Laboratoriniai ŽIV infekcijos tyrimo metodai. ŽIV infekcijos diagnozavimo metodai. Polimerazės reakcija pacientui skiriama tam tikslui

Šiuo metu naujos diagnostikos technologijos leidžia nustatyti daugelio ligų etiologines ir patogenetines priežastis bei radikaliai paveikti gydymo rezultatus. Bene įspūdingiausi šių technologijų diegimo klinikinėje praktikoje rezultatai pasiekti imunologijos ir infekcinių ligų diagnostikos srityse.

Testų sistemos, pagrįstos fermentiniais imunosorbentiniais ir chemiliuminescenciniais imunologiniais tyrimais, gali aptikti įvairių klasių antikūnus, o tai žymiai padidina klinikinių ir analitinių infekcinių ligų diagnostikos metodų jautrumo ir specifiškumo informacijos turinį. Reikėtų pažymėti, kad didžiausia pažanga diagnozuojant infekcijas yra susijusi su polimerazės grandininės reakcijos metodo, kuris laikomas „auksiniu standartu“ diagnozuojant ir įvertinant daugelio infekcinių ligų gydymo efektyvumą, įdiegimu į laboratorinę praktiką. ligų.

Tyrimams gali būti naudojamos įvairios biologinės medžiagos: serumas, kraujo plazma, grandymas, biopsija, pleuros ar smegenų skystis (CSF). Visų pirma, infekcijų laboratorinės diagnostikos metodais siekiama nustatyti tokias ligas kaip virusinis hepatitas B, C, D, citomegalovirusinė infekcija, lytiniu keliu plintančios infekcijos (gonorėja, chlamidijos, mikoplazmos, ureaplazmos), tuberkuliozė, ŽIV infekcija ir kt.

ŽIV infekcija – tai liga, kurią sukelia žmogaus imunodeficito virusas (ŽIV), kuris ilgą laiką išlieka limfocituose, makrofaguose ir nervinio audinio ląstelėse, dėl to išsivysto lėtai progresuojantis organizmo imuninės ir nervų sistemos pažeidimas, pasireiškiantis. antrinės infekcijos, navikai, poūmis encefalitas ir kiti patologiniai pokyčiai.

Infekcijos sukėlėjai – 1 ir 2 tipų žmogaus imunodeficito virusai (ŽIV-1, ŽIV-2) – priklauso retrovirusų šeimai, lėtųjų virusų pošeimiui. Virionai yra sferinės dalelės, kurių skersmuo yra 100-140 nm. Viruso dalelė turi išorinį fosfolipidinį apvalkalą, kuriame yra glikoproteinų (struktūrinių baltymų), kurių molekulinė masė matuojama kilodaltonais. ŽIV-1 tai yra gpl60, gpl20, gp41. Vidinį viruso apvalkalą, dengiantį šerdį, taip pat vaizduoja baltymai, kurių molekulinė masė yra žinoma - p17, p24, p55 (ŽIV-2 yra gpl40, gpl05, gp36, p16, p25, p55).

ŽIV genome yra RNR ir fermento atvirkštinė transkriptazė (revertazė). Kad retroviruso genomas susijungtų su ląstelės-šeimininkės genomu, DNR pirmiausia sintetinama viruso RNR šablone, naudojant atvirkštinį metodą. Tada provirusinė DNR integruojama į šeimininko ląstelės genomą. ŽIV turi ryškų antigeninį kintamumą, gerokai viršijantį gripo viruso.

Žmogaus organizme pagrindinis ŽIV taikinys yra T limfocitai, kurių paviršiuje yra daugiausiai CD4 receptorių. Po to, kai ŽIV patenka į ląstelę, naudodamas atvirkštinį aktyvumą, virusas sintezuoja DNR, remdamasis savo RNR mėginiu, kuris yra integruotas į ląstelės šeimininkės genetinį aparatą (CD4 limfocitus) ir lieka ten visą gyvenimą proviruso būsenoje. Be T-limfocitų pagalbininkų, pažeidžiami makrofagai, B-limfocitai, neuroglijos ląstelės, žarnyno gleivinė ir kai kurios kitos ląstelės. T-limfocitų (CD4 ląstelių) skaičiaus sumažėjimo priežastis – ne tik tiesioginis citopatinis viruso poveikis, bet ir jų susiliejimas su neužkrėstomis ląstelėmis. Kartu su T-limfocitų pažeidimu, ŽIV užsikrėtę pacientai patiria polikloninį B limfocitų aktyvavimą, padidėjus visų klasių imunoglobulinų, ypač IgG ir IgA, sintezei ir vėliau šios imuninės sistemos dalies išeikvojimui. Imuninių procesų reguliavimo sutrikimas taip pat pasireiškia α-interferono, β2-mikroglobulino kiekio padidėjimu ir IL-2 lygio sumažėjimu. Dėl imuninės sistemos disfunkcijos, ypač kai T limfocitų (CD4) skaičius sumažėja iki 400 ląstelių 1 μl kraujo ar mažiau, susidaro sąlygos nekontroliuojamai ŽIV replikacijai ir žymiai padidėja virionų skaičius įvairiose ląstelėse. kūno aplinkos. Dėl daugelio imuninės sistemos dalių pažeidimo ŽIV užsikrėtęs žmogus tampa neapsaugotas nuo įvairių infekcijų sukėlėjų.

Didėjant imunosupresijai, išsivysto sunkios progresuojančios ligos, kurios nepasitaiko normaliai veikiančios imuninės sistemos žmogui. Tai ligos, kurias Pasaulio sveikatos organizacija (PSO) apibrėžė kaip AIDS žyminčias arba AIDS apibrėžiančias ligas.

AIDS apibrėžiančios ligos

Pirmoji grupė - ligos, būdingos tik sunkiam imunodeficitui (CD4 lygis<200). Клинический диагноз ставится при отсутствии анти-ВИЧ-антител или ВИЧ-антигенов.

Antroji grupė yra ligos, kurios gali išsivystyti tiek esant sunkiam imunodeficitui, tiek kai kuriais atvejais be jo.

Todėl tokiais atvejais būtinas laboratorinis diagnozės patvirtinimas.

Pirmoji grupė:

• stemplės, trachėjos, bronchų kandidozė;
• ekstrapulmoninė kriptokokozė;
• kriptosporidiozė su viduriavimu ilgiau nei 1 mėnesį;
• įvairių organų, išskyrus kepenis, blužnį ar limfmazgius, citomegaloviruso pažeidimai vyresniems nei 1 mėnesio pacientams;
• herpes simplex viruso sukelta infekcija, pasireiškianti odos ir gleivinės opomis, kurios išlieka ilgiau nei 1 mėnesį, taip pat bet kokios trukmės bronchitas, pneumonija ar ezofagitas, pažeidžiantis vyresnio nei 1 mėnesio amžiaus pacientą;
• generalizuota Kapoši sarkoma jaunesniems nei 60 metų pacientams;
• smegenų limfoma (pirminė) jaunesniems nei 60 metų pacientams;
• limfocitinė intersticinė pneumonija ir (arba) plaučių limfoidinė displazija jaunesniems nei 12 metų vaikams;
• išplitusi infekcija, kurią sukelia netipinės mikobakterijos (M. aviumintracellulare komplekso mikobakterijos), kurios lokalizacija arba lokalizacija (be plaučių) yra odoje, gimdos kaklelio limfmazgiuose, plaučių šaknų limfmazgiuose;
• Pneumocistinė pneumonija;
• progresuojanti daugiažidininė leukoencefalopatija;
• galvos smegenų toksoplazmozė vyresniems nei 1 mėnesio pacientams.

Antroji grupė:

• bakterinės infekcijos, kombinuotos arba pasikartojančios, vaikams iki 13 metų (daugiau nei du atvejai per 2 stebėjimo metus): sepsis, pneumonija, meningitas, kaulų ar sąnarių pažeidimai, Haemophilus influenzae sukelti abscesai, streptokokai;
• išplitusi kokcidioidomikozė (ekstrapulmoninė lokalizacija);
• ŽIV encefalopatija (ŽIV demencija, AIDS demencija);
• histoplazmozė su viduriavimu, trunkančiu ilgiau nei 1 mėnesį;
• izosporozė su viduriavimu, trunkančiu ilgiau nei 1 mėnesį;
• Kapoši sarkoma bet kuriame amžiuje;
• smegenų limfoma (pirminė) bet kokio amžiaus žmonėms;
• kitos B ląstelių limfomos (išskyrus Hodžkino ligą) arba nežinomo imunofenotipo limfomos: smulkialąstelinės limfomos (pvz., Burkitt limfoma ir kt.); imunoblastinės sarkomos (imunoblastinės, stambialąstelinės, difuzinės histiocitinės, difuzinės nediferencijuotos limfomos);
• išplitusi mikobakteriozė (ne tuberkuliozė), kai pažeidžiami ne tik plaučiai, bet ir odos, gimdos kaklelio ar hilar limfmazgiai;
• ekstrapulmoninė tuberkuliozė (pažeidžianti kitus vidaus organus nei plaučiai);
• salmonelių septicemija, pasikartojanti;
• ŽIV distrofija (išsekimas, staigus svorio kritimas).

