Je velmi důležité rozpoznat onemocnění včas. V určitém okamžiku může být osoba doporučena pro DSC, která umožňuje určit, zda osoba má syfilis nebo ne.
Existuje několik indikací, kdy je nutné darovat krev k určení přítomnosti nebo nepřítomnosti syfilis v lidském těle.
Mezi takové indikace patří:
- Promiskuitní pohlavní styk (nezávazný i náhodný) Lidé se při pohlavním styku ne vždy chrání, a proto se riziko nakažení syfilisem několikrát zvyšuje.
- Příprava před operací, kdy je pro lékaře velmi důležité vědět o celkovém stavu lidského těla a o tom, zda musí přijmout nějaká další bezpečnostní opatření, aby se sami nenakazili.
- , během níž je velmi důležité provést kompletní diagnostiku těla nastávající matky a pochopit, jak velké jsou šance na nošení dítěte. A kromě toho syfilis představuje pro dítě nebezpečí, a proto to v některých případech může vést k ukončení těhotenství.
- Plánování těhotenství. Tento proces je navržen tak, aby zajistil, že budoucí rodiče vědomě podstoupí vyšetření, aby mohli k otázce početí přistupovat vážně. Během této akce jsou identifikována všechna možná onemocnění a také existující infekce, které je třeba okamžitě léčit.
- Vředy na genitáliích, které mohou naznačovat přítomnost vážného a nebezpečného onemocnění.
- Hojný výtok z genitálií různých typů.
- Zvětšené lymfatické uzliny, hlavně v oblasti třísel.
- Vyrážka na těle, která může být doprovázena silným svěděním.
- Bolestivé pocity v oblasti kostí.
Také vyšetření krve na syfilis (DBS) se provádí při každé preventivní prohlídce za jedním účelem, aby byl problém odhalen včas.
Příprava a interpretace krevního testu
Pacient, který obdržel doporučení na CSR test, se musí zdržet konzumace jídla nejméně 8 (nejlépe 12) hodin před samotným výkonem, protože to může někdy vést k falešně pozitivnímu nebo falešně negativnímu testu.
Pokud se člověk nemůže vyhýbat jídlu po tak dlouhou dobu (například diabetici nebo těhotné ženy), je nutné vyloučit čaj, kávu a jakékoli džusy. Je povoleno pít pouze čistou vodu (převařenou nebo filtrovanou).
V okamžiku, kdy vědci dostali takovou metodu pro diagnostiku syfilis, bylo možné ji odhalit i s latentním průběhem.
Wassermanova reakce je zvláště důležitá pro každého venerologa, protože:
- Umožňuje určit i okamžik infekce, samozřejmě ne s přesností na dny, ale přibližný interval a trvání onemocnění je docela dobré.
- Je možné určit přítomnost syfilis, i když se vyskytuje v latentní formě.
- Toto je jediný normální ukazatel toho, jak efektivně léčba probíhá a zda existuje pozitivní dynamika.
Více informací o analýze najdete ve videu.
Také se lékař při provádění preventivních opatření u zdroje infekce řídí výsledky analýzy, což je také důležité.Pacienti jsou zvyklí na to, že výsledek testu může být buď pozitivní, nebo negativní. U syfilidy je ale situace trochu jiná.
Negativní výsledek může nastat buď při úplné absenci infekce, nebo u časné primární či pozdní terciární syfilis.
Pokud jde o pozitivní výsledek, naznačuje, že infekce je přítomna v těle (v závislosti na přesnosti indikátorů), nebo že osoba je ve fázi zotavení nebo v prvním roce po léčbě.To znamená, že při obdržení výsledku analýzy nelze s jistotou říci, zda je člověk zdravý nebo ne. Zejména pokud jde o pacienty podstupující léčbu.
V případě, že člověk nebyl trýzněn příznaky a nepodstoupil žádnou léčbu a jeho analýza byla negativní, znamená to úplnou absenci onemocnění.
Existuje řada onemocnění a důvodů, kvůli kterým může DCS vykazovat výsledky. Člověka to samozřejmě šokuje, ale neznamená to beznaděj.
Falešně pozitivní výsledek se může objevit v následujících případech:
- Během, protože tělo je v tuto chvíli pod velkým stresem.
- Pro diabetes mellitus.
- Na tuberkulózu jakékoli formy.
- V přítomnosti maligních nádorů v těle (onkologie).
- Zneužívání alkoholických nápojů.
- Při virové infekci, kdy játra nepracují tak, jak tělo vyžaduje.
- U zápalu plic, zejména u těžkých forem.
U lidí po očkování lze také pozorovat falešně pozitivní výsledek, takže pokud takový výsledek dostanete, musíte o tom informovat svého lékaře.Pokud jde o falešně negativní výsledky, je to velmi vzácné.
Krevní test je velmi důležitou diagnostickou metodou, která umožňuje odhalit onemocnění včas a zahájit léčbu.
Samozřejmě ne vždy se nemoc odhalí v rané fázi. To je důvod, proč každý rok, zejména pokud došlo k příležitostným sexuálním vztahům, je nutné podstoupit test, aby se nemoc nedostala do těžkého stadia, ve kterém je již problematické vyléčit.
V případě primární syfilis, chancroidního výtoku nebo tečkovaných lymfatických uzlin se vyšetřuje na treponema pallidum. V případě sekundární syfilis se materiál odebírá z povrchu erodovaných papulí na kůži, sliznicích, prasklinách atd. Před odběrem materiálu za účelem očištění od různých nečistot se povrch lézí (eroze, vředy, praskliny ) se musí důkladně otřít sterilním vatovým tamponem navlhčeným izotonickým roztokem chloridu sodného nebo předepsat pleťové vody se stejným roztokem. Očištěný povrch se osuší suchým tamponem a k mírnému podráždění periferních oblastí se používá platinová klička nebo špachtle, přičemž se zároveň lehce mačká základna prvku prsty v gumové rukavici, dokud se neobjeví tkáňový mok (sérum), z nichž se připravuje příprava na výzkum. Získání tkáňové tekutiny je důležité pro diagnostiku syfilis, protože pallidum treponema se nachází v lumen lymfatických kapilár, v tkáňových štěrbinách kolem lymfatických a krevních cév.Punkce regionálních lymfatických uzlin
Kůže nad lymfatickými uzlinami je ošetřena 96% alkoholem a 3-5% alkoholovým roztokem jódu. Poté použijte 1. a 2. prst levé ruky k fixaci lymfatické uzliny. Pravou rukou vezměte sterilní injekční stříkačku s několika kapkami izotonického roztoku chloridu sodného, která se vstříkne rovnoběžně s podélnou osou lymfatické uzliny. Jehla je zatlačena v různých směrech na protější stěnu pouzdra uzlu a obsah stříkačky je pomalu injikován. Pomocí prstů levé ruky se lehce promasíruje lymfatická uzlina. Při pomalém vytahování jehly se současně vytahuje píst stříkačky a odsává se obsah lymfatické uzliny. Materiál se nanese na podložní sklíčko (pokud je množství materiálu malé, přidá se kapka izotonického roztoku chloridu sodného) a překryje se krycím sklíčkem. Studium nativního léčiva se provádí v tmavém zorném poli pomocí světelně optického mikroskopu s kondenzorem v tmavém poli (objektiv 40, 7x, 10x nebo 15x). Treponema pallidum lze nalézt i v barevných preparátech. Při barvení podle Romanovského-Giemsy se světlý treponem obarví růžově, podle Fontana a Morozova hnědě (černě), podle Burriho metody se na tmavém pozadí odhalí nebarvený treponem.Sérologická diagnostika
Standardní (klasické) a specifické sérologické reakce mají velký význam při diagnostice syfilis, hodnocení účinnosti léčby, stanovení léčebného kritéria a identifikaci latentních rezistentních forem. Standardní nebo klasické sérologické reakce (SSR) zahrnují:- Wassermanova reakce (WR),
- sedimentární reakce Kahna a Sachs-Vitebského (cytocholické),
- reakce na skle (expresní metoda),
- imobilizační reakce treponema pallidum (reakce treponema pallidum),
- imunofluorescenční reakce (RIF).
