Sérologická diagnostika založená na reakcii antigén-protilátka sa môže použiť na určenie oboch a zohráva úlohu pri určovaní etiológie vírusovej infekcie, aj keď sú výsledky izolácie vírusu negatívne.
Úspešnosť sérologickej diagnostiky závisí od špecifickosti reakcie a dodržania dočasných podmienok odberu krvi, ktoré telo potrebuje na syntézu protilátok.
Vo väčšine prípadov sa používajú párové krvné séra, ktoré sa odoberajú v intervaloch 2–3 týždňov. Za pozitívnu reakciu sa považuje aspoň 4-násobné zvýšenie titra protilátok. Je známe, že väčšina špecifických protilátok patrí do tried IgG a IgM, ktoré sa syntetizujú v rôznych časoch infekčného procesu. IgM protilátky sú zároveň včasnými protilátkami a testy slúžiace na ich stanovenie slúžia na včasnú diagnostiku (stačí vyšetrenie jedného séra). IgG protilátky sa syntetizujú neskôr a pretrvávajú dlhú dobu.
RN sa používa na typizáciu vírusov na skupinovo špecifickú diagnostiku, napríklad adenovírusové infekcie; reakcia fixácie komplementu(RSK). Najbežnejšie sú hemaglutinačná inhibičná reakcia(RTGA), RSK, RIF, pasívne reakcie A reverzná pasívna hemaglutinácia(RPGA, ROPGA), rôzne verzie ELISA, ktorá takmer univerzálne nahradila RIA, ktorá je v citlivosti rovnaká.
RTGA používa sa na diagnostiku ochorení spôsobených hemaglutinačnými vírusmi. Je založená na väzbe pridaného štandardného vírusu na sérum pacienta protilátkami. Indikátorom reakcie sú červené krvinky, ktoré sú vírusom aglutinované (tvorba charakteristického „dáždnika“) v neprítomnosti špecifických protilátok a usadzujú sa na dne, neaglutinované, ak sú prítomné.
RSK je jednou z tradičných sérologických reakcií a používa sa na diagnostiku mnohých vírusových infekcií. Reakcie sa zúčastňujú dva systémy: protilátky zo séra pacienta + štandardný vírus a ovčie červené krvinky + protilátky proti nim, ako aj titrovaný komplement. Ak sa protilátky a vírus zhodujú, tento komplex viaže komplement a nedochádza k lýze červených krviniek oviec (pozitívna reakcia). Pri negatívnom RSC komplement podporuje lýzu erytrocytov. Nevýhodou metódy je jej nedostatočne vysoká citlivosť a náročnosť štandardizácie činidiel.
Aby sa zohľadnil význam RSC, ako aj RTGA, je potrebné titrovať párové séra, teda odobraté na začiatku ochorenia a v období rekonvalescencie.
RPGA– aglutinácia erytrocytov (alebo polystyrénových guľôčok) senzibilizovaných vírusovými antigénmi v prítomnosti protilátok. Akékoľvek vírusy môžu byť adsorbované na erytrocytoch, bez ohľadu na prítomnosť alebo neprítomnosť hemaglutinačnej aktivity. Kvôli prítomnosti nešpecifických reakcií sa séra testujú pri riedení 1:10 alebo viac.
RNGA- aglutinácia červených krviniek senzibilizovaných špecifickými protilátkami v prítomnosti vírusových antigénov. ROPHA sa najviac rozšírila v detekcii antigénu HBs u pacientov aj u darcov krvi.
AK metóda ako aj ELISA, ktorý sa používa na stanovenie protilátok v sére. ELISA je čoraz dôležitejšia a rozšírenejšia na diagnostické účely. Vírusový antigén sa adsorbuje na pevnú fázu (spodok jamiek polystyrénových tabliet alebo polystyrénových guľôčok). Keď sa pridajú zodpovedajúce protilátky prítomné v sére, naviažu sa na sorbované antigény. Prítomnosť požadovaných protilátok sa deteguje pomocou anti-protilátok (napríklad ľudských) konjugovaných s enzýmom (peroxidáza). Pridaním substrátu a reakciou substrát-enzým sa získa farba. Na stanovenie antigénov sa môže použiť aj ELISA. V tomto prípade sa protilátky adsorbujú na pevnú fázu.
Monoklonálne protilátky. Veľký pokrok v diagnostike vírusových infekcií sa dosiahol v poslednom desaťročí, keď sa s rozvojom výskumu genetického inžinierstva vyvinul systém na produkciu monoklonálnych protilátok. Tým sa výrazne zvýšila špecificita a citlivosť diagnostických metód na stanovenie vírusových antigénov. Úzka špecifickosť monoklonov, ktoré predstavujú malú frakciu vírusových proteínov, ktoré nemusia byť prítomné v klinickom materiáli, bola úspešne prekonaná použitím niekoľkých monoklonálnych protilátok proti rôznym vírusovým determinantom.
Na diagnostiku vírusových ochorení sa používajú tieto metódy:
1) Vírusoskopické.
2) Imunitná elektrónová mikroskopia.
3) Virologické.
4) Sérologické.
5) Imunofluorescenčné.
6) Biologické.
7) Použitie DNA (RNA) sond.
8) Polymerázová reťazová reakcia.
Rozmnožovanie (rozmnožovanie) vírusov v bunkovej kultúre sa posudzuje podľa cytopatického efektu (CPE), ktorý je možné detegovať mikroskopicky a je charakterizovaný morfologickými zmenami v bunkách.
Povaha CPD vírusov sa využíva tak na ich detekciu (indikáciu), ako aj na predbežnú identifikáciu, teda určenie ich druhu.
Metódy detekcie vírusov:
1) Hemadsorpčná reakcia – založená na schopnosti povrchu buniek, v ktorých sa rozmnožujú, adsorbovať červené krvinky – hemadsorpčná reakcia. Na jej umiestnenie do kultúry buniek infikovaných vírusmi sa pridá suspenzia erytrocytov a po určitom čase kontaktu sa bunky premyjú izotonickým roztokom chloridu sodného. Prilepené červené krvinky zostávajú na povrchu buniek infikovaných vírusom.
2) Hemaglutinačná reakcia (HR). Používa sa na detekciu vírusov v kultivačnej tekutine bunkovej kultúry alebo v chorioalantoickej alebo plodovej vode kuracieho embrya.
Sérologické metódy možno použiť na detekciu špecifických protilátok aj vírusových antigénov v testovanom materiáli. Na tieto účely sa môžu použiť všetky známe sérologické reakcie:
1) Reakcia fixácie komplementu.
2) Pasívna hemaglutinačná reakcia a jej varianty (RNAg, RNAt).
3) Hemaglutinačná inhibičná reakcia.
4) Imunitná adhézna hemaglutinačná reakcia (komplex antigén + protilátka v prítomnosti komplementu sa adsorbuje na erytrocytoch).
5) Zrážacie reakcie v géli.
