Skríningová metóda na diagnostiku HIV. Metódy diagnostiky infekcie HIV. Kvantitatívny test na HIV

Skríning – identifikácia frekvencie nerozpoznaných chorôb pomocou rýchlych testov. V masovej praxi testovania a skríningu sa najčastejšie používajú metódy enzýmovej imunoanalýzy, ktoré môžu poskytnúť falošne pozitívne aj falošne negatívne výsledky. Tieto testy boli vyvinuté za účelom vyšetrenia darcovskej krvi a preto majú vysokú citlivosť, takže aj prípadná chyba pri ich testovaní dáva pozitívny výsledok. V tomto prípade musí byť krv zničená a samotný darca sa podrobí kontrolnému testovaniu. Falošne negatívne výsledky závisia od skutočnosti, že inkubačná doba infekcie HIV je 1-3 mesiace. V tomto období je človek nosičom vírusu, čo test na protilátky HIV nezistí.

Každý by mal dostať možnosť nechať sa otestovať na HIV protilátky. Testovanie môže byť dobrovoľné alebo povinné. Pri dobrovoľnom anonymnom testovaní je pacient evidovaný pod číslom a v doklade sa neuvádza adresa ani priezvisko pacienta. Pri dôvernom testovaní by sa informácie o identite pacienta mali premietnuť do jeho zdravotných záznamov, ktoré by malo sprevádzať poradenstvo pre pacienta pred testovaním aj po ňom. Adekvátne informovanie pacienta sa stáva najlepšou psychoterapiou Pacienti sú nakoniec informovaní o výsledkoch testov až po potvrdení pozitívnych výsledkov testov. Deje sa tak s cieľom vyhnúť sa tragickým prípadom, ako bol ten, ktorý sa stal v Rige v roku 1998: pár, ktorý sa dozvedel o pozitívnych výsledkoch testu jedného z nich, spáchal samovraždu; Posmrtné štúdie neodhalili žiadny dôkaz infekcie HIV. Otázka povinného HIV testovania a skríningu je veľmi kontroverzná. V USA bolo od roku 1985 zavedené povinné testovanie v armáde. V niektorých štátoch je testovanie na AIDS povinné pred sobášom a od roku 1997 štát New York zaviedol povinné testovanie na HIV u všetkých novorodencov.

Mnohí zahraniční experti sa domnievajú, že prax povinného testovania na HIV nielen porušuje ľudské práva, ale ukazuje sa aj neúčinná ako bariéra šírenia epidémie, a preto by sa jej implementácia mala obmedziť.

V našej krajine bola povinná registrácia ochorení AIDS zavedená v roku 1985, od okamihu, keď bol identifikovaný prvý prípad ochorenia. V roku 1987 z iniciatívy epidemiológov All-Union Radio odvysielalo správu o otvorení anonymného úradu na vyšetrenie AIDS v Moskve. O pár dní začala táto kancelária fungovať, mesačne prijímala až tisíc ľudí. V dôsledku toho od roku 1987 do roku 1992. Vykonalo sa viac ako 85 miliónov testov na HIV.

V Rusku je široko používaná „metóda epidemiologického vyšetrovania“. Epidemiologickým vyšetrovaním je identifikácia zdroja nákazy v každom prípade nákazy, ak je to možné, obnovenie celého „reťazca“ prenosu nákazy a zároveň prijaté opatrenia na zabránenie šírenia nákazy. Vo federálnom zákone „O prevencii šírenia chorôb spôsobených vírusom ľudskej imunodeficiencie v Ruskej federácii“, prijatom v roku 1995, bola zrušená požiadavka na povinné testovanie „partnerov“ na AIDS. Zrušil sa aj povinný preventívny dohľad nad ľuďmi infikovanými vírusom HIV v zdravotníckych zariadeniach. Povinnému testovaniu na AIDS podľa zákona podliehajú len darcovia krvi, biologických tekutín, orgánov a tkanív, ako aj zástupcovia niektorých profesií.

Bežnou diagnostickou metódou je dnes skríning. HIV sa dá pomocou tejto metódy ľahko zistiť aj v počiatočných štádiách. Pomocou takejto štúdie je možné určiť prítomnosť protilátok proti tejto nebezpečnej chorobe v krvi pacienta. Aká skríningová diagnostika HIV sa používa v modernej medicíne a čo o nej potrebujete vedieť?

Skríningová metóda na diagnostikovanie infekcie HIV: popis

Dnes sa na skríningové štúdie používa celý rad rôznych činidiel, pomocou ktorých je možné diagnostikovať vírus imunodeficiencie. Pred pár rokmi sa na to používali enzýmy tretej generácie. Ich účinnosť a citlivosť neboli dostatočne vysoké. V súčasnosti používané činidlá štvrtej generácie vykazujú lepšie výsledky. S ich pomocou je možné zistiť protilátky a protilátky proti HIV 1, 2 (skríning sa vykonáva v laboratórnych podmienkach). Hlavnou výhodou tohto typu štúdie je schopnosť detegovať nielen protilátky, ale aj antigény. To umožňuje lekárom určiť, akým typom vírusu imunodeficiencie je človek infikovaný. Pomocou takéhoto skríningu HIV infekcie je možné identifikovať aj nosičov vírusu, u ktorých sa neprejavuje, ale môže sa preniesť na iných ľudí.

Najbežnejším testom používaným na identifikáciu tohto ochorenia vo verejných a súkromných inštitúciách je test ELISA. Odporúča sa vykonať tri až štyri týždne po infekcii. Hovoríme o nechránených kontaktoch s novým partnerom, transfúziách krvi a pod.

Čo by ste ešte mali vedieť o skríningových testoch na HIV?

Je dôležité vedieť, že takáto štúdia sa vykonáva pridaním krvi pacienta do indikátora so špeciálnymi činidlami. Odber krvi sa vykonáva na prázdny žalúdok. Od posledného jedla po testovanie musí prejsť aspoň osem hodín.