Wassermanova reakce (WR)
- vyvinul A. Wasserman spolu s A. Neisserem a C. Bruckem v roce 1906. Wassermanova reakce je založena na fenoménu fixace komplementu (Bordet-Gengouova reakce) a umožňuje stanovení antilipidových protilátek (reaginů). Podle moderních koncepcí Wassermanova reakce detekuje protilátky proti lipidům makroorganismu, nikoli Treponema pallidum, a reakce odhalí autoimunitní proces, který je způsoben denaturací tkání makroorganismu Treponema pallidum s tvorbou lipoproteinového komplexu ( konjugát), ve kterém jsou determinanty lipidy (hapteny).RV je obvykle diagnostikována dvěma nebo třemi antigeny. Nejčastěji se používá vysoce citlivý kardiolipin antigen (extrakt z hovězího srdce obohacený o cholesterol a lecitin) a treponemální antigen (sonifikovaná suspenze anatogenního kultivovaného treponemes pallidum). Společně se sérovými reaginy pacienta tvoří tyto antigeny imunitní komplex schopný adsorbovat a vázat komplement. Pro vizuální stanovení vzniklého komplexu (reagins + antigen + komplement) se jako indikátor používá hemolytický systém (směs ovčích erytrocytů s hemolytickým sérem). Pokud je komplement navázán v 1. fázi reakce (reaginuje + antigen + komplement), nedochází k hemolýze – červené krvinky se vysrážejí do snadno znatelné sraženiny (PB pozitivní). Pokud ve fázi 1 komplement není vázán kvůli absenci reaginů v testovaném séru, bude využit hemolytickým systémem a dojde k hemolýze (RT negativní). Stupeň závažnosti hemolýzy při stagingu RV se hodnotí plusy: úplná absence hemolýzy ++++ nebo 4+ (RV je ostře pozitivní); sotva zahájená hemolýza +++ nebo 3+ (RV pozitivní); významná hemolýza ++ nebo 2+ (RV slabě pozitivní); nejasný obraz hemolýzy ± (RV je pochybná); kompletní hemolýza - (Wassermannova reakce negativní).
Kromě kvalitativního hodnocení PB existuje kvantitativní hodnocení s různými ředěními séra (1:10, 1:20, 1:80, 1:160, 1:320). Reaginový titr je určen maximálním ředěním, které stále poskytuje ostře pozitivní (4+) výsledek. Kvantitativní staging RV je důležitý při diagnostice některých klinických forem syfilitické infekce a také při sledování účinnosti léčby. V současné době se Wassermanova reakce provádí se dvěma antigeny (kardiolipin a treponemální znělý Reiterův kmen). Zpravidla se RV stává pozitivní za 5-6 týdnů po infekci u 25-60 % pacientů, po 7-8 týdnech - u 75-96 %, po 9-19 týdnech - u 100 %, i když v posledních letech někdy dříve nebo později . Současně se titr reaginu postupně zvyšuje a dosahuje maximální hodnoty (1:160-1:320 a výše) v případě generalizovaných vyrážek (sekundární čerstvá syfilis). Když je RV pozitivní, je stanovena diagnóza primární séropozitivní syfilis.
Se sekundárním čerstvým a sekundární recidivující syfilis je RV pozitivní u 100 % pacientů, ale u vyčerpaných pacientů s oslabenou imunitou lze pozorovat negativní výsledek. Následně titr reaginu postupně klesá a v případě sekundární recidivující syfilis obvykle nepřesáhne 1:80-1:120.
Pro terciární syfilis RV je pozitivní u 65–70 % pacientů a obvykle je pozorován nízký titr reaginace (1:20–1:40). U pozdních forem syfilis (syfilis vnitřních orgánů, nervový systém) je pozitivní RV pozorována v 50-80% případů. Reaginový titr se pohybuje od 1:5 do 1:320.
Na latentní syfilis pozitivní RV je pozorována u 100 % pacientů. Reaginový titr je od 1:80 do 1:640 a u pozdní latentní syfilis od 1:10 do 1:20. Rychlé snížení titru reaginů (až do úplné negativity) během léčby ukazuje na účinnost léčby.
Nevýhody Wassermanovy reakce- nedostatečná citlivost (negativní v počáteční fázi primární syfilis). Negativní je také u 1/3 pacientů, pokud byli v minulosti léčeni antibiotiky, u pacientů s terciárně aktivní syfilis s lézemi kůže a sliznic, osteoartikulárního aparátu, vnitřních orgánů, centrálního nervového systému a s pozdními vrozenými syfilis.
Nedostatek specifičnosti- Wassermanova reakce může být pozitivní u lidí, kteří dříve neměli a nemají syfilis. Falešně pozitivní (nespecifické) výsledky RV jsou pozorovány zejména u pacientů, kteří trpí systémovým lupus erythematodes, leprou, malárií, zhoubnými novotvary, poškozením jater, rozsáhlým infarktem myokardu a dalšími onemocněními a někdy i u zcela zdravých lidí.
Je detekována krátkodobá falešně pozitivní Wassermanova reakce u některých žen před porodem nebo po porodu, u drogově závislých, po anestezii nebo pití alkoholu. Falešně pozitivní RV je zpravidla slabě vyjádřena, často s nízkým titrem reaginů (1:5-1:20), pozitivní (3+) nebo slabě pozitivní (2+). Při hromadných sérologických průzkumech je frekvence falešně pozitivních výsledků 0,1–0,15 %. K překonání nedostatečné citlivosti používají chladový test (Kolyarova reakce) a zároveň se provádí s dalšími sérologickými reakcemi.
Sedimentární reakce Kahna a Sachs-Vitebského
Wassermanova reakce se používá v kombinaci se dvěma sedimentární reakce (Kahn a Sachs-Vitebsky), když se postupuje, připravují se koncentrovanější antigeny. Expresní metoda (mikroreakce na skle) - odkazuje na lipidové reakce a je založena na srážecí reakci. Je umístěn se specifickým kardiolipinovým antigenem, jehož 1 kapka se smíchá s 2-3 kapkami testovacího krevního séra v jamkách speciální skleněné destičky.Výhoda- rychlost obdržení odpovědi (za 30-40 minut). Výsledky se hodnotí podle množství usazeného sedimentu a velikosti vloček. Expresivita je definována jako CSR – 4+, 3+, 2+ a negativní. Je třeba poznamenat, že falešně pozitivní výsledky jsou pozorovány častěji než u RV. Expresní metoda se zpravidla používá pro hromadná vyšetření na syfilis, pro vyšetření v klinických diagnostických laboratořích, somatických odděleních a nemocnicích. Na základě výsledků expresní metody je vyloučena diagnóza syfilis u těhotných žen, dárců a také pro kontrolu po léčbě.
Treponema pallidum imobilizační reakce (TPI)
Treponema pallidum imobilizační reakce (TPI)- navrhl v roce 1949 R. W. Nelson a M. Mayer. Je to nejspecifičtější diagnostický test na syfilis. Jeho použití však omezuje složitost a vysoká cena výroby. V krevním séru pacientů jsou stanoveny videospecifické protilátky (imobilisiny), které vedou k imobilitě Treponema pallidum v přítomnosti komplementu. Antigenem je živý patogenní Treponema pallidum izolovaný z králíků infikovaných syfilis. Pomocí mikroskopu se spočítá ztráta motility (imobilizované) Treponema pallidum a vyhodnotí se výsledky RIBT: imobilizace Treponema pallidum od 51 do 100 % je pozitivní; od 31 do 50 % - slabě pozitivní; od 21 do 30% - pochybné; od 0 do 20 % - negativní.RIBT je důležitý v diferenciální diagnostice odlišit falešně pozitivní sérologické reakce od reakcí způsobených syfilis. Late se stává pozitivní než RV, RIF a proto nepoužívá se k diagnostice infekčních forem syfilis, i když v sekundárním období syfilis je pozitivní u 85–100 % pacientů.
V terciárním období syfilis s poškozením vnitřních orgánů, pohybového aparátu a nervového systému je RIBT pozitivní v 98-100 % případů ( RV je často negativní).
