;
skríning na prítomnosť autoimunitných ochorení.

Ako každá metóda laboratórnej diagnostiky, aj ELISA má svoje výhody a nevýhody. Medzi výhody metódy patrí:

vysoká špecifickosť a citlivosť metódy (viac ako 90 %);
schopnosť určiť ochorenie a sledovať dynamiku procesu, to znamená porovnanie počtu protilátok v rôznych časových obdobiach;
dostupnosť a rýchlosť tohto výskumu;
neinvazívna metóda zberu materiálu, nie výskum;

Nevýhodou metódy je skutočnosť, že pri analýze je možné identifikovať nie samotného pôvodcu ochorenia, ale iba imunitnú odpoveď naň (protilátky).

Podstata metódy ELISA

Existuje niekoľko typov ELISA: priama, nepriama, metóda blokovania, kompetitívna. V praxi sa však najčastejšie používa heterogénna enzýmová imunoanalýza alebo ELISA.

Základom enzýmovej imunoanalýzy je imunitná reakcia antigénu a protilátky s tvorbou imunitného komplexu, ktorej výsledkom je zmena enzymatickej aktivity špecifických značiek na povrchu protilátok.

V zásade možno tento proces rozdeliť do niekoľkých etáp:

na povrchu jamiek tablety testovacieho systému je purifikovaný antigén špecifického patogénu. Keď sa pridá zvieracie krvné sérum, dôjde k špecifickej reakcii medzi týmto antigénom a požadovanou protilátkou;
Potom sa do jamky pridá špeciálny chromogén (konjugát označený peroxidázou). Dochádza k enzymatickej reakcii, ktorej výsledkom je vznik farebnej látky v jamke platničky. Intenzita jeho farby závisí od množstva imunoglobulínov (protilátok) obsiahnutých v sére zvieraťa;
Potom sa vyhodnotí výsledok. Pomocou viackanálového spektrofotometra sa porovná optická hustota testovaného materiálu s optickou hustotou kontrolných vzoriek a výsledky sa spracujú matematicky. Množstvo protilátok u pacienta priamo závisí od výšky optickej hustoty danej jamky.

Je potrebné mať na pamäti: pre každý testovací systém sa vyvíjajú jednotlivé ukazovatele na zaznamenávanie výsledkov, ukazovateľov normality a patológie („referenčné hodnoty“). Toto sa musí vziať do úvahy pri hodnotení výsledkov každej konkrétnej štúdie.

Je nesprávne interpretovať výsledky jedného laboratória na základe „referenčných hodnôt“ iného laboratória. Rovnako je nesprávne porovnávať výsledky rôznych laboratórií medzi sebou.

Pri hodnotení výsledkov pre špecifické infekcie je dôležitá trieda zistených protilátok a ich množstvo. Od toho závisí nielen otázka etiológie infekcie, ale aj očakávané štádium ochorenia (akútne, chronické), ako aj prítomnosť aktívnej infekcie (akútna alebo exacerbácia chronickej) v čase vyšetrenia.

Aký je približný časový rámec pre výskyt protilátok?

Najskoršie protilátky sú IgM. Môžu byť zistené 1-3 týždne po možnej infekcii, ktorá charakterizuje akútnu fázu infekčného procesu. Druhou situáciou pre výskyt protilátok IgM je exacerbácia chronického procesu. IgM cirkulujú v priemere asi 3 mesiace, potom ich množstvo postupne mizne. U niektorých pacientov je však možné zistiť stopové množstvá IgM v priebehu 1-2 rokov po infekcii.

Od 4. týždňa po infekcii sa začínajú objavovať protilátky IgG. Pri väčšine infekcií sa ich titer postupne zvyšuje s maximom v rôznych časoch (v priemere po 1,5-2 mesiacoch), potom zostáva titer na nízkej úrovni a indikuje imunitu. Pri niektorých ochoreniach nie sú hladiny IgG vysoké.