1 lentelėje (žr. pirmiau pateiktą šaltinio nuorodą) išvardytos AIDS apibrėžiančios ligos ir jų etiologiniai veiksniai.

Yra daug AIDS klasifikacijų.

Pagal naują JAV Ligų kontrolės centro pasiūlytą klasifikaciją (2 lentelę – žr. nuorodą į šaltinį aukščiau), AIDS diagnozė nustatoma asmenims, kurių CD4 limfocitų skaičius mažesnis nei 200/μl, net ir m. AIDS apibrėžiančių ligų nebuvimas.

B kategorijai priskiriami įvairūs sindromai, iš kurių svarbiausi yra bacilinė angiomatozė, burnos ir ryklės kandidozė, pasikartojanti vulvovaginalinė kandidozė, sunkiai gydoma, gimdos kaklelio displazija, gimdos kaklelio karcinoma, idiopatinė trombocitopeninė purpura, listeriozė, periferinė neuropatija.

Antikūnai prieš ŽIV-1 ir ŽIV-2 kraujyje

Antikūnų prieš ŽIV-1 ir ŽIV-2 kraujo serume paprastai nėra.

Antikūnų prieš ŽIV nustatymas yra pagrindinis ŽIV infekcijos laboratorinės diagnostikos metodas. Metodas pagrįstas su fermentu susijusiu imunosorbento tyrimu (ELISA) – jautrumas didesnis nei 99,5%, specifiškumas didesnis nei 99,8%. Antikūnai prieš ŽIV atsiranda 90-95% užsikrėtusių žmonių per 1 mėnesį nuo užsikrėtimo, 5-9% - po 6 mėnesių, 0,5-1% - vėliau. AIDS stadijoje antikūnų skaičius gali mažėti, kol jie visiškai išnyks.

Tyrimo rezultatas išreiškiamas kokybiškai: teigiamas arba neigiamas.

Neigiamas tyrimo rezultatas rodo, kad kraujo serume nėra antikūnų prieš ŽIV-1 ir ŽIV-2. Laboratorija iš karto išduoda neigiamą rezultatą, kai ji yra paruošta. Jei gaunamas teigiamas rezultatas – antikūnų prieš ŽIV nustatymas – siekiant išvengti klaidingai teigiamų rezultatų laboratorijoje, analizė kartojama dar 2 kartus.

Antikūnų prieš ŽIV viruso baltymus kraujo serume imunoblotingas

Antikūnų prieš ŽIV viruso baltymus kraujo serume paprastai nėra.

ELISA metodas antikūnams prieš ŽIV nustatyti yra atrankos metodas. Kai gaunamas teigiamas rezultatas, siekiant patvirtinti jo specifiškumą, naudojamas imunoblotavimo metodas - Western blot - priešnuosėdis paciento kraujo serume esančių antikūnų gelyje su įvairiais viruso baltymais, atskiriamas pagal molekulinę masę naudojant elektroforezę ir taikomas. į nitroceliuliozę. Nustatomi antikūnai prieš viruso baltymus gp41, gpl20, gpl60, p24, pi8, p17 ir kt.

Remiantis Rusijos AIDS prevencijos ir kontrolės centro rekomendacijomis, antikūnų prieš vieną iš glikoproteinų gp41, gpl20, gpl60 aptikimas turėtų būti laikomas teigiamu rezultatu. Jei nustatomi antikūnai prieš kitus viruso baltymus, rezultatas laikomas abejotinu, tokį pacientą reikia tirti du kartus – po 3 ir 6 mėnesių.

Antikūnų prieš specifinius ŽIV baltymus nebuvimas reiškia, kad fermento imunologinio tyrimo metodas davė klaidingai teigiamą rezultatą. Tuo pačiu, praktiniame darbe, vertinant imunoblotavimo metodo rezultatus, būtina vadovautis įmonės pateikta instrukcija naudojamam „Imunoblotingo rinkiniui“.

Imunoblotavimo metodas naudojamas laboratorinei ŽIV infekcijos diagnostikai.

Antigenas p24 kraujo serume

P24 antigeno kraujo serume paprastai nėra.

P24 antigenas yra ŽIV nukleotido sienelės baltymas. Pirminių pasireiškimų stadija po ŽIV infekcijos yra prasidėjusio replikacijos proceso pasekmė. P24 antigenas kraujyje atsiranda praėjus 2 savaitėms po užsikrėtimo ir gali būti aptiktas ELISA metodu per 2–8 savaites. Po 2 mėnesių nuo užsikrėtimo antigenas p24 išnyksta iš kraujo. Vėliau ŽIV infekcijos klinikinėje eigoje stebimas antrasis p24 baltymo kiekio kraujyje padidėjimas. Jis krenta AIDS formavimosi metu. Esamos ELISA testų sistemos, skirtos nustatyti p24 antigeną, naudojamos ankstyvam ŽIV nustatymui kraujo donorams ir vaikams, AIDS eigos prognozei ir AIDS sergančių pacientų terapijos stebėjimui. ELISA pasižymi dideliu analitiniu jautrumu, leidžiančiu aptikti ŽIV-1 p24 antigeną kraujo serume, kai koncentracija yra 5-10 pkg/ml, o ŽIV-2 – mažesnę nei 0,5 ng/ml, ir specifiškumą. Tačiau reikia pažymėti, kad p24 antigeno kiekis kraujyje priklauso nuo individualių skirtumų, o tai reiškia, kad ankstyvuoju laikotarpiu po užsikrėtimo šiuo tyrimu galima nustatyti tik 20–30% pacientų (Rose N.R. et al., 1997).

Antikūnai prieš IgM ir IgG klasių antigeną p24 kraujyje atsiranda nuo 2-os savaitės, pasiekia piką per 2-4 savaites ir išlieka įvairiai tokiame lygyje: IgM klasės antikūnai – kelis mėnesius, išnyksta per metus po infekcija, o IgG antikūnai gali išlikti metų metus.

ŽIV infekcijos diagnozavimo algoritmas priklauso nuo ligos fazės ir jam būdingi įvairių klasių antikūnų aptikimo dinamikos pokyčiai (1, 2 pav. – žr. nuorodą į aukščiau esantį šaltinį).

Tyrimo rezultatas išreiškiamas kokybiškai – teigiamas arba neigiamas. Neigiamas tyrimo rezultatas rodo, kad kraujo serume nėra antikūnų prieš ŽIV-1 ir ŽIV-2 bei p24 antigeną.

Laboratorija iš karto išduoda neigiamą rezultatą, kai ji yra paruošta. Jei gaunamas teigiamas rezultatas – antikūnų prieš ŽIV-1 ir ŽIV-2 ir/ar p24 antigeno nustatymas – siekiant išvengti klaidingai teigiamų rezultatų laboratorijoje, analizė kartojama dar 2 kartus.

Nepriklausomai nuo tyrimo rezultatų, paciento kraujo mėginį ir 3 tyrimų rezultatus laboratorija siunčia į regioninį AIDS centrą, kad patvirtintų teigiamą rezultatą arba patikrintų neapibrėžtą rezultatą. Tokiais atvejais galutinį atsakymą apie šį tyrimą pateikia regioninis AIDS centras.

ŽIV aptikimas polimerazės grandinine reakcija (kokybinis)

ŽIV aptikimas polimerazės grandinine reakcija – PGR (kokybinis) atliekamas šiais tikslais:

• abejotinų imunoblotingų rezultatų sprendimas;
• ankstyvai ŽIV infekcijos diagnostikai;
• antivirusinio gydymo veiksmingumo stebėjimas;
• AIDS stadijos nustatymas (infekcijos perėjimas į ligą).

Pirminės ŽIV infekcijos metu PGR metodu ŽIV RNR galima nustatyti kraujyje praėjus 10-14 dienų po užsikrėtimo.