Je třeba mít na paměti, že RIBT může být falešně pozitivní, pokud testované sérum obsahuje treponemocidní léky (penicilin, tetracyklin, makrolity atd.), které způsobují nespecifickou imobilizaci Treponema pallidum. Za tímto účelem se krev testuje na RIBT nejdříve 2 týdny po ukončení užívání antibiotik a jiných léků.
RIBT, stejně jako RIF, je pomalu negativní během procesu ošetření, takže se nepoužívá jako kontrola během procesu ošetření.
Imunofluorescenční reakce (RIF)
Imunofluorescenční reakce (RIF)- vyvinutý v roce 1954 A.Coonsem a poprvé použit pro diagnostiku syfilitické infekce Deaconem, Falconem, Harrisem v roce 1957. RIF je založen na nepřímé metodě stanovení fluorescenčních protilátek. Antigenem pro výrobu je tkáňově patogenní Treponema pallidum fixovaný na podložní sklíčko, na které je aplikováno testovací sérum. Pokud testované sérum obsahuje antitreponemální protilátky související s IgM a IgG, silně se vážou na antigen – treponema, který je detekován ve fluorescenčním mikroskopu pomocí protidruhového („anti-lidského“) fluorescenčního séra.Výsledky RIF jsou zohledněny intenzitou záře bledého treponemu v přípravku (žlutozelená záře). Při absenci antitreponemálních protilátek v séru není treponema pallidum detekován. V přítomnosti protilátek je detekována záře bledého treponému, jehož stupeň je vyjádřen v plusech: 0 a 1+ - negativní reakce; od 2+ do 4+ - pozitivní.
RIF označuje skupinové treponemální reakce a podává se v 10- a 200násobném ředění testovaného séra (RIF-10 a RIF-200). RIF-10 je považován za citlivější, ale často jsou získány nespecifické pozitivní výsledky než s RIF-200 (má vyšší specificitu). Obvykle, RIF se stává pozitivní dříve než RV- pozitivní u primární séronegativní syfilis u 80 % pacientů, u 100 % v sekundárním období syfilis, vždy pozitivní u latentní syfilis a v 95-100 % případů u pozdních forem a vrozené syfilis.
Specifičnost RIF zvyšuje po předúpravě testovaného séra sorbent-ultrazvukovým treponemovým antigenem, který váže skupinové protilátky (RIF - abs).
Indikace pro RIBT a RIF- diagnostika latentní syfilis k potvrzení specifičnosti komplexu lipidových reakcí při podezření na syfilitickou infekci na základě pozitivní RV. Pozitivní RIBT a RIF jsou důkazem latentní syfilis. V případě falešně pozitivních RV u různých onemocnění (systémový lupus erythematodes, maligní novotvary atd.) a pokud jsou opakované výsledky RIBT a RIF negativní, svědčí to o nespecifické povaze RV. Podezření na pozdní syfilitické léze vnitřních orgánů, muskuloskeletálního systému, nervového systému, pokud mají pacienti negativní RV. Podezření na primární séronegativní syfilis, kdy u pacientů s opakovanými studiemi výtoku z povrchu eroze (vřed), punkce ze zvětšených regionálních lymfatických uzlin, není detekován treponema pallidum - v tomto případě je uveden pouze RIF - 10.
Při vyšetření osob s negativní RV kteří měli dlouhodobé sexuální a domácí kontakty s pacienty se syfilidou, s ohledem na pravděpodobnou možnost jejich léčby v nedávné minulosti antisyfilitickými léky, které způsobily negativitu RV. Enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA - enzymelinked immunosorbent assay) - metoda vyvinutá E. Engvallem a kol., S. Avrames (1971). Podstata spočívá ve spojení syfilitického antigenu sorbovaného na povrchu nosiče na pevné fázi s protilátkou ze zkoumaného krevního séra a identifikaci specifického komplexu antigen-protilátka pomocí enzymaticky značeného protidruhového imunitního krevního séra. To vám umožňuje hodnotit výsledky ELISA vizuálně podle stupně změny barvy substrátu působením enzymu obsaženého v konjugátu. Nespolehlivé výsledky ELISA mohou nastat v důsledku nedostatečného ředění přísad, porušení teplotních a časových podmínek, nekonzistence pH roztoků, kontaminace laboratorního skla a nesprávné techniky mytí médií.
Pasivní hemaglutinační reakce (RPHA)
Jako diagnostický test na syfilis navrhl T. Rathlev (1965,1967), T.Tomizawa (1966). Makromodifikaci reakce nazýváme TRHA, mikromodifikaci MNA-TR, automatizovanou verzi AMNA-TR, reakci s polymočovinovými makrokapslemi místo červených krvinek MSA-TR. Senzitivita a specificita RPGA jsou podobné jako RIBT, RIF, ale RPGA má menší citlivost u časných forem syfilis ve srovnání s RIF-abs a větší citlivost u pozdějších forem vrozené syfilis. RPGA je dodáván v kvalitativní a kvantitativní verzi.Technika odběru krve pro sérologické testy
Ke studiu RV, RIF, RIBT se krev odebírá z ulnární žíly nalačno nebo ne dříve než 4 hodiny po jídle pomocí sterilní stříkačky nebo jedné jehly (spádem). V místě odběru je kůže předem ošetřena 70% alkoholem. Stříkačka a jehla by měly být omyty izotonickým roztokem chloridu sodného. 5-7 ml testovací krve se nalije do čisté, suché a studené zkumavky. Na zkumavku se nalepí prázdný papír s příjmením pacienta, iniciálami, anamnézou nebo číslem ambulantní karty a datem odběru krve. Po odběru krve se zkumavka do druhého dne vloží do lednice s teplotou +4°+8°C. Následující den se sérum pro testování vypustí. Pokud se krev další den nepoužije, je nutné sérum ze sraženiny vypustit a uložit v chladničce nejdéle 1 týden. Pro testování RIBT musí být zkumavka speciálně připravená a sterilní. V případě porušení pravidel pro odběr krve na výzkum může mít nedodržení podmínek za následek zkreslení výsledků.Nedoporučuje se odebírat krev na vyšetření po jídle, pití alkoholu, užívání různých léků, po aplikaci různých vakcín, u žen během menstruačního cyklu.
Pro výzkum expresní metodou byla odebrána krev ze špičky prstu, jak se to dělá při odběru na ESR, ale krev byla odebrána z 1 kapiláry více. Expresní metodu lze provádět i s krevním sérem získaným venepunkcí. Pokud je potřeba provést krevní testy ve vzdálených laboratořích, lze místo krve poslat suché sérum (metoda suchých kapek). K tomu se druhý den po odběru krve oddělí sérum od sraženiny a natáhne se do sterilní stříkačky v množství 1 ml. Poté se sérum nalije ve formě 2 samostatných kruhů na proužek silného psacího papíru (voskový papír nebo celofán) o rozměrech 6x8 cm Na volný okraj se napíše příjmení, iniciály subjektu a datum odběru krve papír. Papír se sérem je chráněn před přímým slunečním zářením a ponechán při pokojové teplotě do druhého dne. Sérum zasychá ve formě malých kroužků lesklého nažloutlého skelného filmu. Poté jsou proužky papíru se sušeným sérem srolovány jako farmaceutický prášek a odeslány do laboratoře s uvedením diagnózy a účelu, pro který se vyšetřuje.
Sérologická rezistence
U některých (2 % a více) pacientů se syfilidou dochází i přes kompletní antisyfilitickou terapii ke zpomalení (absenci) negativních sérologických reakcí po ukončení léčby až na 12 měsíců i déle. Dochází k tzv. sérologické rezistenci, která je v posledních letech často pozorována. Existují formy sérologické rezistence:- Skutečný(absolutní, bezpodmínečné) - je nutné provést další antisyfilitickou léčbu kombinovanou s nespecifickou terapií pro zvýšení imunitních sil těla.
- Relativní- po plné léčbě se z treponema pallidum tvoří cysty nebo L-formy, které jsou v těle v málo virulentním stavu a v důsledku toho dodatečná léčba nemění ukazatele sérologických reakcí, zejména RIF a RIBT.
Pseudoodolnost- po léčbě, i přes pozitivní sérologické reakce, Treponema pallidum v těle chybí. V těle není žádný antigen, ale pokračuje tvorba protilátek, které jsou detekovány při sérologických reakcích.
