Co je součástí Ifa? Enzymová imunoanalýza (EIA). Alternativní metoda ELISA

Enzymová imunoanalýza detekuje specifické protilátky nebo antigeny k řadě onemocnění. Díky diagnostické technologii jsou detekovány látky proteinového původu. Ošetřující lékař vysvětluje, proč je ELISA pozitivní a co to znamená. Pro stanovení diagnózy se berou v úvahu výsledky testů a anamnéza pacienta.

Co to znamená

Metoda výzkumu se začala používat před několika desítkami let. Od té doby se technologie zlepšila a přesnost výsledků se zvýšila. Výhodou diagnostiky je vysoká citlivost. Je zde i úskalí – technika zahrnuje hledání daného agenta, tzn. je nutné předpokládat jeho přítomnost v těle.

Cizí částice (antigen) vstupuje do těla spolu s infekčním agens (agens). Antigenem může být i částice krve někoho jiného, která neodpovídá skupině. Přítomnost takových faktorů způsobuje imunitní reakci. V důsledku složitých nervových procesů vznikají imunoglobuliny. Spojují se s cizími molekulami a vytvářejí imunitní komplex. V této podobě tělo snáze pozná částice a pomocí imunitního systému je zničí. Každý typ mikroorganismu produkuje specifické protilátky.

Pro testování se krev odebírá ze žíly. Poté jsou z materiálu odstraněny vytvořené sloučeniny, které mohou interferovat se studiem. Někdy se odebírají vzorky sliznice nebo mozkomíšního moku jako biologický materiál, v některých případech se provádí rozbor plodové vody. Laboratoř používá speciální destičky, v jejichž jamkách jsou připravené částice patogenních mikroorganismů. Laborant tam umístí sebraný materiál a sleduje, zda se tvoří imunitní sloučeniny.

Chcete-li získat přesné výsledky, musíte provést test na prázdný žaludek. 2 týdny před odesláním materiálu byste měli přestat užívat antivirové léky a antibiotika.

Analýza vám umožňuje potvrdit následující nemoci:

toxoplazmóza;
herpes různých typů;
cytomegalovirus;
salmonelóza;
úplavice;
infekce Helicobacter pylori;
spalničky;
klíšťová encefalitida;
zarděnky;
onemocnění reprodukčního systému;
hepatitida.

Toto je neúplný seznam receptů, zahrnuje také plané neštovice, syfilis a další nemoci, včetně těch, které způsobují různé koky.

Detekce alespoň jednoho imunoglobulinu naznačuje, že výsledek ELISA je pozitivní:

Detekce IgM indikuje akutní stadium infekční patologie. To potvrzuje současnou přítomnost IgA. Negativní výsledek může v některých případech znamenat chronicitu onemocnění.
Pozitivní indikátor IgA naznačuje latentní onemocnění nebo přítomnost chronického procesu.
Detekce IgG v různých případech může naznačovat přítomnost chronické formy onemocnění nebo naznačovat remisi.

Formulář může obsahovat informace pouze o přítomnosti nebo nepřítomnosti patogenu. V některých případech je indikován kvantitativní ukazatel. Někdy je studie zaměřena na stanovení úrovně koncentrace protilátek. Za tímto účelem je stanovena míra pozitivity ELISA. Tento indikátor umožňuje určit, jak dlouho trvá patologický proces v těle.

Co dělat

Infekční lékař se zabývá diagnostikou a léčbou infekčních onemocnění, takže ve většině případů tento odborník předepisuje test.

Pokud ELISA ukáže pozitivní výsledek, měli byste se poradit s lékařem. Je nepřijatelné činit závěry nebo provádět léčbu na vlastní pěst. Je obtížné porozumět indikátorům samostatně; dekódování výsledků musí být získáno od specialisty.

Výsledky krevních testů mohou být ovlivněny faktory, jako je kouření, konzumace alkoholu a užívání určitých skupin drog. Lékař může nařídit opakované vyšetření k vyloučení chyb ve výsledcích. Někdy jsou pro potvrzení diagnózy předepsány další typy studií.

Pokud je test pozitivní, neměli byste dělat předčasné závěry. Včasná studie vám však umožní identifikovat onemocnění a předepsat potřebnou léčbu.

V kontaktu s

Diagnostická metoda (ELISA) je informativní a nepříliš nákladná, proto mnoho laboratoří nabízí svým klientům tuto metodu (enzymový imunotest krve). Studie se provádí na lačný žaludek, krev pro analýzu se odebírá z pacientovy ulnární žíly. Před ELISA je vhodné nekouřit a nepít alkohol.