Skríningový test hrá dôležitú úlohu pri diagnostike infekcie HIV. Môže sa použiť na určenie prítomnosti alebo neprítomnosti vírusu imunodeficiencie v počiatočných štádiách.

Výsledky takejto štúdie môžu byť pozitívne, negatívne alebo pochybné. Posledne menované sú mimoriadne zriedkavé. Spochybniteľný výsledok naznačuje, že postup bol vykonaný nesprávne alebo že reagencie mali nízku kvalitu. Ak je výsledok pozitívny, vykoná sa ďalší výskum. Hovoríme o imunoblottingu. Negatívny výsledok nevyžaduje potvrdenie.

Prvá je určená na identifikáciu všetkých osôb infikovaných HIV, druhá na identifikáciu osôb, ktoré nie sú infikované vírusom HIV, ale pri skríningových testoch reagovali pozitívne. Skríningové testy sú preto vysoko citlivé, t.j. nedávajú takmer žiadne falošne negatívne výsledky, a potvrdzujúce testy sú vysoko špecifické, t.j. nedávajú takmer žiadne falošne pozitívne výsledky. V kombinácii tieto testy poskytujú presné a spoľahlivé výsledky, ktoré dokážu odhaliť kontaminované krvné produkty a stanoviť diagnózu infekcie HIV. Existujú však biologické faktory, ktoré znižujú presnosť týchto testov; Možné sú aj laboratórne chyby. Preto každé laboratórium vykonávajúce testy na protilátky proti HIV musí mať pre tieto testy vynikajúci program kontroly kvality. Netreba zabúdať, že spoľahlivosť laboratórnych vyšetrení nie je nikdy stopercentná a ich výsledky treba vždy považovať za doplnok ku klinickej diagnóze.

Obdobie okna a detekcia infekcie HIV v počiatočných štádiách infekcie:

Protilátky proti HIV sa začínajú produkovať krátko po infekcii, ale čas ich objavenia závisí od mnohých faktorov, najmä od stavu imunitného systému pacienta a od vlastností vírusu. Je dôležité poznamenať, že protilátky môžu byť prítomné v krvi skoro po infekcii, ale ich koncentrácia je pod hranicou citlivosti niektorých metód (obdobie okna). Prvé testovacie systémy detekovali protilátky takmer u všetkých ľudí infikovaných HIV 6–12 týždňov po infekcii. Najnovšie testovacie systémy, vrátane pasce ELISA tretej generácie, zisťujú protilátky 3-4 týždne po infekcii. Čas medzi infekciou a diagnózou HIV infekcie sa môže skrátiť o niekoľko dní použitím metód na detekciu HIV antigénov a o niekoľko ďalších dní použitím metód na detekciu HIV RNA. Ak použijete všetky opísané metódy, diagnóza HIV infekcie u väčšiny pacientov môže byť stanovená do 2–3 týždňov po infekcii. Komerčne dostupné testovacie systémy na skríning protilátok proti HIV majú veľmi vysokú a približne jednotnú citlivosť, dostatočnú na detekciu väčšiny ľudí infikovaných HIV (takzvaná epidemiologická citlivosť). Rôzne testovacie systémy sa však líšia v analytickej citlivosti, t.j. v ich schopnosti detegovať nízke hladiny protilátok, ktoré sa vyskytujú pred dokončením sérokonverzie.

Existujú testovacie systémy určené na detekciu IgM protilátok proti HIV, ale nenašli rozšírené použitie pri včasnej diagnostike infekcie HIV, pretože protilátky IgM nie sú vždy produkované skoro po infekcii. Niektoré testovacie systémy tretej generácie súčasne detegujú protilátky IgM a IgG proti HIV a majú vyššiu analytickú citlivosť.

Pozri tiež: Zverejnenie stavu HIV bez ľútosti, Odchýlenie nosovej priehradky, Cievna aneuryzma: skrytá hrozba pre zdravie, Prenatálny skríning; chromozomálne abnormality, Latentný strabizmus (Strabismus latenta, Heterophoria), Skryté riziko: ženy a srdcové choroby, Latentný syfilis (Syphilis latens), CDC Realtime RT-PCR protokol na detekciu a výskum vírusu chrípky A (H1N1), Škrípanie zubov (bruxizmus) , Pozor: skryté alergény