Možnosti detekcie protilátok

Izolovaná detekcia IgM protilátok naznačuje prítomnosť primárnej infekcie.
Súčasná detekcia IgM a IgG v krvi je typická pre primárnu infekciu v predchádzajúcich 2-3 mesiacoch, ako aj počas exacerbácie chronického ochorenia.
Detekcia izolovaného IgG môže naznačovať imunitu voči ochoreniu aj chronickú infekciu. V druhej situácii je dôležité ako množstvo protilátok (titer), tak aj zmena tohto titra v čase. Typicky sa štúdie vykonávajú v intervaloch 2-4-6 týždňov.

S pokrokom modernej medicíny je možné pri podozrení na určité patológie u pacienta vykonávať hlbšiu diagnostiku. Jednou z informatívnych metód laboratórneho výskumu je analýza ELISA, ktorá sa vykonáva odberom venóznej krvi. To znamená, že pre pacienta sa vo všeobecnosti nič nemení. Laboratórny analyzátor ELISA však vykonáva komplexnú techniku na skúmanie zozbieraného biomateriálu. V nižšie uvedenom materiáli pochopíme, čo sú testy ELISA a aké sú jemnosti použitia metódy ELISA ako diagnostickej metódy.

Čo je to enzýmová imunoanalýza?

Produkciu protilátok vyvolávajú samotné antigény, ktoré prenikli do ľudského tela. Pri vstupe do „bitky“ o zdravie tela sa zdá, že protilátky označujú antigény, čo laboratórny technik vidí pri vyšetrovaní krvi. To znamená, že v zozbieranom biomateriáli je možné sledovať nielen prítomnosť infekcie, ale aj jej stopy po úplnom zotavení tela.

Predpísaním enzýmového imunosorbentného testu na krv pacientovi teda ošetrujúci lekár môže sledovať trvanie infekcie, stupeň jej progresie alebo identifikovať prítomnosť imunity voči konkrétnej infekcii.

Diagnostický proces ELISA vyzerá takto:

Odobratá venózna krv sa v laboratóriu premení na krvné sérum;
Potom laborant použije špeciálnu tácku s bunkami, z ktorých každá už obsahuje všetky potrebné antigény. Do každej bunky stačí jednoducho nakvapkať krvné sérum a sledovať reakciu imunoglobulínov (protilátok) na antigény. Prítomnosť „požadovanej“ reakcie je indikovaná zmenou farby testovaného materiálu. Následne laborant študuje optickú hustotu skúmaného média.

Ascariáza a enterobiáza (škrkavky a červy);
trichinelóza;
Opisthorchiáza v akútnych a chronických formách;
Giardiáza;
amébióza;
toxoplazmóza;
Leishmanióza v akejkoľvek forme.

Dôležité: enzýmový imunotest môže byť kvalitatívny aj kvantitatívny. V prvom prípade laborant iba potvrdí alebo vyvráti prítomnosť požadovanej látky v krvi. V druhom prípade výsledok analýzy naznačuje jeho koncentráciu v tele pacienta.

Nevýhody metódy

So všetkými výhodami tejto diagnostickej metódy stojí za to pochopiť, že enzýmový imunosorbentný krvný test nie je spôsob, ako nájsť príčinu ochorenia pacienta, ale iba spôsob potvrdenia diagnózy navrhnutej ošetrujúcim lekárom. A keďže je výskum dosť drahý, treba ho používať rozumne. V tomto prípade by mal výsledky štúdie interpretovať iba kvalifikovaný odborník.

Dekódovanie výsledkov

Potom, čo sme vyriešili skratku ELISA a čo to je ─ zistil, stojí za to prejsť k interpretácii výsledkov. Tu je dôležité pochopiť, že ak bola analýza vykonaná kvalitatívne, výsledok bude iba pozitívny alebo negatívny. To znamená, že diagnóza buď potvrdí podozrenie lekára týkajúce sa určitej diagnózy, alebo ich vyvráti. V tomto prípade bude formulár obsahovať symboly „+“ alebo „-“.

