Vad är bättre att kauterisera eller ta bort hemagglutination. Salmonella och tyfoidfeber, paratyfus. Egenskaper hos influensavirus. epidemiologi och diagnos av influensa. användning av RTG för serotypning av influensavirus. läkemedel för specifik förebyggande och behandling

Ett korrekt utfört blodprov hjälper till att upptäcka orsakerna till olika komplexa sjukdomar i kroppen i de tidiga stadierna av deras utveckling, och ibland till och med innan kliniska symtom på sjukdomen uppträder. Mycket ofta ordinerar läkare ett agglutinationsreaktionstest till patienter. Därefter kommer vi att ta reda på vad det är - ett RPGA-blodprov, när används det och vad kan det berätta för oss?

Funktionsprincip

Den indirekta hemagglutinationsreaktionen (även kallad passiv hemagglutinationsreaktion, även känd som RPHA, RNGA) uppstår när röda blodkroppar som har adsorberat ett antigen exponeras för immunserum som matchar det givna antigenet.

Studier har visat att denna metod är betydligt överlägsen andra serologiska tester när det gäller specificitet och känslighet. Därför används det ofta för att upptäcka sjukdomar orsakade av bakterier eller rickettsia. Antigener för sådan analys kan vara bakterieextrakt, renade antigener från olika mikrober och komponenter i bakteriella vacciner.

Efter att en patogen bakterie kommer in i människokroppen börjar den producera specifika och ospecifika antikroppar, vilket bildar ett specifikt immunsvar. När det gäller syfilis, vars orsakande medel är Treponema pallidum, som tillhör de gramnegativa spiroketerna, produceras icke-treponemala eller treponemala antikroppar i det mänskliga blodet. Laboratoriediagnostiska tester är baserade på deras identifiering, vilket bör bekräfta eller motbevisa närvaron av virusets orsakande medel i kroppen.

Med RPHA, röda blodkroppar, vars yta har adsorberat treponema pallidum-antigener, när serum med antikroppar mot treponema från material från en person infekterad med syfilis tillsätts, fastnar vid varandra, det vill säga de agglutinerade.

Studiens tillförlitlighet

Det är viktigt att komma ihåg att antikroppar mot den bleka spiroketen börjar dyka upp i kroppen hos infekterade personer 2-4 veckor efter infektion, och i vissa fall kan denna period sträcka sig upp till 6 veckor.

Av denna anledning är känsligheten för analysen för RPHA i det primära stadiet av sjukdomen cirka 86%, vilket är betydligt sämre än noggrannheten för att diagnostisera patienter i de följande två stadierna. Analysens känslighet för sådana patienter, såväl som för bärare av latent syfilis, når 99-100%.

Den passiva hemagglutinationsreaktionen har dock en mycket hög specificitet, som når en nivå av 96-100%.

Detta gör det möjligt att använda denna undersökning för att bekräfta diagnosen vid en positiv reaktion från en preliminär icke-treponemal studie, till exempel en mikroutfällningsreaktion av blåscancer.

Med tanke på att känsligheten för treponemala tester, inklusive RPGA, avsevärt överstiger känsligheten för icke-treponemala metoder, har sådana undersökningar blivit alltmer föreskrivna när man gör screeningtest för syfilis. Men om en positiv reaktion från ett screeningtest tas emot krävs en annan specifik (treponemal) analys, men inte RPGA, för att klargöra diagnosen.

Analysutskrift

När serum med antikroppar mot treponema från materialet från en person som är infekterad med syfilis läggs till det reagens med vilket studien utförs, agglutinerar röda blodkroppar, vilket resulterar i att de fälls ut.

Antalet klibbiga röda blodkroppar påverkas av nivån av antikroppar i serumet. Därför visar passiv hemagglutination inte bara närvaron av antikroppar, utan låter dig också bestämma deras kvantitet. Resultatet av studien presenteras av nivån på antikroppstiter.

En positiv reaktion indikerar förekomsten av patogenen i patientens kropp. Under den diagnostiska processen kan emellertid falskt positiva reaktioner uppstå, vars antal statistiskt sett inte överstiger nivån 0,05-2,5% av det totala antalet studier.

En positiv RPHA-reaktion hos personer som inte är infekterade med syfilis kan uppstå om:

systemiska bindvävssjukdomar,
i patientens blod antikroppar mot patogener som liknar Treponema pallidum,
fysiologiska patologier, såsom hjärtinfarkt,
hepatit B eller C,
onkologiska sjukdomar,
tyfus, leptospiros, tuberkulos,
HIV-infektioner,
borrelios av fästingburen etiologi,
omfattande skador eller frakturer,
graviditet,
vid injektion av narkotiska läkemedel.

I de flesta fall åtföljs falskt positiva reaktioner av en låg titer. Höga titrar är typiska för det sekundära stadiet av sjukdomen och tidigare latent syfilis. Men de kan också uppträda under en falsk-positiv reaktion hos patienter med maligna neoplasmer.

Hos personer som har haft syfilis minst en gång förblir RPHA-reaktionen positiv under resten av livet.

Sällsynta undantag kan vara de situationer då sjukdomen identifierades i ett tidigt utvecklingsstadium, varefter intensiv och effektiv terapi utfördes. Därför kan RPGA-analys inte användas för att bedöma dynamiken i återhämtning eller jämförande diagnos av tidiga eller sena stadier av sjukdomen.

Om en positiv reaktion erhålls är det nödvändigt att undersöka familjemedlemmar till den sjuke och personer som har haft sexuell kontakt med honom.