... diagnostika akéhokoľvek infekčného ochorenia je založená na porovnaní epidemiologických, klinických a laboratórnych údajov a zveličovanie významu niektorej zo skupín týchto údajov môže viesť k diagnostickým omylom. Diagnóza infekcie HIV zahŕňa dve fázy: jaštádium - stanovenie skutočnej skutočnosti infekcie HIV; IIštádium - určenie štádia ochorenia. STANOVENIE SKUTOČNOSTI HIV INFEKCIE Zistenie skutočnej skutočnosti o infekcii HIV (to znamená identifikácia ľudí infikovaných HIV) tiež zahŕňa dve fázy: Etapa I— spojený imunosorbentný test(ELISA): metóda ELISA je skríning (selekcia) - výber pravdepodobne infikovaných jedincov, to znamená, že jej cieľom je identifikovať podozrivých jedincov a eliminovať zdravých jedincov; Protilátky proti HIV sa zisťujú pomocou iných protilátok proti požadovaným protilátkam (protilátky proti iným protilátkam). Tieto „pomocné“ protilátky sú označené enzýmom. Všetky skríningové testy musia byť vysoko citlivé, aby nezmeškali pacienta. Z tohto dôvodu ich špecifickosť nie je príliš vysoká, to znamená, že ELISA môže poskytnúť pozitívnu odpoveď („pravdepodobne chorá“) u neinfikovaných ľudí (napríklad u pacientov s autoimunitnými ochoreniami: reumatizmus, systémový lupus erythematosus atď.). Frekvencia falošne pozitívnych výsledkov pri použití rôznych testovacích systémov sa pohybuje od 0,02 do 0,5 %. Ak test ELISA osoby poskytne pozitívny výsledok, potom je potrebné ďalšie vyšetrenie na potvrdenie skutočnosti, že ide o infekciu HIV. Pri vykonávaní ELISA sú falošne negatívne výsledky možné v 3-5% prípadov - ak sa infekcia vyskytla relatívne nedávno a hladina protilátok je stále veľmi nízka, alebo v terminálnom štádiu ochorenia, charakterizovaného ťažkým poškodením imunitného systému s hlbokým narušením procesu tvorby protilátok. Preto, ak existujú dôkazy o kontakte s ľuďmi infikovanými HIV, opakované testy sa zvyčajne vykonávajú po 2 - 3 mesiacoch. Etapa II — imunoblotovanie(modifikovaný Western Blot, Western blot): je komplexnejšia metóda a slúži na potvrdenie faktu infekcie. Touto metódou sa nezisťujú komplexné protilátky proti HIV, ale protilátky proti jeho jednotlivým štruktúrnym proteínom (p24, gp120, gp41 atď.). Výsledky imunoblotingu sa považujú za pozitívne, ak sa detegujú protilátky aspoň proti trom proteínom, z ktorých jeden je kódovaný génmi env, druhý génmi gag a tretí génmi pol. Ak sa zistia protilátky proti jednému alebo dvom proteínom, výsledok sa považuje za sporný a vyžaduje potvrdenie. Vo väčšine laboratórií sa infekcia HIV diagnostikuje, ak sa súčasne zistia protilátky proti proteínom p24, p31, gp4l a gpl20/gp160. Podstata metódy: vírus je zničený na zložky (antigény), ktoré pozostávajú z ionizovaných zvyškov aminokyselín, a preto majú všetky zložky navzájom odlišný pôvod; potom sa pomocou elektroforézy (elektrický prúd) antigény rozložia na povrch prúžku - ak testovacie sérum obsahuje protilátky proti HIV, potom budú interagovať so všetkými skupinami antigénov, čo sa dá zistiť. Malo by sa to pamätaťže protilátky proti HIV sa objavia u 90-95% infikovaných ľudí do 3 mesiacov po infekcii, u 5-9% infikovaných ľudí sa protilátky proti HIV objavia po 6 mesiacoch a u 0,5-1% infikovaných sa protilátky proti HIV objavia neskôr. Počas štádia AIDS sa môže počet protilátok znižovať, až kým úplne nezmiznú. V imunológii existuje taká koncepcia ako "sérologické okienko"- obdobie od infekcie do objavenia sa takého počtu protilátok, ktoré je možné zistiť. V prípade HIV toto obdobie zvyčajne trvá od 2 do 12 týždňov, v ojedinelých prípadoch aj dlhšie. Počas „sérologického okna“ je podľa testov človek zdravý, no v skutočnosti je infikovaný HIV. Zistilo sa, že DNA HIV môže zostať v ľudskom genóme najmenej tri roky bez známok aktivity a protilátky proti HIV (markery infekcie HIV) sa neobjavia. Počas tohto obdobia („sérologické okno“) je možné identifikovať osobu infikovanú HIV a to aj 1-2 týždne po infekcii pomocou polymerická reťazová reakcia(PCR). Ide o mimoriadne citlivú metódu – teoreticky možno detegovať 1 DNA na 10 ml média. Podstata metódy je nasledovná: pomocou polymerázovej reťazovej reakcie sa získa veľa kópií nukleovej kyseliny (vírus je nukleová kyselina - DNA alebo RNA - v proteínovom obale), ktoré sa potom identifikujú pomocou značených enzýmov alebo izotopov, ako aj ich charakteristickou štruktúrou. PCR je drahá diagnostická metóda, preto sa nepoužíva na skríning ani rutinne. STANOVENIE ŠTÁDIA OCHORENIA Rozvoj AIDS je primárne založený na deštrukcii pomocných T-lymfocytov, označených monoklonálnymi protilátkami – zhlukmi diferenciácie – ako CD4. V tomto ohľade je diagnostika a monitorovanie progresie ochorenia nemožné bez monitorovania subpopulácie pomocných T buniek, čo sa najvýhodnejšie uskutočňuje pomocou laserového triediča buniek. Pre miernu infekciu HIV Počet T-lymfocytov je extrémne variabilný. Vo všeobecnosti sa zníženie počtu buniek CD4 (absolútne a relatívne) zistí u jedincov, u ktorých sa infekcia HIV vyskytla najmenej pred rokom. Na druhej strane, v skorých štádiách infekcie je často prudko zvýšený počet supresorových T buniek (CD8) ako v periférnej krvi, tak aj v zväčšených lymfatických uzlinách. S ťažkým AIDS absolútna väčšina pacientov má znížený celkový počet T-lymfocytov (menej ako 1000 v 1 μl krvi vrátane CD4 lymfocytov - menej ako 22 v 1 μl, pričom absolútna hodnota obsahu CD8 zostáva v medziach normy). V súlade s tým sa pomer CD4/CD8 prudko znižuje. Reakcie T buniek in vitro na štandardné antigény a mitogény sú znížené v prísnom súlade s relatívne zníženým počtom CD4. Pre neskoré štádiá AIDS Charakterizovaná všeobecnou lymfopéniou, neutropéniou, trombocytopéniou (respektíve znížením počtu lymfocytov, neutrofilov a krvných doštičiek), anémiou. Tieto zmeny môžu byť dôsledkom centrálnej inhibície hematopoézy v dôsledku poškodenia krvotvorných orgánov vírusom, ako aj autoimunitnej deštrukcie bunkových subpopulácií na periférii. Okrem toho je AIDS charakterizovaný miernym zvýšením množstva gama globulínov s dominantným zvýšením obsahu IgG. Pacienti so závažnými príznakmi AIDS majú často zvýšené hladiny IgA. V niektorých štádiách ochorenia sa výrazne zvyšuje hladina markerov AIDS ako 1-mikroglobulín, acid-stabilný interferón, 1-tymozín. To isté sa deje so sekréciou voľného neopterínu, metabolitu makrofágov. Zatiaľ nie je možné posúdiť relatívny význam každého z uvedených testov, ktorých počet neustále narastá. Preto by sa mali zvážiť v interakcii s markermi infekcie HIV, imunovirologickými aj cytologickými. Klinický krvný test je charakterizovaný leukopéniou, lymfopéniou (respektíve znížením počtu leukocytov a lymfocytov). Fáza 1 - " inkubačné štádium“—protilátky proti HIV ešte neboli zistené; diagnóza infekcie HIV v tomto štádiu sa robí na základe epidemiologických údajov a musí byť laboratórne potvrdená detekciou vírusu ľudskej imunodeficiencie, jeho antigénov a nukleových kyselín HIV v krvnom sére pacienta; Fáza 2 - " štádium primárnych prejavov"- v tomto období už dochádza k tvorbe protilátok:; Fáza 2A - " asymptomatické» — HIV infekcia sa prejavuje len tvorbou protilátok; Fáza 2B – “ akútna infekcia HIV bez sekundárnych ochorení"- lymfocyty so širokou plazmou - v krvi pacientov je možné detegovať "mononukleárne bunky" a často sa pozoruje prechodný pokles hladiny CD4 lymfocytov (akútna klinická infekcia sa pozoruje u 50-90% infikovaných jedincov v prvom 3 mesiace po infekcii spravidla predchádza sérokonverzii nástup obdobia akútnej infekcie, t.j. objavenie sa protilátok proti HIV); Fáza 2B –“ akútna infekcia HIV so sekundárnymi ochoreniami“- na pozadí poklesu hladiny CD4 lymfocytov az toho vyplývajúcej imunodeficiencie sa objavujú sekundárne ochorenia rôznej etiológie (angína, bakteriálna a Pneumocystisová pneumónia, kandidóza, herpetická infekcia atď.); Fáza 3 - " latentný„- v reakcii na progresiu imunodeficiencie dochádza k modifikácii imunitnej odpovede vo forme nadmernej reprodukcie CD4 buniek, po ktorej nasleduje postupný pokles hladiny CD4 lymfocytov, v priemere rýchlosťou 0,05-0,07 × 109 /l za rok; v krvi sa zisťujú protilátky proti HIV; Fáza 4 - " štádiu sekundárnych ochorení“- deplécia lymfocytov populácie CD4, koncentrácia protilátok proti vírusu výrazne klesá (v závislosti od závažnosti sekundárnych ochorení sa rozlišujú štádiá 4A, 4B, 4B); Fáza 5 - " terminálny stupeň“—typický pokles počtu CD4 buniek pod 0,05 x 109/l; koncentrácia protilátok proti vírusu výrazne klesá alebo protilátky nemusia byť zistené.