Sérologická rezistence se může vyvinout v důsledku:
- nedostatečná léčba bez zohlednění trvání a stádia onemocnění;
- nedostatečná dávka a zejména v důsledku nezohlednění tělesné hmotnosti pacientů;
- porušení intervalu mezi podáváním léku;
- přetrvávání treponema pallidum v těle i přes kompletní specifickou léčbu v důsledku jejich rezistence na penicilin a další chemoterapeutika v přítomnosti skrytých, encystovaných lézí ve vnitřních orgánech, nervovém systému, lymfatických uzlinách, které jsou nepřístupné antibakteriálním lékům (treponema pallidum se často nacházejí v jizvových tkáních mnoho let po ukončení terapie, v lymfatických uzlinách lze někdy detekovat treponema pallidum 3-5 let po antisyfilitické terapii);
- snížení ochranných sil při různých onemocněních a intoxikacích (endokrinopatie, alkoholismus, drogová závislost atd.);
- celková vyčerpanost (jedení potravy chudé na vitamíny, bílkoviny, tuky).
- průvodní nespecifická onemocnění vnitřních orgánů, poruchy kardiovaskulárního systému, revmatismus, dysfunkce endokrinního a nervového systému, těžké chronické dermatózy, zhoubné novotvary;
- poškození nervového systému (těžká poranění, otřes mozku, duševní trauma);
- těhotenství; chronická intoxikace alkoholem, nikotinem, drogami; infekční onemocnění (malárie, tuberkulóza, virová hepatitida, úplavice, tyfus, tyfus a recidivující horečka).
Testování na syfilis je jedním z nejběžnějších laboratorních testů. Testy na syfilis se hojně využívají při preventivních prohlídkách. Pomocí mikroskopie je identifikován původce syfilis. Pomocí sérologických reakcí je potvrzena diagnóza syfilis, stanovena diagnóza latentní syfilis, monitorována účinnost léčby a stanovena vyléčení pacientů.
Diagnóza syfilis je stanovena na základě klinických údajů, detekce patogenů syfilis ve vzorcích materiálu a potvrzení diagnózy sérologickými výzkumnými metodami. Projevy syfilis jsou četné a rozmanité, proto je toto onemocnění diagnostikováno lékaři různých specializací. Diferenciální diagnostika primární syfilis se provádí s řadou onemocnění.
Rýže. 1. Na fotografii je primárním projevem syfilis chancre.
Protilátky proti Treponema pallidum a sérologická diagnostika
Při infekci syfilisem se v těle pacienta tvoří protilátky. Sérologická diagnostika pomáhá lékaři studovat dynamiku tvorby protilátek v těle pacienta se syfilidou v počátečních stádiích onemocnění, během léčby a po jejím ukončení, řešit otázku relapsu onemocnění u pacienta nebo reinfekce (reinfekce), k diagnostice syfilis u masových zdravotních stavů.
Protilátky proti Treponema pallidum IgM
Po infekci se jako první tvoří protilátky IgM. Začínají být detekovány pomocí sérologických reakcí od druhého týdne po infekci. Po 6–9 týdnech nemoci se jejich počet stává maximálním. Pokud pacient není léčen, protilátky po šesti měsících vymizí. IgM protilátky vymizí po 1 - 2 měsících. po, po 3-6 měsících. - po léčbě pozdní syfilis. Pokud je zaznamenán jejich růst, znamená to nebo naznačuje opětovnou infekci. Molekuly IgM jsou velké a neprocházejí placentou k plodu.
Protilátky proti Treponema pallidum IgG
IgG imunoglobulinové protilátky se objevují na konci prvního měsíce (4. týden) od okamžiku infekce. Jejich titr je vyšší než titr IgM. IgG přetrvává po léčbě poměrně dlouho.
Nespecifické protilátky
Existuje mnoho sérologických reakcí. To je vysvětleno antigenní multiplicitou Treponema pallidum. V krevním séru nemocného v různých stádiích syfilis se kromě specifických tvoří i určité nespecifické protilátky - aglutininy, komplement-fixující, imobilisiny, protilátky způsobující imunitní fluorescenci, precipitiny atd. Sérologické reakce k průkazu nespecifických protilátek mít relativní specifičnost, abyste se vyhnuli diagnostickým chybám, neměli byste používat pouze jednu, ale komplex sérologických reakcí (SRR).
Falešně pozitivní testy na syfilis
Charakteristickým rysem netreponemových testů je příjem falešně pozitivních reakcí. Protilátky-reaginy, které jsou produkovány v lidské krvi proti kardiolipinovému antigenu, jsou zaznamenány nejen u syfilis, ale i u dalších onemocnění: kolagenóza, hepatitida, onemocnění ledvin, tyreotoxikóza, rakovina, infekční onemocnění (lepra, tuberkulóza, brucelóza, malárie, tyfus, spála), během těhotenství a menstruačních cyklů, při konzumaci tučných jídel a alkoholu. Bylo zaznamenáno, že počet falešně pozitivních reakcí se zvyšuje s věkem.
Rýže. 2. Fotografie ukazuje primární syfilis u žen.
Laboratorní diagnostika syfilis pomocí sérologických testů
Sérologické testy na syfilis se dělí na treponemální a netreponemální.
1. Netreponemální testy
Antigen používaný v této skupině testů je kardiolipinový antigen. Nejpočetnější jsou lipidové antigeny patogenů syfilis. Tvoří 1/3 suché hmoty buňky. Pomocí netreponemálních testů jsou detekovány reaginové protilátky, které jsou produkovány proti kardiolipinovému antigenu. Do této skupiny patří komplement fixační test (FFR), mikroprecipitační test (MPR), rapid plasma reagin test (RPR) atd. Pomocí netreponemálních testů se provádí primární screening na syfilis (průzkum populačních skupin) a možnost získání výsledků v kvantitativní formě umožňuje použití těchto testů ke sledování účinnosti léčby. Pozitivní výsledky netreponemálních testů musí být potvrzeny treponemálními testy. Charakteristickým rysem netreponemových testů je příjem falešně pozitivních reakcí.
2. Treponemální testy
Treponemální testy používají antigeny treponemového původu izolované z kultury Treponema pallidum. S jejich pomocí se potvrzují pozitivní výsledky netreponemových testů. Do skupiny patří: RSKtrep - reakce fixace komplementu, RIF - imunofluorescenční reakce a její modifikace, RIT, RIBT - imobilizační reakce Treponema pallidum, RPHA - pasivní hemaglutinační reakce, ELISA - enzyme-linked immunosorbent assay.
3. Testy na syfilis pomocí rekombinantních antigenů
Antigeny pro tuto skupinu testů jsou získávány genetickým inženýrstvím a používají se v reakcích - RPGA a ELISA, v imunoblotovacích (IB) analýzách a imunochromatografických analýzách.
Rýže. 3. K diagnostice syfilis se používá soubor sérologických testů.
Diagnostika syfilis pomocí netreponemálních testů
K detekci syfilis se používají netreponemální testy nebo komplex sérologických reakcí (SSR). Sérologická diagnostika se používá od 5. týdne od okamžiku infekce nebo od 2-3 týdnů po vzniku. Protilátky jsou detekovány téměř u všech pacientů s čerstvým primárním. Sérologické reakce jsou pozitivní u 70 - 80 % pacientů se syfilidou, v 50 - 60 % případů u pacientů s terciární latentní syfilis.
Sérologické testy využívající netreponemální testy mohou poskytnout falešně pozitivní výsledky.
Rýže. 4. Odběr krve pro testování na syfilis.
Reakce fixace komplementu (karta RSK, KSK s KA, Wassermanova reakce)
Wassermanova reakce (RW, РВ), vynalezená A. Wassermanem před více než 100 lety, dnes prošla mnoha změnami, ale jako pocta tradici si své jméno zachovala až do současnosti. Reakce fixace komplementu pomocí kardiolipinového antigenu je určena nejen k průkazu protilátek, ale je prováděna i kvantitativně – s různým ředěním séra, což umožňuje její využití ke sledování účinnosti léčby. Nízká senzitivita a specificita, získání falešně pozitivních výsledků jsou negativní aspekty tohoto typu studie.
