Ефектът на лекарствата върху кръвния анализ по метода IFA. ELISA анализ: препис. Премахване на „допълнителни“ антитела

Ензимният имуноанализ открива специфични антитела или антигени към редица заболявания. Благодарение на диагностичната технология се откриват вещества с протеинов произход. Лекуващият лекар обяснява защо ELISA е положителен и какво означава това. За поставяне на диагнозата се вземат предвид резултатите от изследването и медицинската история на пациента.

Какво означава

Методът на изследване започна да се използва преди няколко десетилетия. Оттогава технологията се подобри и точността на резултатите се увеличи. Предимството на диагностиката е високата чувствителност. Има и недостатък - техниката включва търсене на даден агент, т.е. необходимо е да се приеме присъствието му в тялото.

Чужда частица (антиген) навлиза в тялото заедно с инфекциозен агент (агент). Антигенът може да бъде и частица от чужда кръв, която не отговаря на групата. Наличието на такива фактори предизвиква имунна реакция. В резултат на сложни невронни процеси се произвеждат имуноглобулини. Те се свързват с чужди молекули, създавайки имунен комплекс. В тази форма тялото по-лесно разпознава частиците и ги унищожава с помощта на имунната система. Всеки вид микроорганизъм произвежда специфични антитела.

За изследване се взема кръв от вена. След това образуваните съединения, които могат да попречат на изследването, се отстраняват от материала. Понякога се вземат проби от лигавицата или цереброспиналната течност като биологичен материал, в някои случаи се анализира амниотична течност. В лабораторията се използват специални плаки, в ямките на които има препарирани частици от патогенни микроорганизми. Лаборантът поставя събрания материал там и наблюдава дали се образуват имунни съединения.

За да получите точни резултати, трябва да вземете теста на празен стомах. 2 седмици преди подаването на материала трябва да спрете приема на антивирусни лекарства и антибиотици.

Анализът ви позволява да потвърдите следните заболявания:

токсоплазмоза;
различни видове херпес;
цитомегаловирус;
салмонелоза;
дизентерия;
инфекция с Helicobacter pylori;
дребна шарка;
енцефалит, пренасян от кърлежи;
рубеола;
заболявания на репродуктивната система;
хепатит.

Това е непълен списък с рецепти; също така включва варицела, сифилис и други заболявания, включително тези, причинени от различни коки.

Откриването на поне един имуноглобулин показва, че резултатът от ELISA е положителен:

Откриването на IgM показва остър стадий на инфекциозна патология. Това потвърждава едновременното наличие на IgA. Отрицателният резултат в някои случаи може да означава хронифициране на заболяването.
Положителният IgA индикатор показва латентно заболяване или наличие на хроничен процес.
Откриването на IgG в различни случаи може да показва наличието на хронична форма на заболяването или да показва ремисия.

Формулярът може да съдържа информация само за наличието или отсъствието на патогена. В някои случаи се посочва количествен показател. Понякога изследването е насочено към определяне на нивото на концентрация на антитела. За тази цел се определя степента на положителност на ELISA. Този индикатор ви позволява да определите колко дълго продължава патологичният процес в тялото.

Какво да правя

Лекарят по инфекциозни заболявания се занимава с диагностика и лечение на инфекциозни заболявания, така че в повечето случаи този специалист предписва изследването.

Ако ELISA покаже положителен резултат, трябва да се консултирате с лекар. Недопустимо е да правите заключения или да провеждате лечение сами. Трудно е да разберете индикаторите сами, декодирането на резултатите трябва да бъде получено от специалист.

Резултатите от кръвния тест могат да бъдат повлияни от фактори като тютюнопушене, консумация на алкохол и употребата на определени групи лекарства. Лекарят може да назначи повторен преглед, за да изключи грешки в резултатите. Понякога се предписват допълнителни видове изследвания за потвърждаване на диагнозата.

Не трябва да правите преждевременни заключения, ако тестът е положителен. Въпреки това, навременното изследване ще ви позволи да идентифицирате заболяването и да предпише необходимото лечение.

Във връзка с

Когато се предписва тест за вземане на ELISA тест за сифилис. Лабораторни диагностични методи. Резултати от анализа - как да се определи нормата и отклоненията. Цената на ензимен имуноанализ.

По правило всеки път, когато отидете в клиника, лекарите предписват различни тестове. Това им позволява да идентифицират инфекции и заболявания, от които човек страда. ELISA, или така нареченият ензимно-свързан имуносорбентен анализ, е отличен начин за оценка на имунната система на организма и идентифициране на инфекцията и стадия на заболяването чрез наличието на антитела.

И така, на кого е предписан този тест и какво е ензимен имуноанализ? Лекарите предписват този тест, ако човек проявява следните заболявания:

Обривът по тялото е алергична реакция.
Вируси – херпес, цитомегаловирус.
Полово предавани болести - сифилис, трихомонада.
Патология, свързана с рак.
Невросифилис.

В допълнение към изброените заболявания се предписва анализ за определяне на нивото на хормона в кръвта. Въз основа на резултатите се оценява качеството на терапията. Вероятно всеки човек знае какво е сифилис, но няма представа за неговия мащаб и колко заразени хора се разхождат около нас.