Laboratórna diagnostika infekcie HIV

Pri diagnostike infekcie HIV sa používajú 4 skupiny metód:

1. Stanovenie prítomnosti vírusu, jeho antigénov alebo kópií RNA v materiáloch od pacienta alebo osoby infikovanej HIV

Sérologická diagnostika založená na detekcii špecifických protilátok proti povrchovým (gp 120 a gp 41) a interným (p 18 a p 24) HIV proteínom.

3. Identifikácia patognomických (špecifických) zmien v imunitnom systéme pre infekciu HIV.

Laboratórna diagnostika oportúnnych infekcií (choroby spojené s AIDS).

1. Virologická diagnostika. Materiálom na izoláciu HIV sú krvné T-lymfocyty, leukocyty kostnej drene, lymfatické uzliny, mozgové tkanivo, sliny, spermie, cerebrospinálny mok, krvná plazma.

Výsledný materiál sa použije na infekciu kontinuálnej kultúry T-lymfocytov (H9). Indikácia HIV v bunkovej kultúre sa uskutočňuje pomocou CPD (tvorba symplastov), ​​ako aj imunofluorescenciou, elektrónovou mikroskopiou a vyjadrenou aktivitou reverznej transkriptázy.

Moderné metódy výskumu umožňujú odhaliť jeden infikovaný lymfocyt na 1000 buniek.

Detekcia vírusových antigénov v infikovaných T lymfocytoch sa uskutočňuje pomocou monoklonálnych protilátok

V posledných rokoch je pre stanovenie prognózy a závažnosti infekcie HIV rozhodujúce stanovenie počtu kópií HIV RNA v krvnej plazme pomocou metódy polymerázovej reťazovej reakcie (PCR) – takzvanej vírusovej záťaže.

Ak u pacientov, ktorí nedostávajú liečbu, je vírusová záťaž pod hranicou detekcie (menej ako 5 000 kópií HIV RNA v 1 ml plazmy), znamená to absenciu progresie alebo pomalú progresiu. Stupeň nákazy je minimálny. Vysoká vírusová záťaž (viac ako 10 000 kópií RNA v 1 ml plazmy) u pacientov s počtom CO4 lymfocytov nižším ako 300 v 1 μl vždy indikuje progresiu ochorenia.

Sérologická diagnostika. V súčasnosti je najrozšírenejšia.

Materiál na výskum: 5 ml. heparinizovanú krv, ktorá sa môže uchovávať v chladničke, nie však zmrazená, 6-8 hodín pred dodaním do laboratória.