Dôležité: negatívny výsledok testu nie vždy naznačuje neprítomnosť infekcie. Faktom je, že protilátky proti antigénom sa môžu vytvoriť do 14 dní po infekcii a je pravdepodobné, že ešte nevznikli.

Ak sa vykoná kvantitatívna analýza, určí sa typ protilátok, ich množstvo a stupeň aktivity. Pri tejto diagnóze sa stanovujú najmä protilátky (imunoglobulíny) IgG a IgM, ktoré sa tvoria v rôznych obdobiach progresie infekcie. Najbežnejšie výsledky v tomto prípade sú:

Zvýšené IgM a úplná absencia IgG. Tento obrázok naznačuje nedávnu infekciu a akútnu fázu patológie.
Zvýšená aktivita oboch typov imunoglobulínov (IgM a IgG). Hovorí o dlhotrvajúcom a chronickom priebehu infekčného procesu.
Aktivita IgG a úplná absencia IgM. Infekcia sa vyskytla najmenej pred šiestimi mesiacmi a teraz je vírus v zdĺhavom chronickom štádiu.
Nedostatok protilátok IgG a IgA. Výsledok nie je určený.
Absencia protilátok IgM, IgA a IgG. Označuje nedostatok imunity voči určitej infekcii.
Aktivita protilátok IgG, IgM a IgA naznačuje exacerbáciu chronického procesu.

Laborantka okrem identifikácie typov protilátok uvádza aj ich množstvo v špeciálnom stĺpci formulára vo vzťahu k objemu krvi. Pamätajte, že keď pochopíte, čo je metóda ELISA, neinterpretujte výsledky sami. Získané výsledky môže s presnosťou interpretovať iba ošetrujúci lekár v závislosti od očakávanej diagnózy na základe klinického obrazu pacienta.

ELISA (enzyme-linked immunosorbent assay, ELISA) vstúpila do života praktickej medicíny niekde v 60. rokoch minulého storočia. Jeho prvotnou úlohou bol histologický výskum na vedecké účely, ktorý predstavoval hľadanie a identifikáciu antigénnej štruktúry buniek živého organizmu.

Metóda ELISA je založená na interakcii špecifických (AT) a príbuzných antigénov (AG) s tvorbou komplexu „antigén-protilátka“, ktorý sa deteguje pomocou enzýmu. Táto skutočnosť podnietila vedcov k myšlienke, že metódu možno použiť na diagnostické účely na identifikáciu špecifických imunoglobulínov rôznych tried, ktoré sa podieľajú na imunitnej odpovedi na konkrétnu infekciu. A bol to prelom v klinickej laboratórnej diagnostike!

Metóda sa začala aktívne používať až začiatkom 80-tych rokov a potom najmä v špecializovaných inštitúciách. Prvé imunoenzýmové analyzátory boli vybavené krvnými transfúznymi centrami a stanicami, infekčnými chorobami a venerologickými nemocnicami, keďže sa na našom obzore objavil hrozivý AIDS, ktorý sa zrodil na africkom kontinente a okamžite sa pripojil k „starým“ infekciám, vyžadoval okamžité diagnostické opatrenia a pátranie. pre terapeutické lieky, ktoré ho ovplyvňujú.

Rozsah použitia metódy ELISA

Možnosti enzýmovej imunoanalýzy sú skutočne rozsiahle. Teraz je ťažké si predstaviť, ako sa možno zaobísť bez takéhoto výskumu, ktorý sa používa doslova vo všetkých odvetviach medicíny. Zdá sa, čo dokáže ELISA v onkológii? Ukazuje sa, že môže. A veľa. Schopnosť analýzy nájsť markery charakteristické pre určité typy malígnych novotvarov je základom včasnej detekcie nádoru, keď pre svoju malú veľkosť ešte nie je detekovaný iným spôsobom.