En negativ reaktion kan erhållas i följande fall:

personen har inte syfilis,
blod togs felaktigt för testning,
2-4 veckor har gått sedan infektionen, och produktionen av antikroppar har ännu inte börjat.

Under alla omständigheter måste resultatet av studien bedömas i kombination med ytterligare laboratorie- och anamnestiska indikatorer.

Vem är analysen avsedd för?

En läkare kan hänvisa patienter till att donera blod för RPGA i följande fall:

i närvaro av kliniska manifestationer av syfilis: ulcerösa utslag, förstorade lymfkörtlar, diffus alopeci och andra,
om du misstänker en möjlig infektion vid kontakt med redan sjuka personer,
givare som vill donera blod,
personer som genomgår årliga förebyggande undersökningar eller utfärdar hälsointyg,
patienter med ett positivt screeningtest,
före sjukhusvistelse på ett sjukhus,
under preoperativ undersökning,
att identifiera patogener av salmonellos, difteri, dysenteri med hjälp av RPGA-metoden med lämplig diagnostik.

Procedur för att genomföra studien

Ett venöst blodprov som donerats av patienten skickas för testning. För att inte få en felaktig slutsats bör patienten ansvara för att förbereda analysen. För att testresultaten ska vara tillförlitliga bör du följa följande rekommendationer:

Testet ska endast tas på fastande mage.
På analysdagen kan du dricka mineralvatten utan gas i minimala mängder.
Du bör inte röka i minst 30 minuter innan testet, men det är bättre att öka denna tid till flera timmar.
Ett direkt förbud införs mot konsumtion av alkoholhaltiga drycker.
Patienter som behöver regelbundet använda någon medicin måste informera den läkare som remitterar dem för undersökning.
Om du mår dåligt eller mår dåligt ska du meddela sjuksköterskan som tar blodet eller till läkaren på den öppenvårdsmottagning där du behöver göra provet.

Var ansvarig inte bara för frågan om var du ska testas, utan också för att förbereda dig inför tentamen.

Diagnos av andra infektionssjukdomar

Man bör inte tro att en studie som RPGA endast kan utföras för att identifiera orsaken till syfilis i kroppen.

En analys med en salmonella diagnosticum låter dig upptäcka närvaron av en infektion i matsmältningssystemet - salmonella. Från och med den fjärde dagen efter infektionen producerar kroppen antikroppar mot Salmonella-antigener, som RPGA-metoden hjälper till att identifiera. Ett negativt resultat indikerar frånvaro av infektion, och en positiv titer, som ökar från 1:200 till 1:800 i den akuta fasen, indikerar dess närvaro.

Metoden att utföra RPGA med en difterimarkör gör det möjligt att diagnostisera difteri och bedöma immunitet efter vaccination. Antikroppar börjar produceras av immunförsvaret redan nästa dag efter infektion, och stannar kvar i kroppen i flera veckor. Känsligheten i denna analys är överlägsen den bakteriologiska forskningsmetoden. En titer på 1:80 bekräftar närvaron av difteri i kroppen.

Dysenterimarkören för RPHA detekterar mest exakt shigellos (bakteriell dysenteri), även jämfört med laboratoriediagnostikmetoden genom bakterieodling. Om patienten inte får kvalitetsbehandling utvecklas sjukdomen till en kronisk process, där återfall ofta uppstår. Analysen låter dig diagnostisera de akuta och kroniska faserna av diarré, identifiera orsaken till dysenteri, skilja bakteriell shigellos från kolorektal cancer, endokrina störningar eller inflammation i tjocktarmen. En negativ reaktion indikerar frånvaron av bacillen, och dess närvaro bekräftas av en titer på 1:80 för barn eller 1:320 för vuxna.

Genom att utföra ett test med en mässlingsmarkör kan du fastställa mässlingssjukdom. En sådan undersökning kan bli ett alternativ till den RTGA-analys som ofta görs för att diagnostisera mässling.

Så, RPGA-blodprov - vad är det? För att sammanfatta kan vi säkert säga att detta är en modern, mycket känslig och pålitlig metod för att diagnostisera olika sjukdomar av bakteriologisk etiologi.

I kontakt med

hemagglutinationshämningsreaktion (HAI)

RHA bygger på röda blodkroppars förmåga att hålla ihop när vissa antigener adsorberas på dem. Allantoin- och fostervatten, en suspension av korioallantoinmembran från kycklingembryon, suspensioner och extrakt från kulturer eller organ från djur infekterade med virus, och inhemskt smittsamt material används som testmaterial för hemagglutination. RGA är inte serologiskt, eftersom det sker utan deltagande av immunserum och används för att välja den fungerande utspädningen av antigenet för att utföra RGA eller närvaron av ett antigen (virus) i testmaterialet (till exempel för influensa). Reaktionen använder röda blodkroppar från djur, fåglar och människor i blodgrupp I (0).

För att ställa in en ungefärlig RGA appliceras en droppe av en 5 % suspension av röda blodkroppar och en droppe av testmaterialet på en glasskiva och blandas noggrant. Om resultatet är positivt, efter 1-2 minuter observeras utseendet av flockig agglutination av erytrocyter makroskopiskt.