Na účely sérologickej diagnostiky AIDS sa primárne používajú metódy enzýmovej imunoanalýzy so štandardnými systémami enzýmovej imunoanalýzy (ELISA).

Ide o skríningovú metódu. Princíp fungovania je založený na klasickom princípe priamej ELISA. Imunosorbentom sú polystyrénové tablety s imobilizovaným inaktivovaným vírusovo špecifickým antigénom získaným z HIV alebo synteticky.

Potom sa pridá zriedené testovacie sérum. Inkubácia sa uskutočňuje v jamkách s antigénom. Po naviazaní AG na AT sa nenaviazané proteíny trikrát premyjú a potom sa do jamiek pridá konjugát protilátok proti ľudským imunoglobulínom s enzýmovou značkou.

Vznik špecifického AG+AT komplexu sa zisťuje pridaním substrátu pre enzým (roztok ortofenyléndiamínu a peroxidu vodíka).

V dôsledku toho sa farba média mení úmerne množstvu protilátok. Výsledky štúdie sa berú do úvahy na spektrofotometri.

Krvné séra, ktoré majú vírusovo špecifické protilátky podľa údajov ELISA, sa musia ďalej vyšetrovať imunoblotovaním.

Imunitný blotting je potvrdzujúci test, pretože zisťuje protilátky proti rôznym HIV proteínom.

Je založená na predbežnej frakcionácii molekulovou hmotnosťou (separácia) HIV proteínov elektroforézou v polyakrylamidovom géli, po ktorej nasleduje prenos antigénov na nitrocelulózovú membránu. Potom sa na membránu aplikuje testovacie sérum. V tomto prípade špecifické protilátky tvoria komplex so špecifickým antigénom (gp.120, gp.41, str.24, str.18). Poslednou fázou štúdie je identifikácia protilátok proti rôznym HIV proteínom.

Na tento účel sa do systému pridávajú protilátky proti ľudským proteínom, označené enzýmovou alebo rádioizotopovou značkou.

V sére pacienta sa teda detegujú (alebo nedetegujú) protilátky špecifické pre vírus proti všetkým alebo väčšine antigénov HIV.

3. Štúdie stavu imunity. Zamerané na identifikáciu:

1) zníženie pomeru buniek CD4/CD8 (v N 2 a >, s AIDS - 0,5 resp.<);

2) zníženie obsahu buniek CD4 (<200 клеток/мл.);

3) prítomnosť jedného z laboratórnych príznakov, vrátane anémie, leukopénie, trombopénie, lymfopénie;

4) zvýšenie koncentrácie Ig A a Ig G v krvnom sére;

5) zníženie odozvy tvorby lymfocytových blastov na mitogény;

6) absencia kožnej reakcie GTZ na niekoľko antigénov;

7) zvýšenie hladiny cirkulujúcich imunitných komplexov.

Predchádzajúci1234567891011Ďalší

POZRIEŤ VIAC:

Protilátky proti HIV 1/2– zložky krvnej plazmy, bielkovinovej povahy, ktoré zabraňujú šíreniu infekcie HIV a úplne neutralizujú ich negatívny vplyv.

Čo je test na protilátky HIV 1/2 (skríning)

Skríningový test na protilátky proti HIV 1.2 je systém testov, ktorý dokáže identifikovať jedincov infikovaných vírusom imunodeficiencie. Okrem nich existujú takzvané konfirmačné (pomocné) testy, ktorých úlohou je identifikovať jedincov, ktorí nie sú infikovaní vírusom, ale pri skríningu majú pozitívnu reakciu na vírus.

Podstatou skríningovej štúdie na infekciu HIV je stanovenie protilátok proti vírusu imunodeficiencie.

Jeho charakteristickým znakom je zvýšená citlivosť - viac ako 99,5%. Špecifickosť testovania spočíva v tom, že skríning môže poskytnúť falošne pozitívny výsledok, ak telo pacienta obsahuje autoprotilátky.

Identický výsledok je možné zistiť v prípade ochorenia pečene u pacienta, očkovania proti chrípke alebo prítomnosti akéhokoľvek akútneho vírusového ochorenia. Na základe toho sa na získanie presných výsledkov spolu so skríningom zvyčajne vykonáva vyššie uvedený potvrdzujúci test.

Indikácie pre analýzu

V lekárskej praxi existuje pomerne široká škála indikácií na podstúpenie skríningového vyšetrenia.

Pacient môže kontaktovať laboratórium, ak:

• podozrenie na infekciu (ak bol blízky kontakt s nosičom infekcie HIV);
• s úbytkom hmotnosti, horúčkou;
• pneumónia, ktorá nereaguje na konvenčnú liečbu;
• chronické ochorenia, ktoré vznikajú z neznámych dôvodov;
• v procese prípravy na operáciu;
• krvné transfúzie;
• tehotenstvo a plánovanie rodiny;
• So zapálenými lymfatickými uzlinami;
• Príležitostné sexuálne vzťahy.

Osobitne ohrozené osoby: narkomani a promiskuitní ľudia.

Ako prebieha skríning protilátok proti HIV 1/2?

Uskutočnenie postupu si vyžaduje dodržiavanie niekoľkých potrebných pravidiel:

• pacient musí darovať krv výlučne na prázdny žalúdok (pitná voda je povolená);
• od posledného jedla musí uplynúť aspoň osem hodín;
• lekár musí byť upozornený na to, aké lieky pacient užíva a poznať dávkovanie (ak nie je možnosť čo i len krátkodobého vysadenia);
• ak je pacient schopný oddialiť užívanie liekov, odporúča sa to urobiť 10-15 dní pred dňom manipulácie;
• deň pred testovaním je vhodné, aby pacient prestal jesť vyprážané alebo mastné jedlá, má tiež zakázané piť alkoholické nápoje, fajčiť, obmedziť ťažkú ​​fyzickú aktivitu.