Tyrimo rezultatas išreiškiamas kokybiškai: teigiamas arba neigiamas. Neigiamas tyrimo rezultatas rodo, kad kraujyje nėra ŽIV RNR.

Teigiamas rezultatas – ŽIV RNR aptikimas – rodo, kad pacientas yra užsikrėtęs.

ŽIV aptikimas polimerazės grandinine reakcija (kiekybinis)

Paprastai ŽIV kraujyje nėra.

Tiesioginis ŽIV RNR kiekybinis nustatymas naudojant PGR leidžia tiksliau prognozuoti AIDS išsivystymo greitį ŽIV užsikrėtusiems žmonėms nei CD4 ląstelių skaičiaus nustatymas, taigi tiksliau įvertinti jų išgyvenamumą. Didelis viruso dalelių kiekis paprastai koreliuoja su sunkiu imuninės sistemos sutrikimu ir mažu CD4 ląstelių skaičiumi. Žemas virusinių dalelių kiekis paprastai koreliuoja su geresne imunine būkle ir didesniu CD4 ląstelių skaičiumi. Virusinės RNR kiekis kraujyje leidžia numatyti ligos perėjimą į klinikinę stadiją. Kai ŽIV RNR-1 kiekis yra >74 100 kopijų/ml, beveik visiems pacientams išsivysto klinikinis AIDS vaizdas (vyresnysis D., Holden E., 1996).

Tikimybė susirgti AIDS yra 10,8 karto didesnė žmonėms, kurių kraujyje ŽIV-1 yra >10 000 kopijų/ml, nei asmenims, kurių kraujyje yra ŽIV-1.<10 000 копий/мл. При ВИЧ-инфекции прогноз непосредственно определяется уровнем виремии. Снижение уровня виремии при лечении улучшает прогноз заболевания.

Grupė JAV ekspertų parengė ŽIV sergančių pacientų gydymo indikacijas. Gydymas skirtas pacientams, kurių kraujyje yra mažas CD4 ląstelių skaičius<300/мкл или уровнем РНК ВИЧ в сыворотке >20 000 kopijų/ml (PGR). ŽIV užsikrėtusių žmonių antiretrovirusinio gydymo rezultatai vertinami sumažinus ŽIV RNR kiekį serume.

Taikant veiksmingą gydymą, viremijos lygis per pirmąsias 8 savaites turėtų sumažėti 10 kartų ir būti mažesnis už metodo jautrumo ribą (PGR) (<500 копий/мл) через 4-6 месяцев после начала терапии.

Taigi šiandien klinikinėje praktikoje yra įdiegta ir naudojama daug tyrimų metodų ŽIV infekcijai diagnozuoti, kaip ir visoms kitoms virusinėms infekcijoms. Tarp jų pagrindinis vaidmuo skiriamas serologiniams tyrimams. Pagrindiniai ŽIV infekcijų diagnozavimo metodai pateikti 3 lentelėje (žr. šaltinio nuorodą aukščiau), kur jie suskirstyti į keturis lygius, atsižvelgiant į kiekvieno virusų nustatymo metodo svarbą:

• A - testas dažniausiai naudojamas diagnozei patvirtinti;
• B - testas yra naudingas tam tikromis aplinkybėmis diagnozuojant tam tikras infekcijos formas;
• C - testas retai naudojamas diagnostikos tikslais, tačiau turi didelę reikšmę epidemiologiniams tyrimams;
• D testas paprastai nenaudojamas laboratorijose diagnostikos tikslais.

Kadangi virusinių infekcijų diagnostikai, be optimalaus analizės metodo pasirinkimo, ne mažiau svarbus ir teisingas biomedžiagos identifikavimas bei surinkimas tyrimams, 4 lentelėje (žr. nuorodą į šaltinį aukščiau) pateikiamos rekomendacijos, kaip pasirinkti optimalią biomedžiagą tyrimui. ŽIV infekcija.

Norint stebėti užsikrėtusius ŽIV, reikėtų pasinaudoti visapusiško imuninės būklės tyrimo – kiekybinio ir funkcinio visų jo grandžių – humoralinio, ląstelinio imuniteto ir apskritai nespecifinio atsparumo – nustatymo galimybėmis.

Šiuolaikinėmis laboratorinėmis sąlygomis daugiapakopis imunologinės būklės vertinimo principas apima limfocitų ir kraujo imunoglobulinų subpopuliacijos nustatymą. Vertinant rodiklius, reikia atsižvelgti į tai, kad ŽIV infekcijai būdingas CD4/CD8 T ląstelių santykio sumažėjimas mažiau nei 1. CD4/CD8 indeksas 1,5-2,5 rodo normerginę būseną, daugiau nei 2,5 rodo. hiperaktyvumas, mažiau 1,0 – rodo imunodeficitą. Taip pat sunkiais uždegiminio proceso atvejais CD4/CD8 santykis gali būti mažesnis nei 1.

Šis santykis yra esminis vertinant AIDS sergančių pacientų imuninę sistemą, nes ŽIV selektyviai užkrečia ir naikina CD4 limfocitus, dėl ko CD4/CD8 santykis sumažėja iki reikšmių, žymiai mažesnių nei 1.

Imunologinės būklės įvertinimas taip pat grindžiamas bendrųjų arba „stambių“ ląstelinės ir humoralinės imuninės sistemos defektų nustatymu: hipergamaglobulinemija (padidėjusios IgA, IgM, IgG koncentracijos) arba hipogamaglobulinemija galutinėje stadijoje; padidėjusi cirkuliuojančių imuninių kompleksų koncentracija; sumažėjusi citokinų gamyba; limfocitų atsako į antigenus ir mitogenus susilpnėjimas.

Populiacijų santykio pažeidimas bendrame B-limfocitų telkinyje būdingas humoralinio imuniteto nepakankamumui. Tačiau šie pokyčiai nėra būdingi ŽIV infekcijai ir gali atsirasti sergant kitomis ligomis. Išsamiai vertinant daugelį kitų laboratorinių parametrų, reikia atsižvelgti į tai, kad ŽIV infekcijai taip pat būdinga: anemija, limfo- ir leukopenija, trombocitopenija, padidėjęs β2-mikroglobulino ir C reaktyvaus baltymo kiekis bei padidėjęs transaminazių kiekis. aktyvumas kraujo serume.

ŽIV infekcijos prevencija

Sanitarinės ir epidemiologinės taisyklės

SP 3.1.5. 2826-10

I. Taikymo sritis

1.1. Šios sanitarinės ir epidemiologinės taisyklės (toliau – sanitarinės taisyklės) nustato pagrindinius reikalavimus organizacinių, gydymo ir prevencinių, sanitarinių ir antiepideminių priemonių visumai, kurių įgyvendinimas užtikrina ŽIV infekcijos atsiradimo ir išplitimo prevenciją.

1.2. Sanitarinių taisyklių laikymasis yra privalomas piliečiams, individualiems verslininkams ir juridiniams asmenims.

1.3. Šių sanitarinių ir epidemiologinių taisyklių įgyvendinimo priežiūrą atlieka valstybinę sanitarinę ir epidemiologinę priežiūrą vykdančios institucijos.

II. Naudotos santrumpos

ARV vaistai	antiretrovirusiniai vaistai
MENAS	antiretrovirusinis gydymas
AG	antigenai
AT	antikūnų
HAART	labai aktyvus antiretrovirusinis gydymas
hospitalinė infekcija	hospitalinė infekcija
VG	virusinis hepatitas
ŽIV	AIDS virusas
PSO	Pasaulio Sveikatos Organizacija
DI	pasitikėjimo intervalas
YRA	imunoblotingas
IP	ŽIV proteazės inhibitoriai
VMI	lytiniu keliu plintančios infekcijos
ELISA	susietas imunosorbentų tyrimas
KSR	komercinės sekso paslaugos
LIA	linijos blotavimas
LPO	gydymo ir prevencijos organizavimas
MSM	vyrų, kurie turi lytinių santykių su vyrais
NRTI	ŽIV nukleozidų atvirkštinės transkriptazės inhibitoriai
NNATI	nenukleozidiniai ŽIV atvirkštinės transkriptazės inhibitoriai
NAT	nukleorūgščių amplifikacija
OI	oportunistinės infekcijos
PGR	polimerazės grandininė reakcija
PIN kodas	injekcinių narkotikų vartotojų
RNR	ribonukleino rūgštis
AIDS	įgytas imunodeficito sindromas
CD4	ląstelės, kurių paviršiuje yra CD4 ląstelių receptorius

III. Bendrosios nuostatos

3.1. ŽIV infekcija– žmogaus imunodeficito viruso sukelta liga yra antroponozinė infekcinė lėtinė liga, kuriai būdingas specifinis imuninės sistemos pažeidimas, sukeliantis lėtą jos sunaikinimą iki įgyto imunodeficito sindromo (AIDS) atsiradimo, kartu su oportunistinių infekcijų ir antrinių piktybinių infekcijų išsivystymu. neoplazmos.