För att sätta upp RGA i en ovikt rad i brunnarna på polystyrenplattor, bereds dubbelt ökande utspädningar av testmaterialet i fysiologisk lösning i en volym av 0,5 ml. 0,5 ml 0,25 - 1% suspension av röda blodkroppar tillsätts till alla provrör. Resultaten beaktas efter fullständig sedimentering av erytrocyter i kontrollen (röda blodkroppar + saltlösning). Reaktionen beaktas av arten av erytrocytsedimentet. I positiva fall markeras graden av agglutination med plus. En reaktion som ser ut som en tunn film av klibbiga röda blodkroppar som täcker botten av ett provrör (paraply) bedöms med fyra pluspunkter kanter av klibbiga röda blodkroppar är markerade med två plusser ett flockigt sediment av röda blodkroppar omgiven av en zon av agglutinerade klumpar erytrocyter motsvarar ett plus. Ett skarpt definierat erytrocytsediment som inte kan skiljas från kontrollen indikerar frånvaron av agglutination. Titern antas vara den maximala utspädningen av testmaterialet som orsakade agglutination av erytrocyter med två plus.

Om RHA-resultatet är positivt fortsätter studien och bestämmer vilken typ av virus som isolerats med hjälp av en hemamed typspecifika sera.

RTGA är baserat på antiserumets egenskap att undertrycka viral hemagglutination, eftersom viruset som neutraliseras av specifika antikroppar förlorar förmågan att agglutinera röda blodkroppar. För preliminär typning av virus används droppmetoden på glas. För att definitivt fastställa typen av det isolerade viruset och titrera antikropparna i sera, placeras en expanderad RTGA i provrör eller brunnar. För detta ändamål bereds tvåfaldiga utspädningar av sera i fysiologisk lösning och dispenseras i 0,25 ml. Till serumspädningarna tillsätt en droppe material som innehåller viruset och en droppe 1% suspension av röda blodkroppar.

När man använder RTGA för att bestämma typen av virus används typspecifika sera som tillsätts till en lika stor volym av antigenets arbetsutspädning. Typen av det isolerade viruset bestäms av det specifika immunserum som visade den högsta titern av antikroppar mot detta virus.

RGA och RTGA används i stor utsträckning för diagnos av virusinfektioner (fästingburen encefalit, influensa, etc.) för att detektera specifika antikroppar och för att identifiera många virus genom deras antigener.

Immunofluorescensreaktion (RIF)

RIF är baserat på kombinationen av antigener från bakterier, rickettsia och virus med specifika antikroppar märkta med fluorescerande färgämnen (fluoresceinisotiocyanat, rhodamin, B-isoticyanit, lissatin rhodamine B-200, sulfoklorid, etc.) som har reaktiva grupper (sulfocyklorid, etc.) , etc.) . Dessa grupper kombineras med fria aminogrupper av antikroppsmolekyler, som inte förlorar sin specifika affinitet för motsvarande antigen när de behandlas med en fluorokrom. De resulterande AG–AT-komplexen blir tydligt synliga, starkt lysande strukturer under ett fluorescerande mikroskop (Fig. 48). RIF kan detektera små mängder bakteriella och virala antigener. RIF-metoden används i två versioner: direkt och indirekt metod.

Den direkta metoden är baserad på den direkta kopplingen av ett antigen med en märkt antikropp. Den indirekta metoden är baserad på steg-för-steg-detektion av AG-AT-komplexet med fluorescerande färgämnen. Det första steget är bildandet av immunkomplex av ett specifikt antigen med specifika antikroppar. Det andra steget är att identifiera detta komplex genom att behandla det med märkt antigammaglobulin.

Fördelen med RIF är enkelhet, hög känslighet och snabbhet att uppnå resultat. RIF används som en metod för tidig uttrycklig diagnos av influensa, dysenteri, malaria, pest, tularemi, syfilis etc. Ett fluorescerande mikroskop används för att genomföra en sådan studie.

Radioimmunoanalys (RIA)

RIA är en av de mest känsliga immundiagnostiska metoderna. Det används för att detektera hepatit B-virusantigen hos patienter med viral hepatit. För att göra detta tillsätts ett referensserum (serum som innehåller antikroppar mot hepatit B-viruset) till testserumet. Blandningen inkuberas i 1-2 dagar vid en temperatur av 40°C, sedan tillsätts ett referensantigen (antigen märkt med 125 J-isotopen) och inkubationen fortsätter i ytterligare 24 timmar. Utfällande antiimmunoglobuliner mot referensserumproteiner tillsätts till det resulterande antigen-antikroppskomplexet, vilket leder till bildandet av en fällning (fig. 49). Resultatet beaktas av närvaron och antalet pulser i fällningen som registreras av räknaren. Om det finns ett antigen i testserumet som har bundit till specifika antikroppar, interagerar de senare inte med det märkta antigenet och detekteras därför inte i fällningen. Sålunda är RIA baserad på principen om kompetitiv interaktion mellan det detekterade antigenet och en känd mängd märkt antigen med de aktiva centran av antikroppar.

Enzymkopplad immunosorbentmetod (ELISA)

Metoden används för att detektera antigener med deras motsvarande antikroppar konjugerade till ett tagenzym (pepparrotsperoxidas, b-galaktos eller alkaliskt fosfatas). Efter att ha kombinerat antigenet med det enzymmärkta immunserumet tillsätts ett substrat och kromogen till blandningen . Substratet klyvs av enzymet och dess nedbrytningsprodukter orsakar kemisk modifiering av kromogenen. Samtidigt ändrar kromogenen sin färg - färgens intensitet är direkt proportionell mot antalet bundna antigen- och antikroppsmolekyler (fig. 50).