6) Reakcie neutralizácie vírusov.
7) Rádioimunitná metóda.
8) Metódy enzýmového imunotestu.
Z uvedených metód sú stále populárnejšie metódy enzýmovej imunoanalýzy, vyznačujúce sa vysokou špecifickosťou a jednoduchosťou použitia.
7. Hemaglutinačná reakcia, jej mechanizmus pri chrípkových vírusoch. Hemaglutinačná inhibičná reakcia, jej praktická aplikácia.
Hemaglutinačná reakcia (HR). Používa sa na detekciu vírusov v kultivačnej tekutine bunkovej kultúry alebo v chorioalantoickej alebo plodovej vode kuracieho embrya.
8. Vlastnosti antivírusovej imunity. Úloha fagocytózy a humorálnych faktorov v imunite. Interferóny, charakteristika základných vlastností, klasifikácia. Vlastnosti účinku interferónov na vírusy .
Na ochrane tela pred vírusmi sa podieľajú všetky imunitné systémy, no antivírusová imunita má výrazné špecifické črty. Sú determinované tým, že na prienik vírusu do organizmu nereagujú ako prvé komplementové a makrofágové systémy, ale interferónové a T-killer bunkové systémy. Ďalší znak tvorby imunity je spojený so skutočnosťou, že vírusy majú slabý antigénny účinok na B lymfocyty a ich aktivácia, proliferácia a diferenciácia si vyžaduje účasť pomocných T buniek, a teda ich prezentáciu spracovaného vírusového antigénu (peptidové fragmenty ) za účasti molekúl MHC triedy II. Preto úlohou makrofágov a iných buniek prezentujúcich antigén nie je ani tak samotná fagocytóza, ale skôr spracovanie a prezentácia antigénu.
Prvou odpoveďou na prienik vírusu je interferónový systém, ktorý potláča intracelulárnu reprodukciu vírusov. Okrem toho majú a- a b-inhibítory prítomné v krvnom sére antivírusový účinok. Alfa inhibítor je termostabilný substrát, súčasť α-globulínov, zabraňuje adsorpcii vírusov na bunku a je zničený neuraminidázou orto- a paramyxovírusov. Beta-inhibítor je tepelne labilný mukopeptid, súčasť b-globulínov, potláča rozmnožovanie orto- a paramyxovírusov.
Interferóny a inhibítory však na ochranu pred vírusmi nestačili, a tak príroda vytvorila ďalší, veľmi silný obranný mechanizmus proti vírusom na úrovni tela. Predstavujú ho predovšetkým T-cytotoxické lymfocyty a iné zabíjačské bunky. Tieto bunky rozpoznávajú všetky cudzie antigény, vrátane vírusových, ktoré sú im prezentované molekulami MHC triedy I. Hlavným biologickým významom T-killer buniek je detekcia a deštrukcia akýchkoľvek buniek infikovaných cudzími antigénmi.
Interferón je rodina glykoproteínových proteínov, ktoré sú syntetizované bunkami imunitného systému a spojivového tkaniva. V závislosti od toho, ktoré bunky syntetizujú interferón, sa rozlišujú tri typy: ?,? a p-interferóny.
Alfa interferón je produkovaný leukocytmi a nazýva sa leukocyty; interferón beta sa nazýva fibroblastický, pretože ho syntetizujú fibroblasty - bunky spojivového tkaniva, a interferón gama sa nazýva imunitný, pretože ho produkujú aktivované T lymfocyty, makrofágy, prirodzené zabíjačské bunky, t.j. imunitné bunky.
Produkcia interferónu sa prudko zvyšuje pri infekcii vírusmi okrem antivírusového účinku má interferón protinádorovú ochranu, pretože odďaľuje proliferáciu (reprodukciu) nádorových buniek, ako aj imunomodulačnú aktivitu, stimuluje fagocytózu, prirodzené zabíjačské bunky, reguluje protilátky; produkciu B bunkami, aktiváciu expresie hlavného histokompatibilného komplexu.
Mechanizmus akcie. Interferón priamo neovplyvňuje vírus mimo bunky, ale viaže sa na špeciálne bunkové receptory a ovplyvňuje proces rozmnožovania vírusu vo vnútri bunky v štádiu syntézy proteínov.
Súkromná virológia
1. Vírusy, ktoré spôsobujú akútne respiračné ochorenia (ARI). Klasifikácia. Všeobecné charakteristiky ortomyxovírusov. Štruktúra chrípkového viriónu. Vlastnosti jeho genómu a implementácia informácií v ňom obsiahnutých. Replikácia RNA virionu.
1. Vírusy sú pôvodcami akútnych respiračných infekcií. klasifikácia.
Pôvodcami akútnych respiračných infekcií sú nasledujúce vírusy:
1. Chrípkové vírusy A, B, C (Orthomyxoviridae)
2. Paramyxovírusy (Paramyxoviridae) - táto čeľaď zahŕňa tri rody: paramyxovírus - vírusy ľudskej parainfluenzy (HPIV) typu 1, 2, 3, 4, pseudomor hydiny, vtáčia parainfluenza a mumps; Pneumovírus - respiračný syncyciálny vírus (RS vírus); Morbillivirus - vírus osýpok.
3. Respiračné koronavírusy (Coronaviridae).
4. Respiračné reovírusy (Reoviridae).
5. Pikornavírusy (Picornaviridae).
Vírus chrípky A
Virión má guľovitý tvar a priemer 80-120 nm. Vírusový genóm predstavuje jednovláknová fragmentovaná (8 fragmentov) negatívna RNA s celkovou molekulovou hmotnosťou 5 MD. Typ symetrie nukleokapsidu je špirálovitý. Virión má superkapsidu (membránu) obsahujúcu dva glykoproteíny - hemaglutinín a neuraminidázu, ktoré vyčnievajú nad membránu vo forme rôznych hrotov.
Vírusy sú pôvodcami akútnych respiračných ochorení. Charakteristiky prejavu chorôb spôsobených vírusmi chrípky, parainfluenzy, rinovírusmi, respiračným syncyciálnym vírusom a adenovírusmi. Laboratórne metódy na ich diagnostiku.
Virión má guľovitý tvar a priemer 80-120 nm. Vírusový genóm predstavuje jednovláknová fragmentovaná (8 fragmentov) negatívna RNA s celkovou molekulovou hmotnosťou 5 MD. Typ symetrie nukleokapsidu je špirálovitý. Virión má superkapsidu (membránu) obsahujúcu dva glykoproteíny - hemaglutinín a neuraminidázu, ktoré vyčnievajú nad membránu vo forme rôznych hrotov.
Vo vírusoch chrípky A ľudí, cicavcov a vtákov sa našlo 13 typov hemaglutinínu líšiacich sa antigénom, ktoré boli očíslované priebežne (od H1 po H13).
Neuraminidáza (N) je tetramér s molekulovou hmotnosťou 200-250 kDa, každý monomér má molekulovú hmotnosť 50-60 kDa.
