Mi a jobb a hemagglutináció cauterizálása vagy eltávolítása. Szalmonella és tífusz, paratífusz. Az influenzavírusok jellemzői. az influenza epidemiológiája és diagnosztikája. RTG használata influenzavírusok szerotipizálására. speciális megelőzésre és kezelésre szolgáló gyógyszerek

A megfelelően elvégzett vérvizsgálat segít kimutatni a szervezetben a különböző komplex betegségek kórokozóit azok fejlődésének korai szakaszában, sőt esetenként még a betegség klinikai tüneteinek megjelenése előtt. Nagyon gyakran az orvosok agglutinációs reakció tesztet írnak elő a betegeknek. Ezután kitaláljuk, mi ez - RPGA vérvizsgálat, mikor használják, és mit tud mondani nekünk?

Működési elve

A közvetett hemagglutinációs reakció (más néven passzív hemagglutinációs reakció, más néven RPHA, RNGA) akkor következik be, amikor az antigént adszorbeált vörösvértesteket az adott antigénnek megfelelő immunszérum hatásának teszik ki.

Tanulmányok bizonyították, hogy ez a módszer szignifikánsan felülmúlja más szerológiai teszteket a specificitás és az érzékenység tekintetében. Ezért gyakran használják baktériumok vagy rickettsia által okozott betegségek kimutatására. Az ilyen elemzéshez használt antigének lehetnek bakteriális kivonatok, különféle mikrobák tisztított antigénjei és bakteriális vakcinák komponensei.

Miután egy kórokozó baktérium bejut az emberi szervezetbe, specifikus és nem specifikus antitesteket kezd termelni, specifikus immunválaszt képezve. A Gram-negatív spirocheták közé tartozó Treponema pallidum kórokozója által okozott szifilisz esetében az emberi vérben nem treponemális vagy treponemális antitestek képződnek. A laboratóriumi diagnosztikai vizsgálatok az azonosításukon alapulnak, amelyek megerősítik vagy cáfolják a vírus kórokozójának jelenlétét a szervezetben.

Az RPHA-val a vörösvértestek, amelyek felületén adszorbeáltak a treponema pallidum antigéneket, amikor szifilisszel fertőzött személy anyagából származó, treponema elleni antitesteket tartalmazó szérumot adnak hozzá, egymáshoz tapadnak, azaz agglutinálódnak.

A tanulmány megbízhatósága

Fontos megjegyezni, hogy a sápadt spirocheta elleni antitestek a fertőzés után 2-4 héttel kezdenek megjelenni a fertőzött emberek szervezetében, és bizonyos esetekben ez az időszak akár 6 hétig is meghosszabbodik.

Emiatt az RPHA-elemzés érzékenysége a betegség elsődleges stádiumában körülbelül 86%, ami jelentősen gyengébb, mint a betegek diagnosztizálásának pontossága a következő két szakaszban. Az elemzés érzékenysége az ilyen betegeknél, valamint a látens szifilisz hordozóinál eléri a 99-100% -ot.

A passzív hemagglutinációs reakció azonban nagyon magas specificitással rendelkezik, amely eléri a 96-100%-os szintet.

Ez lehetővé teszi, hogy ezt a vizsgálatot egy előzetes nem-treponemális vizsgálat pozitív reakciója, például hólyagrák mikroprecipitációs reakciója esetén a diagnózis megerősítésére használják.

Tekintettel arra, hogy a treponemális tesztek, köztük az RPGA szenzitivitása jelentősen meghaladja a nem treponemális módszerek érzékenységét, az ilyen vizsgálatok egyre inkább előírtak a szifilisz szűrővizsgálatok során. Ha azonban a szűrővizsgálat pozitív reakciója érkezik, a diagnózis tisztázásához egy másik specifikus (treponemális) elemzésre van szükség, de nem RPGA-ra.

Elemzési átirat

Ha a szifiliszben fertőzött személy anyagából származó treponema elleni antitesteket tartalmazó szérumot adnak a reagenshez, amellyel a vizsgálatot végzik, a vörösvérsejtek agglutinálódnak, aminek következtében kicsapódnak.

A ragadós vörösvértestek számát a szérumban lévő antitestek szintje befolyásolja. Ezért a passzív hemagglutináció nemcsak az antitestek jelenlétét mutatja meg, hanem lehetővé teszi azok mennyiségének meghatározását is. A vizsgálat eredményét az antitest-titer szintje mutatja.

A pozitív reakció a kórokozó jelenlétét jelzi a páciens testében. A diagnosztikai folyamat során azonban előfordulhatnak álpozitív reakciók, amelyek száma statisztikailag nem haladja meg az összes vizsgálat 0,05-2,5%-át.

Pozitív RPHA-reakció szifiliszben nem fertőzött embereknél fordulhat elő, ha:

szisztémás kötőszöveti betegségek,
a beteg vérében a Treponema pallidumhoz hasonló kórokozókkal szembeni antitestek,
fiziológiás patológiák, például szívinfarktus,
hepatitis B vagy C,
onkológiai betegségek,
tífusz, leptospirózis, tuberkulózis,
HIV fertőzések,
kullancs által terjesztett etiológiájú borreliosis,
kiterjedt sérülések vagy törések,
terhesség,
kábítószer-injekciózás esetén.

A legtöbb esetben az álpozitív reakciókat alacsony titer kíséri. A magas titerek a betegség másodlagos stádiumára és a korábban látens szifiliszre jellemzőek. Azonban rosszindulatú daganatos betegeknél hamis pozitív reakció során is megjelenhetnek.

Azoknál az embereknél, akiknek legalább egyszer volt szifilisze, az RPHA-reakció életük végéig pozitív marad.

Ritka kivételek lehetnek azok a helyzetek, amikor a betegséget a fejlődés korai szakaszában azonosították, majd intenzív és hatékony terápiát végeztek. Ezért az RPGA elemzés nem használható a gyógyulás dinamikájának értékelésére vagy a betegség korai vagy késői stádiumainak összehasonlító diagnózisára.

Pozitív reakció esetén meg kell vizsgálni a beteg családtagjait és azokat, akik szexuális kapcsolatban álltak vele.