Treba poznamenať, že laboratórne testy na prítomnosť infekcie u detí, ktoré sa narodili matkám, ktoré sú nosičmi vírusu imunodeficiencie, majú svoje špecifiká.

Keďže v prvých mesiacoch života dieťaťa sa môžu v krvi vyskytovať materské protilátky proti HIV, nie je možné na základe výsledkov rozboru získať objektívny obraz o zdravotnom stave novorodenca a ani negatívny výsledok neznamená že vírus nebol schopný preniknúť cez placentárnu bariéru.

Na získanie presných údajov by sa testovanie malo vykonať do 36 mesiacov od narodenia dieťaťa.

Služby v oblasti „Moderná diagnostika“

Kliniky v odbore „Moderná diagnostika“

Testovanie alebo skríning protilátok proti HIV má dva široké, ale veľmi jasne definované ciele – detekciu prípadov a sledovanie. Pri identifikácii prípadov je prvým krokom objasnenie stavu infekcie HIV u každého daného jedinca, aby sa predpísala vhodná liečba alebo aby sa vykonalo monitorovanie pomocou vhodných opatrení.

Účelom epidemiologického dohľadu je odhadnúť prevalenciu HIV, distribúciu prípadov infekcie a jej trendy v skupine alebo populácii.

Citlivosť testu na protilátky proti HIV je mierou jeho schopnosti presne detegovať tieto protilátky vo vzorke a špecifickosť testu je mierou jeho schopnosti presne potvrdiť neprítomnosť protilátok, ak vo vzorke nie sú prítomné.

V ideálnom prípade by mala senzitivita a špecifickosť testu dosiahnuť 100 %. V praxi žiadny biologický test nespĺňa túto požiadavku, a napriek tomu testy používané na HIV protilátky patria medzi najcitlivejšie a najšpecifickejšie testy, ktoré sú v súčasnosti dostupné.

Laboratórna diagnostika AIDS pozostáva z vykonávania virologických, sérologických a imunologických štúdií materiálu od chorých jedincov podozrivých z tohto ochorenia.

Vo virologických štúdiách sa na izoláciu vírusu môžu použiť primárne kultúry mononukleárnych krviniek.

Izolácia a identifikácia vírusu sú metodicky zložité a možno ich vykonávať v špecializovaných laboratóriách. Najúčinnejšou diagnostickou metódou, ktorá sa v súčasnosti používa pri rutinných hromadných vyšetreniach, je detekcia protilátok proti vírusu ľudskej imunodeficiencie. Protilátky proti HIV sa môžu objaviť do konca prvého mesiaca infekcie. Podľa mnohých autorov si vývoj sérokonverzie vyžaduje 4-7 týždňov až 6 mesiacov alebo viac. Prítomnosť protilátok má diagnostickú hodnotu pre AIDS alebo naznačuje riziko jeho rozvoja.

Protilátky nie sú len sérologickým markerom AIDS. Zistené v predklinickej fáze ochorenia umožňujú jeho včasnú diagnostiku. Ich prítomnosť je obzvlášť dôležitá pre detekciu nosičov.

Protilátky sa detegujú počas mnohých rokov, takmer počas celého života. Vedci zistili paralelnosť pri identifikácii vírusu a protilátok proti nemu, t.j. prítomnosť protilátok proti vírusu imunodeficiencie naznačuje vysokú pravdepodobnosť, že osoba je nosičom vírusu.

Protilátky proti antigénu HIV, ktoré sa objavili počas inkubačnej doby, sa s rozvojom ochorenia naďalej intenzívne tvoria, pretože antigénne podráždenie je stimulované viriónmi uvoľnenými z infikovaných lymfocytov a subviriónovými zložkami, ktoré sa dostávajú do krvného obehu počas rozpadu infikovaných buniek a infikované lymfocyty.

Súčasne provírus integrovaný do genómu infikovaných buniek zostáva nedostupný pre špecifické protilátky. To vysvetľuje zdanlivo paradoxný fakt: čím viac protilátok proti vírusu ľudskej imunodeficiencie v krvnom sére, tým ľahšie je izolovať samotný vírus od pacienta.

Stáva sa to preto, že protilátky produkované v reakcii na vírusovú infekciu nie sú neutralizujúce a v dôsledku toho nemajú viditeľný účinok na vírus, ale sú jednoducho prítomné v tele spolu s ním. Na detekciu protilátok (AT) proti vírusu AIDS bolo vyvinutých množstvo testov, ktoré umožňujú vykonávať výskum na dostatočne vysokej úrovni špecifickosti a citlivosti. Ide o metódy rádioimunoanalýzy na pevnej fáze, rádioimunoprecipitácie, imunofluorescencie, enzýmovej imunoanalýzy a imunoblotingu.

Najpoužívanejšími metódami v praxi sú enzýmová imunoanalýza (ELISA), ktorá sa vyznačuje vysokou citlivosťou, schopnosťou kvantitatívneho a vizuálneho zaznamenávania výsledkov reakcie, čo sprístupňuje metódu laboratóriám akejkoľvek úrovne.

ELISA využíva zahraničné a domáce testovacie systémy.

Klinický priebeh infekcie HIV a AIDS

Opatrnosť je potrebná vo vzťahu k deťom narodeným infikovaným matkám. Pri absencii kliniky sa dieťa považuje za infikované, ak AT až HIV pretrváva po roku. Pri pozitívnom výsledku testu ELISA je potrebné otestovať séra, ktoré poskytli jeden pozitívny výsledok, trikrát a potvrdiť pozitívny výsledok v nezávislom systéme - imunobloting

Detekcia AT v reakcii ELISA neposkytuje dostatočné informácie, pretože neindikuje stav testovanej osoby, ale iba inkubáciu, chorobu alebo prítomnosť asymptomatickej infekcie.