Vírus chrípky A má 10 rôznych variantov neuraminidázy
Laboratórna diagnostika. Materiálom na štúdium je výtok z nosohltanu, ktorý sa získava buď opláchnutím alebo použitím vatových tampónov a krv. Používajú sa tieto diagnostické metódy:
1. Virologická - infekcia kuracích embryí, kultúr obličkových buniek opice zelenej (Vero) a psov (MDSC). Bunkové kultúry sú obzvlášť účinné na izoláciu vírusov A(H3N2) a B.
2. Sérologické - detekcia špecifických protilátok a zvýšenie ich titra (v párových sérach) pomocou RTGA, RSK a metódy enzýmovej imunoanalýzy.
3. Ako zrýchlená diagnostika sa používa imunofluorescenčná metóda, ktorá umožňuje rýchlo zistiť vírusový antigén v náteroch odtlačkov prstov z nosovej sliznice alebo vo výteroch z nosohltana pacientov.
4. Na detekciu a identifikáciu vírusu (vírusové antigény) boli navrhnuté metódy RNA sondy a PCR.
Špecifická prevencia
1) žijú z oslabeného vírusu; 2) zabil celý virión; 3) subviriónová vakcína (z rozdelených viriónov); 4) podjednotková vakcína obsahujúca iba hemaglutinín a neuraminidázu.
Vírusy chrípky (ortomyxovírusy). Všeobecné charakteristiky. Superkapsidové proteíny, ich funkcie, význam variability (posun a drift) pre epidemiológiu chrípky. Laboratórne diagnostické metódy. Vakcíny používané na prevenciu chrípky.
Akútne infekčné ochorenie, s horúčkou, poškodením pečene. Antroponóza.
Taxonómia, morfológia, antigénna štruktúra: Čeľaď Picornaviridae, rod Hepatovirus. Typový druh má jeden sérotyp. Je to RNA vírus, jednoducho organizovaný a má jeden vírus špecifický antigén.
Kultivácia: Vírus sa pestuje v bunkových kultúrach. Reprodukčný cyklus je dlhší ako u enterovírusov, cytopatický účinok nie je výrazný.
Odolnosť: Odolné voči teplu; inaktivuje sa varom počas 5 minút. Relatívne stabilný vo vonkajšom prostredí (voda).
Epidemiológia. Zdroj: pacienti. Mechanizmus infekcie je fekálno-orálny. Vírusy sa vylučujú stolicou na začiatku klinických prejavov. S objavením sa žltačky sa intenzita sekrécie vírusu znižuje. Vírusy sa prenášajú vodou, jedlom a rukami.
Postihnuté sú väčšinou deti vo veku od 4 do 15 rokov.
Mikrobiologická diagnostika. Materiálom na výskum je sérum a výkaly. Diagnostika je založená najmä na stanovení IgM v krvi pomocou ELISA, RIA a imunitnej elektrónovej mikroskopie. Rovnaké metódy môžu detegovať vírusový antigén vo výkaloch. Virologické vyšetrenie sa nevykonáva.
3. Virologická diagnostika chrípky. Izolácia vírusu, určenie jeho typu. Sérologické metódy diagnostiky chrípky: RSK, RTGA. Zrýchlená diagnostická metóda využívajúca fluorescenčné protilátky.
Mikrobiologická diagnostika. Diagnóza „chrípky“ je založená na (1) izolácii a identifikácii vírusu, (2) stanovení vírusových antigénov v bunkách pacienta, (3) hľadaní protilátok špecifických pre vírus v sére pacienta. Pri výbere materiálu na výskum je dôležité získať bunky infikované vírusom, pretože v nich dochádza k replikácii vírusu. Materiálom pre výskum je výtok z nosohltanu. Na stanovenie protilátok sa vyšetrujú párové krvné séra pacienta.
Expresná diagnostika. Vírusové antigény sa detegujú v testovanom materiáli pomocou RIF (priame a nepriame verzie) a ELISA. Pomocou PCR je možné detegovať genóm vírusov v materiáli.
Virologická metóda. Optimálnym laboratórnym modelom na kultiváciu kmeňov je kuracie embryo. Indikácia vírusov sa uskutočňuje v závislosti od laboratórneho modelu (úhyn, klinické a patomorfologické zmeny, CPP, tvorba „plakov“, „farebný test“, RHA a hemadsorpcia). Vírusy sú identifikované podľa ich antigénnej štruktúry. Používajú RSK, RTGA, ELISA, RBN (biologická neutralizačná reakcia) vírusov atď. Zvyčajne sa typ vírusov chrípky určuje v RSK, podtyp - v RTGA.
Sérologická metóda. Diagnóza sa stanoví štvornásobným zvýšením titra protilátok v párových sérach od pacienta, ktoré sa získa v intervale 10 dní. Používajú sa vírusy RTGA, RSK, ELISA, RBN.
Adenovírusy, charakteristika vlastností, zloženie skupiny. Adenovírusy patogénne pre ľudí. Charakteristiky patogenézy adenovírusových infekcií, metódy kultivácie adenovírusov. Diagnóza adenovírusových ochorení.
Čeľaď Adenoviridae sa delí na dva rody: Mastadenovirus - adenovírusy cicavcov, patria sem adenovírusy ľudí (41 sérovarov), opíc (24 sérovarov), ako aj hovädzí dobytok, kone, ovce, ošípané, psy, myši, obojživelníky; a Aviadenovírus - vtáčie adenovírusy (9 sérovarov).
Adenovírusom chýba superkapsid. Virión má tvar dvadsaťstena - kubický typ symetrie, jeho priemer je 70-90 nm. Kapsida pozostáva z 252 kapsomérov s priemerom 7-9 nm.
Vo virióne bolo identifikovaných najmenej 7 antigénov. Inkubačná doba je 6-9 dní. Vírus sa množí v epitelových bunkách horných dýchacích ciest a na sliznici očí. Môže preniknúť do pľúc, ovplyvniť priedušky a alveoly, čo spôsobí ťažký zápal pľúc; Charakteristickou biologickou vlastnosťou adenovírusov je tropizmus pre lymfoidné tkanivo.
Adenovírusové ochorenia možno charakterizovať ako febrilné s katarálnymi zápalmi sliznice dýchacích ciest a očí, sprevádzané zväčšením submukózneho lymfatického tkaniva a regionálnych lymfatických uzlín.
Laboratórna diagnostika. 1. Detekcia vírusových antigénov v postihnutých bunkách pomocou imunofluorescenčných alebo IFM metód. 2. Izolácia vírusu. Materiálom na výskum je výtok z nosohltanu a spojovky, krv, výkaly (vírus možno izolovať nielen na začiatku ochorenia, ale aj na 7.-14. deň). Na izoláciu vírusu sa používajú primárne trypsinizované bunkové kultúry (vrátane diploidných) ľudského embrya, ktoré sú citlivé na všetky sérovary adenovírusov. Vírusy sa detegujú svojim cytopatickým účinkom a pomocou RSC, pretože všetky majú spoločný antigén viažuci komplement. Identifikácia sa uskutočňuje typovo špecifickými antigénmi pomocou RTGA a RN v bunkovej kultúre. 3. Detekcia zvýšenia titra protilátok v párových sérach pacientov pomocou RSC. Stanovenie zvýšenia titra typovo špecifických protilátok sa uskutočňuje s referenčnými adenovírusovými sérostkmenmi v RTGA alebo PH v bunkovej kultúre.