Co je krevní test prováděný metodou ELISA?

Mezi metodami krevních testů, které hodnotí schopnost těla odolávat infekčním chorobám a ukazují fázi onemocnění, zaujímá důležité místo enzymový imunosorbentní test (ELISA). Provedení této studie vám umožní komplexně posoudit aktivitu ochranné funkce krve a identifikovat stav imunodeficience u infekčních patologií, stejně jako krevních onemocnění, autoimunitních procesů a hormonálních problémů.

Jedná se o laboratorní vyšetření, které umožňuje stanovit přítomnost specifických protilátek (ochranných krevních faktorů proteinové povahy) proti určitým antigenům (patogenním agens). Z protilátek mají primární význam imunoglobuliny, které mohou existovat ve formě imunokomplexů.

Imunoglobuliny jsou produkovány jako výsledek komplexních neurohumorálních reakcí lidského imunitního systému, ke kterým dochází jako reakce na zavedení cizích antigenů. Každý typ patogenního agens produkuje své vlastní specifické protilátky. Působí tak, že se „navážou“ antigen nebo patologický mikroorganismus, vytvoří se komplexní sloučenina „antigen-protilátka“, následuje neutralizace, enzymatická lýza, reakce fagocytózy a odstranění z těla právě přítomností určitých komplexů typ patogenu nebo škodlivé látky přítomné u pacienta.

Stojí za to připomenout, že po průběhu léčby mohou protilátky zůstat v našem těle velmi dlouho, a to i poté, co infekce opustila naše tělo, tzn. zůstává tzv. „sérologická jizva“. Vezměme si příklad: na noční obloze jsou tisíce hvězd. Mnoho z těchto hvězd zemřelo již dávno, ale jejich světlo k nám stále doléhá po staletí. V podstatě vidíme pouze stopu hvězdy. Je světlo, ale hvězda je dávno pryč.

Ale pokud tam není žádné světlo, neznamená to, že tam hvězda nebyla. S protilátkami je to stejné. Jejich přítomnost nezaručuje přítomnost požadovaného infekčního agens v těle. Absence protilátek neznamená, že neexistuje žádná infekce. Pokud je výsledek testu ELISA pozitivní, znamená to, že musíte infekci hledat pomocí specifičtějších a nákladnějších metod - PCR, bakteriologické kultury. Falešně pozitivní výsledek je možný, pokud má několik mikrobů podobnou antigenní strukturu, pak se budou produkovat „podobné“ protilátky proti různým mikrobům.

Co jsou imunoglobuliny?

Bylo objeveno a studováno 5 hlavních tříd imunoglobulinů – IgA, IgM, IgG, IgD, IgE. role zbytku nebyla dosud plně objasněna a je předmětem vědeckého výzkumu.

Hlavním úkolem imunoglobulinu A (IgA) je ochranná funkce sliznic dýchacích cest, gastrointestinálního traktu a močového systému. Při akutním nástupu onemocnění je nemožné je identifikovat. Tyto ochranné komplexy se objevují až od 2. týdne počátku onemocnění, někdy i později. Většina imunoglobulinu A je koncentrována ve slizničních tkáních. Přibližně asi 80 %. Zbývající protilátky cirkulují v krvi.

Hlavní funkcí je neutralizace a ničení mikroorganismů. Po odeznění akutních projevů onemocnění se množství těchto imunoglobulinů začne snižovat a zcela vymizí až 8 týdnů po propuknutí onemocnění. Pokud je IgA detekován později, znamená to chronický proces.

Hlavními a prvními markery akutní fáze rozvíjející se patologie jsou imunoglobuliny třídy M (IgM). Jsou zjištěny do 5. dne nástupu onemocnění. Jejich přítomnost v krvi lze zjistit zhruba do 6 týdnů. Pak začnou rychle mizet.

Reziduální imunitní odpověď je charakterizována přítomností imunoglobulinů G (IgG) v krvi. Vzhled těchto faktorů v krvi je detekován přibližně měsíc po nástupu onemocnění. V budoucnu mohou být detekovány po mnoho měsíců, let a dokonce i celý život, přičemž plní ochrannou funkci proti návratu (relapsu) onemocnění a v některých případech znemožňují sekundární vývoj patologie.

Pokud se množství imunoglobulinu G začne znovu zvyšovat, pak lze mít podezření na opětovnou infekci. Podobný závěr lze učinit provedením dvou nebo tří vzorků odebraných v intervalu 2 týdnů.