3.2. ŽIV infekcijos diagnozė nustatoma remiantis epidemiologiniais, klinikiniais ir laboratoriniais duomenimis.

3.3. AIDS yra būklė, kuri išsivysto ŽIV infekcijos fone ir kuriai būdinga viena ar daugiau ligų, klasifikuojamų kaip AIDS indikacinės. AIDS yra epidemiologinė sąvoka ir naudojama ŽIV infekcijos epidemiologinei priežiūrai.

3.4. ŽIV infekcijos sukėlėjas – žmogaus imunodeficito virusas – priklauso retrovirusų šeimos lentivirusų pošeimiui. Yra dviejų tipų virusai: ŽIV-1 ir ŽIV-2.

3.5.ŽIV infekcijos šaltinis – asmenys, užsikrėtę ŽIV bet kurioje ligos stadijoje, taip pat ir inkubaciniu laikotarpiu.

3.6. Perdavimo mechanizmas ir veiksniai.

3.6.1. ŽIV infekcija gali būti perduodama tiek natūraliais, tiek dirbtiniais perdavimo mechanizmais.

3.6.2. Natūralus ŽIV perdavimo mechanizmas apima:

3.6.2.1. Kontaktas, kuris pirmiausia atsiranda lytinių santykių metu (tiek homoseksualių, tiek heteroseksualių) ir kai gleivinės ar žaizdos paviršius liečiasi su krauju.

3.6.2.2. Vertikalus (vaiko užsikrėtimas nuo ŽIV infekuotos motinos: nėštumo, gimdymo ir maitinimo krūtimi metu).

3.7.3. Dirbtiniai perdavimo mechanizmai apima:

3.7.3.1. Dirbtinis nemedicininėms invazinėms procedūroms, įskaitant intraveninį vaistų įvedimą (švirkštų, adatų, kitos injekcijos įrangos ir medžiagų naudojimas), tatuiruotes , atliekant kosmetines, manikiūro ir pedikiūro procedūras naudojant nesterilius instrumentus .

3.7.3.2. Dirbtinis skirtas invazinėms intervencijoms sveikatos priežiūros įstaigose. ŽIV infekcija gali užsikrėsti perpilant kraują, jo komponentus, persodinant organus ir audinius, naudojant donoro spermą, donoro motinos pieną iš ŽIV užsikrėtusio donoro, taip pat naudojant medicininius instrumentus parenteralinėms intervencijoms, medicininius produktus, užkrėstus ŽIV ir tvarkomi ne pagal norminių dokumentų reikalavimus.

3.8. Pagrindiniai patogeno perdavimo veiksniai yra žmogaus biologiniai skysčiai (kraujas, kraujo komponentai, sperma, makšties išskyros, motinos pienas).

3.9. Pagrindinės gyventojų grupės, pažeidžiamos ŽIV infekcijos, yra: švirkščiamųjų narkotikų vartotojai (ŠNV), komercinių sekso paslaugų teikėjai (CSW), vyrai, turintys lytinių santykių su vyrais (MSM). Didesnės rizikos užsikrėsti ŽIV grupei priklauso sekso paslaugų teikėjų klientai, švirkščiamųjų narkotikų vartotojų seksualiniai partneriai, kaliniai, gatvės vaikai, daug seksualinių partnerių turintys asmenys, migruojančios gyventojų grupės (sunkvežimių vairuotojai, sezoniniai darbuotojai, įskaitant užsienio piliečius, dirbančius rotacijos principu ir kt.), žmonės, piktnaudžiaujantys alkoholiu ir ne švirkščiamaisiais narkotikais, nes apsvaigę nuo psichoaktyvių medžiagų yra labiau linkę į pavojingesnį seksualinį elgesį.

3.10. Klinikinė ŽIV infekcijos eiga nenaudojant antiretrovirusinio gydymo.

3.10.1. Inkubacinis periodas

ŽIV infekcijos inkubacinis laikotarpis yra laikotarpis nuo užsikrėtimo momento iki organizmo atsako į viruso patekimą (klinikinių simptomų atsiradimo ar antikūnų susidarymo) paprastai trunka 2–3 savaites, tačiau gali trukti iki 3–3 savaites. 8 mėnesius, kartais iki 12 mėnesių. Per šį laikotarpį užsikrėtusiam žmogui neaptinkama antikūnų prieš ŽIV, todėl padidėja infekcijos perdavimo iš jo rizika hospitaliniuose židiniuose, įskaitant kraujo ir jo komponentų perpylimą.

3.10.2. Ūminė ŽIV infekcija.

30–50% užsikrėtusiųjų pasireiškia ūminės ŽIV infekcijos simptomai, kuriuos lydi įvairios apraiškos: karščiavimas, limfadenopatija, eriteminis-makulopapulinis veido, liemens, kartais galūnių bėrimas, mialgija ar artralgija, viduriavimas, galvos skausmas, pykinimas ir vėmimas, kepenų ir blužnies padidėjimas, neurologiniai simptomai. Šie simptomai pasireiškia esant dideliam virusų kiekiui įvairiais deriniais ir yra skirtingo sunkumo. Retais atvejais jau šiame etape gali išsivystyti sunkios antrinės ligos, dėl kurių pacientai miršta. Šiuo laikotarpiu padažnėja užsikrėtusių asmenų siuntimų į sveikatos priežiūros įstaigas; infekcijos perdavimo rizika yra didelė dėl didelio viruso kiekio kraujyje.

3.10.3. Subklinikinė stadija.

Subklinikinės stadijos trukmė vidutiniškai 5–7 metai (nuo 1 iki 8 metų, kartais ir daugiau), jokių kitų klinikinių apraiškų, išskyrus limfadenopatiją, nėra. Šiame etape, nesant apraiškų, užsikrėtęs asmuo ilgą laiką išlieka infekcijos šaltiniu. Subklinikiniu periodu ŽIV toliau dauginasi, kraujyje mažėja CD4 limfocitų skaičius.

3.10.4. Antrinių ligų stadija.

Didėjant imunodeficitui, atsiranda antrinių ligų (infekcinių ir onkologinių). Ligos su virusinėmis, bakterinėmis, grybelinėmis infekcijomis iš pradžių vyksta gana palankiai ir jas sustabdo įprasti terapiniai vaistai. Iš pradžių tai daugiausia odos ir gleivinių pažeidimai, vėliau – organų ir generalizuoti pažeidimai, lemiantys paciento mirtį.

3.11. Antiretrovirusinis gydymas (ART) yra etiotropinis ŽIV infekcijos gydymas. Šiuo metu ART visiškai nepašalina ŽIV iš paciento organizmo, tačiau sustabdo viruso dauginimąsi, dėl ko atkuriamas imunitetas, užkertamas kelias antrinių ligų vystymuisi ar regresijai, išsaugomas ar atstatomas paciento darbingumas ir jo mirties prevencija. Veiksmingas antiretrovirusinis gydymas taip pat yra prevencinė priemonė, mažinanti paciento, kaip infekcijos šaltinio, riziką.

IV. Laboratorinė ŽIV infekcijos diagnostika

4.1. Laboratorinė ŽIV infekcijos diagnostika grindžiama antikūnų prieš ŽIV ir viruso antigenų nustatymu, taip pat ypatingais atvejais ŽIV provirusinės DNR ir ŽIV virusinės RNR aptikimu (vaikams pirmaisiais gyvenimo metais).

4.2. Laboratoriniai ŽIV infekcijos diagnozavimo tyrimai atliekami valstybinėse, savivaldybių ar privačiose sveikatos priežiūros įstaigose pagal sanitarinę-epidemiologinę ataskaitą ir licenciją, pateiktą Rusijos Federacijos teisės aktų nustatyta tvarka.

4.3. Standartinis ŽIV infekcijos laboratorinės diagnostikos metodas yra antikūnų/antigenų prieš ŽIV nustatymas naudojant ELISA. Patvirtinamieji testai (imuniniai, linijiniai blotai) naudojami rezultatams dėl ŽIV patvirtinti.