5. Coxsackie a ECHO vírusy. Charakteristika ich vlastností. Zloženie skupiny. Metódy mikrobiologickej diagnostiky chorôb spôsobených vírusmi Coxsackie a ECHO.
Coxsackie je najkardiotropnejší zo všetkých enterovírusov. U 20-40% pacientov mladších ako 20 rokov je infekcia Coxsackie komplikovaná myokarditídou. Vírusy Coxsackie sú reprezentované dvoma skupinami: skupina Coxsackie A zahŕňa 23 sérovarov (A1-A22, 24); Skupina Coxsackie B zahŕňa 6 sérovarov (B1-B6).
Vírusy Coxsackie A a B môžu u ľudí spôsobiť okrem ochorení podobných detskej obrne, niekedy sprevádzaných paralýzou, rôzne iné ochorenia s jedinečným klinickým obrazom: aseptickú meningitídu, epidemickú myalgiu (Bornholmova choroba), herpangínu, menšie ochorenie, gastroenteritídu, akútnu ochorenia dýchacích ciest, myokarditída
ECHO, čo znamená: E - enterické; C - cytopatogénne; H - človek; O - sirota - sirota. má 32 sérovarov.
Zdrojom infekcií Coxsackie a ECHO sú ľudia. K infekcii vírusmi dochádza fekálno-orálnou cestou.
Patogenéza chorôb spôsobených vírusmi Coxsackie a ECHO je podobná patogenéze detskej obrny. Vstupnými bránami sú sliznica nosa, hltana a tenkého čreva, v ktorých epitelových bunkách, ako aj v lymfoidnom tkanive sa tieto vírusy množia.
Afinita k lymfoidnému tkanivu je jedným z charakteristických znakov týchto vírusov. Po rozmnožení vírusy prenikajú do lymfy a potom do krvi, čo spôsobuje virémiu a generalizáciu infekcie.
Akonáhle sa vírusy dostanú do krvného obehu, šíria sa hematogénne po celom tele a selektívne sa usadzujú v tých orgánoch a tkanivách, ku ktorým majú tropizmus.
Metódy diagnostiky enterovírusových ochorení. použiť virologickú metódu a rôzne sérologické reakcie. Štúdia sa musí vykonať na celej skupine enterovírusov. Na ich izoláciu sa používa črevný obsah, výplachy a výtery z hrdla, menej často mozgovomiechový mok alebo krv, v prípade úmrtia pacienta sa vyšetrujú kúsky tkaniva z rôznych orgánov. Testovaný materiál infikuje bunkové kultúry (poliovírusy, ECHO, Coxsackie B a niektoré sérovary Coxsackie A), ako aj novonarodené myši (Coxsackie A).
Typizácia izolovaných vírusov sa uskutočňuje v neutralizačných reakciách, RTGA, RSK, precipitačných reakciách, s použitím štandardných zmesí sér rôznych kombinácií. Na detekciu protilátok v ľudských sérach pri enterovírusových infekciách sa využívajú rovnaké sérologické reakcie (RN, farebné reakcie, RTGA, RSK, precipitačné reakcie), avšak na tieto účely je potrebné mať spárované séra od každého pacienta (v akútnom období resp. po 2-3 týždňoch od začiatku ochorenia). Reakcie sa považujú za pozitívne, keď sa titer protilátok zvýši aspoň 4-krát. Pri týchto dvoch metódach sa používa aj IPM (na detekciu protilátok alebo antigénu).
Hepatitída B. Štruktúra a charakteristika hlavných vlastností viriónu. Povrchový antigén, jeho význam. Vlastnosti interakcie vírusu s bunkou. Spôsoby infekcie. Laboratórne diagnostické metódy. Špecifická prevencia.
Vírus hepatitídy B, HBV Virión obsahuje tri hlavné antigény
1. HBsAg - povrchový (povrchový), alebo rozpustný (rozpustný), alebo austrálsky antigén.
2. HBcAg - jadrový antigén (cog antigén).
3. HBeAg - antigén e, lokalizovaný v jadre viriónu
Samotný virión, častica Dane, má guľovitý tvar a priemer 42 nm. Superkapsida viriónu pozostáva z troch proteínov: hlavného (jadro), veľkého a stredného (obr. 88.1). Genóm je uzavretý v kapside a je reprezentovaný dvojvláknovou kruhovou DNA s molekulovou hmotnosťou 1,6 MD. DNA pozostáva z približne 3200 nukleotidov, ale jej plusové vlákno je o 20-50% kratšie ako mínusové vlákno.
Povrchový antigén - HBsAg - existuje vo forme troch morfologicky odlišných variantov: 1) predstavuje superkapsidu celého viriónu; 2) nachádzajúce sa vo veľkých množstvách vo forme častíc s priemerom 20 nm a majúcich guľovitý tvar; 3) vo forme vlákien s dĺžkou 230 nm. Chemicky sú identické. HBsAg obsahuje jeden spoločný antigén a a dva páry vzájomne sa vylučujúcich typovo špecifických determinantov: d/y a w/r, preto existujú štyri hlavné podtypy HBsAg (a teda HBV): adw, adr, ayw a ayr. Antigén a zabezpečuje vytvorenie všeobecnej skríženej imunity voči všetkým podtypom vírusu.
Proteíny, ktoré tvoria povrchový antigén, existujú v glykozylovanej (gp) a neglykozylovanej forme. Glykozylované sú gp27, gp33, gp36 a gp42 (čísla označujú mW v kDa). Superkapsida HBV pozostáva z hlavného alebo jadrového proteínu S (92 %); stredný M proteín (4 %) a veľký alebo dlhý L proteín (1 %).
Hlavný proteín - p24/gp27, Veľký proteín - p39/gp42, Stredný proteín - gp33/gp36.
Interakcia s bunkou.
1. Adsorpcia na bunke.
2. Prienik do bunky pomocou mechanizmu receptorom sprostredkovanej endocytózy (ohraničená jamka -> ohraničená vezikula -> lyzozóm -> uvoľnenie nukleokapsidy a prienik vírusového genómu do jadra hepatocytu).