Moderná klinická laboratórna diagnostika (CDL) má okrem nádorových markerov aj významný arzenál panelov ELISA a využíva ich na diagnostiku rôznych patologických stavov (infekčné procesy, hormonálne poruchy) a sledovanie farmaceutických liekov s cieľom identifikovať ich vplyv na organizmus pacienta. a mimochodom nielen ľudské. V súčasnosti je enzýmová imunoanalýza široko používaná vo veterinárnych službách, pretože „naši bratia“ sú tiež náchylní na mnohé choroby, ktorými niekedy veľmi trpia.

teda ELISA vďaka svojej citlivosti a špecifickosti dokáže zo vzorky krvi odobratej zo žily určiť:

Hormonálny stav (hormóny štítnej žľazy a nadobličiek, pohlavné hormóny);
Prítomnosť vírusových a bakteriálnych infekcií (HIV, B a C, chlamýdie, syfilis, a, a, rovnako ako mnoho ďalších chorôb spôsobených patogénnymi mikroorganizmami);
Stopy vitálnej aktivity mikroorganizmov, ktoré iniciovali infekčný proces, ktorý úspešne skončil a prešiel do štádia tvorby imunitnej odpovede na tento patogén. Takéto stopy, teda protilátky, zostávajú v mnohých prípadoch cirkulovať v krvi po celý život, čím chránia človeka pred opätovnou infekciou.

Čo je podstatou ELISA?

Enzýmová imunoanalýza umožňuje určiť nielen prítomnosť samotného patogénu (kvalitatívnou analýzou), ale aj jeho kvantitatívny obsah v krvnom sére pacienta.

Vírusová alebo bakteriálna dávka významne ovplyvňuje priebeh infekčného procesu a jeho výsledok, preto kvantitatívna analýza zohráva dôležitú úlohu v diagnostike a liečbe ochorení v rôznych formách a štádiách.

Keď však poznáme enzýmové imunotesty ako metódu ELISA, ani sa nezamýšľame nad tým, ako dokáže pokryť takú širokú škálu mikroorganizmov obývajúcich našu planétu, z ktorých mnohé predstavujú priamu hrozbu pre zdravie a životy ľudí a zvierat. Faktom však je, že ELISA má veľa možností (nekonkurenčných a konkurenčných - priamych a nepriamych), z ktorých každá rieši svoj vlastný problém a umožňuje tak cielené vyhľadávanie.

Na identifikáciu imunoglobulínov jednej alebo druhej triedy sa používa tradičný 96-jamkový polystyrénový panel (doštička), v jamkách ktorého sú koncentrované sorbované rekombinantné proteíny v tuhej fáze. Protilátky alebo antigény, ktoré sa dostanú do jamky s krvným sérom, nájdu „známy“ predmet a vytvoria s ním komplex (AG - AT), ktorý sa fixovaný enzýmovým konjugátom prejaví zmenou farby jamky, keď čítanie výsledkov.

Enzýmová imunoanalýza sa vykonáva pomocou testovacích systémov určitej špecifickosti, vyrobených v špeciálnych laboratóriách a vybavených všetkými potrebnými reagujúcimi zložkami. Výskum možno vykonávať pomocou práčok („práčok“) a čítacích spektrofotometrov, ktoré väčšinou zahŕňajú ručnú prácu. Na plnoautomatických strojoch, ktoré oslobodia laboranta od monotónnej instilácie, umývania a iných rutinných úkonov, je samozrejme práca rýchlejšia a pohodlnejšia, no nie všetky laboratóriá si môžu dovoliť taký luxus a pokračovať v práci po starom - ďalej poloautomatické stroje.

Interpretácia výsledkov ELISA je v kompetencii lekára laboratórnej diagnostiky a treba brať do úvahy aj inherentnú vlastnosť takmer všetkých imunochemických reakcií dávať falošne pozitívne alebo falošne negatívne odpovede.

Video: moderný enzýmový imunotest

Výsledky ELISA na príklade syfilisu

Enzýmová imunoanalýza je vhodná na detekciu všetkých foriem a okrem toho sa používa v skríningových štúdiách. Na vykonanie analýzy sa používa pacientova venózna krv odobratá na prázdny žalúdok. V práci sa používajú tablety s určitou špecifickosťou (AB triedy A, M, G) alebo celkové protilátky.