Imunitný blotting poskytuje viac informácií, pretože prítomnosť AT na mnohých antigénoch HIV je charakteristická pre ťažké ochorenie, zatiaľ čo reakcia s 1-2 antigénmi je typickejšia pre mierny infekčný proces.

Je informatívne spočítať počet T (pomocníkov) a pomer T4 k Te (supresorovým) lymfocytom, stanoveným pomocou mono-body protilátok.

Dôležitým kritériom ochorenia môže byť prudké zvýšenie množstva imunoglobulínov, najmä A a V. Vo všeobecnom klinickom krvnom teste môže byť ochorenie indikované lymfopéniou, leukopéniou, erytropéniou, trombocytopéniou a eozinofíliou.

Testy HIV používané na epidemiologický dohľad nemusia byť také presné ako tie, ktoré sa vyžadujú na klinické účely.

Ak je však prevalencia HIV v populácii veľmi nízka, všetky pozitívne vzorky sa musia opätovne preskúmať v dodatočných testoch.

Odber krvi na testovanie protilátok proti HIV alebo na skríning môže byť sprevádzaný registráciou mien subjektov (pomenovaný odber) alebo môže byť vykonaný bez registrácie mien alebo individuálnych identifikačných údajov (anonymný odber) (tabuľka

Anonymný, neidentifikovateľný skríning má tieto charakteristiky: využíva vzorky krvi odobraté na iné účely; Anonymita je zaručená z dôvodu, že sa nezhromažďujú ani nezohľadňujú identifikačné údaje; nie je potrebné získať súhlas subjektov; nevyžaduje sa kontakt s poradenskými alebo sociálnymi službami; A čo je najdôležitejšie, chyby v štatistických odhadoch v závislosti od úrovne participácie populácie sú minimalizované.

Hoci anonymné testovanie na HIV môže poskytnúť presnejšie údaje, táto metóda má nasledujúce nevýhody: nemôže eliminovať potenciálne skreslenie výberu; údaje o vysokorizikovom správaní a iných dôležitých premenných nie sú dostupné a nemožno ich spätne zbierať; nie je možné kontaktovať ľudí postihnutých HIV a informovať ich o ich stave; Vyšetrenie je možné vykonávať len v skupinách osôb, ktorým sa krv odoberá na iné účely.

V oblastiach, kde sa prevalencia infekcií HIV považuje za veľmi nízku, by sa mal dohľad nad verejným zdravím zamerať predovšetkým na jednotlivcov alebo populácie s najrizikovejším správaním

Krv na testovanie na HIV v tejto rizikovej skupine sa najľahšie odoberá v centrách špecializovaných na liečbu pohlavne prenosných chorôb alebo podobných inštitúciách.

Ak je bežné aj vnútrožilové užívanie drog, mali by sa odoberať vzorky krvi užívateľom drog v špeciálnych ústavoch.

Odber krvi raz za 3 alebo 6 mesiacov v najrizikovejších skupinách z geografických oblastí, kde sú takéto skupiny najpočetnejšie, bude zvyčajne postačovať. Výnimkou môžu byť rizikové skupiny, ako sú narkomani, ktorí praktizujú vnútrožilové podávanie drog, u ktorých môže byť potrebných viac súkromných vyšetrení.

WHO v súčasnosti vyvíja systém klasifikácie (stagingu) chorôb pre klinické štúdie, ktorý možno použiť aj v štúdiách liečby, ktoré môžu mať aj prognostickú hodnotu.

Účelom takéhoto systému však nie je nahradiť existujúce definície AIDS používané pri dohľade nad zdravotnou starostlivosťou.

V súčasnosti sa všade vyvíjajú plánované (rutinné) systémy sledovania HIV.

Tieto systémy je potrebné prispôsobiť súčasnej epidemiologickej situácii; Metódy odberu vzoriek v populáciách s veľmi nízkou prevalenciou vírusov sa teda musia nevyhnutne líšiť od metód používaných v populáciách, kde je prevalencia stredná alebo vysoká.

Takýto dohľad zahŕňa rutinné vyšetrenia dobre definovaných a dostupných skupín obyvateľstva.

Primárne by mala zahŕňať tie skupiny, ktoré sú najviac ohrozené infekciou a z každej z týchto skupín by sa mal na vyšetrenie vybrať konštantný vopred stanovený počet jedincov.

V posledných rokoch sa anonymný, identitne slepý skríning stáva čoraz bežnejším ako presná a nákladovo efektívna metóda sledovania HIV v zdravotníckych zariadeniach.

Laboratórne diagnostické metódy pre HIV

Vo vysoko špecializovanom laboratóriu sa vykonáva:

a) stanovenie protilátok, antigénov a imunitných komplexov cirkulujúcich v krvi; kultivácia vírusu, identifikácia jeho genómového materiálu a enzýmov;

b) posúdenie funkcií bunkovej časti imunitného systému.

Hlavná úloha patrí sérologickým diagnostickým metódam zameraným na stanovenie protilátok, ako aj antigénov patogénov v krvi a iných biologických tekutinách tela.

Testovanie protilátok proti HIV sa vykonáva:

a) bezpečnosť krvných transfúzií a transplantácií;

b) dohľad, testovanie s cieľom monitorovať prevalenciu HIV infekcie a študovať dynamiku jej prevalencie v určitej populácii;

c) diagnostika HIV infekcie, t.j.

e. dobrovoľné testovanie krvného séra od zjavne zdravých ľudí alebo pacientov s rôznymi klinickými príznakmi a symptómami podobnými infekcii HIV alebo AIDS.

Systém laboratórnej diagnostiky HIV infekcie je vybudovaný na trojstupňovom princípe.