Den vanligaste är fastfas-ELISA, där en av komponenterna i immunreaktionen (antigen eller antikropp) adsorberas på en fast bärare. Polystyrenmikropaneler används som en fast bärare. Vid bestämning av antikroppar tillsätts patientblodserum, antiglobulinserum märkt med ett enzym och en blandning av enzym- och kromogensubstratlösningar sekventiellt till brunnar med sorberat antigen. Varje gång efter tillsats av ytterligare en komponent tas obundna reagens bort från brunnarna genom noggrann tvättning. Om resultatet är positivt ändras färgen på kromogenlösningen.

En bärare i fast fas kan sensibiliseras inte bara med ett antigen utan också med en antikropp. Därefter tillsätts det önskade antigenet till brunnarna med sorberade antikroppar, immunserum mot antigenet märkt med ett enzym tillsätts och sedan tillsätts en blandning av substratlösningar för enzymet och kromogenen.

ELISA används för att diagnostisera sjukdomar orsakade av virala och bakteriella patogener.

AVSNITT VII. GRUNDLÄGGANDE OM VIRUSOLOGI

I laboratoriet används två hemagglutinationsreaktioner med olika verkningsmekanismer.

Den första RGA är serologisk. I denna reaktion agglutineras röda blodkroppar när de interagerar med lämpliga antikroppar (hemagglutininer). Reaktionen används ofta för att bestämma blodgrupper.

Den andra RGA är inte serologisk. I den orsakas inte vidhäftningen av röda blodkroppar av

antikroppar, men speciella ämnen som bildas av virus. Till exempel agglutinerar influensaviruset de röda blodkropparna hos kycklingar och marsvin, och polioviruset agglutinerar de röda blodkropparna hos får. Denna reaktion gör det möjligt att bedöma förekomsten av ett visst virus i materialet som studeras.

Reaktionen utförs i provrör eller på speciella plattor med brunnar. Materialet som testas för närvaron av viruset späds med en isotonisk lösning från 1:10 till 1:1280; 0,5 ml av varje spädning blandas med en lika stor volym 1-2% suspension av röda blodkroppar. I kontrollen blandas 0,5 ml erytrocyter med 0,5 ml isotonisk lösning. Provrören placeras i en termostat i 30 minuter, och plattorna lämnas i rumstemperatur i 45 minuter.

Redovisning av resultat. Om reaktionen är positiv uppstår ett sediment av röda blodkroppar med bågade kanter ("paraply") längst ner i provröret eller brunnen, som täcker hela botten av brunnen. Om resultatet är negativt bildar de röda blodkropparna ett tätt sediment med släta kanter ("knapp"). Samma sediment bör finnas i kontrollen. Reaktionens intensitet uttrycks med "+"-tecken. Virustitern är den maximala utspädningen av materialet i vilket agglutination sker.

Hemagglutinationsinhiberingsreaktion

Detta är en serologisk reaktion där specifika antivirala antikroppar, som interagerar med viruset (antigen), neutraliserar det och berövar det förmågan att agglutinera röda blodkroppar, d.v.s. hämma hemagglutinationsreaktionen. Denna reaktion låter dig bestämma typen och typen av virus.

Att sätta upp en reaktion. 0,25 ml antiviralt serum blandas med en lika stor volym material som innehåller viruset. Blandningen skakas och placeras i en termostat i 30 minuter, varefter 0,5 ml 1-2% suspension av röda blodkroppar tillsätts.

Redovisning av resultat. Om experimentet utförs korrekt, bör en "knapp" bildas i kontrollen av serum och erytrocyter - det finns ingen faktor som agglutinerar erytrocyter; vid antigenkontroll bildas ett "paraply" - viruset orsakade agglutination av röda blodkroppar. Om serumet är homologt med viruset som studeras, bildas en "knapp" - serumet har neutraliserat viruset.

Indirekt hemagglutinationsreaktion

Den indirekta (passiva) hemagglutinationsreaktionen (RIHA) är baserad på det faktum att röda blodkroppar, om ett lösligt antigen adsorberas på deras yta, förvärvar förmågan att agglutinera när de interagerar med antikroppar mot det adsorberade antigenet.

Att sätta upp en reaktion. Serumet värms i 30 minuter vid 56 °C, späds sekventiellt i förhållandet 1:10 - 1:1280 och hälls i 0,25 ml rör eller brunnar, där 2 droppar röda blodkroppar med antigener adsorberade på dem sedan tillsätts.

Kontroller: en suspension av erytrocyter med antigener adsorberade på dem med uppenbart immunserum, en suspension av erytrocyter med antigener adsorberade på dem med normalt serum; en suspension av normala röda blodkroppar med testserum. I den första kontrollen bör agglutination förekomma, i den andra och tredje bör den inte förekomma.

Kontrollfrågor.

1. Vad indikerar ett positivt röntgenanalysresultat mellan röda blodkroppar och materialet som testas för förekomst av virus?

2. Kommer en agglutinationsreaktion av röda blodkroppar att uppstå om ett virus och dess motsvarande serum tillsätts dem? Vad heter reaktionen som avslöjar detta fenomen?

PRAKTISKT ARBETE Nr 12.

Komplementfixeringsreaktion.

Komplementfixeringsreaktionen (FFR) bygger på det faktum att ett specifikt antigen-antikroppskomplex alltid adsorberar (binder) komplement till sig själv.

Denna reaktion används i stor utsträckning vid identifiering av antigener och vid serodiagnos av infektioner, särskilt sjukdomar orsakade av spiroketer (Wassermann-reaktion), rickettsia och virus.