Negatív reakció a következő esetekben fordulhat elő:

az embernek nincs szifilisze,
helytelenül vettek vért a vizsgálathoz,
2-4 hét telt el a fertőzés óta, és az antitestek termelése még nem kezdődött el.

Mindenesetre a vizsgálat eredményét további laboratóriumi és anamnesztikus mutatókkal együtt kell értékelni.

Kinek ajánlott az elemzés?

Az orvos az alábbi esetekben utalhatja a betegeket véradásra RPHA-hoz:

a szifilisz klinikai megnyilvánulásai esetén: fekélyes kiütések, megnagyobbodott nyirokcsomók, diffúz alopecia és mások,
ha fertőzésre gyanakszik, ha már beteg emberekkel érintkezik,
vért adni kívánó donorok,
éves megelőző vizsgálaton vagy egészségügyi bizonyítványt kiállító személyek,
pozitív szűrővizsgálattal rendelkező betegek,
fekvőbeteg-kórházban történő kórházi kezelés előtt,
a műtét előtti vizsgálat során,
a szalmonellózis, diftéria, vérhas kórokozóinak azonosítása RPGA módszerrel a megfelelő diagnosztikával.

A vizsgálat elvégzésének eljárása

A páciens által leadott vénás vérmintát vizsgálatra küldik. Annak érdekében, hogy ne kapjon hibás következtetést, a páciensnek kell felelősnek lennie az elemzés előkészítéséért. Annak érdekében, hogy a vizsgálati eredmények megbízhatóak legyenek, tartsa be a következő ajánlásokat:

A vizsgálatot csak éhgyomorra szabad elvégezni.
Az elemzés napján szénsavmentes ásványvizet fogyaszthat minimális mennyiségben.
Az elemzés előtt legalább 30 percig nem szabad dohányozni, de jobb, ha ezt az időt több órára növeli.
Az alkoholtartalmú italok fogyasztására közvetlen tilalom vonatkozik.
Azoknak a betegeknek, akiknek rendszeresen kell gyógyszert szedniük, értesíteniük kell a vizsgálatra utaló orvosukat.
Ha rosszul érzi magát, vagy rosszul érzi magát, értesítenie kell a vérvételt végző ápolónőt vagy a vizsgálatot végző ambulancia orvosát.

Legyen felelős nemcsak a vizsgálat helyének kérdésében, hanem a vizsgára való felkészülésben is.

Egyéb fertőző betegségek diagnosztizálása

Nem szabad azt gondolni, hogy egy olyan vizsgálatot, mint az RPGA, csak a szifilisz kórokozójának azonosítására lehet elvégezni a szervezetben.

A szalmonelladiagnosztikával végzett elemzés lehetővé teszi az emésztőrendszer fertőzésének - a szalmonella - jelenlétének kimutatását. A fertőzést követő negyedik naptól kezdve a szervezet a Salmonella antigénekkel szembeni antitesteket termel, amelyek azonosításában az RPGA módszer segít. A negatív eredmény a fertőzés hiányát jelzi, és a pozitív titer, amely 1:200-ról 1:800-ra nő az akut fázisban, jelzi a jelenlétét.

Az RPGA diftéria markerrel történő végrehajtásának módszere lehetővé teszi a diftéria diagnosztizálását és az immunitás felmérését a vakcinázás után. Az immunrendszer már a fertőzést követő napon elkezdi termelni az antitesteket, és néhány hétig a szervezetben marad. Ennek az elemzésnek az érzékenysége jobb, mint a bakteriológiai kutatási módszer. Az 1:80-as titer megerősíti a diftéria jelenlétét a szervezetben.

Az RPHA vérhasmarkere a legpontosabban kimutatja a shigellosist (bakteriális vérhas), még a bakteriális tenyésztéssel végzett laboratóriumi diagnosztikai módszerhez képest is. Ha a beteg nem részesül minőségi kezelésben, a betegség krónikus folyamattá fejlődik, melyben gyakran előfordulnak visszaesések. Az elemzés lehetővé teszi a hasmenés akut és krónikus fázisainak diagnosztizálását, a vérhas kórokozójának azonosítását, a bakteriális shigellosis és a vastagbélrák, az endokrin rendellenességek vagy a vastagbélgyulladás megkülönböztetését. A negatív reakció a bacilus hiányát jelzi, jelenlétét gyermekeknél 1:80, felnőtteknél 1:320 titer igazolja.

A kanyaró markerrel végzett vizsgálat lehetővé teszi a kanyaró betegség meghatározását. Egy ilyen vizsgálat a kanyaró diagnosztizálására gyakran végzett RTGA-analízis alternatívája lehet.

Szóval, RPGA vérvizsgálat - mi ez? Összefoglalva, nyugodtan kijelenthetjük, hogy ez egy modern, rendkívül érzékeny és megbízható módszer különféle bakteriológiai etiológiájú betegségek diagnosztizálására.

Kapcsolatban áll

hemagglutinációs gátlási reakció (HAI)

Az RHA a vörösvérsejtek azon képességén alapul, hogy összetapadnak, amikor bizonyos antigének adszorbeálódnak rajtuk. A hemagglutináció vizsgálatához allantois- és magzatvizet, csirkeembriók chorioallantois membránjának szuszpenzióját, vírusokkal fertőzött állatok tenyészeteiből vagy szerveiből származó szuszpenziókat és kivonatokat, valamint natív fertőző anyagot használnak. Az RGA nem szerológiai jellegű, mivel immunszérum részvétele nélkül fordul elő, és az antigén munkahígításának kiválasztására szolgál az RGA végrehajtásához, vagy egy antigén (vírus) jelenlétét a vizsgálati anyagban (például influenza esetén). A reakció során állatok, madarak és emberek I. vércsoportjába tartozó vörösvértesteket használnak (0).

A hozzávetőleges RGA beállításához egy csepp 5%-os vörösvértest-szuszpenziót és egy csepp vizsgálati anyagot viszünk egy tárgylemezre, és alaposan összekeverjük. Ha az eredmény pozitív, 1-2 perc elteltével makroszkóposan megfigyelhető az eritrociták pelyhes agglutinációja.