Jak se provádí krevní ELISA?

Pro enzymovou imunoanalýzu se ve většině případů používá krev pacienta, někdy se odebírá sklivec, mok z míšního kanálu a plodová voda.

Krev se odebírá injekční jehlou do injekční stříkačky z kubitální žíly. Studie se provádí na prázdný žaludek. Je třeba si uvědomit, že užívání některých léků může ovlivnit výsledek testu. Před darováním krve se musíte zdržet kouření a pití alkoholu. Užívání drog může zkreslit výsledky.

V případě negativních hodnot imunoglobulinů IgM, IgG, IgA lze hovořit o absenci onemocnění nebo jeho počáteční fázi je také možný negativní výsledek s úplným zotavením po značné době.

Pokud nejsou detekovány IgA a IgM a IgG je pozitivní, pak se vší pravděpodobností mluvíme o vytvořené imunitě po infekčním onemocnění nebo po očkování.

Pokud nejsou detekovány IgA a IgM a IgG je pozitivní, pak se vší pravděpodobností mluvíme o vytvořené imunitě po infekčním onemocnění nebo po očkování

V případě vysokého titru IgM s negativními hodnotami IgG a IgA lze usoudit, že jde o akutní infekční onemocnění.

Simultánní pozitivní hodnoty výsledků imunoglobulinů - IgA, IgM, IgG jsou charakteristické pro akutní fázi relapsu stávajícího chronického onemocnění.

Co prezentovaná technologie poskytuje: stanovení přítomnosti helmintů v krvi; hledání dalších patogenů v těle; můžete zjistit důvody zhoršení vašeho zdraví; léčba je také založena na testech získaných tímto způsobem; můžete sledovat stav svého imunitního systému.

Další dobrou vlastností je možnost sledovat markery rakoviny bez ohledu na jejich původ, samozřejmě za předpokladu, že jsou v těle přítomny. Tento test je vhodný i pro popis stavu lidského reprodukčního systému. Přítomnost některých proteinů, hormonů a peptidů umožňuje posoudit potenciál partnera z hlediska početí dítěte a také očekávanou kvalitu budoucího plodu.

Krevní test na Giardii je mezi moderními lékaři poměrně populární. Kromě toho je tato výzkumná metoda vynikajícím nástrojem pro biomedicínskou analýzu a kvantitativní statistiku z hlediska specifických antigenů.

Jak se používá enzymatická imunoanalýza?

Je pravda, že se jedná o složitější případy, takže kvalita takového rozboru bude velmi záviset na laborantech provádějících testování. Vlastnosti technologie a její rozdíl od starých laboratorních studií:

nyní se místo vzorku stolice používá krev ke stanovení přítomnosti helmintů;
Vzorek je v laboratoři studován velmi rychle a úplné informace lze získat hned následující den;
náklady na laboratorní výzkum jsou levné, protože teologie je velmi jednoduchá;
Krevní test na helminty poskytuje vysokou přesnost.

Testy na imunologický rozbor krve pomocí ELISA

Málokdo ví, jaké krevní testy existují z hlediska lidského imunologického systému, protože tyto testy nejsou tak časté. Takový krevní test zpravidla poskytuje informace o viru imunodeficience v lidském těle a je anonymní, protože se provádí na žádost pacienta.

K odběru se používá krev odebraná ze žíly nalačno, ze které se centrifugací získá sérum pro testování. Kromě toho lze studiem krevního séra odhalit řadu sexuálně přenosných chorob (syfilis, herpes, chlamydie), stejně jako všechny typy hepatitidy, spalničky, zarděnky, příušnice a toxoplazmózu.

Pro analýzu ELISA je studovaným biologickým materiálem v zásadě krev, lze však vyšetřit mozkomíšní mok, obsah sklivce, plodovou vodu atd.

Imunoglobuliny jsou imunitní molekuly, které se mohou vázat a neutralizovat většinu infekčních patogenů a toxinů v těle. V tomto případě je nejdůležitější charakteristikou imunoglobulinů jejich specificita, tedy schopnost vázat se na specifický antigen. Právě tato vlastnost se používá k provádění krevního testu na imunoglobulin.

Existuje pět typů imunoglobulinů, ale nejvíce zkoumané jsou imunoglobuliny A, M a G. Imunoglobuliny M a G vykazují svou aktivitu v krvi. Imunoglobuliny A jsou jakousi bariérou na povrchu sliznic, protože jsou tam přítomny ve velkém množství.