RKS är en komplex serologisk reaktion. Det involverar komplement och två antigen-antikroppssystem. I huvudsak är dessa två serologiska reaktioner.

Det högra huvudsystemet består av ett antigen och en antikropp (den ena är känd, den andra inte). En viss mängd komplement läggs till den. Om antigenet och antikroppen i detta system matchar, kommer de att ansluta och binda en komplimang. Det resulterande komplexet är fint dispergerat och inte synligt.

Bildandet av detta komplex detekteras med hjälp av ett andra hemolytiskt eller indikatorsystem. Det inkluderar röda blodkroppar från får (antigen) och motsvarande hemolytiska serum (antikropp), dvs. färdigt immunkomplex. I detta system kan lys av röda blodkroppar endast ske i närvaro av komplement. Om komplement är bundet av det första systemet, kommer det inte att ske någon hemolys i det andra systemet, eftersom inget gratis komplement. Frånvaron av hemolys (innehållet i röret är grumligt eller det finns ett sediment av erytrocyter i botten) registreras som ett positivt RSK-resultat.

Om antigenet i det första systemet inte motsvarar antikroppen, bildas inte immunkomplexet och komplementet förblir fritt. Om den förblir fri, deltar komplimangen i det andra systemet, vilket orsakar hemolys, RSC-resultatet är negativt (innehållet i rören är genomskinligt - "lackerat blod").

Komponenter, komplementfixeringsreaktioner:

1. Antigen - vanligtvis lysat, extraherar, hapten,

mindre ofta en suspension av mikroorganismer.

2. Antikropp - patientens serum.

3. Komplement – marsvinsserum.

4. Antigen - fårerytrocyter.

5. Antikropp - hemolysin mot fårerytrocyter.

6. Isoton lösning.

På grund av det faktum att ett stort antal komplexa komponenter är involverade i RSC,

de måste först titreras och reageras i exakta mängder och i lika volymer: 0,5 eller 0,25, mer sällan 0,2, 1,25 eller 1,0 ml (större volymer ger ett mer exakt resultat). Titrering av reaktionskomponenterna utförs i samma volym som experimentet, varvid de saknade ingredienserna ersätts med en isotonisk lösning.

Vidal reaktion. Från den andra veckan av sjukdomen ackumuleras antikroppar mot smittämnet i blodet hos patienter. För att identifiera dem undersöks patientens blodserum i en agglutinationsreaktion. Dödade Salmonellakulturer - diagnosticums - används som antigener.

För att utföra Widal-reaktionen används patientens serum, en uppsättning diagnostiska kit och en isoton natriumkloridlösning.

Blod (2-3 ml) från pulpan på fingret eller kubitalvenen samlas upp i ett sterilt rör och levereras till laboratoriet. I laboratoriet placeras provröret i en termostat i 20-30 minuter för att bilda en koagel, sedan används en pasteurpipett för att ringa in koagel för att separera den från provrörets vägg, och den placeras i kylan. i 30-40 minuter. Det separerade serumet sugs av och används för att utföra en agglutinationsreaktion med diagnostik från Salmonella tyfus och paratyfusfeber. Blod kan centrifugeras för att erhålla serum.

När en infektionsprocess inträffar - tyfoidfeber eller paratyfus - producerar kroppen O- och H-antikroppar mot samma antigener av patogenen.

O-antikroppar dyker upp först och försvinner ganska snabbt. H-antikroppar håller länge. Samma sak händer vid vaccination, därför indikerar en positiv Widal-reaktion med O- och H-antigener förekomsten av sjukdomen, och en reaktion endast med H-antigener kan uppstå hos både de som tillfrisknat från sjukdomen (anamnestisk reaktion) och de vaccinerade (vaccinreaktion). Baserat på detta utförs Widal-reaktionen separat med O- och H-antigener (diagnosticum).

Eftersom tyfoidfeber och paratyfus A och B är kliniskt lika, för att identifiera sjukdomens natur, testas patientens serum samtidigt med diagnostik från Salmonella tyfus och paratyfus A och B.

Widal-reaktionen används ofta eftersom den är enkel och inte kräver speciella förhållanden.

Reaktionen kan utföras på två sätt: droppvis och volumetrisk (se kapitel 12). I praktiken används den volymetriska metoden oftare. När en linjär agglutinationsreaktion utförs måste antalet rader motsvara antalet antigener (diagnosticum). Det orsakande medlet för sjukdomen anses vara en mikroorganism från vilken diagnostiken agglutinerades av patientens serum. Ibland noteras gruppagglutination, eftersom de orsakande medlen för tyfoid- och paratyfusfeber har gemensamma gruppantigener. I detta fall anses resultatet av reaktionen i serien där agglutination noteras i en större utspädning av serum vara positivt (tabell 36).

Tabell 36. Möjligt resultat av agglutinationsreaktionen

Notera. I praktiken utförs Widal-reaktionen med fyra diagnostikum: tyfoidfeber "O" och "H", och paratyfusfeber A och B med diagnostik "ON".

Om agglutination endast inträffar i små utspädningar av serum - 1:100, 1:200, för att skilja reaktionen under sjukdomen från vaccinationen eller anamnestisk reaktion, tillgriper de att upprepa agglutinationsreaktionen efter 5-7 dagar. Hos en patient ökar antikroppstitern, men hos en vaccinerad eller återställd person förändras den inte. Således fungerar en ökning av antikroppstiter i blodserumet som en indikator på sjukdomen.