В момента сифилисът е най-често срещаното заболяване. Това е трепонома, която засяга човешкото тяло. В резултат на това са засегнати всички вътрешни органи на пациента.

Това е много опасна инфекция и често се случва да не се прояви дълго време. Следователно човек може дълго време да бъде носител и разпространител, без да знае, че е болен.

Лабораторен диагностичен метод

Медицината не стои неподвижна; съвременните тестове са значително различни от старите методи за изследване на тялото. Въпреки че изпълняваха ролята си перфектно, понякога се налагаше да чакат седмици и месеци за резултати. Това естествено не е било от полза за заразения човек. Какво се чака за резултат?

Класическите тестове - откриване на сифилис по метода на Васерман, метода на Кан - започнаха да губят позициите си и бяха заменени от тестове като ELISA.

Това е най-модерният метод за откриване на инфекция при хората. Резултатът се дешифрира с помощта на компютър. Това ви позволява по-точно да определите положителен или отрицателен резултат.

По време на декодирането се извършва търсене на антитела към определени заболявания. И в резултат на анализа беше възможно да се идентифицира инфекция, когато резултатът беше положителен. Използването на ELISA за откриване на сифилис предполага използване на три класа имуноглобулини:

G, M, A – те са най-важни за диагностиката.
Те се произвеждат в заразен човек строго в определена последователност.
Стадият на инфекцията се определя бързо.

Резултати от ELISA - нормален и положителен анализ

Ако говори за ELISA тест за сифилис, тогава в този случай е трудно да се каже какво е нормално или ненормално. Резултатът обикновено е отрицателен или положителен. Освен това има титри, които определят количеството антитела в кръвта.

Има много тънкости при дешифрирането на анализа, ако той покаже положителен резултат, анализът все пак ще трябва да се повтори няколко пъти, за да се изключи методът на фалшиво положителна реакция.

Както вече беше написано, има много тънкости при дешифрирането на анализа и само лекуващият лекар може да определи резултата. Нека дадем примери в таблицата какви резултати могат да бъдат показани за ензимен имуноанализ:

Не се отчайвайте, ако анализът покаже положителен резултат. По правило се извършват допълнителни анализи и изследвания по различни начини, за да се постави по-точна диагноза.

Цената на ензимен имуноанализ

По правило цената на този анализ зависи пряко от самия анализ и откриването на конкретна инфекция. Определянето на маркери за инфекция от различни видове струва от 200 до 350 рубли. И такъв анализ се извършва в рамките на два дни.

ELISA е най-популярният и модерен метод за диагностика на тялото. Методът се оказа ефективен при откриване на инфекция и определяне на точния период на заразяване.

Имайки предвид ценовата политика, можем да кажем, че анализът е достъпен за всеки с всякакъв бюджет. Това позволява на лекуващия лекар да получи пълна картина на инфекцията на дадено лице. Той се доказа в действие и не разочарова лекарите. В същото време, след като получи анализа, лекуващият лекар може да реагира незабавно, като предпише своевременно лечение.

5.1 Същност и класификация на ELISA.

ELISA се появява в средата на 60-те години и първоначално е разработен като метод за идентифициране на антиген в хистологична проба, както и за визуализиране на линии на утаяване при тестове за имунодифузия и имуноелектрофореза, а след това започва да се използва за количествено определяне на антигени и антитела в биологични течности. В разработването на метода участват E. Engvall и R. Pählman, както и независимо W. Van Weeman и R. Schurs.

Ориз. 6 Основен принцип на ELISA:

за идентифициране на антигени; 2) за откриване на антитела

Методът се основава на специфичното свързване на антитяло с антиген, като един от компонентите се конюгира с ензим, в резултат на реакцията със съответния хромогенен субстрат се образува оцветен продукт, чието количество може да се определи; спектрофотометрично (фиг. 6).

Откриването на възможността за имобилизиране на антиген и антитяло върху различни носители при запазване на тяхната свързваща активност направи възможно разширяването на използването на ELISA в различни области на биологията и медицината.

Появата на моноклонални антитела допринесе за по-нататъшното развитие на ELISA, което направи възможно повишаването на неговата чувствителност, специфичност и възпроизводимост на резултатите.

Теоретично ELISA се основава на данни от съвременната имунохимия и химична ензимология, познаване на физикохимичните закономерности на реакцията антиген-антитяло, както и на основните принципи на аналитичната химия. Чувствителността на ELISA и времето, което отнема, се определят от няколко основни фактора: кинетичните и термодинамичните характеристики на реакцията антиген-антитяло, съотношението на реагентите, активността на ензима и разделителната способност на методите му за откриване. Като цяло реакцията антиген-антитяло може да се опише с проста схема:

+[AG]↔[ATAG]

Разнообразието от обекти на изследване от нискомолекулни съединения до вируси и бактерии, както и необичайно широк спектър от задачи, свързани с разнообразието от условия за използване на ELISA, определят развитието на изключително голям брой варианти на този метод.

Всяка версия на ELISA съдържа 3 задължителни етапа:

1. етапът на разпознаване на тестваното съединение от антитяло, специфично за него, което води до образуването на имунен комплекс;

2. етапът на образуване на връзката на конюгата с имунния комплекс или със свободни места на свързване;

3. етап на преобразуване на ензимния етикет в записан сигнал. Класификацията на методите ELISA се основава на няколко подхода:

1. Въз основа на вида на реагентите, налични в първия етап на ELISA, се разграничават конкурентни и неконкурентни методи.