4.4. Antikūnų prieš ŽIV tyrimo diagnostikos algoritmas:

4.4.1. Pirmajame etape (atrankos laboratorija).

Jei ELISA tyrimo metu gaunamas teigiamas rezultatas, analizė atliekama paeiliui dar 2 kartus (su tuo pačiu serumu ir toje pačioje tyrimų sistemoje, antro serumo prašoma tik tuo atveju, jei pirmojo serumo neįmanoma išsiųsti tolesniam tyrimui) . Jei iš trijų ELISA tyrimų gaunami du teigiami rezultatai, serumas laikomas pirminiu teigiamu ir siunčiamas į referencinę laboratoriją (AIDS prevencijos ir kontrolės centro ŽIV diagnostikos laboratoriją) tolesniems tyrimams.

4.4.2. Antrame etape (referencinė laboratorija).

Iš pradžių teigiamas serumas pakartotinai ištiriamas ELISA metodu naudojant antrą kito gamintojo testavimo sistemą, kuri skiriasi nuo pirmosios antigenų sudėtimi, antikūnais arba patvirtinimui pasirinktu tyrimo formatu. Jei gaunamas neigiamas rezultatas, serumas pakartotinai tiriamas naudojant trečią kito gamintojo testavimo sistemą, kuri skiriasi nuo pirmosios ir antrosios antigenų sudėtimi, antikūnais ar tyrimo formatu. Jei gaunamas neigiamas rezultatas (antroje ir trečioje testų sistemose), išduodama išvada apie antikūnų prieš ŽIV nebuvimą. Jei gaunamas teigiamas rezultatas (antrojoje ir (arba) trečiojoje bandymo sistemoje), serumas turi būti tiriamas imuniniu arba linijiniu blotu. Patvirtinamojo testo rezultatai interpretuojami kaip teigiami, neapibrėžti arba neigiami.

4.4.2.1. Siekiant užtikrinti tyrimų kontrolę ir apskaitą, etaloninė diagnostika turėtų būti atliekama tame pačiame Rusijos Federacijos subjekte, kuriame buvo atliktas atrankinis tyrimas įgaliotos specializuotos sveikatos priežiūros įstaigos, kuri atlieka organizacinį ir metodinį darbą, laboratorijoje. ŽIV infekcijos ir susijusių ligų diagnostinės, terapinės, prevencinės ir antiepideminės priemonės.

Referencinė diagnostika taip pat gali būti atliekama Federalinėje valstybinėje įstaigoje, kurios pagrindu veikia federaliniai ir rajoniniai AIDS prevencijos ir kontrolės centrai, bei Federalinės valstybinės institucijos Respublikinėje klinikinėje infekcinių ligų ligoninėje (Sankt Peterburgas).

4.4.3. Testai, kuriuose yra antikūnų prieš 2 iš 3 ŽIV glikoproteinų (env, gag, pol), laikomi teigiamais.

4.4.4. Serumai laikomi neigiamais (neigiamais), kuriuose neaptikta jokių antikūnų prieš jokį ŽIV antigeną (baltymus) arba yra silpna reakcija su p 18 baltymu.

4.4.5. Serumai, kuriuose yra antikūnų prieš vieną ŽIV glikoproteiną ir (arba) bet kuriuos ŽIV baltymus, laikomi neapibrėžtais (abejotinais). Jei gaunamas neapibrėžtas rezultatas su baltymų profiliu, įskaitant pagrindinius baltymus (gag) p 25, atliekamas ŽIV-2 diagnozavimo testas.

4.4.6. Jei imuninės ar linijinės blotos metu gaunamas neigiamas ir abejotinas rezultatas, rekomenduojama tirti serumą tyrimo sistemoje, siekiant nustatyti p24 antigeną arba ŽIV DNR/RNR. Jei buvo aptiktas p24 antigenas arba ŽIV DNR/RNR, pakartotinis tyrimas naudojant imuninį arba linijos blotą atliekamas praėjus 2, 4, 6 savaitėms po pirmojo neapibrėžto rezultato.

4.4.7. Jei gaunamas neapibrėžtas rezultatas, po 2 savaičių, 3 ir 6 mėnesių atliekami pakartotiniai antikūnų prieš ŽIV tyrimai imuniniu arba linijiniu blotu. Jei gaunami neigiami ELISA rezultatai, tolesnių tyrimų nereikia. Jei praėjus 6 mėnesiams po pirmojo tyrimo vėl gaunami neapibrėžti rezultatai, o pacientas neturi infekcijos rizikos veiksnių ir klinikinių ŽIV infekcijos simptomų, rezultatas vertinamas kaip klaidingai teigiamas. (Jei yra epidemiologinių ir klinikinių indikacijų, serologiniai tyrimai atliekami pakartotinai, kaip nurodė gydantis gydytojas ar epidemiologas).

4.5. ŽIV infekcijai diagnozuoti jaunesniems nei 18 mėnesių vaikams, gimusiems ŽIV užsikrėtusių motinų, dėl motinos antikūnų buvimo, naudojami kiti metodai.

4.5.1. ŽIV infekcijai diagnozuoti jaunesniems nei 12 mėnesių vaikams, gimusiems ŽIV infekuotų motinų, naudojami metodai, skirti nustatyti ŽIV genetinę medžiagą (DNR arba RNR). Gavus teigiamus ŽIV DNR arba ŽIV RNR tyrimo rezultatus dviejuose atskiruose vyresnio nei vieno mėnesio vaiko kraujo mėginiuose yra laboratorinis ŽIV infekcijos diagnozės patvirtinimas. Gavus du neigiamus ŽIV DNR ar ŽIV RNR tyrimų rezultatus 1–2 mėnesių ir 4–6 mėnesių amžiaus (jei nemaitinama krūtimi), vaikas yra užsikrėtęs ŽIV, tačiau vaikas iš ambulatorijos registro išbraukiamas dėl intranatalinis ir perinatalinis kontaktas dėl ŽIV infekcijos gali atsirasti sulaukus 1 metų.

4.5.2. Iš ambulatorinės registracijos dėl ŽIV infekcijos pašalinimas sulaukus 18 mėnesių atliekamas tuo pačiu metu dalyvaujant:

– du ar daugiau neigiamų antikūnų prieš ŽIV tyrimo ELISA metodu rezultatai;

- ryškios hipogamaglobulinemijos nebuvimas atliekant kraujo tyrimą dėl antikūnų prieš ŽIV;

- klinikinių ŽIV infekcijos apraiškų nebuvimas;

4.5.3. ŽIV infekcijos diagnozė vaikams, gimusiems ŽIV užsikrėtusių motinų ir sulaukusiems 18 mėnesių amžiaus, atliekama taip pat, kaip ir suaugusiems.

4.6. Laboratorinė ŽIV infekcijos diagnostika gali būti atliekama tik naudojant sertifikuotas standartizuotas diagnostinių tyrimų sistemas (rinkinius), nustatyta tvarka patvirtintas naudoti Rusijos Federacijos teritorijoje.

Žmogaus imunodeficito virusu užsikrėtusiems asmenims identifikuoti naudojamų tyrimų sistemų gaunamos kokybės kontrolei atlikti naudojamos standartinės serumo plokštės (pramonės standartiniai mėginiai), patvirtinti nustatyta tvarka.

4.7. Remiantis tyrimo rezultatais, laboratorijos išduotame dokumente nurodomas tyrimo sistemos pavadinimas, galiojimo laikas, serija, ELISA rezultatas (teigiamas, neigiamas), imunobloto rezultatas, linijinis blotas (identifikuotų baltymų sąrašas ir išvada: teigiama, neigiamas, neapibrėžtas). Konfidencialiems tyrimams dokumente turi būti nurodyti paso duomenys: vardas, pavardė, visa gimimo data, gyvenamosios vietos adresas, kontingento kodas. Anoniminės ekspertizės metu dokumentas pažymimas specialiai nustatytu kodu.

4.7.1. Gavus abejotiną patvirtinamojo tyrimo (imuninio, linijinio blotavimo) rezultatą, išduodama išvada apie neapibrėžtą tyrimo rezultatą ir rekomenduojama pakartoti paciento tyrimą, kol bus nustatyta būklė (po 3, 6, 12 mėnesių).

4.8. Paprasti / greiti ŽIV specifinių antikūnų tyrimai yra tyrimai, kuriuos galima atlikti be specialios įrangos greičiau nei per 60 minučių . Kaip tiriamoji medžiaga gali būti naudojamas kraujas, serumas, kraujo plazma ir seilės (nubrėžimas nuo dantenų gleivinės). ).

