Внешние проявления, которые появляются на поздних этапах, легко спутать с другими заболеваниями. Поэтому очень многое зависит от результатов лабораторных исследований. Но и эта отрасль медицины пока не может предложить универсального анализа для верификации сифилиса.
Анализы на сифилис: диагностические подходы
Все методы, которые используются для выявления сифилиса, разделяются на две разные категории.
Ключевое различие между ними в следующем:
- Поиск непосредственно возбудителя. Это так называемые прямые тесты. Материалом служит фрагмент тканей, полученных из подозрительного очага.
- Исследование на предмет выявления специфических антител – иммуноглобулинов, – которые иммунитет вырабатывает в ответ на попадание бледной трепонемы в кровь. Материалом для исследований служит плазма крови.
Обе эти категории обладают своими достоинствами и недостатками. В первом случае важно, чтобы клетки спирохеты попали в исследуемый образец (высокая специфичность, но не всегда приемлемая чувствительность).
Методы из второй категории наоборот, обладают высокой чувствительностью, но специфичность их оставляет желать лучшего. Так что правдивый ответ на вопрос, может ли анализ на сифилис быть ошибочным , однозначен: да. Причем в обе стороны – или ложноотрицательным. Особенно, если исследование проводилось только по одной методике.
Анализ на сифилис: прямые тесты
Сюда входят анализы на сифилис, которые позволяют обнаружить либо саму трепонему, либо ее уникальный генетический материал.
Для этого в медицинской практике применяются:
- Изучение образца под микроскопом в темном поле – темнопольная микроскопия.
- Прямая иммунофлюоресценция. Это модификация темнопольной микроскопии.
- Поиск фрагментов ДНК трепонемы методом полимеразно-цепной реакции (ПЦР).
Для темнопольной микроскопии берется отделяемое из доступного подозрительного очага. При положительном результате, в окуляре видны живые подвижные спирохеты. В методе прямой флюоресценции используется тот же материал, что и для темнопольной микроскопии. Образец фиксируется парафином. И на него наносятся противотрепонемные антитела, заранее помеченные флюоресцирующим красителем. Если в материале есть возбудитель сифилиса, иммуноглобулины прочно связываются с белками на поверхности микроба и светятся в ультрафиолете. Заметить такое свечение достаточно легко.
Эти исследования дешевы, у них высокая специфичность, но низкая чувствительность.
Для достоверного результата нужно, чтобы в образце было не менее 1000 – 100 000 микробных тел. А для темнопольной микроскопии важно, чтоб они были живы и двигались. Метод ПЦР позволяет дать точный результат, если в исследуемом образце есть хотя бы 10 спирохет. Специфичность достигает 100%, поэтому сомневаться, может ли анализ на сифилис быть ложноположительным в этом случае – не следует.
Однако, если не соблюсти методику забора или допустить техническую ошибку при исследовании, можно получить ложноотрицательный результат. А это существенный недостаток. Стоимость исследования тоже достаточно высока.
Сифилис сопровождается многочисленными симптомами и имеет большое количество клинических форм. Его распознавание основано на комплексном клинико-лабораторном обследовании пациента. Общий анализ крови при сифилисе несет мало информации, поэтому для диагностики болезни не применяется.
Для анализов могут браться следующие материалы:
- кровь из пальца и вены;
- ликвор — спинно-мозговая жидкость;
- отделяемое твердого шанкра (язвы);
- участки регионарных лимфоузлов.
Выбор материала и метода диагностики зависит от стадии болезни. О том, какие анализы сдают на сифилис, мы поговорим в следующей рубрике.
Классификация методов лабораторной диагностики болезни
В начальной стадии можно использовать бактериоскопический метод, основанный на определении возбудителя – бледной трепонемы – под микроскопом. В дальнейшем широко используются серологические тесты, основанные на определении микробных антигенов и вырабатываемых организмом антител в биологическом материале.
Бактериологические исследование не проводят, так как возбудитель сифилиса очень плохо растет на питательных средах в искусственных условиях.
Все методы обнаружения трепонемы, то есть виды анализов на сифилис, делятся на две большие группы:
1. Прямые, которые непосредственно обнаруживают сам микроб:
- темнопольная микроскопия (выявление трепонем на темном фоне);
- RIT-тест – заражение исследуемым материалом кроликов;
- полимеразная цепная реакция (ПЦР), обнаруживающая участки генетического материала микроорганизма.