А) При конкурентен ELISA на първия етап системата съдържа както анализираното съединение, така и неговия аналог, белязан с ензим и конкуриращ се за специфични места на свързване с него.

Б) Неконкурентните методи се характеризират с наличието в системата на първия етап само на анализираното съединение и специфични за него центрове за свързване.

2. Всички ELISA методи са разделени на хомогенни и хетерогенни.

Ако и трите етапа на ELISA протичат в разтвор и между основните етапи няма допълнителни стъпки за разделяне на образуваните имунни комплекси от нереагиралите компоненти, методът принадлежи към хомогенната група.

Основата на хомогенния ELISA, използван като правило за определяне на нискомолекулни вещества, е инхибирането на активността на ензима, когато се комбинира с антиген или антитяло. Ензимната активност се възстановява в резултат на реакцията антиген-антитяло.

Когато едно антитяло се свърже с антиген, съдържащ ензимен маркер, ензимната активност се инхибира с 95% по отношение на субстрата с високо молекулно тегло, което се дължи на пространственото изключване на субстрата от активния център на ензима. Тъй като концентрацията на антигена се увеличава, повече антитела се свързват и остават повече свободни антиген-ензимни конюгати, способни да хидролизират субстрата с високо молекулно тегло. Анализът се извършва много бързо, едно определяне изисква 1 минута. Чувствителността на метода е доста висока. Може да се използва за определяне на вещество на ниво пикомол.

Хетерогенните методи се характеризират с анализ в двуфазна система с участието на твърда носеща фаза и задължителен етап на отделяне на имунните комплекси от нереагиралите компоненти (промиване), които са в различни фази (формираните имунни комплекси са на твърда фаза, а нереагиралите комплекси са в разтвор) . Хетерогенните методи, при които образуването на имунни комплекси на първия етап се извършва в твърдата фаза, се наричат твърдофазни методи.

Методите се класифицират като хомогенни-хетерогенни, ако етап 1 - образуването на специфични комплекси става в разтвор и след това се използва твърда фаза с имобилизиран реагент за разделяне на компонентите.

3. Според принципа на определяне на тестваното вещество:

А) Директно определяне на концентрацията на вещество (антиген или антитяло) чрез броя на свързващите места, взаимодействащи с него. В този случай ензимният етикет ще се намира в образувания специфичен AG-AT комплекс. Концентрацията на аналита ще бъде право пропорционална на записания сигнал.

B) Определяне на концентрацията на вещество чрез разликата в общия брой на свързващите места и останалите свободни свързващи места. В този случай концентрацията на аналита ще се повиши, а регистрираният сигнал ще намалее; следователно в този случай има обратна зависимост от големината на записания сигнал.

5.2 Характеристики на компонентите, използвани в ELISA.

Ензими.

Ензимните маркери имат изключително мощен каталитичен ефект; една ензимна молекула може да реагира с голям брой субстратни молекули. По този начин ензимът, присъстващ в малки количества, може да бъде идентифициран и количествено определен чрез образуването на продукти и реакцията, която катализира. Друго предимство на използването на ензими като етикети се дължи на наличието в молекулата на множество функционални групи (сулфхидрилни, карбоксилни, тиразинови остатъци и др.), Чрез които молекулите на лигандите могат да бъдат ковалентно свързани.

Ензимните маркери, използвани в ELISA, трябва да имат следните свойства:

– висока активност и стабилност на ензима при аналитични условия, когато е модифициран и в конюгат с антитела или други протеини;

– наличието на чувствителни субстрати и простотата на метода за определяне на продуктите или субстратите на ензимната реакция;

– възможността за адаптиране на субстратните системи към допълнително укрепване;

– липса на ензима и неговите инхибитори в изследваната биологична течност.

Най-малко 15 различни ензима могат да се използват в ELISA. Най-широко използваните, в съответствие с горните изисквания, са пероксидазата от хрян (HRP), алкалната фосфатаза (ALP) и β-D-галактозидазата. И трите са стабилни и катализират силно чувствителни реакции. В допълнение, продуктите, получени в резултат на реакциите, катализирани от тези ензими, в зависимост от използвания субстрат, могат да бъдат открити не само чрез колориметрични методи, но и чрез флуоресцентни методи. Други ензими се използват много по-рядко. Това се обяснява с по-ниската им специфична активност в сравнение с ПК и АП.

Субстрати.

Изборът на субстрат се определя основно от ензима, използван като етикет, тъй като реакцията ензим-субстрат е силно специфична.

Основни изисквания към основата:

– осигуряване на висока чувствителност на метода при откриване на ензима в конюгата;

– образуване на добре разпознаваеми (например оцветени) продукти на реакцията ензим-субстрат;

– субстратът трябва да е безопасен, евтин, достъпен и удобен за използване.

По-често се използват хромогенни субстрати, които, когато се разрушат, образуват цветно вещество. Обещаващо е използването на високоенергийни субстрати - флуоресцентни, хемилуминесцентни. Използването на такива субстрати позволява теоретично да се увеличи чувствителността на ELISA с два порядъка.