A polisztirol lemezek üregeiben az RGA széthajtott sorban történő felállításához a vizsgált anyagból kétszeresen növekvő hígításokat készítünk fiziológiás oldatban 0,5 ml térfogatban. Minden kémcsőbe 0,5 ml 0,25-1%-os vörösvértest-szuszpenziót adunk. Az eredményeket a kontroll (vörösvértestek + sóoldat) vörösvértestek teljes ülepedése után vesszük figyelembe. A reakciót az eritrocita üledék természete veszi figyelembe. Pozitív esetekben az agglutináció mértékét pluszjelekkel jelöljük. A kémcső (ernyő) alját lefedő, ragacsos vörösvértestek vékony filmjeként megjelenő reakciót négy pluszjellel értékeljük, ha a filmben hézagok vannak, a csipkés film jelenléte A ragacsos vörösvértestek élei két pluszjellel vannak jelölve, a vörösvértestek pelyhes üledéke, amelyet vörösvértestek agglutinált csomóinak zónája vesz körül, egy plusznak felel meg. A kontrolltól megkülönböztethetetlen, élesen definiált eritrocita üledék az agglutináció hiányát jelzi. A titert a vizsgálati anyag azon maximális hígításának tekintjük, amely az eritrociták két plusz agglutinációját okozta.

Ha az RHA eredmény pozitív, a vizsgálatot folytatják, meghatározva az izolált vírus típusát típusspecifikus szérummal végzett hemagglutinációs gátlási reakcióval.

Az RTGA az antiszérum azon tulajdonságán alapul, hogy elnyomja a vírus hemagglutinációját, mivel a specifikus antitestek által semlegesített vírus elveszíti a vörösvérsejtek agglutinációjának képességét. A vírusok kísérleti tipizálásához az üvegen végzett csepp módszert alkalmazzák. Az izolált vírus típusának végleges megállapításához és a szérumban lévő antitestek titrálásához egy kiterjesztett RTGA-t helyezünk kémcsövekbe vagy lyukakba. Ebből a célból fiziológiás oldatban kétszeres hígítású szérumot készítünk, és 0,25 ml-re adagoljuk. A szérumhígításokhoz adjunk egy csepp vírust tartalmazó anyagot és egy csepp 1%-os vörösvérsejt-szuszpenziót.

Amikor RTGA-t használunk a vírus típusának meghatározására, típusspecifikus szérumokat használunk, amelyeket az antigén munkahígításának azonos térfogatához adunk. Az izolált vírus típusát az a specifikus immunszérum határozza meg, amely a vírus elleni antitestek legmagasabb titerét mutatta.

Az RGA-t és az RTGA-t széles körben használják vírusfertőzések (kullancsencephalitis, influenza stb.) diagnosztizálására, specifikus antitestek kimutatására és számos vírus azonosítására antigénjeik alapján.

Immunfluoreszcens reakció (RIF)

A RIF baktériumok, rickettsia és vírusok antigénjeinek és fluoreszcens festékekkel jelölt specifikus antitestekkel (fluoreszcein-izotiocianát, rodamin, B-izoticianát, lisszatin-rodamin B-200, szulfoklorid stb.) kombinációján alapul, amelyek reaktív csoportokkal (szulfoklorid-ciánnal) rendelkeznek. stb.) . Ezek a csoportok az antitestmolekulák szabad aminocsoportjaival egyesülnek, amelyek nem veszítik el specifikus affinitásukat a megfelelő antigénhez, ha fluorokrómmal kezelik. A keletkező AG–AT komplexek fluoreszcens mikroszkóp alatt jól látható, erősen világító struktúrákká válnak (48. ábra). A RIF képes kimutatni kis mennyiségű bakteriális és vírusantigént. A RIF módszer két változatban használatos: direkt és indirekt módszerrel.

A közvetlen módszer egy antigén és egy jelölt antitest közvetlen kombinációján alapul. Az indirekt módszer az AG–AT komplex fluoreszcens festékek segítségével történő lépésről lépésre történő kimutatásán alapul. Az első szakasz egy specifikus antigén immunkomplexeinek kialakulása specifikus antitestekkel. A második lépés ennek a komplexnek az azonosítása jelzett antigammaglobulinnal történő kezeléssel.

A RIF előnye az egyszerűség, a nagy érzékenység és az eredmények elérésének gyorsasága. A RIF-et influenza, vérhas, malária, pestis, tularémia, szifilisz stb. korai expressz diagnosztizálására használják. Fluoreszcens mikroszkópot használnak az ilyen vizsgálatok elvégzésére.

Radioimmunoassay (RIA)

A RIA az egyik legérzékenyebb immundiagnosztikai módszer. A hepatitis B vírus antigén kimutatására szolgál vírusos hepatitisben szenvedő betegeknél. Ehhez referencia szérumot (a hepatitis B vírus elleni antitesteket tartalmazó szérumot) adnak a vizsgált szérumhoz. A keveréket 1-2 napig 40 0 C-on inkubáljuk, majd referencia antigént (125 J izotóppal jelölt antigént) adunk hozzá, és az inkubálást további 24 órán át folytatjuk. A referencia szérumfehérjék ellen kicsapó antiimmunglobulinokat adnak a kapott antigén-antitest komplexhez, ami csapadék képződéséhez vezet (49. ábra). Az eredményt a számláló által rögzített csapadékban lévő impulzusok jelenléte és száma veszi figyelembe. Ha van a tesztszérumban olyan antigén, amely specifikus antitestekhez kötődött, az utóbbiak nem lépnek kölcsönhatásba a jelölt antigénnel, és ezért nem mutatható ki a csapadékban. Így a RIA a kimutatott antigén és ismert mennyiségű jelölt antigén és az antitestek aktív központjai közötti kompetitív kölcsönhatás elvén alapul.

Enzimhez kötött immunszorbens módszer (ELISA)

A módszert antigének kimutatására használják a megfelelő antitestek felhasználásával, amelyek egy tag enzimhez (torma-peroxidáz, b-galaktóz vagy alkalikus foszfatáz) konjugáltak. Az antigén és az enzimmel jelölt immunszérum kombinálása után szubsztrátot és kromogént adunk a keverékhez. . A szubsztrátot az enzim hasítja, és bomlástermékei a kromogén kémiai módosulását okozzák. Ugyanakkor a kromogén megváltoztatja a színét – a szín intenzitása egyenesen arányos a megkötött antigén- és antitestmolekulák számával (50. ábra).