3. Intracelulárna reprodukcia.
Zdrojom nákazy vírusom hepatitídy B je len človek. Infekcia sa vyskytuje nielen parenterálne, ale aj sexuálne a vertikálne (od matky po plod)
V súčasnosti je hlavnou metódou diagnostiky hepatitídy B použitie reverzného pasívneho hemaglutinačného testu (RPHA) na detekciu vírusu alebo jeho povrchového antigénu – HBsAg. Ako už bolo uvedené, krv obsahuje mnohonásobne viac povrchového antigénu ako samotný vírus (100-1000-krát). Na ROPHA reakciu sa používajú erytrocyty senzibilizované protilátkami proti vírusu hepatitídy B. Keď je v krvi prítomný antigén, dochádza k hemaglutinačnej reakcii. Na detekciu protilátok proti vírusovému antigénu HBsAg sa používajú rôzne imunologické metódy (RSK, RPGA, IFM, RIM atď.)
Špecifická prevencia
Očkovanie proti hepatitíde B je povinné a malo by sa vykonať v prvom roku života. Na očkovanie boli navrhnuté dva typy vakcín. Na prípravu jedného z nich sa ako surovina používa plazma nosičov vírusov, pretože obsahuje vírusový antigén v množstve dostatočnom na prípravu vakcíny. Hlavnou podmienkou prípravy tohto typu vakcín je ich úplná bezpečnosť. Na výrobu iného typu vakcíny sa využívajú metódy genetického inžinierstva, najmä na získanie antigénneho materiálu sa používa rekombinantný klon kvasiniek, ktorý produkuje povrchový antigén. vírus hepatitídy B.
V Rusku boli vytvorené vakcíny pre dospelých aj novorodencov a malé deti. Celý očkovací cyklus pozostáva z troch injekcií:
Dávkujem - ihneď po narodení; II dávka - po 1-2 mesiacoch; III dávka - do ukončeného 1. roku života.
Detekcia v sére Prítomnosť protilátok proti antigénom patogénu umožňuje stanoviť diagnózu ochorenia. Sérologické štúdie sa používajú aj na identifikáciu mikrobiálnych antigénov, rôznych biologicky aktívnych látok, krvných skupín, tkanivových a nádorových antigénov, imunitných komplexov, bunkových receptorov atď.
Keď je mikrób izolovaný Patogén sa identifikuje u pacienta štúdiom jeho antigénnych vlastností pomocou imunodiagnostických sér, t.j. krvných sér hyperimunizovaných zvierat obsahujúcich špecifické protilátky. Ide o tzv sérologická identifikácia mikroorganizmov.
Široko používaný v mikrobiológii a imunológii aglutinačné reakcie, precipitácia, neutralizácia, reakcie zahŕňajúce komplement, s použitím značených protilátok a antigénov (rádioimunologické, enzýmové imunostanovenie, imunofluorescenčné metódy). Uvedené reakcie sa líšia zaznamenaným účinkom a technikou produkcie, všetky sú však založené na interakčnej reakcii antigénu s protilátkou a používajú sa na detekciu protilátok aj antigénov. Imunitné reakcie sa vyznačujú vysokou citlivosťou a špecifickosťou.
Vlastnosti interakcie protilátok s antigénmi sú základom diagnostických reakcií v laboratóriách. Reakcia in vitro medzi antigénom a protilátkou pozostáva zo špecifickej a nešpecifickej fázy. IN špecifická fáza dochádza k rýchlej špecifickej väzbe aktívneho centra protilátky na antigénnu determinantu. Potom príde nešpecifická fáza - pomalšie, čo sa prejavuje viditeľnými fyzikálnymi javmi, ako je tvorba vločiek (aglutinačný jav) alebo zrazenina vo forme zákalu. Táto fáza si vyžaduje prítomnosť určitých podmienok (elektrolyty, optimálne pH prostredia).
Väzba antigénneho determinantu (epitopu) na aktívne centrum Fab fragmentu protilátok je spôsobená van der Waalsovými silami, vodíkovými väzbami a hydrofóbnou interakciou. Sila a množstvo antigénu viazaného protilátkami závisí od afinity, avidity protilátok a ich valencie.
K otázke expresnej diagnostiky:
1. Dá sa diagnostikovať kultúra izolovaná vo svojej čistej forme.
2. V špeciálne vybavených laboratóriách (musí mať povolenie)
3. Dodržiavanie prísnych pravidiel, ako sú: izolovaná miestnosť, požadované špeciálne ochranné obleky, povinné úplné sanitárne ošetrenie miestnosti po práci s patogénom, sanitárne ošetrenie výskumníkov po ukončení práce.
Metódy expertnej diagnostiky.
1. Bakteriológia - kombinované polytropné živné pôdy pre rýchle štúdium morfov, tinktor, biochemické. vlastnosti. Použitie enzýmovej indikátorovej pásky, elektrofyzikálna metóda, metóda papierových diskov nasiaknutých rôznymi látkami (glukóza, laktóza atď.)
2. Fágová diagnostika.
3. Sérodiagnostika - Manciniho metóda, precipitácia v géli podľa Ascoliho, RA, RPGA.
4. Bakterioskopia - priama a nepriama RIF.
Expresné diagnostické metódy pre:
Cholera - M.Z Ermolyeva, imobilizačná stanica s cholerovým diagnostickým sérom, RIF.
Tularémia - RA na skle, RPGA
Chume - fágová typizácia, metóda sacharidového papiera, RPGA.
Sínusový vred - Ascoliho metóda, RIF, RPGA.
Vzorec rastu: existujú tri z nich: difúzny (nepovinné anaeróby), spodný (obligátne anaeróby) a povrchový (obligátne aeróby).
Izolácia čistej kultúry anaeróbnych baktérií
V laboratórnej praxi budete často musieť pracovať s anaeróbnymi mikroorganizmami. Sú náročnejšie na živné pôdy ako aeróby, častejšie vyžadujú špeciálne rastové prísady, pri pestovaní vyžadujú zastavenie prístupu kyslíka a ich rast je dlhší. Preto je práca s nimi zložitejšia a vyžaduje si značnú pozornosť bakteriológov a laboratórnych technikov.
Je dôležité chrániť materiál, ktorý obsahuje anaeróbne patogény, pred toxickými účinkami vzdušného kyslíka. Preto sa odporúča odoberať materiál z ložísk purulentnej infekcie pri punkcii pomocou injekčnej striekačky, čas medzi odberom materiálu a jeho naočkovaním na živnú pôdu by mal byť čo najkratší.
Keďže sa na kultiváciu anaeróbnych baktérií používajú špeciálne živné pôdy, ktoré by nemali obsahovať kyslík a majú nízky redoxný potenciál (-20 -150 mV), do ich zloženia sa pridávajú indikátory - resazurín, metylénová modrá atď., ktoré reagujú na zmenu v tomto potenciáli. Ako rastie, bezfarebné formy indikátorov sa obnovujú a menia svoju farbu: resazurín sa zafarbí na stredne ružovú a metylénová modrá na stredne modrú. Takéto zmeny naznačujú nemožnosť použitia médií na kultiváciu anaeróbnych mikróbov.