Образуване на конюгат.

Конюгатът е антиген или антитяло, белязано с ензимен маркер. Образуването на конюгат е един от важните етапи на ELISA.

При образуването на конюгат се избира оптималният метод за въвеждане на ензимен етикет, така че и двата компонента на конюгата да запазят своята биологична активност: ензимът - способността да взаимодейства със субстрата и антигенът или антитялото - антигенност и антиген-свързваща активност , съответно. Наличието на белязан, високо пречистен антиген позволява използването на конкурентни методи. В този случай на последния етап е възможно да се измери активността на конюгата, който не е свързан с имобилизирани антитела, което избягва процедурата на измиване и прави анализа по-удобен. Въпреки това, антигените са различни по своите физикохимични свойства и структура, което означава, че е невъзможно да се разработят универсални методи за получаване на конюгат с антиген. В този случай получаването на конюгат антиген-ензим е отделна сложна задача. Приготвянето на белязани антитела за ELISA е методично по-достъпно.

Конюгацията на ензима с имунохимично активни протеини се осъществява чрез различни методи: химическо кръстосано свързване, ковалентно свързване на ензимната молекула с Ag или AT и образуване на съединения чрез нековалентни връзки, например, когато връзката между ензима и Ag или AT се осъществява имунологично чрез взаимодействие антиген-антитяло.

Най-широко използвани са ковалентните методи за получаване на конюгати. Изборът на реакция на свързване се определя от вида на наличните функционални групи в дадените протеинови молекули. Глутаралдехид, натриев периодат и др. се използват като реагенти, използвани за въвеждане на ензима в молекулите на антигена и антитялото.

Съществуват едноетапни и двуетапни методи за получаване на конюгати с помощта на глутаралдехид. Могат да се образуват конюгати с различни размери с намалена ензимна активност (15 - 60% от свободния ензим). Полученият конюгат с голям размер може пространствено да попречи на определянето на тестваното вещество. Конюгатите с относително ниско молекулно тегло се състоят от Fab фрагмент и една ензимна молекула.

В резултат на двуетапен синтез, който се състои от поетапно производство на ензим, първо модифициран с омрежващ агент, неговото изолиране и след това последващото му взаимодействие с антиген (антитяло), молекулите на се образува хомогенен състав, съдържащ 1-2 ензимни молекули на имуноглобулинова молекула и поддържащ висока ензимна и имунологична активност. Въпреки това, броят на образуваните такива конюгати е малък (за пероксидазата от хрян е 5–10%).

Най-голямо практическо приложение е намерено в метода за получаване на имунопероксидазни конюгати, базиран на окисляването на въглехидратния компонент на ензима с натриев периодат (свързването на пероксидазата в конюгата достига 70-90% от първоначалното количество ензим).

Надеждният конюгат трябва да има следните свойства:

Висока сила на антитялото и висок афинитет към антигена, така че да може да се използва във високо разреждане и по този начин да се намали неспецифичното свързване;

Достатъчна специфичност при работното разреждане;

Преобладаването на мономерните форми над полимерните, т.к полимерните форми са склонни да се прилепват неспецифично към пластмасата, което води до високо фоново ниво на реакция;

Оптималното моларно съотношение между ензим и антитела (оптималното съотношение е около 1:1);

Достатъчна ензимна активност на конюгата. Това свойство се определя главно от условията на конюгация и съотношението на ензимните молекули и антителата в конюгата.

5.3 Хетерогенни ELISA методи.

Хетерогенните ELISA (или твърдофазни ELISA) включват методи, при които аналитът присъства в две фази. За разделяне на компонентите на имунохимична реакция се използва твърда фаза (неразтворим носител, обикновено пластмаса) с имобилизирани върху нея антитела или антиген, която се промива на всеки етап, за да се отстранят междинните и нереагиралите компоненти.

Имобилизирането може да се извърши чрез ковалентно свързване на антитела (антигени) към активиран носител, като се използват химични подходи, както и чрез физическа адсорбция на антитела (антигени) върху повърхността на твърди полимери (например полистиренови плочи). В чуждестранната литература тази посока се нарича тест ELISA или ензимно-свързан имуносорбентен анализ.

Неконкурентен ELISA за определяне на антигени, използвайки примера за използване на маркирани с ензим специфични антитела и имобилизирани антитела.

Разтвор, съдържащ анализирания антиген, се добавя към носителя с имобилизирани антитела. По време на инкубационния процес се образува специфичен комплекс антиген-антитяло. След това носителят се измива от несвързани антигени и се добавят белязани антитела - конюгат. В този случай количеството на свързания конюгат е право пропорционално на количеството антиген в тестовата проба. След вторична инкубация и отстраняване на излишния конюгат се добавя хромогенен субстрат за използвания ензим, който променя цвета си под действието на ензима, т.е. протича ензимна реакция с оцветяване на разтвора в ямките. Степента на оцветяване е правопропорционална на количеството специфични антитела, маркирани с ензима, ензима и съответно антигена, който се изследва. Измерванията на оптичната плътност на разтвора в ямките при определена дължина на вълната (в зависимост от използвания субстрат) се извършват с помощта на специални спектрофотометри, пригодени за четци за микроплаки. Количествената оценка на концентрацията на антиген в пробата се определя чрез сравняване на резултатите с калибровъчна крива на зависимостта на оптичната плътност на разтвора от концентрацията на стандартния разтвор на антиген.