A legelterjedtebb a szilárd fázisú ELISA, amelyben az immunreakció egyik komponense (antigén vagy antitest) szilárd hordozón adszorbeálódik. A polisztirol mikropaneleket szilárd hordozóként használják. Az antitestek meghatározásakor a páciens vérszérumát, az enzimmel jelölt antiglobulin szérumot, valamint az enzim- és kromogénszubsztrát oldatok keverékét egymás után hozzáadják a szorbeált antigént tartalmazó üregekhez. Minden alkalommal, amikor újabb komponenst adunk hozzá, a meg nem kötött reagenseket alapos mosással távolítjuk el a lyukakból. Ha az eredmény pozitív, a kromogén oldat színe megváltozik.

A szilárd fázisú hordozó nemcsak antigénnel, hanem antitesttel is érzékenyíthető. Ezután a kívánt antigént hozzáadjuk a szorbeált antitestekkel ellátott üregekbe, az enzimmel jelölt antigén elleni immunszérumot, majd az enzim és a kromogén szubsztrát oldatainak keverékét.

Az ELISA-t vírusos és bakteriális kórokozók által okozott betegségek diagnosztizálására használják.

SZAKASZ VII. A VIRUSOLÓGIA ALAPJAI

A laboratóriumban két különböző hatásmechanizmusú hemagglutinációs reakciót alkalmaznak.

Az első RGA szerológiai. Ebben a reakcióban a vörösvérsejtek agglutinálódnak, amikor kölcsönhatásba lépnek a megfelelő antitestekkel (hemagglutininekkel). A reakciót széles körben használják vércsoportok meghatározására.

A második RGA nem szerológiai. Ebben a vörösvértestek tapadását nem az okozza

antitestek, hanem a vírusok által alkotott speciális anyagok. Például az influenzavírus a csirkék és a tengerimalacok vörösvérsejtjeit, a poliovírus pedig a juhok vörösvérsejtjeit agglutinálja. Ez a reakció lehetővé teszi egy adott vírus jelenlétének megítélését a vizsgált anyagban.

A reakciót kémcsövekben vagy speciális lyukakkal ellátott lemezeken hajtják végre. A vírus jelenlétére vizsgált anyagot izotóniás oldattal 1:10-től 1:1280-ig hígítjuk; Mindegyik hígításból 0,5 ml-t keverünk össze azonos térfogatú 1-2%-os vörösvérsejt-szuszpenzióval. A kontrollban 0,5 ml eritrocitát összekeverünk 0,5 ml izotóniás oldattal. A csöveket 30 percre termosztátba helyezzük, és a lemezeket 45 percig szobahőmérsékleten hagyjuk.

Az eredmények elszámolása. Ha a reakció pozitív, a kémcső vagy a lyuk alján vörösvértest-üledék kacskaringós szélekkel ("esernyő") jelenik meg, amely befedi a mélyedés teljes alját. Ha az eredmény negatív, a vörösvértestek sűrű, sima szélű üledéket alkotnak ("gomb"). Ugyanennek az üledéknek kell lennie a kontrollban. A reakció intenzitását „+” jelekkel fejezzük ki. A vírustiter annak az anyagnak a maximális hígítása, amelyben agglutináció történik.

Hemagglutináció-gátló reakció

Ez egy szerológiai reakció, amelyben a vírussal (antigénnel) kölcsönhatásba lépő specifikus antivirális antitestek semlegesítik azt, és megfosztják a vörösvértestek agglutinációjának képességétől, azaz gátolják a hemagglutinációs reakciót. Ez a reakció lehetővé teszi a vírusok típusának és típusának meghatározását.

Reakció beállítása. 0,25 ml antivirális szérumot keverünk össze azonos térfogatú vírust tartalmazó anyaggal. A keveréket összerázzuk, és 30 percre termosztátba helyezzük, majd 0,5 ml 1-2%-os vörösvérsejt-szuszpenziót adunk hozzá.

Az eredmények elszámolása. Ha a kísérletet helyesen hajtják végre, egy „gombot” kell kialakítani a szérum és az eritrociták szabályozásában - nincs vörösvértest-agglutináló faktor; az antigénkontrollban „esernyő” képződik - a vírus a vörösvértestek agglutinációját okozta. Ha a szérum homológ a vizsgált vírussal, egy „gomb” keletkezik – a szérum semlegesítette a vírust.

Közvetett hemagglutinációs reakció

A közvetett (passzív) hemagglutinációs reakció (RIHA) azon a tényen alapul, hogy a vörösvértestek, ha a felületükön oldható antigén adszorbeálódik, az adszorbeált antigén elleni antitestekkel való kölcsönhatás során agglutináló képességre tesznek szert.

Reakció beállítása. A szérumot 30 percig 56 °C-on melegítjük, egymás után 1:10-1:1280 arányban hígítjuk, és 0,25 ml-es csövekbe vagy lyukakba öntjük, majd 2 csepp vörösvértestet csepegtetünk a rajtuk adszorbeált antigénekkel.

Vezérlők: vörösvértestek szuszpenziója a rajtuk adszorbeált antigénekkel nyilvánvalóan immunszérummal, vörösvértest-szuszpenzió a rajtuk adszorbeált antigénekkel normál szérummal; normál vörösvértestek szuszpenziója tesztszérummal. Az első kontrollban agglutinációnak kell bekövetkeznie, a másodikban és a harmadikban nem.

Ellenőrző kérdések.

1. Mit jelez a pozitív röntgenanalízis eredménye a vörösvértestek és a vizsgált anyag között a vírus jelenlétére?

2. Bekövetkezik-e a vörösvértestek agglutinációs reakciója, ha vírust és annak megfelelő szérumot adunk hozzájuk? Mi a neve annak a reakciónak, amely felfedi ezt a jelenséget?

GYAKORLATI MUNKA 12. sz.

Komplement rögzítési reakció.

A komplementkötési reakció (FFR) azon a tényen alapszik, hogy egy specifikus antigén-antitest komplex mindig adszorbeálja (megköti) önmagához a komplementet.