Podstata Wassermanovy reakce je následující: antigeny, které se používají ke stádiu Wassermanovy reakce, se na ně v případě přítomnosti protilátek proti původcům syfilis v lidské krvi navážou komplimentem a vysrážejí se. Intenzita reakce je označena znaménkem (+). Reakce může být negativní (-) - bez sedimentu, pochybná (malý sediment nebo +), slabě pozitivní (++), pozitivní (+++) a silně pozitivní (++++).
Modifikovaná Wassermanova reakce, Kolmerova reakce, je citlivější. S jeho pomocí jsou protilátky detekovány v sérech, kde Wassermanova reakce poskytla negativní výsledek.
V případě ostře pozitivních reakcí se provádí kvantitativní stanovení reaginů, pro které se používá sérum v ředění od 1:10 do 1:320, což umožňuje použití tohoto typu studie ke sledování účinnosti léčby. Například pokles titru protilátek a jejich následná séronegativita (získání negativních výsledků) svědčí o úspěšném vyléčení onemocnění.
Rýže. 5. Krevní test na syfilis - Wassermanova reakce.
Mikroprecipitační reakce (MPR)
Srážková mikroreakce se využívá pro hromadná vyšetření určitých skupin populace, diagnostiku syfilis a sledování účinnosti léčby. K provedení tohoto typu výzkumu je zapotřebí malé množství testovacího materiálu. Mikroreakce precipitace je založena na imunologické reakci antigen-protilátka. Pokud jsou protilátky přítomny v krevním séru subjektu, komplex antigen-protilátka se vysráží za vzniku vloček. Reakce se provádí v jamkách speciální skleněné desky. Posuzuje se podle intenzity sraženiny a velikosti vloček v (+) jako Wassermanova reakce. Nepoužívá se při vyšetřování těhotných žen, dárců a ke sledování účinnosti léčby. VDRL a RPR jsou typy mikroreakcí.
Rýže. 6. Typ srážecí reakce v kapce na skle.
Rýže. 7. Krevní test na syfilis - mikroprecipitační reakce.
Rýže. 8. Souprava pro rychlé stanovení plazmatických reaginů (RPR test na syfilis).
Všechny pozitivní testy získané při nespecifických sérologických reakcích vyžadují potvrzení specifickými reakcemi – treponemálními testy.
Diagnostika syfilis pomocí treponemálních testů
Při provádění treponemových testů se používají antigeny treponemového původu. Jejich negativní stránkou je nemožnost jejich použití ke sledování účinnosti léčby, získání pozitivních výsledků u spirochetóz a nevenerických treponematóz a získání falešně pozitivních výsledků u onkologických onemocnění, lepry a některých endokrinních patologií. Testy jako RPGA, ELISA a RIF zůstávají pozitivní po mnoho let po vyléčení syfilis a v některých případech po celý život.
RIBT a RIF jsou nejspecifičtější ze všech sérologických reakcí používaných k diagnostice syfilis. Umožňují rozlišit falešně pozitivní reakce a identifikovat pozdní formy syfilis, které se vyskytují s negativními reakcemi. Pomocí RIBT jsou rozpoznány falešně pozitivní reakce u těhotných žen, když je nutné vyřešit problém infekce dítěte.
Treponema pallidum imobilizační reakce (RIBT, RIT)
Podstatou reakce je, že protilátky v krevním séru pacienta znehybňují Treponema pallidum. Reakce je považována za negativní, když je imobilizováno až 20 % patogenů, slabě pozitivní - 21 - 50 %, pozitivní - 50 - 100 %. RIBT někdy dává falešně pozitivní výsledky. Test je komplexní a pracný, je však nepostradatelný při diferenciální diagnostice latentních forem onemocnění a falešně pozitivních výsledků sérologických reakcí, a to i u těhotných žen. RIBT dává 100% pozitivní výsledek pro sekundární, časnou a pozdní syfilis, v 94 - 100% případů - pro jiné formy syfilis.
Imunofluorescenční reakce (RIF)
Podstata reakce spočívá v tom, že treponema pallidum (antigeny) v kombinaci s protilátkami značenými fluorochromy vydávají ve fluorescenčním mikroskopu žlutozelenou záři. Výsledek se vyhodnotí znaménkem (+). Pomocí RIF jsou detekovány imunoglobuliny třídy A. Imunofluorescenční reakce se stává pozitivní dříve než Wassermanova reakce. Vždy je pozitivní u sekundární a latentní syfilis, v 95 - 100 % případů je pozitivní u syfilis terciární a vrozené. Technika provádění tohoto typu výzkumu je jednodušší než technika RIBT, ale není možné nahradit RIF RIBT, protože tato reakce je ve specifičnosti nižší než RIBT. RIF-10 (modifikace RIF) je citlivější, RIF-200 a RIF-abs jsou specifičtější.
Rýže. 9. Krevní test na syfilis - imunofluorescenční reakce (RIF).
Treponema pallidum imunitní adhezní reakce (IPAT)
Podstatou reakce je, že Treponema pallidum senzibilizovaný sérem pacienta v přítomnosti komplementu přilne na povrch červených krvinek. Výsledné komplexy se vysrážejí během centrifugace. Senzitivita tohoto testu a specificita jsou blízké RIF a RIBT.
Enzymový imunotest na syfilis (ELISA)
Pomocí ELISA se stanoví imunoglobuliny třídy M a G Technika IgM-ELISA může být použita jako screeningový a konfirmační test. Senzitivita ELISA a její specificita jsou podobné RIF. U syfilis dává ELISA pozitivní výsledky od třetího měsíce infekce a zůstává pozitivní po poměrně dlouhou dobu (někdy po celý život).
Rýže. 10. Analyzátor enzymové imunoanalýzy.
Pasivní (nepřímá) hemaglutinační reakce (RPHA)
RPHA je založena na schopnosti červených krvinek, na kterých jsou adsorbovány antigeny treponema pallidum, slepit se (hemaglutinace) v přítomnosti séra pacienta. RPGA se používá k diagnostice všech forem syfilis, včetně latentní. Při použití vysoce kvalitního antigenu tento typ sérologické reakce předčí ve specificitě a senzitivitě všechny ostatní testy.
Rýže. 11. RPGA se používá k diagnostice všech forem syfilis.
Rýže. 12. Test na syfilis - pasivní (nepřímá) hemaglutinační reakce (schéma).
Rýže. 13. Vzhled obráceného deštníku, který zabírá celé dno zkumavky, ukazuje na pozitivní reakci. V případě, že se červené krvinky usadí ve sloupci („tlačítko“) ve středu dna zkumavky, je indikována negativní reakce.
Rýže. 14. Test RPHA v laboratorních podmínkách.
Mikrobiologická diagnostika
Spolu se sérologickou diagnostikou hraje důležitou roli metoda průkazu Treponema pallidum (mikrobiologická diagnostika), zejména v období séronegativní syfilis, kdy v krvi ještě nejsou žádné protilátky, ale již se objevují první projevy čerstvé primární syfilis ( venerologický vřed).
Biologickým materiálem pro studium je výtok z povrchu tvrdých vředů (chancres), obsah pustulárních syfilidů, mokvavé a erozivní papuly, punkce infikovaných lymfatických uzlin, mozkomíšní mok a plodová voda pro PCR - krev.
Nejlepší metodou pro detekci patogenů syfilis je zkoumání biologického materiálu v mikroskopu v tmavém poli. Tato technika umožňuje vidět treponema pallidum v živém stavu, studovat jeho strukturální rysy a pohyb a rozlišovat patogenní patogeny od saprofytů.
Rýže. 15. Analýza na syfilis - mikroskopie v tmavém poli.
Rýže. 16. Při studiu suchých nátěrů se používá barvení Romanovsky-Giemsa. Světlé treponémy se zbarvují do růžova, všechny ostatní druhy spirochet se zbarvují do fialova.
Detekce Treponema pallidum mikroskopií v tmavém poli je absolutním kritériem pro konečnou diagnózu syfilis.
Rýže. 17. K identifikaci bakterií se používá imunofluorescenční reakce (RIF) - treponemální test. Specifický komplex antigen-protilátka v kombinaci se specifickým sérem značeným fluorochromem ve světle fluorescenčního mikroskopu dodává bakteriím nazelenalou záři.