Фигура 7.

Тъй като на етапа на идентифициране на специфичен имунокомплекс, антигенът се свързва с молекули на имобилизирани и белязани антитела, в литературата този метод често се нарича метод на „сандвич“ (от английски sandvich) или метод на две места ELISA (от английският двуместен анализ).

Този метод може да се използва за анализ само на онези антигени, които имат поне две антигенни детерминанти на повърхността си. Недопустимо е за анализ на голям брой едновалентни антигени (лекарствени съединения, пестициди и др.).

Основното предимство на този метод е неговата висока чувствителност. Границата на откриване на съединения по този метод в момента достига стойност от около 10-21 mol, което съответства на откриването на само 600 молекули от аналита в проба. Максимална чувствителност се постига, когато всяка имунологична реакция се провежда в равновесие, което се отразява на продължителността на анализа, която е средно 4-6 часа. Неконкурентен ELISA за определяне на антитела, използвайки примера за използване на маркирани с ензим вторични антитела и имобилизирани антигени.

Тестовият серум се добавя към имобилизирания антиген. След инкубиране и промиване на несвързаните антитела се добавят белязани вторични антитела, които са специфични за анализираните антитела. След вторична инкубация и отстраняване на излишъка от белязани вторични антитела, съдържанието на ензимния етикет върху носителя е пропорционално на концентрацията на специфични антитела в серума.

Тази схема е една от най-разпространените ELISA за откриване на антитела, тъй като позволява откриването на антитела към различни антигени.

Хетерогенен конкурентен ELISA за определяне на антиген, като се използва пример за използване на белязан антиген и имобилизирани антитела.

Към антителата, имобилизирани върху носителя, се добавя разтвор, съдържащ анализирания антиген и фиксирана концентрация на конюгата антиген-ензим. След инкубиране носителят се измива от несвързан свободен и белязан антиген и се записва ензимната активност върху носителя, която е обратно пропорционална на концентрацията на определяния антиген.



5.4 Хомогенен ELISA метод.

Хомогенният ензимен имуноанализ (HELISA) е методологично най-простият тип ELISA. Когато се извършва, един от участниците в имунната реакция (обикновено антиген с ниско молекулно тегло) се маркира с ензим и се наблюдава напредъкът на образуването на комплекса антиген-антитяло, като се записват промени в ензимната активност.

Такова нарушение на ензимната активност може да възникне или поради пространствено разделяне на ензима и субстрата, или поради конформационни промени в ензимната молекула, които съпътстват образуването на имунния комплекс. HIFA има редица значителни предимства пред другите имунохимични методи. Първо, висока експресия (целият анализ с помощта на HIFA отнема минути и дори части от минути).

Ориз.8 Опции за хомогенен ензимен имуноанализ(A - ефектът на разделяне на ензима (F) и субстрата (C) поради пространствени пречки по време на взаимодействието на антигена (Ag) и антитялото (Ab); B - ефектът от промяната в конформацията на ензим по време на образуването на комплекса антиген-антитяло).

На второ място, методът е едноетапен и не изисква трудоемки и отнемащи време етапи на пране. И накрая, трето, методът изисква минимални обеми (8-50 μl) и количества от биологична или клинична проба. Методът HIFA обаче има един изключително съществен недостатък - на негова основа е възможно да се създават диагностични тестови системи само за антигени с ниско молекулно тегло. Само в този случай антитялото, взаимодействайки с антигена, може ефективно да екранира или модифицира ензимната молекула, свързана с този антиген. Именно в тази връзка (въпреки очевидната простота и очевидните предимства пред други методи, на базата на HIFA бяха създадени диагностични инструменти за откриване само на хормони, пептиди, лекарствени и наркотични вещества и някои нискомолекулни протеини.

5.5 “Сандвич” - ELISA вариант за откриване на антигени.

Антигените, открити с помощта на този вариант на ELISA, трябва да имат множество епитопи, способни да свързват антитела, или да имат повтарящи се, пространствено разделени епитопи с една и съща специфичност.

При извършване на тази версия на ELISA, високо специфични поли- или моноклонални антитела, адсорбирани върху твърдата фаза, се инкубират с тестовата проба. След процедурата на промиване към ямките се добавят маркирани с ензим антитела (конюгат) към същия антиген и след това се провеждат всички останали етапи на реакцията. Ефективността на образуване на специфичен комплекс на всеки етап от анализа зависи от константата на свързване на реакцията антиген-антитяло.

За да се определи нивото на биологично активни вещества като имунологични комплекси, е необходимо специално лабораторно изследване. Ако се подозира хематологично, инфекциозно или автоимунно заболяване, специалистите предписват кръвен тест за ELISA. С напредването на статията ще разгледаме какво представлява, как да се подготвим за него, какво показва и как да го дешифрирате сами.

Какво изследване е това - кръвен тест ELISA? Съкращението означава имуноензимен анализ на кръвта, по време на който се определя количественото и качественото съдържание на различни биологично активни вещества, както и антитела и антигени в биологичен материал.