4.8.1. Paprastų / greitų bandymų taikymo sritys:

• transplantologija – prieš renkant donorinę medžiagą;
• donorystė – kraujo tyrimas, skubiai perpylus kraujo produktus ir nesant donoro kraujo, tirto dėl ŽIV antikūnų;
• vertikali prevencija – nėščiųjų, kurių ŽIV būklė nežinoma, tyrimas prenataliniu laikotarpiu (skirti medikamentinę ŽIV infekcijos profilaktiką gimdymo metu);
• ŽIV profilaktika po kontakto – ŽIV tyrimas skubios pagalbos atveju;

4.8.2. Kiekvienas ŽIV testas, naudojant paprastus / greitus testus, turi būti atliekamas kartu su privalomu lygiagrečiu tos pačios kraujo dalies tyrimu, naudojant klasikinius ELISA ir IB metodus.

4.9. Neleidžiama daryti išvados apie ŽIV infekcijos buvimą ar nebuvimą remiantis tik paprasto/greito tyrimo rezultatais. Paprastų/greitų testų rezultatai naudojami tik laiku priimant sprendimus kritinėse situacijose.

Labai specializuotoje laboratorijoje atliekama:

A) kraujyje cirkuliuojančių antikūnų, antigenų ir imuninių kompleksų nustatymas; kultivuoti virusą, nustatyti jo genominę medžiagą ir fermentus;

B) imuninės sistemos ląstelinės dalies funkcijų įvertinimas. Pagrindinis vaidmuo tenka serologiniams diagnostikos metodams, kuriais siekiama nustatyti antikūnus, taip pat patogenų antigenus kraujyje ir kituose biologiniuose organizmo skysčiuose.

ŽIV antikūnų tyrimas atliekamas siekiant:

A) kraujo perpylimų ir transplantacijų saugumas;

B) stebėjimas, testavimas siekiant stebėti ŽIV infekcijos paplitimą ir tirti jos paplitimo dinamiką tam tikroje populiacijoje;

C) ŽIV infekcijos diagnostika, t. y. savanoriškas praktiškai sveikų žmonių arba pacientų, turinčių įvairių klinikinių požymių ir simptomų, panašių į ŽIV infekciją ar AIDS, kraujo serumo tyrimas.

Laboratorinės ŽIV infekcijos diagnostikos sistema yra sukurta trijų etapų principu. Pirmasis etapas yra atranka, skirta atlikti pirminius kraujo tyrimus, siekiant nustatyti antikūnų prieš ŽIV baltymus buvimą. Antrasis etapas yra orientacinis – leidžia, naudojant specialius metodinius metodus, patikslinti (patvirtinti) pirminį teigiamą rezultatą, gautą atrankos etape. Trečiasis etapas – ekspertinis etapas, skirtas galutiniam ŽIV infekcijos žymenų, nustatytų ankstesniuose laboratorinės diagnostikos etapuose, buvimo ir specifiškumo patikrinimui. Kelių laboratorinės diagnostikos etapų poreikį pirmiausia lemia ekonominiai sumetimai.

Praktikoje naudojami keli testai, leidžiantys pakankamai patikimai identifikuoti ŽIV infekuotus žmones:

ELISA testas (su fermentu susietas imunosorbentas), skirtas pirmam lygiui nustatyti, pasižymi dideliu jautrumu, nors ir mažesniu specifiškumu nei toliau;

Imuninis blotavimas (Western-blot), labai specifinis ir dažniausiai naudojamas testas, skirtas atskirti ŽIV-1 ir ŽIV-2;

Antigenemijos p25 testas, veiksmingas pradinėse infekcijos stadijose;

Polimerazės grandininė reakcija (PGR).

Masinės kraujo mėginių patikros atvejais rekomenduojama tirti tiriamųjų grupės serumų mišinius, sudarytus taip, kad kiekvieno mėginio galutinis praskiedimas neviršytų 1:100. Jei serumų mišinys yra teigiamas, tiriamas kiekvienas teigiamame mišinyje esantis serumas. Šis metodas nesukelia jautrumo praradimo tiek ELISA, tiek imunobloto tyrime, tačiau sumažina darbo sąnaudas ir pradinio tyrimo išlaidas 60-80%.

Imunologiniai metodai

1. T pagalbininkų skaičius,

2. T4 ir T8 santykis,

3. padidėjusio jautrumo būsena,

4. T ląstelių sistemos kompensacinė funkcija.

Tai pasireiškia imunoglobulinų hiperprodukcija, jie yra mažo afiniteto ir dar daugiau suvartojama organizmo medžiagų.

Trūkumai: atsiranda vėlai, kai kurių imunologinių rodiklių gali būti ir sergant kitomis infekcijomis.

Klinikiniai metodai – m.b. yra panašios į kitas ligas, būdingiausios apraiškos fiksuojamos vėlesnėse stadijose, todėl klinikinė diagnostika nėra labai efektyvi

Pagrindinis metodas – serologinis – įgyvendinamas 2 etapais:

1 – atrankinis tyrimas – mėginių paėmimas, ar nėra suminių antikūnų prieš visus imunologinio tyrimo baltymus. Šis etapas suteikia 95% teisingų rezultatų ir 5% klaidingų teigiamų rezultatų.

2 – patvirtinantis metodas – visi mėginiai tiriami patvirtinamuoju metodu. Šis metodas leidžia aptikti antikūnus prieš viruso baltymą. Teigiamas rezultatas yra tada, kai aptinkami antikūnai prieš bent 3 viruso baltymus, jei 1 ar 2 rezultatas kelia abejonių ir reikalauja papildomo tyrimo.

Pirminės ŽIV infekcijos serodiagnostikos metu suminiai antikūnai nustatomi naudojant atrankos testus – ELISA ir agliutinacijos reakcijas. Antrajame (arbitražo) etape naudojamas sudėtingesnis testas - imunoblotas, leidžiantis ne tik patvirtinti arba atmesti pradinę išvadą, bet ir tai padaryti nustatant antikūnus prieš atskirus viruso baltymus.

ŽIV antikūnų tyrimo rezultatų interpretavimas

ŽIV antikūnų tyrimo rezultatui įtakos turi gana daug skirtingų veiksnių, tarp kurių svarbus ir tyrimo laikas po galimos infekcijos.

Daugeliu atvejų antikūnai prieš ŽIV gali būti aptikti praėjus 6–12 savaičių po užsikrėtimo. Šis laikotarpis nuo viruso patekimo į organizmą iki aptinkamo antikūnų kiekio atsiradimo vadinamas teigiamos serokonversijos periodu arba „lango“ periodu. Yra retų atvejų, kai antikūnai atsiranda praėjus 6 mėnesiams po užsikrėtimo, o pranešimai apie antikūnų aptikimą tik po 1 metų neturi įrodymų. Šiuo metu diagnostikos tarnyboje naudojami naujos kartos ELISA metodai, leidžiantys nustatyti antikūnus prieš ŽIV praėjus 3–4 savaitėms po užsikrėtimo, o tam tikri šių metodų deriniai, vadinamosios testavimo strategijos, „lango“ periodą sutrumpina iki 2– 3 savaites, t.y. leidžia aptikti antikūnus prieš ŽIV, kai tik jie pradeda gamintis organizme.

Neigiamas rezultatas reiškia, kad tiriamojo kraujyje nebuvo aptikta ŽIV antikūnų. Ši būklė vadinama seronegatyvumu ir paprastai reiškia, kad asmuo nėra užsikrėtęs.

Neigiamas rezultatas nesuteikia jokios garantijos ateičiai. Jis tik nurodo būseną apžiūros metu. Yra nedidelė tikimybė, kad apklausa buvo atlikta lango laikotarpiu. Todėl, jei asmuo anksčiau buvo užsikrėtęs ŽIV, o jo testas buvo neigiamas, jį reikėtų dar kartą pasitikrinti praėjus mažiausiai 6 mėnesiams po rizikos įvykio.

Teigiamas rezultatas reiškia, kad paciento kraujyje buvo rasta antikūnų prieš ŽIV. Ši būklė vadinama seropozityvumu – žmogus yra užsikrėtęs ŽIV. Svarbu suprasti, kad teigiamas rezultatas rodo tik ŽIV infekciją, o ne AIDS. Tačiau itin svarbu gavus teigiamą rezultatą kreiptis į gydytoją patarimo ir prireikus medicininės pagalbos, kuri leis ilgą laiką išlaikyti geros kokybės gyvenimo lygį.