Ezt a reakciót széles körben alkalmazzák antigének azonosítására és fertőzések szerodiagnózisára, különösen spirocheták (Wassermann-reakció), rickettsia és vírusok által okozott betegségekre.

Az RKS egy összetett szerológiai reakció. Ez magában foglalja a komplement és két antigén-antitest rendszert. Lényegében két szerológiai reakcióról van szó.

A jobb oldali főrendszer egy antigénből és egy antitestből áll (az egyik ismert, a másik nem). Bizonyos mennyiségű kiegészítőt adnak hozzá. Ha ennek a rendszernek az antigénje és az antitestje egyezik, összekapcsolódnak és egy bókot kötnek. A kapott komplex finoman eloszlik és nem látható.

Ennek a komplexnek a képződését egy második hemolitikus vagy indikátorrendszer segítségével detektáljuk. Tartalmazza a birka vörösvértesteit (antigén) és a megfelelő hemolitikus szérumot (antitest), azaz. kész immunkomplex. Ebben a rendszerben a vörösvértestek lízise csak komplement jelenlétében történhet. Ha a komplementet az első rendszer köti, akkor a második rendszerben nem lesz hemolízis, mert nincs szabad kiegészítés. A hemolízis hiányát (a tubus tartalma zavaros vagy vörösvértest-üledék van az alján) pozitív RSC-eredményként rögzítjük.

Ha az első rendszerben az antigén nem felel meg az antitestnek, akkor az immunkomplex nem képződik, és a komplement szabad marad. Szabadon maradva a bók részt vesz a második rendszerben, hemolízist okozva, az RSC eredménye negatív (a csövek tartalma átlátszó - „lakkozott vér”).

Komponensek, komplement rögzítési reakciók:

1. Antigén - általában lizátum, kivonat, haptén,

ritkábban mikroorganizmusok szuszpenziója.

2. Antitest – a beteg széruma.

3. Komplement - tengerimalac szérum.

4. Antigén - birka eritrociták.

5. Antitest - hemolizin a birka eritrocitáira.

6. Izotóniás oldat.

Tekintettel arra, hogy az RSC-ben nagyszámú összetett komponens vesz részt,

először pontos mennyiségben és egyenlő térfogatban kell titrálni és bevinni a reakcióba: 0,5 vagy 0,25, ritkábban 0,2, 1,25 vagy 1,0 ml (nagyobb térfogat pontosabb eredményt ad). A reakciókomponensek titrálását a kísérlettel azonos térfogatban végezzük, a hiányzó összetevőket izotóniás oldattal pótoljuk.

Vidal reakciója. A betegség második hetétől a fertőző ágens elleni antitestek felhalmozódnak a betegek vérében. Azonosításukra a beteg vérszérumát agglutinációs reakcióban vizsgálják. Az elölt Salmonella tenyészeteket - diagnosztikai anyagokat - használják antigénként.

A Widal-reakció végrehajtásához a páciens szérumát, diagnosztikai készleteket és izotóniás nátrium-klorid oldatot használnak.

Az ujj pulpájából vagy a cubitalis vénából származó vért (2-3 ml) steril csőbe gyűjtjük és a laboratóriumba szállítjuk. A laboratóriumban a kémcsövet termosztátba helyezzük 20-30 percre, hogy alvadék alakuljon ki, majd Pasteur pipettával körbeírjuk a vérrögöt, hogy elválasszuk a kémcső falától, és hidegbe helyezzük. 30-40 percig. A leválasztott szérumot leszívják, és Salmonella typhus és paratífusz láz diagnosztikájával agglutinációs reakció végrehajtására használják. A vér centrifugálható a szérum előállításához.

Fertőző folyamat – tífusz vagy paratífusz – bekövetkezésekor a szervezet O- és H-antitesteket termel a kórokozó ugyanazon antigénjei ellen.

Az O-antitestek először jelennek meg, és elég gyorsan eltűnnek. A H-antitestek sokáig fennmaradnak. Ugyanez történik az oltás során is, ezért az O- és H-antigénnel pozitív Widal-reakció a betegség jelenlétére utal, és csak a H-antigénekkel való reakció léphet fel mind a betegségből felépülteknél (anamnesztikus reakció), mind a betegségből. beoltottak (vakcina reakció). Ennek alapján a Widal-reakciót O- és H-antigénekkel (diagnosztikumok) külön hajtják végre.

Mivel a tífusz és a paratífusz A és B klinikailag hasonlóak, a betegség természetének azonosítása érdekében a beteg szérumát a Salmonella typhus és a paratífusz A és B diagnosztikájával egyidejűleg vizsgálják.

A Widal-reakciót széles körben használják, mivel egyszerű és nem igényel különleges feltételeket.

A reakció kétféleképpen hajtható végre: cseppenkénti és térfogati úton (lásd a 12. fejezetet). A gyakorlatban a volumetrikus módszert gyakrabban használják. Lineáris agglutinációs reakció végrehajtásakor a sorok számának meg kell egyeznie az antigének számával (diagnosztikumok). A betegség kórokozójának azt a mikroorganizmust tekintjük, amelyből a diagnosztizáló anyagot a beteg széruma agglutinálta. Néha csoportos agglutinációt észlelnek, mivel a tífusz és a paratífusz kórokozói közös csoportantigénekkel rendelkeznek. Ebben az esetben a reakció eredménye abban a sorozatban, amelyben a szérum nagyobb hígításában agglutinációt észleltek, pozitívnak tekinthető (36. táblázat).

36. táblázat Az agglutinációs reakció lehetséges eredménye

Jegyzet. A gyakorlatban a Widal-reakciót négy diagnosztikai módszerrel hajtják végre: „O” és „H” tífusz, valamint „ON” diagnosztikai diagnosztikai eszközökkel az A és B paratífusz.

Ha az agglutináció csak kis szérumhígításokban fordul elő - 1:100, 1:200, akkor a betegség alatti reakció és a vakcinázási vagy anamnesztikus reakció megkülönböztetése érdekében az agglutinációs reakciót 5-7 nap elteltével megismétlik. Egy betegnél az antitesttiter nő, de beoltott vagy felépült embernél nem változik. Így a vérszérum antitest-titerének növekedése a betegség indikátoraként szolgál.