Какво се използва в ензимния имуноанализ на кръвта:

гръбначно-мозъчна течност;
слуз на уретрата, цервикалния канал;
амниотична течност;
съдържанието на стъкловидното тяло.

Имуноензимният анализ се предписва за диагностициране на полово предавани болести, инфекциозни и онкологични процеси, алергични реакции, нарушения на ендокринната и репродуктивната система, автоимунни и имунодефицитни заболявания, както и за оценка на риска от развитие на някои бъбречни заболявания.

Кръвен тест за ELISA по време на бременност се предписва с цел ранно откриване, нарушения в развитието в началните етапи и проследяване на тяхната динамика. В допълнение, анализът ELISA ви позволява да контролирате нивото на антитела, които могат да провокират развитието на тежки неврологични заболявания при дете, като по този начин предотвратява развитието на усложнения не само по време на бременност, но и по време на раждане.

Позволява да се реагира предварително на установените проблеми и значително да се подобри здравето както на майката, така и на нейното бебе.

Предимствата на кръвния ELISA включват:

висока (до 90%) степен на чувствителност;
възможността за ранна диагностика, като същевременно се определя стадият на заболяването;
ниска цена на реагентите и, следователно, наличност;
минимално количество материал за изследване;
минимални срокове за получаване;
възможност за дългосрочно съхранение на реактиви;
способността да се контролира динамиката на развитието на патологичния процес.

Тестови системи

Недостатъци на ензимния имуноанализ:

невъзможно е да се определи причинителят на заболяването; в лабораторията се получава само имунен отговор
възможността за получаване на фалшив резултат (в много редки случаи, главно по време на бременност).

Подготовка

Принципът на този вид кръвен тест се основава на образуването на специфични антитела в човешкото тяло, когато антигените навлязат в него, тоест чужди агенти, които причиняват развитието на определено заболяване. В резултат на тяхното взаимодействие се образуват комплекси "антиген-антитяло", които се изследват по време на имуноензимен анализ.

В тази връзка, за да не се повлияят тези комплекси и съответно надеждността на получените резултати, анализът на кръв и друг биологичен материал за ELISA изисква определена подготовка.

Също така, 14 дни преди предложеното изследване, специфичното лечение се спира и се спира употребата на антибактериални и антивирусни лекарства.

Кръвта за ELISA се дарява от вена. Непосредствено преди вземането на кръв трябва да ограничите физическата активност, както и да избягвате пушенето и пиенето на алкохолни напитки.

Има няколко метода и методи за извършване на ензимен имуноанализ: директни и индиректни методи, конкурентни и блокиращи методи.

Основата за изследване на кръв (всеки друг биологичен материал) с помощта на ELISA е алгоритъм, състоящ се от две реакции - имунна и ензимна.

По време на първия патологичните агенти се свързват със защитните елементи на клетките на взетия за изследване биологичен материал. Образува се имунен комплекс "антиген - антитяло". Изглежда така. Антигените присъстват на повърхността на абсолютно всички клетки.

Когато чужди клетки навлязат в тялото, те се улавят от имунни клетки (на чиито повърхности са разположени антитела), които сравняват данните за антигените от повърхността на новопристигналите клетки с информацията, съхранена в собствената им „памет“. Ако тези данни не съвпадат, се активират защитните функции на организма, състоящи се в образуването на имунен комплекс.

След това се провежда ензимна реакция, която визуализира резултатите от предишната реакция. Неговият принцип се основава на превръщането на веществото от едно в друго. За всеки тип ELISA материалът, образуван по време на имунната реакция, има специфичен ензим, обработката с който се използва за определяне на концентрацията на чуждия агент (въз основа на интензитета на цвета на разтвора).

Декодиране

Благодарение на кръвен тест за ELISA, лабораторните техници определят A, G и M. Положителният резултат при изследване на кръв (други биологични суровини) за ELISA позволява не само да се постави диагноза, но и стадия на заболяването, т.к. както и естеството на неговия ход (остър или хроничен).

Тези имуноглобулини, при наличие на патологичен процес в тялото на пациента, се образуват в различни периоди на заболяването:

Имуноглобулини M, IgM– образуват се пет дни след началото на заболяването и остават в кръвта 1,5 месеца, след което изчезват. Откриването на IgM показва наличието на остър първичен патологичен процес в тялото и необходимостта от засилена терапевтична намеса.
Имуноглобулини G, IgG– възникват четири седмици след заразяването, присъствието им в организма може да се установи няколко месеца. Откриването на IgG показва анамнеза за предишно заболяване на дадено лице. Повишаването на тяхното ниво може също да означава повторна инфекция.
Имуноглобулини А, IgA– появяват се по време на инфекцията и присъстват в тялото в продължение на четири седмици. Намаляването на съдържанието им показва началото на възстановяването. Повторното явяване в тестове, след като човек е преминал лечение и се е възстановил, показва, че болестта е станала хронична. Едновременното откриване на IgA и IgG в резултатите от ELISA също показва наличието на хроничен процес в организма.

Трябва също да се отбележи, че едновременното присъствие на IgG и IgM в анализите показва, че хроничният процес се е влошил и пациентът трябва да започне лечение. Ако нито един от имуноглобулините не е открит по време на изследването, това означава липса на имунен отговор.