Neaiškus rezultatas. Retais atvejais ŽIV antikūnų tyrimo rezultatas yra neaiškus. Laboratorija negali atsakyti, ar žmogus seropozityvus, ar seronegatyvus. Esant tokioms aplinkybėms, būtina pasikonsultuoti su gydytoju ir dar kartą išsitirti.



Diagnozuojant ŽIV infekciją, naudojamos 4 metodų grupės:

1. Viruso, jo antigenų arba RNR kopijų buvimo medžiagose iš paciento ar ŽIV užsikrėtusio asmens nustatymas.

2. Serologinė diagnostika, pagrįsta specifinių antikūnų prieš paviršinius (gp 120 ir gp 41) ir vidinius (p 18 ir p 24) ŽIV baltymus nustatymu.

3. Patognomoninių (specifinių) imuninės sistemos pokyčių ŽIV infekcijai nustatymas.

4. Oportunistinių infekcijų (su AIDS susijusių ligų) laboratorinė diagnostika.

1. Virusologinė diagnostika.ŽIV išskyrimo medžiaga yra kraujo T limfocitai, kaulų čiulpų leukocitai, limfmazgiai, smegenų audinys, seilės, sperma, smegenų skystis ir kraujo plazma. Gauta medžiaga naudojama nuolatinei T-limfocitų (H9) kultūrai užkrėsti. ŽIV indikacija ląstelių kultūroje atliekama naudojant CPD (simplastų susidarymą), taip pat imunofluorescenciją, elektroninę mikroskopiją ir išreikštą atvirkštinės transkriptazės aktyvumą. Šiuolaikiniai tyrimo metodai leidžia aptikti vieną užkrėstą limfocitą 1000 ląstelių.

Viruso antigenų aptikimas užkrėstuose T limfocituose atliekamas naudojant monokloninius antikūnus

Pastaraisiais metais ŽIV RNR kopijų kiekio kraujo plazmoje nustatymas naudojant polimerazės grandininės reakcijos (PGR) metodą – vadinamąjį virusinį krūvį – buvo itin svarbus nustatant ŽIV infekcijos prognozę ir sunkumą. Jei pacientams, kuriems negydoma, viruso kiekis yra mažesnis už aptikimo ribą (mažiau nei 5000 ŽIV RNR kopijų 1 ml plazmos), tai rodo progresavimo nebuvimą arba lėtą progresavimą. Užkrėtimo laipsnis yra minimalus. Didelis viruso kiekis (daugiau nei 10 000 RNR kopijų 1 ml plazmos) pacientams, kurių CO4 limfocitų skaičius yra mažesnis nei 300 1 μl, visada rodo ligos progresavimą.

2. Serologinė diagnostika.Šiuo metu ji yra labiausiai paplitusi.

Medžiaga tyrimams: 5 ml. heparinizuotas kraujas, kuris gali būti laikomas šaldytuve, bet neužšaldytas, 6-8 valandas iki pristatymo į laboratoriją.

Serologinei AIDS diagnostikai pirmiausia naudojami fermentų imuninės analizės metodai su standartinėmis fermentų imuninės analizės sistemomis (ELISA). Tai atrankos metodas. Veikimo principas pagrįstas klasikiniu tiesioginės ELISA principu. Imunosorbentas yra polistireno tabletės su imobilizuotu inaktyvuotu virusui specifiniu antigenu, gautu iš ŽIV arba sintetiniu būdu. Tada pridedamas praskiestas tiriamasis serumas. Inkubuojama šuliniuose su antigenu. Po to, kai AG prisijungia prie AT, nesurišti baltymai plaunami tris kartus, o po to į duobutes pridedamas antikūnų prieš žmogaus imunoglobulinus konjugatas su fermento žyme. Specifinio AG+AT komplekso susidarymas nustatomas pridedant substrato fermentui (ortofenilendiamino ir vandenilio peroksido tirpalo). Dėl to terpės spalva kinta proporcingai antikūnų kiekiui. Į tyrimo rezultatus atsižvelgiama spektrofotometru. Kraujo serumai, turintys virusui specifinių antikūnų pagal ELISA duomenis, turi būti toliau tiriami imunoblotavimo būdu.

Imuninis blotingas yra patvirtinantis testas, nes jis aptinka antikūnus prieš įvairius ŽIV baltymus. Jis pagrįstas išankstiniu ŽIV baltymų frakcionavimu pagal molekulinę masę (atskyrimu) elektroforezės būdu poliakrilamido gelyje, po kurio antigenai perkeliami į nitroceliuliozės membraną. Tada tiriamasis serumas užtepamas ant membranos. Šiuo atveju specifiniai antikūnai sudaro kompleksą su specifiniu antigenu (gp.120, gp.41, p.24, p.18). Paskutinis tyrimo etapas – antikūnų prieš įvairius ŽIV baltymus nustatymas. Norėdami tai padaryti, į sistemą pridedami antikūnai prieš žmogaus baltymus, pažymėtus fermentu arba radioizotopiniu ženklu. Taigi virusui specifiniai antikūnai prieš visus arba daugumą ŽIV antigenų aptinkami (arba neaptinkami) paciento serume.

3. Imuninės būklės tyrimai. Siekiama nustatyti:

1) CD4/CD8 ląstelių santykio mažinimas (N 2 ir >, sergant AIDS - 0,5 ir<);

2) sumažinti CD4 ląstelių kiekį (<200 клеток/мл.);

3) vieno iš laboratorinių požymių, įskaitant anemiją, leukopeniją, trombopeniją, limfopeniją, buvimas;

4) didinant Ig A ir Ig G koncentraciją kraujo serume;

5) limfocitų blastų susidarymo atsako į mitogenus mažinimas;

6) GTZ odos reakcijos į kelis antigenus nebuvimas;

7) cirkuliuojančių imuninių kompleksų lygio didinimas.

... bet kurios infekcinės ligos diagnozė pagrįsta epidemiologinių, klinikinių ir laboratorinių duomenų palyginimu, o vienos iš šių duomenų grupių reikšmingumo perdėjimas gali lemti diagnostikos klaidas.

ŽIV infekcijos diagnozė susideda iš dviejų etapų:
aš etapas - nustatyti faktinį užsikrėtimo ŽIV faktą ;
II etapas - nustatant ligos stadiją .

ŽIV UŽSIKRITIMO FAKTO NUSTATYMAS

Faktinio ŽIV užsikrėtimo fakto nustatymas (tai yra ŽIV užsikrėtusių asmenų nustatymas) taip pat apima du etapus:
I etapas- susietas imunosorbento tyrimas(ELISA): ELISA metodas yra atrankos (atrankos) metodas - galimai užsikrėtusių asmenų atranka, tai yra jo tikslas yra nustatyti įtartinus asmenis ir pašalinti sveikus asmenis; Antikūnai prieš ŽIV nustatomi naudojant kitus antikūnus prieš norimus antikūnus (antikūnus prieš kitus antikūnus). Šie „pagalbiniai“ antikūnai yra paženklinti fermentu. Visi atrankiniai testai turi būti labai jautrūs, kad nepraleistumėte paciento. Dėl šios priežasties jų specifiškumas nėra labai didelis, tai yra, ELISA gali duoti teigiamą atsakymą („tikriausiai serga“) neinfekuotiems žmonėms (pavyzdžiui, pacientams, sergantiems autoimuninėmis ligomis: reumatu, sistemine raudonąja vilklige ir kt.). Klaidingai teigiamų rezultatų dažnis naudojant įvairias testavimo sistemas svyruoja nuo 0,02 iki 0,5%. Jei asmens ELISA testas duoda teigiamą rezultatą, būtina atlikti tolesnį tyrimą, kad būtų patvirtintas ŽIV infekcijos faktas. Atliekant ELISA, klaidingai neigiami rezultatai galimi 3-5% atvejų - jei infekcija įvyko palyginti neseniai ir antikūnų lygis vis dar labai mažas, arba galutinėje ligos stadijoje, kuriai būdingas didelis imuninės sistemos pažeidimas. su dideliu antikūnų susidarymo proceso sutrikimu. Todėl, jei yra kontakto su ŽIV infekuotais asmenimis įrodymų, pakartotiniai tyrimai paprastai atliekami po 2–3 mėnesių.
II etapas - imunoblotingas(modifikuotas Western blot, Western blot): yra sudėtingesnis metodas ir padeda patvirtinti infekcijos faktą. Šiuo metodu nustatomi ne kompleksiniai antikūnai prieš ŽIV, o antikūnai prieš atskirus jo struktūrinius baltymus (p24, gp120, gp41 ir kt.). Imunoblotavimo rezultatai laikomi teigiamais, jei aptinkami antikūnai prieš bent tris baltymus, iš kurių vieną koduoja env genai, kitą – gag genai, o trečią – pol genai. Jei aptinkami antikūnai prieš vieną ar du baltymus, rezultatas laikomas abejotinu ir jį reikia patvirtinti. Daugumoje laboratorijų ŽIV infekcijos diagnozė nustatoma, jei vienu metu aptinkami antikūnai prieš baltymus p24, p31, gp4l ir gpl20/gp160. Metodo esmė: virusas suardomas į komponentus (antigenus), kurie susideda iš jonizuotų aminorūgščių liekanų, todėl visi komponentai turi skirtingą kilmę vienas nuo kito; tada, naudojant elektroforezę (elektros srovę), antigenai pasiskirsto juostelės paviršiuje - jei tiriamajame serume yra antikūnų prieš ŽIV, tada jie sąveikaus su visomis antigenų grupėmis, ir tai galima nustatyti.