Som svar på införandet av tyfuspatogener som har Vi-antigenet i kroppen, uppträder Vi-agglutininer i patientens blod. De upptäcks från den andra sjukdomsveckan, men deras titer överstiger vanligtvis inte 1:10. Detekteringen av Vi-antikroppar är förknippad med närvaron av tyfuspatogener i kroppen, därför är bestämning av dessa antikroppar av stor epidemiologisk betydelse, eftersom det möjliggör identifiering av bakteriebärare.

Vi-hemagglutinationsreaktion. Detta är den mest känsliga reaktionen för att upptäcka antikroppar.

Principen för reaktionen är att humana (grupp I) eller fårerytrocyter, efter särskild behandling, kan adsorbera Vi-antigen på sin yta och därigenom förvärva förmågan att agglutinera med motsvarande Vi-antikroppar.

Röda blodkroppar med antigener adsorberade på ytan kallas erytrocytdiagnosticum.

För att utföra Vi-hemagglutinationsreaktionen, ta:

1) patientens blodserum (1-2 ml); 2) erytrocyt Salmonella Vi-diagnosticum; H) Vi-serum; 4) O-serum; 5) isotonisk natriumkloridlösning.

Reaktionen utförs i agglutinationsrör eller i plastplattor med brunnar.

Blod tas från patienten på samma sätt som för Vidal-reaktionen. Serum erhålls. Tvåfaldiga serieutspädningar framställs från serumet, från 1:10 till 1:160.

0,5 ml av varje spädning tillsätts till brunnen och 0,25 ml erytrocyt diagnosticum tillsätts. Reaktionen utförs i en volym av 0,75 ml.

Kontrollerna är: 1) standardagglutinerande monoreceptorserum + diagnosticum - reaktionen måste vara positiv upp till serumtitern; 2) diagnosticum i isoton natriumkloridlösning (kontroll) - reaktionen ska vara negativ.

Innehållet i brunnarna blandas noggrant, placeras i en termostat i 2 timmar och lämnas i rumstemperatur till nästa dag (18-24 timmar).

Bokföring börjar med kontroll. Reaktionen bedöms beroende på graden av agglutination av diagnosticum.

Resultaten beaktas enligt fyrkorssystemet:

Röda blodkroppar är helt agglutinerade - sediment i botten av brunnen i form av ett "paraply";

+++ "paraply" är mindre, inte alla röda blodkroppar är agglutinerade;

++ "paraplyet" är litet, i botten av hålet finns ett sediment av icke-agglutinerade erytrocyter;

Reaktionen är negativ; de röda blodkropparna agglutinerade inte och slog sig ner i botten av brunnen i form av en knapp.

Kontrollfrågor

1. Vid vilken period av sjukdomen utförs Vidal-reaktionen?

2. Vilka ingredienser behövs för att utföra Widal-reaktionen?

3. Vilken diagnostik används för att utföra Vidal-reaktionen?

4. Vilken serologisk reaktion är den mest känsliga för att diagnostisera tyfus paratyfusinfektioner?

5. Vilket diagnostikum används vid utförande av Vi-hemagglutinationsreaktionen?

6. Vilket serum används för att bestämma närvaron av Vi-antigen i kulturen som studeras?

7. Vad är betydelsen av att bestämma Vi-fagotypen?

Ta O- och H-diagnostik från Salmonella tyfus, paratyfus A och paratyfus B och patientens serum från läraren. Ge Vidals reaktion.

Kulturmedia

EMS, Ploskireva, och vismut-sulfit agar media produceras av den medicinska industrin i form av torrt pulver. De är beredda enligt anvisningarna på etiketten: väg upp en viss mängd pulver, häll i lämplig mängd vatten, koka och häll i sterila petriskålar.

Russell onsdag. Tillsätt 40 g torrt näringsmedium till 950 ml destillerat vatten och tillsätt 5 g näringsagar. Värm tills pulvren kokar och löser sig. 1 g x löses i 50 ml destillerat vatten. timmar av glukos och tillsätt till den beredda blandningen. Mediet hälls i sterila rör på 5-7 ml, steriliseras med strömmande ånga (2 dagar i 2 minuter) och fasas så att en kolonn finns kvar. Russells medium med mannitol och sackaros framställs på samma sätt.

Olkenitskys medium från torr agar. 2,5 g torr näringsagar smälts i 100 ml destillerat vatten. Alla ingredienser som anges i receptet (etiketten) läggs till agaren kyld till 50°C. Mediet som hälls i provrör steriliseras med strömmande ånga (3 dagar, 20 minuter vardera) och klipps sedan ner. Det beredda mediet ska vara blekrosa till färgen.

Hem → Analyser → Immunologisk metod → Hemagglutinationsreaktioner (immunologisk metod)

Agglutinationsreaktionerär baserade på interaktionen av ett reagens (antikroppar) med antigener som finns på ytan av celler eller främmande partiklar. Som ett resultat bildas stora aggregat, som fälls ut och kan ses även med blotta ögat. På detta sätt bestäms blodgruppen enligt ABO-systemet, närvaron av Rh-faktorn i det etc. Detta är en mer känslig diagnostisk metod jämfört med utfällningsreaktioner, eftersom volymen av sediment (agglutinat) överstiger volymen av fällning.

Direkt hemagglutination

Den direkta hemagglutinationsreaktionen (DHR) används för att detektera ytantigener hos mikroorganismer och röda blodkroppar, samt antikroppar mot dem.
Testmaterialet (blod) tillsätts till standardsera innehållande antikroppar. Hastigheten på den direkta agglutinationsreaktionen är relaterad till mängden material som testas, mängden och koncentrationen av serum och omgivande temperatur.