2. Непрямые (серологические), основанные на выявлении антител к микробу, которые вырабатываются организмом в ответ на инфицирование.
Серологические анализы делятся на две группы
Нетрепонемные:
- реакция связывания комплемента с кардиолипиновым антигеном (РСКк);
- реакция микропреципитации (РМП);
- тест быстрых плазменных реагинов (RPR);
- проба с толуидиновым красным.
Трепонемные:
- реакция связывания комплемента с трепонемным антигеном (РСКт);
- реакция иммобилизации трепонем (РИТ или РИБТ);
- реакция иммунофлюоресценции (РИФ);
- реакция пассивной гемагглютинации (РПГА);
- иммуноферментный анализ (ИФА);
- иммуноблоттинг.
Методики этих анализов достаточно сложны, поэтому мы остановимся в основном на том, когда они проводятся и насколько точную информацию дают.
Сразу скажем, что основа диагностики сифилиса – серологические методы. Как называется анализ на сифилис: в каждом случае обследование может включать разные методики. Ниже мы более подробно расскажем о них.
Прямые тесты
Убедительно доказывает наличие трепонем их обнаружение под микроскопом. Вероятность сифилиса при этом достигает 97%. Вместе с тем микробы можно обнаружить лишь у 8 больных из 10, поэтому отрицательный тест не исключает заболевание.
Диагностика проводится в и периодах, когда имеются твердый шанкр или кожная сыпь. В отделяемом этих заразных элементов и ищут возбудителей болезни.
Более эффективный, но вместе с тем более дорогой и сложный анализ – обнаружение трепонем после предварительной обработки их флуоресцентными антителами. Это вещества, «прилипающие» к микробам и образующие «свечение» их в поле микроскопа.
Чувствительность методов снижается при большой длительности болезни, обработке язв и сыпи антисептиками, а также после лечения.
Биологический метод диагностики RIT высокоспецифичен, но дорог, а результат получается лишь через долгое время, когда у зараженного животного разовьется заболевание. В настоящее время метод практически не используют, хотя он практически самый точный из всех. Отличный анализ крови на сифилис для обнаружения генетического материала трепонем – ПЦР. Единственное его ограничение – относительная дороговизна диагностики.
Серологические методы
Нетрепонемные тесты
РСКк и РМП
Самый известный из этих анализов – реакция Вассермана. Это способ быстрой диагностики (экспресс анализ на сифилис), основанный на сходной реакции антител из крови больного человека на сами трепонемы и на кардиолипин, полученный из бычьего сердца. В результате такого взаимодействия антител и кардиолипина образуются хлопья.
В России данный анализ практически не используется. Его заменила реакция микропреципитации. Недостатком метода является его низкая специфичность. Ложноположительный анализ крови на сифилис встречается при туберкулезе, болезнях крови, системной красной волчанке, при беременности, после рождения ребенка, во время менструального кровотечения и во многих других случаях. Поэтому при положительной RW применяют более точные методы диагностики.
После заражения реакция становится положительной через два месяца. При вторичном сифилисе она положительна практически у всех больных.
Сходный механизм имеет реакция микропреципитации, заменившая реакцию Вассермана. Она недорога, легко исполнима, быстра в оценке, но тоже может давать ложноположительный результат. Эти два теста используют как скрининговые.
РМП становится положительной через месяц после появления твердого шанкра. Для ее проведения используется кровь из пальца.
Может ли анализ на сифилис быть ошибочным? Конечно, да, особенно при использовании нетрепонемных тестов.
Причины острых ложноположительных проб при использовании РМП:
- острые инфекционные заболевания;
- воспаление легких;
- инфаркт миокарда;
- инсульт;
- травмы и отравления.
Хронические ложноположительные результаты часто возникают при следующих болезнях:
- туберкулез;
- бруцеллез;
- лептоспироз;
- саркоидоз;
- ревматические болезни;
- инфекционный мононуклеоз;
- злокачественные опухоли;
- сахарный диабет;
- цирроз печени и другие.
Если возникают спорные анализы – применяют трепонемные серологические тесты для уточнения диагноза.