Reikėtų prisiminti kad 90-95% užsikrėtusiųjų ŽIV antikūnai atsiranda per 3 mėnesius po užsikrėtimo, 5-9% užsikrėtusiųjų antikūnai prieš ŽIV atsiranda po 6 mėnesių, o 0,5-1% užsikrėtusiųjų antikūnai prieš ŽIV atsiranda vėliau. AIDS stadijoje antikūnų skaičius gali mažėti, kol jie visiškai išnyks.

Imunologijoje yra tokia sąvoka kaip "serologinis langas" - laikotarpis nuo užsikrėtimo iki tokio antikūnų kiekio, kurį galima aptikti, atsiradimo. ŽIV atveju šis laikotarpis paprastai trunka nuo 2 iki 12 savaičių, retais atvejais ilgiau. „Serologinio lango“ metu, remiantis tyrimais, žmogus yra sveikas, tačiau iš tikrųjų yra užsikrėtęs ŽIV. Nustatyta, kad ŽIV DNR gali išlikti žmogaus genome mažiausiai trejus metus be aktyvumo požymių ir neatsiranda antikūnų prieš ŽIV (ŽIV infekcijos žymenys).

Per šį laikotarpį („serologinis langas“) galima nustatyti ŽIV užsikrėtusį asmenį ir net 1-2 savaites po užsikrėtimo naudojant polimerazės grandininė reakcija(PGR). Tai itin jautrus metodas – teoriškai galima aptikti 1 DNR 10 ml terpės. Metodo esmė tokia: naudojant polimerazės grandininę reakciją, gaunama daug nukleorūgšties kopijų (virusas yra nukleorūgštis – DNR arba RNR – baltymo apvalkale), kurios vėliau identifikuojamos naudojant paženklintus fermentus arba izotopus. , taip pat pagal jiems būdingą struktūrą. PGR yra brangus diagnostikos metodas, todėl jis nenaudojamas atrankai ar įprastai.

LIGOS STADĖS NUSTATYMAS

AIDS vystymasis grindžiamas, visų pirma, T-limfocitų-pagalbininkų, pažymėtų monokloniniais antikūnais – diferenciacijos klasteriais – kaip CD4, sunaikinimas. Šiuo atžvilgiu diagnozuoti ir stebėti ligos progresavimą neįmanoma be T pagalbinių ląstelių subpopuliacijos stebėjimo, o tai patogiausia atlikti naudojant lazerinį ląstelių rūšiatorių.

Dėl lengvos ŽIV infekcijos T-limfocitų skaičius yra labai įvairus rodiklis. Apskritai, CD4 ląstelių skaičiaus sumažėjimas (absoliutus ir santykinis) nustatomas asmenims, kuriems ŽIV užsikrėtė bent prieš metus. Kita vertus, ankstyvosiose infekcijos stadijose tiek periferiniame kraujyje, tiek padidėjusiuose limfmazgiuose dažnai labai padaugėja slopinamųjų T ląstelių (CD8).

Su sunkiu AIDS Absoliuti dauguma pacientų turi sumažėjusį bendrą T limfocitų skaičių (mažiau nei 1000 1 μl kraujo, įskaitant CD4 limfocitus – mažiau nei 22 iš 1 μl, o absoliuti CD8 kiekio reikšmė išlieka normos ribose). Atitinkamai, CD4/CD8 santykis smarkiai sumažėja. T ląstelių atsakas in vitro į standartinius antigenus ir mitogenus sumažėja griežtai atsižvelgiant į santykinai sumažėjusį CD4 skaičių.

Vėlyvoms AIDS stadijoms Būdinga bendra limfopenija, neutropenija, trombocitopenija (atitinkamai limfocitų, neutrofilų ir trombocitų skaičiaus sumažėjimas), anemija. Šie pokyčiai gali būti centrinio hematopoezės slopinimo dėl viruso sukelto kraujodaros organų pažeidimo, taip pat periferinių ląstelių subpopuliacijų autoimuninio sunaikinimo pasekmė. Be to, AIDS būdingas vidutinis gama globulinų kiekio padidėjimas ir dominuojantis IgG kiekio padidėjimas. Pacientams, sergantiems sunkiais AIDS simptomais, dažnai būna padidėjęs IgA kiekis. Kai kuriais ligos etapais žymiai padidėja AIDS žymenų, tokių kaip 1-mikroglobulinas, rūgščiai stabilus interferonas, 1-timozinas, lygis. Tas pats atsitinka su laisvo neopterino, makrofagų metabolito, sekrecija. Kiekvieno iš išvardytų testų santykinės svarbos įvertinti kol kas neįmanoma, jų skaičius nuolat didėja. Todėl jie turėtų būti vertinami sąveikaujant su ŽIV infekcijos žymenimis, tiek imunovirusiniais, tiek citologiniais. Klinikiniam kraujo tyrimui būdinga leukopenija ir limfopenija (atitinkamai leukocitų ir limfocitų skaičiaus sumažėjimas).

1 etapas - " inkubacinis etapas» - antikūnai prieš ŽIV dar neaptikti; ŽIV infekcijos diagnozė šiame etape nustatoma remiantis epidemiologiniais duomenimis ir turi būti laboratoriškai patvirtinta paciento kraujo serume nustačius žmogaus imunodeficito virusą, jo antigenus ir ŽIV nukleino rūgštis;
2 etapas - " pirminių pasireiškimų stadija» - šiuo laikotarpiu jau gaminami antikūnai:;
2A etapas – “ besimptomis» - ŽIV infekcija pasireiškia tik antikūnų gamyba;
2B etapas – “ ūminė ŽIV infekcija be antrinių ligų» - plačios plazmos limfocitai - pacientų kraujyje galima aptikti „mononuklearines ląsteles“, dažnai stebimas laikinas CD4 limfocitų kiekio sumažėjimas (ūminė klinikinė infekcija stebima 50–90% užsikrėtusių asmenų per pirmuosius 3). praėjus mėnesiams po užsikrėtimo, ūminės infekcijos laikotarpis, kaip taisyklė, prasideda prieš serokonversiją, t. y. atsiranda antikūnų prieš ŽIV);
2B etapas – “ ūminė ŽIV infekcija su antrinėmis ligomis» - sumažėjus CD4 limfocitų kiekiui ir dėl to atsirandančiam imunodeficitui, atsiranda antrinės įvairios etiologijos ligos (krūtinės angina, bakterinė ir pneumonija, kandidozė, herpetinė infekcija ir kt.);
3 etapas - " latentinis» - reaguojant į imunodeficito progresavimą, imuninio atsako modifikacija pasireiškia per didelio CD4 ląstelių dauginimosi forma, po to palaipsniui mažėja CD4 limfocitų kiekis, vidutiniškai 0,05-0,07x109/l. per metus; kraujyje aptinkami antikūnai prieš ŽIV;
4 etapas - " antrinių ligų stadija» - sumažėjus CD4 populiacijos limfocitams, ženkliai sumažėja antikūnų prieš virusą koncentracija (priklausomai nuo antrinių ligų sunkumo, skiriamos 4A, 4B, 4B stadijos);
5 etapas - " terminalo stadija» - paprastai CD4 ląstelių skaičiaus sumažėjimas žemiau 0,05x109/l; antikūnų prieš virusą koncentracija labai sumažėja arba antikūnų gali neaptikti.