Zavedenie aspoň 0,05 % agaru do média pomáha znižovať redoxný potenciál, ktorý zvýšením jeho viskozity pomáha znižovať prísun kyslíka. To sa zasa dosiahne aj použitím čerstvých (najneskôr do dvoch hodín po výrobe) a redukovaných živných médií.
Treba brať do úvahy, že vzhľadom na zvláštnosti fermentačného typu metabolizmu anaeróbnych baktérií vyžadujú prostredie bohatšie na nutričné zložky a vitamíny. Najčastejšie sa používajú srdcovo-mozgové a pečeňové infúzie, sójové a kvasnicové extrakty, hydrolytický digest kazeínu, peptónu, tryptónu. Je povinné pridať rastové faktory, ako je Tween-80, hemín, menadion, plná alebo hemolyzovaná krv.
Izolácia čistej kultúry aeróbnych mikroorganizmov pozostáva z niekoľkých etáp.
Prvý deň (1. štádium štúdie) sa patologický materiál odoberie do sterilnej nádoby (skúmavka, banka, fľaša). Študuje sa vzhľad, konzistencia, farba, vôňa a ďalšie vlastnosti, pripravuje sa náter, natiera sa a skúma sa pod mikroskopom. V niektorých prípadoch (akútna kvapavka, mor) je v tomto štádiu možné vykonať predchádzajúcu diagnózu a navyše vybrať médiá, na ktoré bude materiál naočkovaný. Obsadzovanie sa vykonáva bakteriologickou slučkou (používa sa najčastejšie), špachtľou Drigalského metódou a vatovým tampónom. Poháre sú uzavreté, obrátené hore dnom, podpísané špeciálnou ceruzkou a umiestnené v termostate pri optimálnej teplote (37°C) na 18-48 rokov. Účelom tejto fázy je získať izolované kolónie mikroorganizmov.
Niekedy sa však na akumuláciu materiálu vysieva na tekuté živné médiá.
Z podozrivých kolónií sa pripravia nátery, zafarbia sa pomocou Gramovej metódy na štúdium morfologických a tinktoriálnych vlastností patogénov a skúmajú sa pohyblivé baktérie v „visiacej“ alebo „rozdrvenej“ kvapke. Tieto znaky majú mimoriadne veľkú diagnostickú hodnotu pri charakterizácii určitých typov mikroorganizmov.
Zvyšky študovaných kolónií sa opatrne odstránia z povrchu média bez toho, aby sa dotkli ostatných, a naočkujú sa na šikmé časti agaru alebo na sektory Petriho misky s živným médiom, aby sa získala čistá kultúra. Skúmavky alebo misky s kultúrami sa umiestnia do termostatu pri optimálnej teplote na 18-24 hodín.
Baktérie môžu rásť inak aj na tekutých živných pôdach, hoci charakteristiky rastových prejavov sú horšie ako na pevných pôdach.
Baktérie sú schopné spôsobiť difúzny zákal média, jeho farba sa nemusí meniť alebo nadobudnúť farbu pigmentu. Tento rastový vzor je najčastejšie pozorovaný u väčšiny fakultatívnych anaeróbnych mikroorganizmov.
Niekedy sa na dne skúmavky vytvorí zrazenina. Môže byť drobivá, homogénna, viskózna, hlienovitá atď. Médium nad ňou môže zostať priehľadné alebo sa môže zakaliť. Ak mikróby netvoria pigment, sediment má modro-modrú alebo žltkastú farbu. Anaeróbne baktérie rastú spravidla podobným spôsobom.
Parietálny rast sa prejavuje tvorbou vločiek a zŕn pripevnených k vnútorným stenám skúmavky. Médium zostáva transparentné.
Aeróbne baktérie majú tendenciu rásť povrchovo. Jemný, bezfarebný alebo modrastý film sa často vytvára vo forme sotva viditeľného povlaku na povrchu, ktorý zmizne, keď sa médium zatrasie alebo zatrasie. Fólia môže byť vlhká, hustá, má vláknitú, slizkú konzistenciu a môže sa prilepiť na slučku a ťahať za ňu. Existuje však aj hustý, suchý, krehký film, ktorého farba závisí od pigmentu produkovaného mikroorganizmami.
Ak je to potrebné, urobí sa náter, zafarbí sa, vyšetrí sa pod mikroskopom a mikroorganizmy sa naočkujú slučkou na povrch tuhého živného média, aby sa získali izolované kolónie.
Tretí deň (štádium 3 štúdie) sa študuje rastový vzor čistej kultúry mikroorganizmov a uskutočňuje sa jeho identifikácia.
Najprv venujú pozornosť charakteristikám rastu mikroorganizmov na médiu a urobia náter, zafarbia ho pomocou Gramovej metódy, aby skontrolovali čistotu kultúry. Ak sa pod mikroskopom pozorujú baktérie rovnakého typu morfológie, veľkosti a farbiacich vlastností (schopnosť farbiť), dochádza k záveru, že kultúra je čistá. V niektorých prípadoch možno na základe vzhľadu a charakteristík ich rastu vyvodiť záver o type izolovaných patogénov. Určenie druhov baktérií na základe ich morfologických charakteristík sa nazýva morfologická identifikácia. Určenie typu patogénu na základe jeho kultúrnych charakteristík sa nazýva kultúrna identifikácia.
Tieto štúdie však nestačia na konečný záver o type izolovaných mikróbov. Preto sa študujú biochemické vlastnosti baktérií. Sú dosť rôznorodé.
Najčastejšie sa študujú sacharolytické, proteolytické, peptolytické, hemolytické vlastnosti, tvorba dekarboxylázových enzýmov, oxidáza, kataláza, plazmakoaguláza, DNáza, fibrinolyzín, redukcia dusičnanov na dusitany a pod. Na tento účel existujú špeciálne živné pôdy, ktoré sú naočkované mikroorganizmami (pestrofarebná séria Hiss, MPB, zrazená srvátka, mlieko atď.).
Určenie typu patogénu na základe jeho biochemických vlastností sa nazýva biochemická identifikácia.
PESTOVACIE METÓDY
A IZOLÁCIA ČISTEJ KULTÚRY BAKTÉRIÍ
Pre úspešné pestovanie sú okrem správne zvolených médií a správne nasadených semien potrebné optimálne podmienky: teplota, vlhkosť, prevzdušňovanie (prívod vzduchu). Kultivácia anaeróbov je náročnejšia ako na odstránenie vzduchu zo živného média sa používajú rôzne metódy.
Izolácia jednotlivých typov baktérií (čistej kultúry) z testovaného materiálu, ktorý zvyčajne obsahuje zmes rôznych mikroorganizmov, je jednou z etáp každej bakteriologickej štúdie. Čistá kultúra mikróbov sa získa z izolovanej mikrobiálnej kolónie.
Pri izolácii čistej kultúry z krvi (hemokultúra) sa najskôr „pestuje“ v tekutom médiu: 10-15 ml sterilne odobratej krvi sa naočkuje do 100-150 ml tekutého média. Pomer naočkovanej krvi k živnej pôde 1:10 nie je náhodný – takto sa dosiahne riedenie krvi (neriedená krv má škodlivý vplyv na mikroorganizmy).