RPR и проба с толуидиновым красным
Тест быстрых плазменных реагинов (анализ на сифилис rpr) – еще одна разновидность реакции с кардиолипиновым антигеном. Ее используют в следующих случаях:
- скрининг населения;
- подозрение на сифилис;
- обследование доноров.
Упомянем еще и пробу с толуидиновым красным. Все эти способы используются для оценки эффективности лечения. Они являются полуколичественными, то есть уменьшаются при выздоровлении и возрастают при рецидиве инфекции.
Отрицательные результаты нетрепонемных тестов с большой вероятностью свидетельствуют, что сифилиса у обследуемого нет. Поэтому нетрепонемные тесты применяются для оценки излеченности. Первый такой анализ следует сдать через 3 месяца после завершения курса лечения.
Трепонемные тесты
Трепонемные тесты основаны на использовании трепонемных антигенов, что значительно повышает их диагностическую ценность. Они применяются в следующих ситуациях:
- положительный скрининг-тест (реакция микропреципитации);
- распознавание ложноположительного результата скрининга;
- подозрение на сифилис;
- диагностика скрытых форм;
- ретроспективная постановка диагноза, когда пациент перенес заболевание ранее.
РИТ и РИФ
Самые качественные (высокочувствительные и высокоспецифичные) – РИТ и РИФ. Недостатки этих методов – сложность, длительность, необходимость современного оборудования и обученного персонала. У большинства вылеченных пациентов трепонемные тесты остаются положительными в течение многих лет, и поэтому не могут применяться как критерий излеченности.
РИФ становится положительной через два месяца после заражения. Если она отрицательная – пациент здоров, если положительная – высока вероятность заболевания.
РИТ особенно часто применяется при положительных результатах РМП, чтобы исключить или подтвердить заболевание. Она высокочувствительна и позволяет с большой точностью сказать, есть у пациента сифилис, или нет. Однако анализ становится положительным только через три месяца после инфицирования.
Иммуноблоттинг
Иммуноблоттинг еще более чувствителен, чем РИФ, но менее чувствителен, чем РПГА. Его используют нечасто, в основном для диагностики сифилиса новорожденных.
Перечисленные методы не подходят для скрининга, то есть быстрого выявления болезни, потому что становятся положительными позднее, чем реакция микропреципитации.
ИФА и РПГА
Современные высокоинформативные стандартизированные методы диагностики сифилиса – ИФА и РПГА. Они недороги, быстро ставятся и проверяются в больших количествах. Эти тесты могут быть применены для подтверждения диагноза.
Анализ РПГА становится положительным при первичном серопозитивном сифилисе, то есть при появлении твердого шанкра (через месяц после заражения). Особенно он ценен при диагностике поздних, и врожденных форм заболевания. Однако РПГА должна быть дополнена как минимум одним нетрепонемным и одним трепонемным тестом для точности диагностики. Такой тройной тест – самый достоверный анализ на сифилис. Недостаток РПГА – сохранение положительной реакции в течение долгого времени, что не позволяет применять тест как критерий излеченности.
Анализ ИФА на сифилис становится положительным уже через три недели после заболевания. Минусом ИФА является то, что он бывает ложный. Ложноположительная реакция возникает при системных заболеваниях, нарушениях обмена веществ, а также у детей, рожденных больными матерями.
Недостатки серологических методов привели к разработке самых совершенных способов, не дающих ошибок, но пока дорогих и редко применяемых – газовой хроматографии и масс-спектрометрии.
Алгоритм диагностики сифилитической инфекции на разных стадиях
В первичном серонегативном периоде (до 2 месяцев после заражения) проводят поиск трепонемы в темном поле или с использованием флюоресцирующих антител.
При первичном серопозитивном, вторичном и скрытом сифилисе используют РМП и ИФА, а как подтверждающий тест – РПГА.
У пациентов с рецидивами вторичного сифилиса исследуют элементы сыпи, пытаясь выделить из них трепонемы для микроскопического изучения.
В третичном периоде РМП у трети больных отрицательная. ИФА и РПГА положительные, но они могут свидетельствовать не о третичном сифилисе, а о перенесенном ранее заболевании. Слабоположительный анализ скорее говорит о выздоровлении, чем о третичном сифилисе.
При выставлении диагноза «врожденный сифилис» принимают во внимание наличие болезни у матери, разницу в показателях РМП у матери и ребенка, положительные ИФА и РПГА у новорожденного, иммуноблоттинг.