Rýže. 18. Původci syfilis jsou jasně viditelní v nátěrech připravených metodou Levaditi (impregnace stříbrem). Bledý treponema je tmavé barvy na pozadí žluté barvy buněk infikovaných tkání.
Rýže. 20. Fotografie ukazuje kolonii Treponema pallidum. Je obtížné získat bakteriální kulturu. Na umělých živných půdách prakticky nerostou. Na médiu obsahujícím koňské a králičí sérum se kolonie objevují ve dnech 3–9.
PCR na syfilis
Dnes je technika polymerázové řetězové reakce účinná a slibná. PCR pro syfilis umožňuje získat výsledky během několika hodin a v materiálu odebraném pro diagnostiku může být přítomno alespoň několik patogenů.
Rýže. 21. PCR pro syfilis dokáže detekovat DNA nebo její fragmenty z Treponema pallidum.
Citlivost této výzkumné metody závisí na přítomnosti Treponema pallidum v biologickém materiálu a dosahuje 98,6 %. Specifičnost tohoto testu do značné míry závisí na správné volbě cíle pro amplifikaci během diagnózy a dosahuje 100 %.
Zároveň vzhledem k nedostatečně prostudovaným srovnávacím charakteristikám senzitivity a specificity přímých metod diagnostiky syfilis a PCR nebyla tato vyšetřovací metoda v Ruské federaci pro diagnostiku onemocnění dosud schválena.
PCR pro syfilis je povoleno provádět pouze v některých případech jako další metoda pro diagnostiku vrozené syfilis, neurosyfilis, pokud je obtížné diagnostikovat syfilis pomocí sérologických metod u pacientů s HIV.
Rýže. 22. Detekce DNA Treponema pallidum pomocí PCR indikuje buď přítomnost životaschopných bakterií, nebo zbytky mrtvých bakterií, které však obsahují jednotlivé úseky chromozomální DNA schopné tvořit další kopie.
Diagnostika syfilis je založena na klinických a laboratorních datech. Mezi posledně jmenovanými jsou mimořádně cenné sérologické studie, které se provádějí nejen k potvrzení diagnózy syfilis, ale také ke sledování její dynamiky pod vlivem terapie.
Sérologie syfilis dnes představuje samostatnou oblast vědění. Byly vytvořeny různé reakce, které získaly státní uznání v různých zemích. Je důležité, aby získané výsledky byly správně interpretovány, čehož lze dosáhnout pouze se znalostí základů sérologie.
U nás se pro sérologickou diagnostiku syfilis v souladu s metodickým doporučením Ministerstva zdravotnictví používá:
Precipitační mikroreakce (MR) s kardiolipinovým antigenem je screeningový test pro screening populace na syfilis;
Test reaginové plazmy (RPR), který také není treponemální, se používá jako screeningový test;
Komplex sérologických reakcí (CSR), který zahrnuje reakci fixace komplementu (CFR) s treponemálními a kardiolipinovými antigeny a MR;
Treponema pallidum imobilizační reakce (TRIRT), při které je jako antigen použit patogenní Treponema pallidum kmene Nichols;
Imunofluorescenční reakce (RIF) (v modifikacích: RIF-abs, RIF-c a RIF s kapilární krví z prstu); patogenní Treponema pallidum kmene Nichols se používá jako antigen v RIF;
Pasivní hemaglutinační reakce (RPHA) s antigenem z kulturního nebo patogenního Treponema pallidum;
Enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA) s antigenem z kulturního nebo patogenního Treponema pallidum.
Všechny tyto reakce mají různou citlivost a specifičnost a doporučují se pro použití v závislosti na daném úkolu.
Při hromadných preventivních prohlídkách populace na syfilis se využívá MR s krevní plazmou nebo inaktivovaným krevním sérem vyšetřovaných. Vyhodnocují se výsledky reakce -
kvalitativně jako 4+, 3+, 2+ a negativní. Výhodou expresní metody je rychlost získání odpovědi (za 30-40 minut), malý objem krve potřebný pro test (2-3 kapky), který lze pacientům odebrat z prstu.
Touto expresní metodou jsou vyšetřovány osoby, které jsou pravidelně vyšetřovány na pohlavně přenosné choroby, pacienti v somatických léčebnách a osoby umístěné ve speciálních záchytných stanicích. Pokud je expresní metoda použita izolovaně, jedná se pouze o screeningový test. Na základě jeho pozitivního výsledku není stanovena diagnóza syfilis a subjekty jsou odeslány k dermatovenerologovi k dalšímu klinickému vyšetření a vyšetření krve některým z dalších diagnostických testů (DSR, RIBT, RPGA, ELISA nebo RIF). Expresní metoda se nepoužívá u těhotných žen nebo dárců, protože často dává falešně pozitivní výsledky. Zdravotníci, kteří prošli speciálním školením, odebírají krev z prstu a provádějí magnetickou rezonanci. Laboratorní lékaři jsou povinni zohlednit jeho výsledky.
RSC s treponemálními a kardiolipinovými antigeny se používají k potvrzení diagnózy syfilis v přítomnosti aktivních projevů onemocnění, k vyšetření osob, které měly sexuální kontakt s pacientem se syfilis, k identifikaci latentní (latentní) syfilis, účinnosti terapie , při vyšetřování pacientů v psychiatrických a neurologických léčebnách, dárců a těhotných žen včetně osob doporučených k umělému přerušení těhotenství.
Krev pro výzkum se odebírá v množství 5-7 ml z ulnární žíly sterilní jehlou při dodržení pravidel asepse. U kojenců lze krev získat ze spánkové žíly nebo z řezů na patě. Krev se odebírá striktně nalačno (5-6 hodin po jídle) a nechá se v čistých suchých zkumavkách 2-3 hodiny při pokojové teplotě, aby se srazila. Testování DSR a specifických reakcí se provádí v sérologických laboratořích kožních a venerologických ústavů a ve venkovských oblastech - v laboratořích venkovských okresních nemocnic.
Metoda suchých kapek je velmi vhodná pro odesílání krve k testování do vzdálených laboratoří. K tomu se druhý den po odběru krve oddělí sérum od sraženiny. Pomocí odměrné pipety odeberte 1 ml séra a nalijte jej ve formě dvou samostatných koleček na proužek silného papíru (voskovaný nebo celofán) o rozměrech cca 6x8 cm Na volný okraj papíru napište příjmení pacienta, jméno a příjmení, datum odběru krve a sériové číslo. Sérum se nechává na papíře, chráněno před přímým slunečním zářením a prachem.
po dobu 24 hodin při pokojové teplotě k vysušení. Poté jsou proužky papíru se sušeným sérem srolovány a odeslány do laboratoře.
RSC u CSR s kardiolipinovým antigenem není příliš citlivý a stává se pozitivním 2-4 týdny po nástupu chancre a titr reaginu se postupně zvyšuje a dosahuje maxima (1:160-1:320 a více) se sekundární čerstvou syfilis. Poté titr reaginu postupně klesá a v případě sekundární recidivující syfilis obvykle nepřesáhne 1:80-1:20. U pacientů s terciární syfilis dávají tyto reakce pozitivní výsledek pouze v 70 % případů.
Je třeba zdůraznit, že CSR není striktně specifická pro syfilis a v některých případech může poskytnout falešně pozitivní (nespecifické) výsledky. Takové falešně pozitivní reakce jsou pozorovány u pacientů s malomocenstvím, malárií, někdy s autoimunitním onemocněním, novotvary, zápalem plic, tuberkulózou, onemocněním jater, při užívání léků (sulfonamidy, glukosidy, kozlík atd.), jakož i během těhotenství, menstruace atd. d. Při odběru krve na vyšetření na CSR je nutné upozornit subjekt, aby 2-3 dny předem nepil alkohol, tučná jídla a nebral léky. Nedoporučuje se testovat krev 1. týden po očkování, úrazu, operaci, při horečnatých stavech, v prvních 2 týdnech po narození, u novorozenců v prvních 10 dnech života, protože fyzikálně-chemické změny v krevním séru při těchto stavech mohou být podobné těm, které byly pozorovány u pacientů se syfilis.