Списъкът на наличните диагностични методи се разширява бързо през последните десетилетия; диагностиците се опитват да комбинират предимствата на всички предишни тестове в нови методи, като се отърват от всичките им предишни недостатъци.

Напоследък списъкът с диагностични процедури все повече включва ензимно-свързан имуносорбентен анализ - модерен и сравнително нов тест, който е малко известен на обикновения човек, който не се занимава с медицина. Въпреки това тази техника бързо набира редици на своите привърженици сред квалифицирания медицински персонал. Можете да опитате да разберете какво представлява и в какви случаи трябва да се използва, като се запознаете с неговите характеристики и основни характеристики.

Ензимният имуноанализ е инструментална лабораторна техника, базирана на молекулярната реакция "антиген-антитяло", която позволява откриването на специфични протеини в биологични материали (проби за изследване). Такива протеини могат да бъдат ензими, различни микроорганизми (вируси, бактерии, гъбички), протозои и др.

След откриването на метода той получава името ELISA тест, което няма нищо общо с името на откривателите, а е съкращение от пълното наименование на английски – enzyme-linked imunosorbent assay. Лекарите по целия свят използват това име, някои лекари в рускоговорящите страни също наричат този вид изследване по този начин.

Основният принцип на метода е молекулярната реакция "антиген-антитяло".

Антиген е всяка чужда молекула, която навлиза в човешкото тяло като част от микроба, причиняващ заболяването. Антигените обикновено са протеинови молекули. В допълнение към микроорганизмите, такъв „непознат“ може да бъде чужди кръвни клетки, които не съответстват на групата или Rh фактора.

В отговор на навлизането на такъв антиген в тялото се стартира имунна реакция, която е насочена към защита срещу всякакви чужди молекули. Това се дължи на синтеза на специални агенти на имунната система - антитела (имуноглобулини). Всяко антитяло е подходящо само за специфичен антиген и неутрализира патогенния „непознат“, като се свързва с него в един комплекс. Това е процесът на такова свързване, който се нарича реакция "антиген-антитяло".

Видове антитела

Всички антитела (имуноглобулини) се разделят на 5 вида в зависимост от това на какъв етап от имунния отговор се появяват:

За ELISA диагностика най-често са важни нивата на имуноглобулините IgG, IgM и IgA. По техните титри можете да разберете дали човек е имал заболяването преди или се е заразил наскоро, дали е развил имунитет или тялото му е беззащитно срещу патология.

Предимства и недостатъци на ензимния имуноанализ

В момента ELISA е един от най-точните и чувствителни методи. Той е възприет от специалисти в различни области на медицината и продължава да разширява обхвата си на приложение.

Предимства на метода

Висока точност на получените данни.
Чувствителност (позволява ви да откриете необходимото вещество дори при минимално присъствие на патогена в пробата).
Възможност за диагностика в първите дни на заболяването или в инкубационния период.
Скорост на събиране на данни в сравнение с други методи с подобна точност.
Висока автоматизация на процеса и минимално човешко участие, което намалява грешката на изпълнителя.
Получаване на данни за етапа на патологичния процес и ефективността на избраната терапия.
Безболезнено и минимално инвазивно при вземане на материал.

Недостатъци на метода

В повечето случаи ви позволява да определите реакцията на тялото към патогенен агент, а не самия патоген.
Преди теста трябва да се знае точно предполагаемото заболяване, тъй като тестът е много специфичен.
Вероятността от фалшиви индикатори, причинени от технически проблеми, приемане на лекарства, едновременното наличие на няколко хронични заболявания или метаболитни нарушения в тялото на пациента.
Тълкуването на резултатите трябва да се извършва само от висококвалифициран специалист, тъй като за тълкуване на получените данни е необходимо специално обучение и голям набор от медицински познания в определена област.
ELISA е доста рядко изследване, така че не се извършва във всички диагностични лаборатории.
Методът е доста скъп, тъй като в допълнение към реагентите лабораторията трябва да разполага с много скъпо оборудване и проби от антигени, произведени в специални институти.

В какви случаи се използва имуноензимен анализ?

Пълният списък от показания за ензимен имуноанализ е много широк, включва почти всички отрасли на медицината.

Най-често ELISA се използва за следните цели:

откриване на инфекциозни заболявания;
диагностика на болести, предавани по полов път;
определяне на имунен статус или отделни автоимунни заболявания;
идентифициране на туморни маркери;
определяне на хормони.

В случай на инфекциозни и вирусни заболявания, техниката ни позволява да идентифицираме следните патологии:

В допълнение, ELISA ви позволява бързо и ефективно да определите състоянието на инфаркт, да оцените репродуктивния потенциал на тялото, да идентифицирате алергиите, техния източник и т.н.

Имуноензимната техника се използва за провеждане на клинични изследвания по време на разработването на нови лекарства и при оценката на ефекта им върху човешкото тяло.

Видове проби и методи за избора им за изследване

Най-често тестовият материал за ензимен имуноанализ е кръвта, която се взема от антекубиталната вена на пациента. Вземането на проби се извършва на празен стомах, предимно сутрин. След вземане на проба тези образувани клетки, които пречат на изследването, се отделят и отстраняват от кръвта, оставяйки само серум.