Imunologický krevní test umožňuje určit typ imunoglobulinů, díky čemuž ELISA umožňuje nejen diagnostikovat onemocnění, ale také určit stadium onemocnění a sledovat dynamiku onemocnění:

v prvních 2 týdnech onemocnění jsou detekovány pouze imunoglobuliny A;
od 2. do 3. týdne onemocnění se v krvi prokazují imunoglobuliny A a M;
CC3 do 4. týdne krevní test na imunoglobulin detekuje všechny tři typy;
po zotavení imunoglobuliny M zmizí z krve a množství A a G se sníží 2–4krát;
v přítomnosti chronického procesu jsou v krvi nutně přítomny imunoglobuliny G, chybí imunoglobuliny M, imunoglobuliny A mohou a nemusí být přítomny.

Rozsah aplikace imunologické analýzy krve pomocí ELISA

Diagnostika virových onemocnění: hepatitida, herpes, virus Epstein-Barrové, cytomegalovirus atd.;
pohlavně přenosné infekce: chlamydie, kapavka, trichomonas, mykoplazma, ureaplazma;
syfilis; endokrinologie (stanovení hladiny hormonů);
nádorové markery (diagnostika rakoviny); imunologie (diagnostika imunodeficience);
alergologie (diagnostika a léčba alergií).

Sérologický krevní test je laboratorní metoda krevního testování, která se používá k diagnostice infekčních onemocnění a určení stadia infekčního procesu. Sérologická reakce je založena na interakci protilátek a antigenů.

Stanovení antigenů slouží k určení rodu a druhu mikroorganismů. Tato výzkumná metoda se používá v urologii a venerologii. Krev na sérologické vyšetření krve se odebírá ráno nalačno ze žíly.

Indikace pro použití a onemocnění zjištěná testem ELISA

Hlavním biomateriálem pro ELISA je krevní sérum: v laboratoři je pacientovi odebrán vzorek krve ze žíly, ze kterého jsou následně odstraněny vzniklé elementy, které rozbor komplikují. V některých dalších případech se k rozboru používá mozkomíšní mok, plodová voda, stěry ze sliznic apod.

Aby nedošlo ke zkreslení výsledků, doporučuje se darovat krev nalačno a dva týdny před vyšetřením (pokud je cílem diagnostika chronických, latentních infekčních onemocnění) je nutné vysadit antibiotika a antivirotika Není možné pokrýt úplný seznam indikací pro ELISA.

Nespornými výhodami ELISA jsou vysoká senzitivita a specificita metody. Citlivost je schopnost rozpoznat požadovanou látku, i když je její koncentrace ve vzorku nízká. Specifičnost implikuje bezchybnou diagnózu: pokud je výsledek pozitivní, znamená to, že byla nalezena přesně očekávaná protilátka nebo antigen, a ne některé jiné.

ELISA do značné míry nahradila „zlatý standard“ mikrobiologie – bakteriologickou diagnostickou metodu, při níž bylo k identifikaci patogena nutné jej izolovat z těla a následně kultivovat několik dní na živném médiu ve zkumavce.

Po celou dobu provádění analýzy byli lékaři nuceni léčit pacienta „naslepo“, původ mikroorganismu hádali z příznaků onemocnění. Stanovení IgM pomocí ELISA umožňuje přesnou diagnózu již v prvních dnech onemocnění.

Vysoký stupeň technologické účinnosti enzymových imunoanalýz minimalizuje vliv lidského faktoru, což snižuje pravděpodobnost chyby. Většina testovacích systémů a činidel ELISA používaných v moderních laboratořích je vyráběna v průmyslových podmínkách, což zaručuje přesné výsledky.

Nevýhody metody ELISA

Bohužel, abyste mohli provést ELISA, musíte vědět, co přesně hledat: technika analýzy znamená, že lékař má předem předpoklad o povaze onemocnění. Proto nemá smysl předepisovat takový test v naději, že náhodně „uhodnete“ diagnózu.

V případě diagnostiky infekčních onemocnění nemůže enzymatická imunoanalýza najít patogen a určit jeho specifické vlastnosti: indikuje pouze přítomnost protilátek v krvi pacienta, které nepřímo indikují přítomnost cizího mikroorganismu v lidském těle. ELISA je extrémně přesná, ale ne levná metoda, takže ji musíte používat moudře a výsledky by měl interpretovat kvalifikovaný lékař.