Обязательно обследуются на сифилис беременные женщины, особенно те, у которых уже были роды мертвым плодом, неразвивающаяся беременность, ранние выкидыши. Им проводится РМП, ИФА, РПГА. Обследуют на наличие заболевания и перед прерыванием беременности.
Правила получения анализа на сифилис
Чтобы получить направление в лабораторию, нужно посетить своего участкового терапевта. Если хочется сдать анализ быстрее, это можно сделать в частной лаборатории без направления (например, лаборатории Инвитро анализ на сифилис делают быстро и анонимно).
Как сдать анализ на сифилис? Кровь сдается с утра, натощак. Можно пить лишь чистую воду.
Подготовка: за два дня до сдачи анализа нужно исключить из питания жирную пищу и особенно алкоголь.
Как берут анализ? обычным способом из пальца или локтевой вены.
Сколько делается анализ на сифилис? Результат пробы обычно бывает готов уже на следующий день. Расшифровка может быть взята у врача или в лаборатории.
Сколько действителен анализ? На срок до трех месяцев.
Анализ спинно-мозговой жидкости
В некоторых случаях для диагностики нейросифилиса берут анализ ликвора.
Это обследование назначается всем пациентам со скрытым сифилисом, если у них существуют признаки патологии нервной системы, а также при скрытом и позднем нейросифилисе.
Кроме того, анализ выполняется всем пациентам после выздоровления при сохранении у них положительных серологических реакций. Мы уже писали в нашей статье, что такое явление случается нередко.
Анализ ликвора при сифилисе назначает и проводит только врач.
Спинно-мозговую жидкость получают путем прокола между двумя позвонками поясничного отдела. Ее собирают по 4 мл в две пробирки. Затем место пункции обрабатывается йодом и накрывается стерильной повязкой. После пункции пациент должен лежать на животе с приподнятым ножным концом кровати не менее 3-4 часов, затем он может лечь на бок. Постельный режим после пункции показан в течение двух суток.
Ликвор из первой пробирки исследуют с помощью общепринятых реакций на содержание белка, клеток, определение признаков менингита (воспаления мозговых оболочек).
Спинно-мозговая жидкость из второй пробирки исследуется на содержание антител к трепонеме с помощью реакции Вассермана, РМП, РИФ и РИБТ, о которых мы говорили выше.
По степени выраженности нарушений различают четыре вида изменений ликвора. Анализируя их, врач может сделать вывод о наличии разных форм поражения нервной системы (сосудистый нейросифилис, сифилитический менингит, менинго-васкулярный сифилис, спинная сухотка, поздний мезенхимальный нейросифилис), а также о выздоровлении больного с положительными серологическими тестами.
Серологические тесты на выявление сифилиса основаны на обнаружении антител, которые образуются в отношении трепонемы, инфицировавшей весь организм или пока что его определенный участок. Исследования медиков утверждают, что один из трех обследуемых пациентов, получивших диагноз ложноположительный сифилис, может быть и не заражен этим заболеванием. Примерно 32% с "позитивным" результатом вначале, лишились своего диагноза после вторично проведенного лабораторного исследования. Это означает, что тысячи пациентов могли бы подвергнуться ненужному лечению, если бы не прошли дополнительное обследование.
В медицине сифилис ложноположительный определяется в том случае, когда анализы утверждают наличие антител, а заболевание на самом деле отсутствует. Тесты на выявление данного заболевания классифицируются по типу использованию антигена. Они могут быть нетрепонемные и трепонемные. К сожалению, анализ крови очень чувствителен к наличию в ней антител, поэтому иногда он выдает ложную информацию при наличии других заболеваний.
При проведении нетрепонемных тестов в крови идет поиск антител к кардиолипину. Этот компонент - результат разрушения тканей, которое бывает при многих заболеваниях. Его присутствие указывает не обязательно на наличие сифилиса, а только на процесс разрушения, который начался в организме. Получив положительный ответ, надо искать возбудитель путем проведения повторного тестирования трепонемным способом, который ложным бывают очень редко.