Indirekt hemagglutination

Den indirekta hemagglutinationsreaktionen utförs för att detektera antikroppar i patientens blod med hjälp av en erytrocytdiagnostik. Reagenset består av röda blodkroppar på vars yta det finns ett antigen (proteiner av mikroorganismer, toxiner, allergener etc.).
Patientens blodserum späds med 0,9 % natriumkloridlösning, sedan tillsätts erytrocytdiagnostik och resultatet övervakas. Denna mycket känsliga diagnostiska metod detekterar antigener även i små koncentrationer.

Hemagglutinationsreaktion (HRA).

I laboratoriet används två hemagglutinationsreaktioner med olika verkningsmekanismer.

Den andra RGA är inte serologisk. I den orsakas inte vidhäftningen av röda blodkroppar av

Hemagglutinationsreaktion

Virustitern är den maximala utspädningen av materialet i vilket agglutination sker.

Hemagglutinationsinhiberingsreaktion

Indirekt hemagglutinationsreaktion

Att sätta upp en reaktion. Serumet värms upp i 30 minuter vid 56 °C, späds sekventiellt i förhållandet 1:10 - 1:1280 och hälls i 0,25 ml i provrör eller brunnar, där 2 droppar röda blodkroppar med antigener adsorberade på dem sedan Lagt till.

Kontrollfrågor.

1. Vad indikerar ett positivt röntgenanalysresultat mellan röda blodkroppar och materialet som testas för förekomst av virus?

2. Kommer en agglutinationsreaktion av röda blodkroppar att uppstå om ett virus och dess motsvarande serum tillsätts dem? Vad heter reaktionen som avslöjar detta fenomen?

PRAKTISKT ARBETE Nr 12.

Komplementfixeringsreaktion.

Komplementfixeringsreaktionen (CFR) bygger på det faktum att ett specifikt antigen-antikroppskomplex alltid adsorberar (binder) komplement till sig själv.

Denna reaktion används i stor utsträckning vid identifiering av antigener och vid serodiagnos av infektioner, särskilt sjukdomar orsakade av spiroketer (Wassermann-reaktion), rickettsia och virus.

RKS är en komplex serologisk reaktion. Det involverar komplement och två antigen-antikroppssystem. I huvudsak är dessa två serologiska reaktioner.

Komponenter, komplementfixeringsreaktioner:

1. Antigen - vanligtvis lysat, extraherar, hapten,

mindre ofta en suspension av mikroorganismer.

2. Antikropp - patientens serum.

3. Komplement – marsvinsserum.

4. Antigen - fårerytrocyter.

5. Antikropp - hemolysin mot fårerytrocyter.

6. Isoton lösning.

På grund av det faktum att ett stort antal komplexa komponenter är involverade i RSC,

Relaterad information:

Sök på sajten:

Det indirekta eller passiva hemagglutinationstestet (IRHA eller RPHA) är mer känsligt och specifikt än agglutinationstestet. Denna reaktion används också i två riktningar.

1) För att upptäcka antikroppar i patientens blodserum används erytrocytdiagnostik, där antigenet adsorberas på ytan av tanninbehandlade erytrocyter. I relation till denna reaktion används oftare termen RPGA.

Testserumet späds ut i brunnarna på plastplattor och erytrocytdiagnosticum tillsätts. Med en positiv reaktion visas en tunn film längs hålets väggar i form av ett "spetsparaply" med en negativ reaktion, ett tätt sediment av erytrocyter i form av en "knapp".

2) För att upptäcka toxiner och bakterieantigener i materialet som studeras används antikroppserytrocytdiagnostik, erhållen genom adsorption av antikroppar på erytrocyter. I relation till denna reaktion används oftare termen RNGA. Till exempel, med hjälp av antikroppsdiagnostik, upptäcks pestbacillantigen, difteriexotoxin och botulinumexotoxin.

Vad är en erytrocytdiagnostik? Vad är en antikropp erytrocyt diagnosticum?

Erythrocyte diagnosticums är röda blodkroppar (behandlade med tannin eller formalin) med antigener extraherade från bakterier adsorberade på dem, och används i RPHA (passiva hemagglutinationsreaktioner). I de fall då RPGA används för att detektera antigen i sekret från patienter, i vävnader etc., används "antikroppsdiagnostik", dvs röda blodkroppar sensibiliserade med antikroppar.

I RNGA detekteras blodserumantikroppar med hjälp av en antigen erytrocytdiagnosticum, som är erytrocyter med antigener adsorberade på dem.

Metod för att sätta upp reaktioner. Koagglutinationsreaktion.

- fixering av röda blodkroppar med formaldehyd eller glutar- eller akrylaldehyder. Sådana behandlade röda blodkroppar lagras under lång tid. Oftare används erytrocyter från får, människor, kycklingar etc. för detta ändamål;
— Behandling av fixerade erytrocyter med en tanninlösning. Som ett resultat förvärvar röda blodkroppar förmågan att irreversibelt adsorbera proteiner (virus och antikroppar) på deras yta;
- sensibilisering av taniserade erytrocyter av virus eller antikroppar.

Koagglutinationsreaktion (CAR)

Koagglutinationsreaktionen används för att bestämma antigener med användning av antikroppar adsorberade på protein A i stafylokockceller (antikroppsdiagnosticum).
Protein A har en affinitet för Fc-fragmentet av immunoglobuliner, därför behandlas sådana bakterier med immundiagnostiskt serum ospecifikt adsorberar serumantikroppar, som sedan interagerar med aktiva centra med motsvarande mikrober isolerade från patienter. Som ett resultat av koagglutination bildas flingor bestående av stafylokocker, diagnostiska serumantikroppar och den detekterade mikroben.