Etapy izolácie čistej kultúry baktérií
Fáza I (natívny materiál)
Mikroskopia (približná predstava o mikroflóre).
Výsev na pevných živných pôdach (získavanie kolónií).
Štádium II (izolované kolónie)
Štúdium kolónií (kultúrne vlastnosti baktérií).
Mikroskopické vyšetrenie mikróbov v zafarbenom nátere
(morfologické vlastnosti baktérií).
Výsev na šikmom živnom agare, aby sa izolovala čistá kultúra.
Stupeň III (čistá kultúra)
Stanovenie kultúrnych, morfologických, biochemických
a ďalšie vlastnosti na identifikáciu bakteriálnych kultúr
IDENTIFIKÁCIA BAKTÉRIÍ
Identifikácia izolovaných bakteriálnych kultúr sa uskutočňuje štúdiom morfológie baktérií, ich kultúrnych, biochemických a iných charakteristík, ktoré sú vlastné každému druhu.
Súvisiace informácie.
Väčšina vírusových infekcií vyvíja imunitné reakcie, ktoré sa používajú na diagnostiku. Bunkové odpovede sa zvyčajne hodnotia v testoch na cytotoxicitu lymfocytov proti infekčným agens alebo cieľovým bunkám nimi infikovaným, alebo sa zisťuje schopnosť lymfocytov reagovať na rôzne antigény a mitogény.
V praktických laboratóriách sa závažnosť bunkových reakcií určuje len zriedka. Metódy identifikácie antivírusových AT sa rozšírili.
RN je založená na potlačení cytopatogénneho účinku po zmiešaní vírusu so špecifickým AT. Neznámy vírus sa zmieša so známymi komerčnými antisérami a po vhodnej inkubácii sa pridá k bunkovej monovrstve. Neprítomnosť bunkovej smrti naznačuje nesúlad medzi infekčným agens a známymi AT.
Inhibícia hemaglutinácie pomocou RTHA používa sa na identifikáciu vírusov, ktoré môžu aglutinovať rôzne červené krvinky. Za týmto účelom zmiešajte kultivačné médium obsahujúce patogén so známym komerčným antisérom a pridajte ho do bunkovej kultúry. Po inkubácii sa stanoví schopnosť kultúry hemaglutinovať a ak chýba, urobí sa záver, že vírus sa nezhoduje s antisérom. Inhibícia cytopatického účinku interferenciou vírusu Reakcia inhibície cytopatického účinku v dôsledku interferencie vírusu sa používa na identifikáciu patogénu, ktorý interferuje so známym cytopatogénnym vírusom v kultúre citlivých buniek. Na tento účel sa do kultivačného média obsahujúceho skúmaný vírus (napríklad do vírusu rubeoly, ak je podozrenie) pridá komerčné sérum, inkubuje sa a infikuje sa druhá kultúra; po 1-2 dňoch sa do nej zavedie známy cytopatogénny vírus (napríklad akýkoľvek ECHO vírus). Ak je prítomný cytopatogénny účinok, usudzuje sa, že prvá kultúra bola infikovaná vírusom zodpovedajúcim použitej AT.
Priama imunofluorescencia.
Spomedzi iných testov je najpoužívanejšia priama imunofluorescenčná reakcia (najrýchlejšia, najcitlivejšia a reprodukovateľná). Napríklad identifikácia CMV pomocou cytopatogénneho účinku vyžaduje aspoň 2-3 týždne a pri použití značeného monoklonálneho AT je identifikácia možná do 24 hodín. So súpravou takýchto činidiel sa môžu pridávať do kultúr infikovaných vírusom a inkubovať , zmyte nenaviazané činidlo a skúmajte pomocou fluorescenčnej mikroskopie (umožňuje vám zistiť prítomnosť fluorescencie v infikovaných bunkách).
Imunoelektrónová mikroskopia (podobne ako v predchádzajúcej metóde) umožňuje identifikovať rôzne typy vírusov identifikovaných elektrónovou mikroskopiou (napríklad rôzne typy herpetických vírusov), čo nie je možné vykonať na základe morfologických znakov. Namiesto antisér sa na identifikáciu používajú rôzne značené AT, ale zložitosť a vysoká cena metódy obmedzujú jej použitie.
Detekcia antivírusových protilátok (AT) v krvnom sére. RTGA. RSK. REEF.
Imunosorpčné metódy na detekciu antivírusových protilátok.
Jednoduchším a dostupnejším prístupom je detekcia antivírusových protilátok (AT) v sére. Vzorky krvi by sa mali odoberať dvakrát: ihneď po nástupe klinických príznakov a po 2 až 3 týždňoch. Je mimoriadne dôležité vyšetriť presne dve vzorky séra. Výsledky jedinej štúdie nemožno považovať za presvedčivé z dôvodu nemožnosti spojiť výskyt AT s týmto prípadom. Je možné, že tieto AT cirkulujú po predchádzajúcej infekcii. V takejto situácii možno len ťažko preceňovať úlohu štúdia séra získaného v období rekonvalescencie. Prítomnosť ochorenia počas obdobia odberu prvej vzorky je indikovaná nie menej ako štvornásobným zvýšením AT titra zisteného počas štúdie druhej vzorky.
Metódy uvedené nižšie nerozlišujú medzi protilátkami (AT) vytvorenými počas choroby a protilátkami, ktoré cirkulujú po zotavení (trvanie tohto obdobia sa pri rôznych infekciách líši). Keďže pre adekvátnu diagnózu je potrebné potvrdiť signifikantný nárast AT titrov v dvoch vzorkách, prvá vzorka sa vyšetruje v akútnej fáze a druhá v období rekonvalescencie (po 2-3 týždňoch). Získané výsledky majú retrospektívny charakter a sú vhodnejšie na vykonávanie epidemiologických prieskumov. RTGA deteguje AT syntetizované proti hemaglutinínom vírusov (napríklad vírusu chrípky).
Metóda umožňuje jednoducho detegovať takéto protilátky (AT) v sére pacienta. RSK je hlavnou metódou sérodiagnostiky vírusových infekcií (medzi dostupnými). Reakcia deteguje komplement fixujúce IgM a IgG, ale nerozlišuje ich; Na optimalizáciu získaných výsledkov si príprava reakcie vyžaduje určité zručnosti personálu.
REEF. Ak je možné získať biopsiu infikovaného tkaniva a sú dostupné komerčné súpravy AT značené fluoresceínom, diagnózu možno potvrdiť priamou imunofluorescenciou.