Ложный ИФА - явление исключительное
Ложноположительные реакции RW хорошо известны, в то время как ложноположительный ИФА на сифилис бывает крайне редким, потому что этот анализ проводится для подтверждения диагностики. Несмотря на то, что ИФА имеет степень правдивости около 98%, ложноположительные результаты на сифилис могут быть получены при наличии у пациента некоторых острых или хронических заболеваний. Среди них отмечается смешанное заболевание соединительной ткани, аутоиммунные заболевания, сахарный диабет, цирроз печени на фоне алкоголизма, вирусные инфекции и беременность. При проведении ИФА исследований используются самые современные препараты и реактивы. Это приводит к тому, что ложноположительный ИФА можно получить даже после излечения болезни по причине сверх высокой чувствительности реактивов.
Причины ложноположительного теста
Врачи, сталкивающиеся с различными проявлениями болезней, указывают на биологические ложные предпосылки. Доля людей, получивших ложноположительный тест на сифилис, имела на самом деле волчанку. В эту же группу относятся беджель и возвратный тиф, лептоспироз, лептоспир. Тем не менее, получив подобное заключение, врач сразу не может констатировать наличие болезни, если при этом еще и внешние признаки отсутствуют. Требуется повторное обследование. Отсутствие симптомов во второй раз и отрицательный результат говорит лишь о том, что человек получил ошибочный приговор. Осталось найти альтернативное заболевание, которое пока умело прячется и не дает себя обнаружить визуально.
Ложноположительная реакция на сифилис возникает при отсутствии болезни под действием целого ряда факторов. При получении таких данных не стоит пугаться – ряд тестов имеет погрешность, и потому они могут показывать неправильный результат.
Анализы на сифилис бывают двух основных типов: трепонемные и нетрепонемные.
Первые справедливо считаются более точными, поскольку они рассчитаны на определение ДНК бледной спирохеты в организме. Эти методики направлены непосредственно на определение самой трепонемы или продуктов её жизнедеятельности. Они показывают высокую эффективность за счёт большой точности. Но проводятся такие анализы не во всех клиниках, поскольку для этого необходимо специальное оборудование и реактивы. Поэтому они не применяются в скрининговых исследованиях. К наиболее популярным трепонемным методам относят:
- Реакция иммунофлюорисценции (РИФ). Определяет непосредственно антитела и антигены. По полученной информации можно не только установить сифилис, но и выявить его стадию.
- Реакция пассивной гемоагглютинации (РПГА). Выявляет склеивание красных кровяных клеток (эритроцитов), возникающее из-за накопления на поверхности специализированных антител.
- Иммуноферментный анализ (ИФА). Устанавливает наличие определенных антител, которые вырабатываются на разных стадиях болезни. По соотношению количества этих антител и устанавливается стадия болезни.
- Полимеразная цепная реакция (ПЦР). Направлена на выявление участков бактериальной ДНК в плазме крови.
Нетрепонемные обследования ещё называют неспецифическими. Они направлены на определение антител, которые формируются в качестве ответа на заражение. То есть они выявляют возбудителя косвенно. Но такие исследования имеют свои преимущества:
- возможность быстро получить результаты;
- относительная дешевизна;
- выполнение на стандартном лабораторном оборудовании.
Такой анализ ориентирован на обнаружении в плазме человека специализированного белка, возникающего из-за разрушения тканей бледной трепонемой. К основным методикам такого типа относят:
- реакцию Вассермана;
- микроскопический тест;
- макроскопический тест.
Важно! Погрешность в таких методах диагностики достигает 20%. Поэтому не стоит паниковать при получении положительного заключения.
Основные причины явления
Погрешность при выполнении трепонемных тестов составляет максимум 5%. Нетрепонемные гораздо чаще показывают ложный результат. Наиболее распространёнными причинами такого явления можно назвать:
- злокачественные новообразования;
- заражение палочкой Коха (туберкулёз) в любой форме;
- патологии энтеровирусной природы;
- инфекционный мононуклеоз;
- гепатиты всех видов;
- пневмония;
- болезнь Лайма;
- алкоголизм;
- наркомания;
- дерматиты;
- вакцинация, которая выполнена менее, чем за 21 день до анализа;
- диабет всех типов;
- возраст старше 70 лет;
- беременность.
При выявлении некорректных результатов не стоит пугаться – врач обязательно назначит повторное исследование. Обычно назначается повторный нетрепонемный тест через 2-3 недели. Если он снова показывает положительный ответ, требуется выполнение высокоточного трепонемного исследования.