A Vi antigént hordozó tífusz kórokozók szervezetbe való bejutására válaszul a beteg vérében Vi agglutininek jelennek meg. A betegség 2. hetétől észlelhetők, de titerük általában nem haladja meg az 1:10-et. A Vi-antitestek kimutatása összefügg a tífusz kórokozók szervezetben való jelenlétével, ezért ezen antitestek meghatározása epidemiológiai szempontból kiemelt jelentőségű, mivel lehetővé teszi a baktériumhordozók azonosítását.

Vi-hemagglutinációs reakció. Ez a legérzékenyebb reakció az antitestek kimutatására.

A reakció elve az, hogy az emberi (I. csoport) vagy birka vörösvértestek speciális kezelés után képesek adszorbeálni a Vi-antigént a felületükön, és ezáltal a megfelelő Vi-antitestekkel agglutinálódni képesek.

A felszínen adszorbeált antigénekkel rendelkező vörösvértesteket vörösvértest-diagnosztikának nevezzük.

A Vi-hemagglutinációs reakció végrehajtásához tegye a következőket:

1) a beteg vérszéruma (1-2 ml); 2) eritrocita Salmonella Vi-diagnosticum; H) Vi-szérum; 4) O-szérum; 5) izotóniás nátrium-klorid oldat.

A reakciót agglutinációs csövekben vagy lyukakkal ellátott műanyag lemezeken hajtjuk végre.

A pácienstől ugyanúgy vesznek vért, mint a Vidal-reakciónál. Szérumot kapunk. A szérumból kétszeres sorozathígításokat készítenek, 1:10-től 1:160-ig.

Mindegyik hígításból 0,5 ml-t adunk az üregbe, és 0,25 ml eritrocitadiagnosztikát. A reakciót 0,75 ml térfogatban hajtjuk végre.

A kontrollok a következők: 1) standard agglutináló monoreceptor szérum + diagnosztikum - a reakciónak pozitívnak kell lennie a szérumtiterig; 2) diagnosticum izotóniás nátrium-klorid oldatban (kontroll) - a reakciónak negatívnak kell lennie.

A lyukak tartalmát alaposan összekeverjük, 2 órára termosztátba helyezzük és másnapig (18-24 óráig) szobahőmérsékleten hagyjuk.

A könyvelés az ellenőrzéssel kezdődik. A reakciót a diagnosztika agglutinációjának mértékétől függően értékeljük.

Az eredményeket a négykeresztes rendszer szerint vesszük figyelembe:

A vörösvérsejtek teljesen agglutináltak - üledék a kút alján „esernyő” formájában;

+++ az „ernyő” kisebb, nem minden vörösvérsejt agglutinálódik;

++ az „ernyő” kicsi, a lyuk alján nem agglutinált vörösvértestek üledéke található;

A reakció negatív; a vörösvértestek nem agglutinálódtak és gomb formájában a kút aljára telepedtek.

Ellenőrző kérdések

1. A betegség melyik szakaszában történik a Vidal-reakció?

2. Milyen összetevőkre van szükség a Widal-reakció végrehajtásához?

3. Milyen diagnosztikával hajtják végre a Vidal-reakciót?

4. Melyik szerológiai reakció a legérzékenyebb a tífuszos paratífusz fertőzések diagnosztizálásában?

5. Milyen diagnosztikát használunk a Vi-hemagglutinációs reakció végrehajtása során?

6. Milyen szérummal határozzuk meg a Vi-antigén jelenlétét a vizsgált tenyészetben?

7. Mi a jelentősége a Vi-fagotípus meghatározásának?

Vegye át a Salmonella typhus, a paratífusz A és a paratífusz B O- és H-diagnosztikáját, valamint a tanártól a páciens szérumát. Adja meg Vidal reakcióját.

Kulturális média

Az EMS, Ploskireva és bizmut-szulfit agar táptalajokat az orvosi ipar állítja elő száraz por formájában. Elkészítésük a címkén található utasítások szerint történik: mérjünk ki egy bizonyos mennyiségű port, öntsük fel a megfelelő mennyiségű vízzel, forraljuk fel és öntsük steril Petri-csészékbe.

Russell szerda. Adjunk hozzá 40 g száraz táptalajt 950 ml desztillált vízhez, és adjunk hozzá 5 g tápagart. Forrásig melegítjük, és a porok feloldódnak. 1 g x-et feloldunk 50 ml desztillált vízben. óra glükózt és hozzáadjuk az elkészített keverékhez. A táptalajt 5-7 ml-es steril kémcsövekbe öntjük, folyó gőzzel sterilizáljuk (2 napig 2 percig), és leferdítjük, hogy egy oszlop maradjon. A Russell-féle mannitot és szacharózt tartalmazó tápközeget ugyanígy készítjük el.

Olkenitsky táptalaj száraz agarból. 2,5 g száraz tápagart 100 ml desztillált vízben felolvasztunk. A receptben (címke) megadott összes összetevőt hozzáadjuk az 50 °C-ra hűtött agarhoz. A kémcsövekbe öntött táptalajt áramló gőzzel sterilizáljuk (3 napig, egyenként 20 percig), majd lekaszáljuk. Az elkészített tápközegnek halvány rózsaszínűnek kell lennie.

Kezdőlap → Elemzések → Immunológiai módszer → Hemagglutinációs reakciók (immunológiai módszer)

Agglutinációs reakciók egy reagens (antitestek) és a sejtek felszínén található antigénekkel vagy idegen részecskék kölcsönhatásán alapulnak. Ennek eredményeként nagy aggregátumok képződnek, amelyek kicsapódnak és szabad szemmel is láthatók. Ily módon a vércsoport meghatározása az ABO rendszer szerint történik, a benne lévő Rh faktor jelenléte stb. Ez egy érzékenyebb diagnosztikai módszer a precipitációs reakciókhoz képest, mivel az üledék (agglutinát) térfogata meghaladja a kicsapódik.