Agglutinerande serum: vad de innehåller; hur de erhålls, vad de används till; Vad är titern på agglutinerande serum?

Agglutinerande serum erhålls genom att immunisera kaniner (intravenöst, subkutant eller intraperitonealt) med en suspension av dödade bakterier, börja med en dos på 200 miljoner, sedan 500 miljoner, 1 miljard, 2 miljarder mikrobiella kroppar i 1 ml, med intervaller på 5 dagar. 7-8 dagar efter den sista immuniseringen tas blod och antikroppstitern bestäms.

Titern för ett agglutinerande serum är den maximala utspädningen av serumet vid vilken agglutination med motsvarande mikroorganism inträffar.

Agglutinerande sera används för att identifiera mikrober i en fullskalig agglutinationsreaktion.

Hemagglutinationsreaktion (HRA)

Om mikroorganismen som studeras agglutineras av serum till titern eller till halva titervärdet, kan den anses tillhöra den art vars namn anges på ampullens etikett.

Vilka är skillnaderna mellan polyvalenta och monovalenta (monoreceptor) agglutinerande sera; Varför kommer det sig att när en kanin immuniseras med mikrober av en typ erhålls ett serum som innehåller antikroppar mot flera antigener?

Monoreceptorsera är sera som innehåller antikroppar mot endast ett antigen, och polyvalenta sera som ger aglutinationsreaktioner med två eller tre relaterade bakterier som har ett gemensamt antigen. Agglutinerande sera används för att identifiera mikroorganismer i en agglutinationsreaktion. Nackdelen med sådana sera är att de kan ge gruppagglutinationsreaktioner på grund av de innehåller antikroppar mot bakterier som har gemensamma antigener.

Hemagglutinationsreaktion. Beskrivning och tillämpning

Det är baserat på det faktum att röda blodkroppar, på vilka antigener tidigare adsorberats, förvärvar förmågan att agglutinera i närvaro av homologa sera (antikroppar).

I detta fall fungerar röda blodkroppar som bärare med specifika determinanter, vars agglutination sker som ett resultat av antigen + antikroppsreaktionen.

Röda blodkroppar på vars yta antigener är fast fästa kallas erytrocytantigen diagnosticum, eller erytrocyter sensibiliserade med antigen.

En annan typ av RNGA - antikroppar adsorberas på ytan av erytrocyter och deras efterföljande agglutination sker i närvaro av ett homologt antigen. I detta fall kallas sådana erytrocyter erytrocytantikropp diagnosticum, eller erytrocyter sensibiliserade av antikroppar.

Baserat på dessa två grundläggande metodologiska tillvägagångssätt har många modifieringar av RNGA utvecklats och använts. Sålunda används små standardlatexpartiklar som bärare. I det här fallet kallas reaktionen latexagglutinationsreaktion (RLA) eller Staphylococcus aureus används - koagglutinationsreaktion, etc. Vanligtvis bereds erytrocytdiagnostik vid biologiska industriföretag, och huvudupplevelsen av RNGA utförs i diagnostiska laboratorier.

Förberedelse av erytrocytdiagnostik inkluderar följande steg:

fixering av röda blodkroppar med formaldehyd eller glutar- eller akrylaldehyder. Sådana behandlade röda blodkroppar lagras under lång tid. Oftare används erytrocyter från får, människor, höns etc. för detta ändamål;
behandling av fixerade erytrocyter med tanninlösning. Som ett resultat förvärvar röda blodkroppar förmågan att irreversibelt adsorbera proteiner (virus och antikroppar) på deras yta;
sensibilisering av taniserade erytrocyter av virus eller antikroppar.

Det bör noteras att metoderna för att förbereda erytrocytdiagnostik för virusinfektioner är olika.

Proceduren för att utföra RNGA för att detektera och bestämma antikroppstiter är som följer:

lika doser av erytrocyter sensibiliserade med antigen tillsätts till successiva 2-faldiga utspädningar av serum;
blandningen lämnas i 2-3 timmar vid rumstemperatur eller i 16-18 timmar vid 4 °C;
ta hänsyn till resultaten. Om serumet innehåller antikroppar mot viruset som de röda blodkropparna sensibiliserades med, observeras hemagglutination, vilket bedöms i korsningar.

Antikroppstitern i serum anses vara den högsta serumspädningen som fortfarande ger hemagglutination med minst två korsningar.

RNGA åtföljs av alla relevanta kontroller. Vanligtvis utförs reaktionen med användning av mikrometoden.

RNGA låter dig lösa följande diagnostiska problem:

detektera antikroppar och bestämma deras titer i blodserum med användning av en känd erytrocytantigendiagnostik;
upptäcka och identifiera ett okänt virus med hjälp av en känd diagnostik för erytrocytantikroppar.

Fördelar med RNGA: hög känslighet, enkel placeringsteknik och svarshastighet. Det är dock viktigt att notera att stora svårigheter uppstår vid beredningen av stabil erytrocytdiagnostik (stort beroende av renheten hos de använda komponenterna, behovet av att välja ett sätt för fixering, tanisering och sensibilisering av erytrocyter för varje typ av virus).

Om du hittar ett fel, välj en textbit och tryck på Ctrl+Enter.

I kontakt med