Reakcia zahŕňa inkubáciu študovaného tkaniva s AT, ich následné odstránenie a fluorescenčnú mikroskopiu vzorky. Imunosorpčné metódy na detekciu antivírusových protilátok Imunosorpčné metódy (napríklad ELISA a RIA) sú informatívnejšie, pretože detegujú IgM a IgG oddelene, čo umožňuje vyvodiť určité závery o dynamike infekčného procesu alebo o stave rekonvalescencie. Na detekciu AT sa známy antigén adsorbuje na pevný substrát (napríklad na steny skúmaviek, plastové mikrodoštičky, Petriho misky) a pridávajú sa rôzne riedenia pacientovho séra. Po vhodnej inkubácii sa nenaviazaný AT odstráni, pridá sa antisérum na ľudský Ig značený enzýmom, postup inkubácie a premytia nenaviazaného AT sa zopakuje a pridá sa nejaký chromogénny substrát (citlivý na pôsobenie enzýmu). Keďže zmena farby je úmerná obsahu špecifických AT, je celkom možné určiť ich titer spektrofotometricky. V diagnostike HIV infekcie je najpoužívanejšou metódou imunoblotting.
Detekcia vírusových antigénov (AG). ELISA. V súčasnosti sa už objavili komerčné súpravy na identifikáciu hypertenzie niektorých patogénov, ktoré umožňujú ich identifikáciu v priebehu 5-10 minút. Na detekciu AG sa známe AT sorbujú na pevnej fáze a pridá sa sérum obsahujúce AG; Po inkubácii sa nenaviazaný AG dekantuje, systém sa premyje a pridá sa značený AT, špecifický pre sorbovaný AT. Postup inkubácie a premývania sa opakuje, pridáva sa chromogénny substrát, pri zmene farby systému sa zaznamená pozitívny výsledok. DNA hybridizácia je vysoko špecifická metóda, ktorá umožňuje identifikáciu vírusového genómu po jeho hybridizácii s komplementárnymi molekulami DNA. Ako markery sa používajú enzýmy a izotopy.
Metóda určuje schopnosť vírusovej DNA hybridizovať so značenou komplementárnou DNA; špecifickosť metódy je priamo úmerná dĺžke komplementárneho reťazca. Sľubná je metóda in situ hybridizácie nukleových kyselín. Na nastavenie reakcie sa značená DNA aplikuje na tkanivové biopsie (vrátane biopsií fixovaných vo formalíne alebo zapustených do parafínových blokov) a zaznamenáva sa interakcia s komplementárnou DNA. Metóda sa používa na detekciu vírusov herpes simplex, ľudského papilómu, Epstein-Barrovej atď.
PCR. Metóda výrazne zvyšuje citlivosť hybridizačnej metódy, zvyšuje obsah vírusovej DNA v materiáli získanom od pacienta a tiež urýchľuje čas na získanie výsledkov.
Imunitné reakcie používa sa v diagnostických a imunologických štúdiách u chorých a zdravých ľudí. Na tento účel používajú sérologické metódy t.j. metódy na štúdium protilátok a antigénov pomocou reakcií antigén-protilátka stanovených v krvnom sére a iných tekutinách, ako aj v telesných tkanivách.
Detekcia v sére Prítomnosť protilátok proti antigénom patogénu umožňuje stanoviť diagnózu ochorenia. Sérologické štúdie sa používajú aj na identifikáciu mikrobiálnych antigénov, rôznych biologicky aktívnych látok, krvných skupín, tkanivových a nádorových antigénov, imunitných komplexov, bunkových receptorov atď.
Keď je mikrób izolovaný Patogén sa identifikuje u pacienta štúdiom jeho antigénnych vlastností pomocou imunodiagnostických sér, t.j. krvných sér hyperimunizovaných zvierat obsahujúcich špecifické protilátky. Ide o tzv sérologická identifikácia mikroorganizmov.
Široko používaný v mikrobiológii a imunológii aglutinačné reakcie, precipitácia, neutralizácia, reakcie zahŕňajúce komplement, s použitím značených protilátok a antigénov (rádioimunologické, enzýmové imunostanovenie, imunofluorescenčné metódy). Uvedené reakcie sa líšia zaznamenaným účinkom a technikou produkcie, všetky sú však založené na interakčnej reakcii antigénu s protilátkou a používajú sa na detekciu protilátok aj antigénov. Imunitné reakcie sa vyznačujú vysokou citlivosťou a špecifickosťou.
Vlastnosti interakcie protilátok s antigénmi sú základom diagnostických reakcií v laboratóriách. Reakcia in vitro medzi antigénom a protilátkou pozostáva zo špecifickej a nešpecifickej fázy. IN špecifická fáza dochádza k rýchlej špecifickej väzbe aktívneho centra protilátky na antigénnu determinantu. Potom príde nešpecifická fáza - pomalšie, čo sa prejavuje viditeľnými fyzikálnymi javmi, ako je tvorba vločiek (aglutinačný jav) alebo zrazenina vo forme zákalu. Táto fáza si vyžaduje prítomnosť určitých podmienok (elektrolyty, optimálne pH prostredia).
Väzba antigénneho determinantu (epitopu) na aktívne centrum Fab fragmentu protilátok je spôsobená van der Waalsovými silami, vodíkovými väzbami a hydrofóbnou interakciou. Sila a množstvo antigénu viazaného protilátkami závisí od afinity, avidity protilátok a ich valencie.
Imunodeficiencie, primárne a najmä sekundárne, sú medzi ľuďmi rozšírené. Sú príčinou mnohých chorôb a patologických stavov, a preto vyžadujú prevenciu a liečbu pomocou imunotropných liekov.
34. Inaktivované (konkrétne) vakcíny. Potvrdenie. Aplikácia. Výhody. Nedostatky.
Inaktivované (usmrtené, korpuskulárne alebo molekulárne) vakcíny– prípravky, ktoré ako aktívnu zložku obsahujú kultúry patogénnych vírusov alebo baktérií usmrtených chemickou alebo fyzikálnou metódou (bunkové, viriónové) alebo komplexy antigénov extrahované z patogénnych mikróbov, ktoré obsahujú ochranné antigény (subcelulárne, subviriónové vakcíny).
Na izoláciu antigénnych komplexov (glykoproteíny, LPS, proteíny) z baktérií a vírusov sa používa kyselina trichlóroctová, fenol, enzýmy a izoelektrické zrážanie.
Získavajú sa pestovaním patogénnych baktérií a vírusov na umelých živných médiách, ich inaktiváciou, izoláciou antigénnych komplexov, čistením a konštrukciou vo forme tekutého alebo lyofilného prípravku.
Výhodou tohto typu vakcíny je jej relatívna jednoduchosť výroby (nie je potrebné dlhé štúdium a izolácia kmeňov). Medzi nevýhody patrí nízka imunogenicita, potreba trojnásobného použitia a vysoká reaktogenita formalizovaných vakcín. Taktiež v porovnaní so živými vakcínami imunita, ktorú vytvárajú, nevydrží dlho.
V súčasnosti sa používajú tieto usmrtené vakcíny: týfus, obohatený o Vi antigén; vakcína proti cholere, vakcína proti čiernemu kašľu.