Falešně pozitivní výsledky mohou být získány i technickými chybami (neúplná hemolýza, nesterilní odběr krve, nedostatečná kvalifikace laborantů).
K odlišení falešně pozitivních výsledků CSR od skutečných, k diagnostice latentní a pozdní formy syfilis, při podezření na syfilitickou infekci, ke stanovení retrospektivní diagnózy onemocnění se doporučuje použít specifické sérologické testy (RIBT, RPGA, ELISA nebo RIF)
K provedení specifických sérologických reakcí se také odebírá krev v množství 5-10 ml z antekubitální žíly nalačno. Krev se nalije do suché zkumavky pro testování na RIF a do sterilní zkumavky pro testování na RIBT. Specifické sérologické reakce na syfilis se provádějí ve specializovaných laboratořích dermatovenerologických pracovišť.
RIF je založen na nepřímé metodě stanovení fluorescenčních protilátek. Antigenem v této reakci je suspenze usmrceného kulturního Treponema pallidum, fixovaná na sklíčka, na kterou se aplikuje test a protidruhové fluorescenční sérum. Výsledky RIF se stanoví pod fluorescenčním mikroskopem posouzením záře treponémů v přípravku. Pokud je výsledek pozitivní, mají treponémy žlutozelenou záři, jejíž stupeň je označen plusy od 1 do 4; s negativními výsledky, treponémy nesvítí.
Další specifická reakce na syfilis - RIBT - je založena na fenoménu imobilizace Treponema pallidum antigeny krevního séra pacienta za přítomnosti komplementu. Suspenze živého Treponema pallidum získaná z králíků infikovaných syfilis se používá jako antigen pro RIBT. Počítání treponem, které ztratily pohyblivost (imobilizované), se provádí pod mikroskopem. Výsledky reakce se hodnotí v procentech: od 0 do 20 % - negativní, od 21 do 30 % - pochybné, od 31 do 50 % - slabě pozitivní, od 51 do 100 % - pozitivní. RIBT se stává pozitivní na konci primárního období syfilis a zůstává tak ve všech obdobích tohoto onemocnění a někdy i po úplné antisyfilitické léčbě. U terciární syfilis, specifických lézí vnitřních orgánů, nervového systému a vrozené syfilis, kdy je CSR často negativní, dává RIBT pozitivní výsledky v 98–100 % případů. Diagnóza latentní syfilis musí být potvrzena pozitivním RIBT.
RIBT může také poskytnout falešně pozitivní výsledky, pokud testované sérum obsahuje treponemocidní látky (antibiotika - penicilin, tetracyklin), které způsobují nespecifickou (toxickou) imobilizaci Treponema pallidum. Proto nemůžete testovat svou krev na tuto reakci dříve než 2 týdny po ukončení užívání antibiotik.
Sérologické studie lze také použít k určení poškození nervového systému syfilis vyšetřením mozkomíšního moku pacienta. Vyšetřuje se také na přítomnost proteinových a enzymových prvků, které indikují patologii a pomáhají diagnostikovat jednu nebo jinou formu neurosyfilis. Mozkomíšní mok se získává lumbální punkcí. Provádí se asepticky, nepředstavuje žádné nebezpečí a může být provedeno lékařem i ambulantně. Sérologické studie mozkomíšního moku jsou indikovány ve všech případech syfilis
Diagnostika syfilis je založena na klinických a laboratorních datech. Diagnóza syfilis je stanovena až po laboratorním potvrzení, tj. zjištění světlého treponemu ve výtoku chancre, erozivní, papuly u primární a sekundární syfilis a údajích ze sérologického vyšetření. Sérologické reakce jsou nesmírně cennou metodou nejen pro potvrzení diagnózy syfilis, ale také pro sledování dynamiky jejího průběhu pod vlivem léčby a zjištění, zda je onemocnění vyléčeno.
Standardní součásti komplexu sérologických reakcí (CSR) pro zjištění syfilitické infekce jsou v současnosti doplněny o treponemální reakce: RIBT (imobilizační reakce treponema pallidum), RIF (imunofluorescenční reakce). Wassermannova reakce (RW, PB) je založena na fenoménu fixace komplementu. K jeho výrobě se používá kardiolipinový antigen, což je cholesterolizovaný alkoholový extrakt z hovězího srdečního svalu a má podobné antigenní vlastnosti jako Treponema pallidum.
Wassermanova reakce
Komplement je vázán komplexem (lipoidní antigen a reagin testovaného séra). K indikaci vzniklého komplexu se používá hemolytický systém (ovčí červené krvinky a hemolytické sérum). Do skupiny CSR patří kromě reakce fixace komplementu s kardiolipinem a treponemálními antigeny také skleněná reakce (expresní metoda). Závažnost hemolýzy během RV je indikována plusy: ostře pozitivní - 4 +; pozitivní - 3 +; slabě pozitivní - 2 + nebo 1 +; negativní - . Důležité je také stádium reakce pomocí kvantitativní metody, tj. s různým ředěním séra (1:10; 1:20 atd. až do 1:320).
Velký počet standardních sérologických reakcí se vysvětluje antigenní mozaikovitostí Treponema pallidum, díky které se v krvi objevuje odpovídající množství protilátek (fixující komplement, aglutininy, precipitiny, imobiliny, protilátky způsobující imunitní fluorescenci atd.). sérum pacientů.
V každém stadiu syfilis mohou převažovat určité protilátky, a proto mohou být reakce s některými antigeny již pozitivní, zatímco s jinými mohou být stále negativní. Navíc relativní specifičnost standardních sérologických reakcí vyžaduje použití ne jedné z nich, ale komplexu reakcí, aby se zabránilo diagnostickým chybám. CSR se stanou pozitivními na konci 3. nebo během 4. týdne po objevení se chancre. Tyto reakce jsou ostře pozitivní a ve významném zředění séra téměř u všech pacientů se sekundárním čerstvým (98-99 %), sekundárním rekurentním (100 %), terciálně aktivním (70-80 %) a terciálně latentním (50-60 %) syfilis.
CSR však není striktně specifický soubor reakcí na syfilis. Pozitivní mohou být u pacientů s leprou, tuberkulózou, brucelózou, malárií, lupus erythematodes, dále při zápalu plic, jaterních chorobách, rakovině, po požití alkoholu, tučných jídel, v těhotenství, zejména v druhé polovině, i při během prvních 2 týdnů po porodu.
S věkem se zvyšuje počet nespecifických falešně pozitivních výsledků DCS. Pro podloženou diagnózu syfilis jsou spolu s údaji CSR, klinickými údaji, výsledky testů na Treponema pallidum v projevech primární a sekundární syfilis brány v úvahu, údaje z dalších sérologických reakcí - RIBT a RIF. RIBT je založen na fenoménu imobilizace Treponema pallidum protilátkami typu imobilisinu nalezenými v krevním séru pacientů se syfilidou. Suspenze světlého treponema získaná z tkání syfilitické orchideje se používá jako antigen pro RIBT.
Treponema pallidum se po přidání pacientova krevního séra zastaví v pohybu, tedy znehybní. Výsledky reakce se hodnotí v procentech: pozitivní RIBT se uvádí při imobilizaci od 51 do 100 % Treponema pallidum, slabě pozitivní - od 31 do 50 %, pochybné - od 21 do 30 % a negativní - od 0 do 20 % . Reakce se provádí za podmínek anaerobiózy. Imobilisiny se objevují v krevním séru pacientů později než jiné protilátky, takže RIBT se stává pozitivní později než CSR a RIF. RIBT je nejspecifičtější z existujících reakcí na syfilis. Jeho hlavním účelem je rozpoznat falešně pozitivní výsledky při provádění CSR. To je důležité zejména pro pacienty, u kterých se syfilis vyskytuje latentně bez vnějších projevů, ale s poškozením vnitřních orgánů nebo nervového systému. RIBT má zvláštní význam při rozpoznávání falešně pozitivních výsledků CSR u těhotných žen.