При диагностициране на пикочно-полови инфекции материалът често се превръща в намазки от лигавичните тъкани на гениталните органи, слуз от уретрата или шийката на матката, проби от ректума, изстъргвания от ерозии или язви в областта на слабините и от други части на тялото. Могат да се вземат натривки както от устната кухина, така и от назофаринкса.

Понякога в акушерската и гинекологичната практика по време на бременност се използва ензимен имуноанализ за определяне на състоянието на околоплодната течност. В този случай пробата става амниотичната течност. За да направите това, вземете малко количество течност, като пробиете амниотичната торбичка с дълга игла. Всички манипулации се извършват със стерилни инструменти, за да се минимизират възможните рискове.

Често материалът се превръща в цереброспинална или серозна течност. Това се случва с локална анестезия, която се прилага чрез инжектиране.

Специалистът, който изпраща изследването, трябва да изясни какъв тип материали са необходими за имуноензимен анализ. Често се вземат проби от няколко вида или от различни места наведнъж. Лекарят, който издава направление за този вид изследване, също трябва да информира пациента за подготовката за даряване на биоматериал.

Подготовка за имуноензимен анализ

За да се повиши точността на данните, получени след ензимен имуноанализ, подготовката за избор на материал трябва да бъде както следва:

10 дни преди изследването изключете антибиотици, антивирусни и антимикотични лекарства;
Алкохолът, пушенето и приемането на наркотици трябва да бъдат премахнати на ден;
през същия период е необходимо да се избягва физическото пренапрежение;
Предупреждавайте лекаря за всички лекарства, които пациентът приема;
Уведомете Вашия лекар, ако сте бременна или подозирате, че сте бременна.

Най-добре е материалите за изследване да се вземат сутрин на празен стомах.

Ако диагнозата има за цел да определи състоянието на хормоналните нива, тогава е важно да сте в спокойно състояние предния ден и да избягвате нервно напрежение. За жените даряването на кръв за хормони се определя ясно от периода на месечния цикъл, който ще бъде обсъден от лекаря по време на назначаването.

2-3 дни преди вземането на проби трябва да изключите пържени и мазни храни от менюто, а преди тестване за хепатит не яжте цитрусови плодове или други оранжеви или жълти плодове и зеленчуци.

Тълкуване на резултатите от ензимен имуноанализ

Резултатът от качествено изследване обикновено се обозначава със знаците „+“ (открит) или „-“ (не е намерен).

Въз основа на наличието или отсъствието на определени групи имуноглобулини могат да се направят следните заключения:

JgM (-), JgG (-), JgA (-) - имунитетът към болестта липсва напълно (тялото не се е сблъсквало преди с този тип антиген);
JgM (-), JgG (+), JgA (-) - имаше предишен сблъсък с този антиген или ваксината;
JgM (+), JgG (-/+), JgA (-/+) - остър патологичен процес (най-вероятно първичен);
JgM (-), JgG (+/-), JgA (+/-) - хроничен процес;
JgM (+), JgG (+), JgA (+) - рецидив;
JgM (-) - етап на възстановяване.

Количествените стойности носят голям информационен товар, но само лекуващият лекар може да ги интерпретира въз основа на предишни показания, възрастта на пациента и нормите за всяко конкретно заболяване. Поради тази причина не можете сами да оцените резултатите.

Колко време трябва да чакате за резултати?

Тази техника има много разновидности, в зависимост от които се определя периодът за получаване на данни в ръка. Средната продължителност на ELISA диагностиката е 4-6 часа, което ви позволява да предоставите резултати още на следващия ден.

Най-дългите методи отнемат до 10 дни, например в случай на ХИВ инфекция.

При спешна нужда е възможно използването на експресни методи, при които отговорът се получава в рамките на 1-2 часа.

Къде мога да получа ELISA тест?

Тъй като оборудването за този вид диагностика е доста скъпо, не всички лаборатории могат да го закупят. В допълнение, тестовете, съдържащи специфични антигени, имат ограничен срок на годност (обикновено около 1 година) и следователно изискват постоянно актуализиране.

Поради тези причини държавните медицински институции не винаги разполагат с ELISA лаборатории. Най-често е необходимо да се свържете с големи частни медицински или големи диагностични центрове.

За провеждане на ELISA тест лабораторията трябва да има специален лиценз, а персоналът и лаборантите трябва да преминат специално обучение.

Най-често определен диагностичен център или лаборатория се препоръчва от лекаря, който насочва пациента за преглед.

Цената на ензимен имуноанализ

Цената на това изследване зависи от региона на страната и от нивото на клиниката, предоставяща услугата. В Москва минималната цена за определяне на един антиген започва от 700 рубли. Ако е необходимо да се идентифицират няколко имуноглобулина наведнъж, цената ще се сумира.

В случай на спешен анализ цената се увеличава с 150-200 рубли. за всеки антиген.

Въпреки доста високата цена, ензимният имуноанализ позволява да се направи изследването на пациента възможно най-информативно и бързо, което намалява времето преди началото на лечението и позволява по-бързо стабилизиране на състоянието на човека.

Това видео представя филма „Основи на ензимния имуноанализ“.