Vzhľadom na to, že protilátky v syfilise sú produkované v špecifickej sekvencii, ELISA môže ľahko odpovedať na otázku, kedy došlo k infekcii a v akom štádiu je proces, a interpretácia získaných výsledkov môže byť prezentovaná v nasledujúcej forme:

IgM indikuje trvanie infekčného procesu (môže sa objaviť počas exacerbácie chronických zápalových ochorení);
IgA uvádza, že infekcia sa vyskytla pred viac ako mesiacom;
IgG naznačuje, že infekcia je v plnom prúde alebo že liečba bola nedávno vykonaná, čo sa dá ľahko určiť na základe anamnézy.

Pri testovaní na syfilis zostanú negatívne jamky (a negatívna kontrola) bezfarebné, zatiaľ čo pozitívne jamky (a pozitívna kontrola) budú vykazovať jasne žltú farbu v dôsledku zmeny farby chromogénu pridaného počas testu. Intenzita farby sa však nie vždy zhoduje s kontrolou, to znamená, že môže byť mierne bledšia alebo mierne žltkastá. Ide o pochybné výsledky, ktoré spravidla podliehajú opätovnému preskúmaniu s povinným zohľadnením kvantitatívnych ukazovateľov získaných na spektrofotometri, ale vo všeobecnosti je farba priamo úmerná počtu imunitných komplexov (súvisiacich Ag a AT) .

Najvzrušujúcejším z enzýmových imunotestov je HIV ELISA

Analýza je pre široké spektrum populácie možno zaujímavejšia ako iné, pretože stále nemožno s istotou povedať, že mnohé sociálne problémy zmizli (prostitúcia, drogová závislosť atď.). Žiaľ, HIV postihuje nielen tieto vrstvy ľudskej spoločnosti, môžete sa nakaziť za rôznych okolností, ktoré nesúvisia so sexuálnou nemorálnosťou alebo užívaním drog. Ak je však potrebný test na HIV, nemali by ste sa báť, že o vašej návšteve takéhoto laboratória budú vedieť všetci naokolo. Teraz sú ľudia infikovaní HIV chránení zákonom a tí, ktorí majú pochybnosti, sa môžu obrátiť na anonymné úrady, kde môžu problém vyriešiť bez strachu z publicity a odsúdenia.

Enzýmová imunoanalytická metóda používaná na diagnostiku HIV infekcie je jednou z najdôležitejších štandardných štúdií, ktorá si však vyžaduje špeciálne podmienky, keďže téma je veľmi chúlostivá.

Má zmysel vykonávať HIV ELISA po sexuálnom kontakte, transfúzii krvi, iných lekárskych zákrokoch, ktoré naznačujú infekciu, a na konci inkubačnej doby („séronegatívne okno“), ale treba mať na pamäti, že toto obdobie je nie konštantná. Môže skončiť za 14-30 dní, alebo môže trvať až šesť mesiacov, preto sa za priemernú hodnotu považuje interval od 45 do 90 dní. Na HIV sa krv daruje rovnako ako pri iných infekciách – zo žily nalačno. Výsledky budú pripravené v závislosti od akumulácie materiálu v laboratóriu a jeho pracovnej vyťaženosti (od 2 do 10 dní), hoci najčastejšie laboratóriá odpovedajú v ten istý alebo nasledujúci deň.

Čo môžete očakávať od svojich výsledkov HIV?

ELISA na infekciu HIV zisťuje protilátky proti dvom typom vírusu: HIV-1 (bežnejší v Rusku a iných krajinách Európy a Ázie) a HIV-2 (častejší v západnej Afrike).