Je třeba připomenout, že nespecifické pozitivní výsledky RIBT jsou možné také u pacientů se sarkoidózou, lupus erythematodes, tuberkulózou, cirhózou jater atd. U těchto onemocnění je však RIBT slabě pozitivní (od 30 do 50 %) a nikdy nedosáhne 100%. Při léčbě antibiotiky jsou výsledky RIBT negativní. Studie s použitím RIBT se proto provádějí až po 7 dnech, pokud byla podávána antibiotika rozpustná ve vodě, a 25 dnech po ukončení léčby trvanlivými antibiotiky. RIF je citlivější reakce, proto je pozitivní již v primárním séronegativním období syfilis u 80 % pacientů. Z hlediska specifičnosti je RIF horší než RIBT, což mu neumožňuje nahradit RIBT, i když jeho technika je mnohem jednodušší. Reakce se provádí v několika modifikacích: RIF-10, RIF-200 a RIF-abs. (vstřebáno). RIF-10 je citlivější, zatímco RIF-200 a RIF-abs. víc konkrétní.
Princip reakce spočívá v tom, že se specifický antigen (treponema pallidum) kombinuje s krevním sérem pacienta (protilátky) a protidruhovým fluorescenčním sérem (králičí sérum proti lidským globulinům v kombinaci s fluoresceinem, látkou zářící pod ultrafialovým světlem). Při pozitivní reakci můžete ve fluorescenčním mikroskopu vidět žlutozelenou záři světlého treponemu, protože jsou obklopeny fluorescenčními protilátkami, které na nich ulpívají. Stupeň luminiscence se posuzuje plusy, jako u CSR. Pozitivní reakce se uvádí jako 4 +, 3 + a 2 +. Pokud je stupeň luminiscence 1 + a nedochází k žádné luminiscenci, je reakce považována za negativní. U sekundární syfilis je RIF pozitivní téměř ve 100 % případů. U latentní syfilis je vždy pozitivní (99–100 %), u terciárních forem a vrozené syfilis je pozitivní v 95–100 %.
Expresní metoda (mikroreakce na skle). Při této reakci, stejně jako u CSR, se používá kardiolipinový antigen, jehož jedna kapka se smíchá s 2-3 kapkami krevního séra vyšetřované osoby v jamkách speciální skleněné destičky. Reakce probíhá srážecím mechanismem. Celková doba reakce je 10-40 minut. Výsledek se hodnotí podle hustoty usazeného sedimentu a velikosti vloček; závažnost reakce je označena plusy: 4 +, 3 + atd., jako DAC. Mikroreakce na skle je pro pacienty se syfilisem méně specifická než RV, ale je o něco lepší v citlivosti. Falešně pozitivní výsledky jsou získávány častěji expresní metodou než metodou RT. Proto je tato metoda schválena pro použití pouze jako selekční reakce při hromadných vyšetřeních populace, klinickém vyšetření a vyšetření pacientů v klinických diagnostických laboratořích somatických nemocnic.
Definitivní diagnóza syfilis na základě této metody je zakázána. Pouze expresní metodu nelze použít při vyšetřování dárců, těhotných žen nebo pro sledování po léčbě pacientů se syfilidou. K diagnostice syfilis lze využít další metody: enzymatický imunosorbentní test (ELISA) s mikroprecipitační reakcí (RPM) nebo pasivní hemaglutinační reakci (RPHA) s RMP (včetně cizích analogů RMP - RPR nebo VDRL). Při provádění klinicko-sérologického sledování po specifické léčbě (pro stanovení účinnosti terapie) je povolena kvantitativní studie rakoviny močového měchýře (studie reakčního titru v průběhu času). Enzymová imunoanalýza (ELISA, Elisa). Principem reakce je spojení syfilitického antigenu, sorbovaného na povrchu nosiče na pevné fázi, s antigenem testovaného krevního séra a identifikace specifického komplexu antigen-protilátka pomocí protidruhového imunitního séra značeného enzymem. Senzitivita a specificita testu ELISA jsou podobné jako u RIF.
Pasivní hemaglutinační reakce (RPHA). Makromodifikaci této reakce nazýváme TRHA, mikromodifikaci MNA-TP a automatizovanou verzi AMNA-TP. Vědci vyvinuli domácí diagnostikum pro RPHA z patogenního a kultivovaného Treponema pallidum. Byla zjištěna vysoká citlivost a specificita RPGA, zejména u pozdních forem syfilis. Snadná výroba, nízká cena a vysoká citlivost RPGA umožňuje jeho použití jako screeningové reakce na syfilis. RPGA je k dispozici v kvalitativní a kvantitativní verzi, existují makro- a mikromodifikace.
IgM sérologie. V posledních desetiletích byla široce studována dynamika tvorby protilátek v těle pacientů se syfilis před, během a po léčbě. Je to dáno tím, že u pacientů, kteří byli pro syfilis plně léčeni, přetrvávají dlouhodobě pozitivní výsledky specifických sérologických reakcí na syfilis, což komplikuje řešení problematiky vyléčení pacientů, ale i včasnou diagnostiku vrozená syfilis. Obtížná je také diferenciální diagnostika relapsu onemocnění a reinfekce.
Při studiu tvorby protilátek v těle pacientů se syfilidou bylo zjištěno, že specifické protilátky se tvoří nejdříve po infekci. IgM, detekovaný již ve druhém týdnu po infekci a jeho maximální koncentrace v krvi dosahuje za 6-9 týdnů. Po 6 měsících po ukončení terapie u většiny pacientů nejsou v krvi detekovány. Ve čtvrtém týdnu po infekci začne tělo produkovat specifické IgG. Tento typ imunoglobulinu je detekován v největším množství 1-2 roky po infekci. Je třeba poznamenat, že specifické IgM přestávají být produkovány, když antigen zmizí z těla, a sekrece IgG pokračuje klony paměťových buněk. Velké molekuly IgM navíc neprocházejí placentou z matky na plod, a proto se podle jejich přítomnosti u dítěte zjišťuje, zda je dítě infikováno Treponema pallidum. Vzhledem k tomu, že koncentrace v krvi specifických
IgM v průběhu času přirozeně klesá; zvýšení titru těchto protilátek může sloužit jako pomocná známka přítomnosti relapsu onemocnění nebo reinfekce. V roce 1977 bylo navrženo 19S IgM-TA-abs, poté 19 IgM-TPHA. Tyto testy jsou založeny na separaci testovacích sér na 19S IgM a 7S IgG pomocí gelové filtrace a detekci prvního pomocí imunofluorescenční metody a hemaglucinačního testu. V roce 1980 V. Schmidt popsal hemadsorpční reakci na nosiči IgM-SPHA v pevné fázi, který kombinoval prvky ELISA a RPHA, a v roce 1983 E. 
Lindeschmidt navrhl IgM-TP-ABS-Elisa. A. Luger (1981) stanovil, že pro stanovení aktivity specifického procesu v centrálním nervovém systému je důležité stanovit IgM nastavením 19S IgM-SPHA. Zvláštní pozornost je věnována sérokonverzi v důsledku syfilis u kojenců, jejichž matky dostávaly antisyfilitickou léčbu.
Diagnóza vrozené syfilis je u zdravých novorozenců často chybně stanovena na základě průkazu IgG-AT, který se od matek se syfilidou dostává do krve dítěte přes placentární bariéru. K vyloučení vrozené syfilis u kojenců narozených matkám léčeným pro syfilis, které mají pozitivní první sérologie, ale nemají žádné klinické příznaky, je zapotřebí další testování IgM-AT a použití kombinací různých testů.
Pasivní hemaglutinační reakce v sérodiagnostice syfilis (RPHA) se na rozdíl od RIF a ELISA vyznačuje svou metodologickou jednoduchostí, rychlostí získávání výsledků a vysokou reprodukovatelností. Vzhledem k těmto vlastnostem by měl být RPGA používán jako screeningový test pro hromadné vyšetření na syfilis. Princip metody spočívá v tom, že při interakci krevního séra obsahujícího specifické protilátky s červenými krvinkami senzibilizovanými Treponema pallidum je pozorována jejich charakteristická aglutinace. Senzibilizaci erytrocytů mohou vyvolat antigeny patogenních a kulturních kmenů Treponema pallidum. RPGA je cenným diagnostickým testem ve všech stadiích syfilis a je zvláště citlivý u pozdních forem syfilis.
Před použitím léků uvedených na webu se poraďte se svým lékařem.