Közvetlen hemagglutináció

A közvetlen hemagglutinációs reakciót (DHR) a mikroorganizmusok és a vörösvértestek felszíni antigénjeinek, valamint az ezek elleni antitestek kimutatására használják.
A vizsgálati anyagot (vért) a standard antitesteket tartalmazó szérumhoz adjuk. A közvetlen agglutinációs reakció sebessége a vizsgált anyag mennyiségétől, a szérum mennyiségétől és koncentrációjától, valamint a környezeti hőmérséklettől függ.

Közvetett hemagglutináció

A közvetett hemagglutinációs reakciót az antitestek kimutatására hajtják végre a páciens vérében vörösvértest-diagnosztikával. A reagens vörösvértestekből áll, amelyek felületén antigén található (mikroorganizmusok fehérjéi, toxinok, allergének stb.).
A beteg vérszérumát 0,9%-os nátrium-klorid oldattal hígítjuk, majd vörösvértest-diagnosztikát adunk hozzá és az eredményt monitorozzuk. Ez a rendkívül érzékeny diagnosztikai módszer kis koncentrációban is kimutatja az antigéneket.

Hemagglutinációs reakció (HRA).

A laboratóriumban két különböző hatásmechanizmusú hemagglutinációs reakciót alkalmaznak.

A második RGA nem szerológiai. Ebben a vörösvértestek tapadását nem az okozza

Hemagglutinációs reakció

A vírustiter annak az anyagnak a maximális hígítása, amelyben agglutináció történik.

Hemagglutináció-gátló reakció

Közvetett hemagglutinációs reakció

Reakció beállítása. A szérumot 30 percig 56 °C-on melegítjük, egymás után 1:10-1:1280 arányban hígítjuk, majd 0,25 ml-rel kémcsövekbe vagy lyukakba öntjük, ahol 2 csepp vörösvértestet helyezünk a rajtuk adszorbeált antigénekkel. tette hozzá.

Ellenőrző kérdések.

1. Mit jelez a pozitív röntgenanalízis eredménye a vörösvértestek és a vizsgált anyag között a vírus jelenlétére?

2. Bekövetkezik-e a vörösvértestek agglutinációs reakciója, ha vírust és annak megfelelő szérumot adunk hozzájuk? Mi a neve annak a reakciónak, amely felfedi ezt a jelenséget?

GYAKORLATI MUNKA 12. sz.

Komplement rögzítési reakció.

A komplement fixációs reakció (CFR) azon a tényen alapszik, hogy egy specifikus antigén-antitest komplex mindig adszorbeálja (megköti) önmagához a komplementet.

Az RKS egy összetett szerológiai reakció. Ez magában foglalja a komplement és két antigén-antitest rendszert. Lényegében két szerológiai reakcióról van szó.

Komponensek, komplement rögzítési reakciók:

1. Antigén - általában lizátum, kivonat, haptén,

ritkábban mikroorganizmusok szuszpenziója.

2. Antitest – a beteg széruma.

3. Komplement - tengerimalac szérum.

4. Antigén - birka eritrociták.

5. Antitest - hemolizin a birka eritrocitáira.

6. Izotóniás oldat.

Tekintettel arra, hogy az RSC-ben nagyszámú összetett komponens vesz részt,

Kapcsolódó információ:

Keresés az oldalon:

Az indirekt vagy passzív hemagglutinációs teszt (IRHA vagy RPHA) érzékenyebb és specifikusabb, mint az agglutinációs teszt. Ezt a reakciót két irányban is alkalmazzák.

1) A páciens vérszérumában lévő antitestek kimutatására eritrocita diagnosztikai készleteket használnak, amelyekben az antigén adszorbeálódik a tanninnal kezelt eritrociták felületén. Ezzel a reakcióval kapcsolatban gyakrabban használják az RPGA kifejezést.

A vizsgálandó szérumot a műanyag lemezek üregeiben hígítjuk, és vörösvértest-diagnosztikát adunk hozzá. Pozitív reakció esetén a lyuk falai mentén vékony film jelenik meg „csipke esernyő” formájában, negatív reakcióval, sűrű eritrocita üledék jelenik meg „gomb” formájában;

2) A vizsgált anyagban lévő toxinok és bakteriális antigének kimutatására antitest-vörösvértest-diagnosztikát alkalmaznak, amelyet az antitestek vörösvértesteken történő adszorpciójával nyernek. Ezzel a reakcióval kapcsolatban gyakrabban használják az RNGA kifejezést. Például antitest-diagnosztika segítségével kimutatják a pestisbacillus antigént, a diftéria exotoxint és a botulinum exotoxint.

Mi az eritrocita diagnosztika? Mi az antitest vörösvértest diagnosztika?

Az eritrocita diagnosztikai vörösvérsejtek (tanninnal vagy formalinnal kezelve), amelyeken a baktériumokból kinyert antigéneket adszorbeálják, és RPHA-ban (passzív hemagglutinációs reakciók) használják. Abban az esetben, ha RPGA-t használnak antigén kimutatására a betegek váladékában, szövetekben stb., „antitestdiagnosztikát” alkalmaznak, azaz antitestekkel szenzitizált vörösvértesteket.

Az RNGA-ban a vérszérum antitestek kimutatása egy antigén eritrocita diagnosztikával történik, amely vörösvértestek a rajtuk adszorbeált antigénekkel.

A reakciók felállításának módszertana. Koagglutinációs reakció.

- vörösvértestek rögzítése formaldehiddel vagy glutársav vagy akril aldehidekkel. Az ilyen kezelt vörösvérsejtek hosszú ideig tárolódnak. Gyakrabban birkák, emberek, csirkék stb. vörösvértesteit használják erre a célra;
— rögzített eritrociták kezelése tanninoldattal. Ennek eredményeként a vörösvértestek képessé válnak a fehérjék (vírusok és antitestek) irreverzibilis adszorbeálására a felületükön;
- a tanizált eritrociták vírusok vagy antitestek általi szenzitizálása.

Koagglutinációs reakció (CAR)

A koagglutinációs reakciót az antigének meghatározására használják staphylococcus sejtek A-fehérjére adszorbeált antitestek felhasználásával (antibody diagnosticum).
Az A-fehérje affinitást mutat az immunglobulinok Fc-fragmenséhez, ezért az ilyen immundiagnosztikai szérummal kezelt baktériumok nem specifikusan adszorbeálják a szérum antitesteket, amelyek azután kölcsönhatásba lépnek az aktív centrumokkal a betegekből izolált megfelelő mikrobákkal. A koagglutináció eredményeként pelyhek képződnek, amelyek staphylococcusokból, diagnosztikai szérum antitestekből és a kimutatott mikrobából állnak.