Prvým stupňom je skríning, určený na vykonanie primárnych krvných testov na prítomnosť protilátok proti HIV proteínom. Druhý stupeň je referenčný - umožňuje pomocou špeciálnych metodických techník objasniť (potvrdiť) primárny pozitívny výsledok získaný v štádiu skríningu. Tretia etapa je expertná, určená na konečné overenie prítomnosti a špecifickosti markerov HIV infekcie identifikovaných v predchádzajúcich etapách laboratórnej diagnostiky.

Potreba niekoľkých stupňov laboratórnej diagnostiky je primárne spôsobená ekonomickými úvahami.

V praxi sa používa niekoľko testov, ktoré umožňujú identifikovať ľudí infikovaných HIV s dostatočnou mierou spoľahlivosti:

ELISA test (enzyme-linked immunosorbent assay) na detekciu prvej úrovne sa vyznačuje vysokou citlivosťou, aj keď menšou špecifickosťou ako nasledujúce;

Immune blot (Western-blot), veľmi špecifický a najpoužívanejší test, ktorý umožňuje odlíšiť HIV-1 a HIV-2;

Antigenemia p25 test, účinný v počiatočných štádiách infekcie;

Polymerázová reťazová reakcia (PCR).

V prípadoch hromadného skríningu vzoriek krvi sa odporúča testovať zmesi sér zo skupiny subjektov zostavené tak, aby výsledné riedenie každej vzorky nepresiahlo 1:100.

Ak je zmes sér pozitívna, testuje sa každé sérum v pozitívnej zmesi. Táto metóda nevedie k strate citlivosti pri ELISA aj imunoblote, ale znižuje náklady na pracovnú silu a náklady na vstupné vyšetrenie o 60 – 80 %.

Imunologické metódy

počet T pomocníkov,

2. pomer T4 a T8,

3. stav precitlivenosti,

4. kompenzačná funkcia systému T buniek.

Prejavuje sa hyperprodukciou imunoglobulínov, majú nízku afinitu a telový materiál sa spotrebúva ešte viac.

Nevýhody: objavujú sa neskoro, pri iných infekciách môžu byť prítomné niektoré imunologické ukazovatele.

Klinické metódy – m.b. sú podobné ako pri iných ochoreniach, najtypickejšie prejavy sa zaznamenávajú v neskorších štádiách, takže klinická diagnostika nie je veľmi účinná

Hlavná metóda – sérologická – sa realizuje v 2 etapách:

1 – skríningové vyšetrenie – odber vzoriek na celkové protilátky proti všetkým proteínom imunoanalýzy.

Táto fáza poskytuje 95 % pravdivých výsledkov a 5 % falošne pozitívnych výsledkov.

2 – konfirmačná metóda – všetky vzorky sa vyšetrujú konfirmačnou metódou. Táto technika vám umožňuje detegovať protilátky proti vírusovému proteínu.

Pozitívny výsledok je, keď sa zistia protilátky aspoň na 3 vírusové proteíny, ak na 1 alebo 2 je výsledok sporný a vyžaduje si ďalšie vyšetrenie.

Pri primárnej sérodiagnostike HIV infekcie sa stanovujú celkové protilátky pomocou skríningových testov – ELISA a aglutinačných reakcií.

V druhom (arbitrážnom) štádiu sa používa zložitejší test - imunoblot, ktorý umožňuje nielen potvrdiť alebo zamietnuť pôvodný záver, ale aj na úrovni stanovenia protilátok proti jednotlivým proteínom vírusu.

Interpretácia výsledkov testov na protilátky HIV

Výsledok testu na protilátky HIV ovplyvňuje pomerne veľké množstvo rôznych faktorov a medzi nimi je dôležité načasovanie testu po možnej infekcii.

Vo väčšine prípadov môžu byť protilátky proti HIV detekované 6-12 týždňov po infekcii.

Toto obdobie od vstupu vírusu do tela do objavenia sa detekovateľného množstva protilátok sa nazýva obdobie pozitívnej sérokonverzie alebo obdobie „okna“. Existujú zriedkavé prípady výskytu protilátok 6 mesiacov po infekcii a správy o detekcii protilátok až po 1 roku nemajú žiadny dôkaz. V súčasnosti diagnostická služba využíva nové generácie metód ELISA, ktoré umožňujú detekovať protilátky proti HIV 3–4 týždne po infekcii a určité kombinácie týchto metód, takzvané testovacie stratégie, skracujú obdobie „okna“ na 2– 3 týždne, t.j.

umožňujú detekovať protilátky proti HIV hneď, ako sa začnú produkovať v tele.

Negatívny výsledok znamená, že v krvi vyšetrovanej osoby neboli zistené žiadne protilátky proti HIV.

Tento stav sa nazýva séronegativita a zvyčajne znamená, že osoba nie je infikovaná.

Negatívny výsledok neposkytuje žiadnu záruku do budúcnosti. Uvádza len stav pri vyšetrení. Je malá šanca, že prieskum sa uskutočnil počas obdobia okna. Preto, ak bola osoba v minulosti vystavená HIV a testovaná s negatívnym výsledkom, mala by sa znova otestovať najmenej 6 mesiacov po rizikovej udalosti.

Pozitívny výsledok znamená, že v krvi pacienta sa našli protilátky proti HIV.

Tento stav sa nazýva séropozitivita – človek je infikovaný vírusom HIV. Je dôležité pochopiť, že pozitívny výsledok naznačuje iba infekciu HIV a nie AIDS.

Je však mimoriadne dôležité po získaní pozitívneho výsledku kontaktovať lekára so žiadosťou o radu a v prípade potreby lekársku pomoc, ktorá vám umožní dlhodobo udržať kvalitu života na dobrej úrovni.

Neistý výsledok. V zriedkavých prípadoch je výsledok testu na protilátky HIV nejasný.

Laboratórium nevie odpovedať, či je človek séropozitívny alebo séronegatívny. Za takýchto okolností je potrebné konzultovať s lekárom a znova sa otestovať.