Úlohou HIV ELISA je vyhľadávanie protilátok triedy G, ktoré sú detegované na všetkých testovacích systémoch, ale v neskoršom období, a protilátok triedy A a M, detegovaných na rekombinantných testovacích súpravách novej generácie, ktoré umožňujú nájsť protilátky. v najskorších štádiách (inkubačná doba – „séronegatívne okno“). Od testu ELISA možno očakávať nasledujúce odpovede:

Primárny pozitívny výsledok: krv musí byť znovu vyšetrená testovacím systémom rovnakého typu, ale podľa možnosti inej série a inou osobou (laborantom);
Opakované (+) zahŕňa nový odber krvi od pacienta s jej vyšetrením podobným primárnej analýze;
Ďalší pozitívny výsledok je predmetom referenčnej analýzy, ktorá využíva vysoko špecifické testovacie súpravy (2-3 ks);
Pozitívny výsledok v oboch (alebo troch) systémoch sa odošle na imunoblotovanie (rovnaká ELISA, ale vykonaná individuálne s použitím testovacích súprav obzvlášť vysokej špecifickosti).

Záver o infekcii HIV sa robí len na základe imunoblotingu. Konverzácia s infikovanou osobou prebieha úplne dôverne. Vyzradenie lekárskeho tajomstva v Rusku, ako aj v iných krajinách, je trestne stíhané.

Mimoriadnu obľubu si získali aj testy na chlamýdie a cytomegalovírusy pomocou metódy enzýmovej imunoanalýzy, pretože umožňujú určiť čas infekcie, štádium ochorenia a účinnosť liečebných opatrení.

Počas implementácie je možné pozorovať aj výskyt protilátok rôznych tried. v rôznych fázach patologického stavu spôsobeného infekčným agensom:

IgM možno zistiť už sedem dní po infekcii;
IgA naznačuje, že infekcia žije v tele viac ako mesiac;
IgG potvrdzuje diagnózu chlamýdií a pomáha monitorovať liečbu a určiť jej účinnosť. Je potrebné poznamenať, že protilátky triedy G zostávajú a cirkulujú v tele bez ohľadu na trvanie ochorenia, preto, aby ste správne interpretovali analýzu, musíte vziať do úvahy referenčné hodnoty (normy), ktoré mimochodom , sú odlišné pre každý CDL: berúc do úvahy značku testovacieho systému a špecifickosť činidiel zahrnutých v súprave. Normálne hodnoty sa zadávajú do formulára vedľa výsledku ELISA.

Čo sa týka , tu je to trochu inak: Protilátky triedy M sa objavia asi po mesiaci až mesiaci a pol, to znamená, že pozitívny výsledok (IgM+) sa dostane do fázy primárnej infekcie alebo počas reaktivácie latentnej infekcie a zostane tak od 4 mesiacov do šiestich mesiacov.

Prítomnosť protilátok triedy G je charakteristická pre nástup primárnej akútnej infekcie alebo reinfekcie. Analýza uvádza, že vírus je prítomný, ale neposkytuje informácie o tom, v akom štádiu je infekčný proces. Stanovenie normálneho titra IgG tiež spôsobuje ťažkosti, pretože úplne závisí od imunitného stavu konkrétnej osoby, ktorý sa však stanovuje pomocou identifikácie imunoglobulínov triedy G, vzhľadom na takéto správanie protilátok pri diagnostike CMV na posúdenie schopnosti protilátok triedy G interagovať s CMV, aby ho neskôr „neutralizovali“ (AT avidita). V počiatočnom štádiu ochorenia sa IgG veľmi zle viaže na vírusové antigény (nízka avidita) a až potom začne vykazovať aktivitu, preto môžeme hovoriť o zvýšení avidity protilátok.

O výhodách enzýmovej imunoanalýzy môžeme veľa hovoriť, pretože táto metóda dokázala vyriešiť mnohé diagnostické problémy iba pomocou venóznej krvi. Odpadá tak dlhé čakanie, starosti a problémy so zbieraním materiálu na výskum. Okrem toho sa testovacie systémy pre ELISA neustále zdokonaľujú a nie je ďaleko deň, keď test poskytne 100% spoľahlivý výsledok.