Agglutináló szérumok: mit tartalmaznak; hogyan szerzik be, mire használják őket; Mi az agglutináló szérum titere?

Az agglutináló szérumot úgy nyerik, hogy nyulakat (intravénásan, szubkután vagy intraperitoneálisan) elölt baktériumok szuszpenziójával immunizálnak, kezdve 200 millió, majd 500 millió, 1 milliárd, 2 milliárd mikrobatesttel 1 ml-ben, 5 napos időközönként. 7-8 nappal az utolsó immunizálás után vért veszünk és meghatározzuk az antitest titert.

Az agglutináló szérum titere a szérum azon maximális hígítása, amelynél a megfelelő mikroorganizmussal való agglutináció megtörténik.

Az agglutináló szérumokat a mikrobák azonosítására használják teljes körű agglutinációs reakcióban.

Hemagglutinációs reakció (HRA)

Ha a vizsgált mikroorganizmust a szérum a titerre vagy a titerérték felére agglutinálja, akkor az ampulla címkéjén feltüntetett fajhoz tartozónak tekinthető.

Mi a különbség a polivalens és az egyértékű (monoreceptor) agglutináló szérumok között? Miért hoz létre egy nyúl egyfajta mikrobákkal történő immunizálása több antigén elleni antitesteket tartalmazó szérumot?

A monoreceptor szérumok olyan szérumok, amelyek csak egy antigén elleni antitesteket tartalmaznak, és többértékű szérumok, amelyek aglutinációs reakciót adják két vagy három rokon baktériummal, amelyeknek közös antigénje van. Az agglutináló szérumokat a mikroorganizmusok azonosítására használják az agglutinációs reakcióban. Az ilyen szérumok hátránya, hogy csoport-agglutinációs reakciókat képesek adni, mert olyan baktériumok elleni antitesteket tartalmaznak, amelyeknek közös antigénjeik vannak.

Hemagglutinációs reakció. Leírás és alkalmazás

Ez azon a tényen alapul, hogy a vörösvértestek, amelyeken az antigének korábban adszorbeálódnak, homológ szérumok (antitestek) jelenlétében képesek agglutinálódni.

Ebben az esetben a vörösvértestek hordozóként működnek specifikus determinánsokkal, amelyek agglutinációja az antigén + antitest reakció eredményeként következik be.

Azokat a vörösvértesteket, amelyek felületéhez az antigének szilárdan kötődnek, erythrocyte antigen diagnosticumnak vagy antigénnel érzékenyített eritrocitáknak nevezzük.

Az RNGA egy másik típusa - az antitestek adszorbeálódnak az eritrociták felszínén, és ezt követő agglutinációjuk homológ antigén jelenlétében történik. Ebben az esetben az ilyen vörösvértesteket erythrocyte antibody diagnosticumnak, vagy antitestekkel szenzitizált vörösvértestnek nevezik.

E két alapvető módszertani megközelítés alapján az RNGA számos módosítását fejlesztették ki és alkalmazták. Így kis standard latex részecskéket használnak hordozóként. Ebben az esetben a reakciót latex agglutinációs reakciónak (RLA) nevezik, vagy Staphylococcus aureust alkalmaznak - koagulációs reakciót stb. Az eritrocita diagnosztikát általában biológiai ipari vállalkozásoknál készítik, és az RNGA fő tapasztalatait diagnosztikai laboratóriumokban végzik.

Az eritrocita diagnosztika előkészítése a következő lépéseket tartalmazza:

vörösvértestek rögzítése formaldehiddel vagy glutársav vagy akril aldehidekkel. Az ilyen kezelt vörösvérsejtek hosszú ideig tárolódnak. Gyakrabban birkák, emberek, csirkék stb. vörösvértesteit használják erre a célra;
rögzített eritrociták kezelése tannin oldattal. Ennek eredményeként a vörösvértestek képessé válnak a fehérjék (vírusok és antitestek) irreverzibilis adszorbeálására a felületükön;
tanizált eritrociták vírusok vagy antitestek általi szenzitizálása.

Meg kell jegyezni, hogy a vírusfertőzések vörösvértest-diagnosztikájának elkészítésének módszerei eltérőek.

Az RNGA végrehajtásának eljárása az antitesttiter kimutatására és meghatározására a következő:

azonos dózisú antigénnel érzékenyített eritrocitákat adunk a szérum egymást követő kétszeres hígításaihoz;
az elegyet 2-3 órán át szobahőmérsékleten vagy 16-18 órán át 4 °C-on hagyjuk;
vegye figyelembe az eredményeket. Ha a szérum antitesteket tartalmaz arra a vírusra, amellyel a vörösvértesteket szenzitizálták, hemagglutináció figyelhető meg, amelyet keresztezéssel értékelnek.

A szérum antitest-titerét a legmagasabb szérumhígításnak tekintik, amely még legalább két keresztezéssel hemagglutinációt biztosít.

Az RNGA-t minden vonatkozó vezérlő kíséri. A reakciót általában mikromódszerrel hajtjuk végre.

Az RNGA lehetővé teszi a következő diagnosztikai problémák megoldását:

antitestek kimutatása és titerük meghatározása a vérszérumban egy ismert eritrocita antigén diagnosztikával;
Ismeretlen vírus kimutatása és azonosítása ismert eritrocita antitest diagnosztikával.

Az RNGA előnyei: nagy érzékenység, egyszerű elhelyezési technika és válaszsebesség. Fontos azonban megjegyezni, hogy a stabil eritrocita-diagnosztika elkészítése során nagy nehézségek merülnek fel (nagy függés a felhasznált komponensek tisztaságától, az eritrociták rögzítésének, tanizálásának és szenzitizálásának módjának megválasztása minden vírustípushoz).

Ha hibát talál, jelöljön ki egy szövegrészt, és nyomja meg a Ctrl+Enter billentyűkombinációt.

Kapcsolatban áll