Možné výsledky ELISA

V závislosti na obsahu analýzy může formulář prezentovat údaje ve formě tabulky se seznamem všech protilátek nebo antigenů s poznámkami o negativní nebo pozitivní reakci, nebo bude uvedena kvantitativní hodnota výsledku (negativní, slabě pozitivní, pozitivní nebo silně pozitivní).

Druhá možnost určuje, kolik protilátek je obsaženo v analyzovaném vzorku. Dalším kvantitativním ukazatelem je index avidity protilátek, vyjádřený v procentech. Udává, kolik času uplynulo od začátku infekčního procesu (čím vyšší index, tím více).

Dnes se vyrábí tisíce typů testovacích systémů ELISA, které umožňují detekci specifických protilátek a antigenů pro širokou škálu patologií. Proto se tato analýza používá téměř ve všech lékařských odvětvích. Diagnóza stanovená pomocí ELISA je zárukou předepsání adekvátní terapie a účinné léčby onemocnění.

Pokud máte potřebné reagencie a dobrou organizaci laboratoře, obdržíte výsledek testu do 1–2 dnů po odběru krve. V některých případech, pokud je nutné získat nouzovou reakci, lze tuto dobu zkrátit na 2–3 hodiny.

ELISA je moderní laboratorní vyšetření, které hledá v krvi specifické protilátky (nebo antigeny) na konkrétní onemocnění s cílem identifikovat nejen etiologii, ale i stadium onemocnění.

hledat specifické protilátky proti jakékoli infekční nemoci;
hledání antigenů jakýchkoli infekčních onemocnění;
studium hormonálního stavu pacienta;
screening na přítomnost autoimunitních onemocnění.

Jako každá metoda laboratorní diagnostiky má i ELISA své výhody a nevýhody. Mezi výhody metody patří:

vysoká specificita a senzitivita metody (více než 90 %);
schopnost určit onemocnění a sledovat dynamiku procesu, to znamená srovnání počtu protilátek v různých časových obdobích;
dostupnost a rychlost tohoto výzkumu;
neinvazivní metoda sběru materiálu, nikoli výzkum;

Nevýhodou metody je skutečnost, že při analýze lze identifikovat nikoli původce onemocnění samotného, ale pouze imunitní odpověď na něj (protilátky).

Podstata metody ELISA

Existuje několik typů ELISA: přímá, nepřímá, blokující metoda, kompetitivní. V praxi se však nejčastěji používá heterogenní enzymatická imunoanalýza neboli ELISA.

Základem enzymové imunoanalýzy je imunitní reakce antigenu a protilátky s tvorbou imunitního komplexu, která má za následek změnu enzymatické aktivity specifických značek na povrchu protilátek.

V zásadě lze tento proces rozdělit do několika fází:

na povrchu jamek tablety testovacího systému je purifikovaný antigen specifického patogenu. Když se přidá zvířecí krevní sérum, dojde ke specifické reakci mezi tímto antigenem a požadovanou protilátkou;
Dále se do jamky přidá speciální chromogen (konjugát značený peroxidázou). Dochází k enzymatické reakci, jejímž výsledkem je vznik barevné látky v jamce destičky. Intenzita jeho barvy závisí na množství imunoglobulinů (protilátek) obsažených v séru zvířete;
Poté se vyhodnotí výsledek. Pomocí vícekanálového spektrofotometru je optická hustota testovaného materiálu porovnána s optickou hustotou kontrolních vzorků a výsledky jsou zpracovány matematicky. Množství protilátek u pacienta přímo závisí na výšce optické hustoty dané jamky.

Je třeba mít na paměti: pro každý testovací systém jsou vyvinuty individuální indikátory pro zaznamenání výsledků, indikátorů normality a patologie („referenční hodnoty“). To je třeba vzít v úvahu při posuzování výsledků každé konkrétní studie.

Je nesprávné interpretovat výsledky jedné laboratoře na základě „referenčních hodnot“ jiné laboratoře. Nesprávné je také porovnávat výsledky různých laboratoří mezi sebou.

Při hodnocení výsledků u konkrétních infekcí je důležitá třída detekovaných protilátek a jejich množství. Na tom závisí nejen otázka etiologie infekce, ale také očekávané stadium onemocnění (akutní, chronické), jakož i přítomnost aktivní infekce (akutní nebo exacerbace chronické) v době vyšetření.

Jaký je přibližný časový rámec pro výskyt protilátek?

Nejčasnější protilátky jsou IgM. Mohou být detekovány 1-3 týdny po možné infekci, která charakterizuje akutní fázi infekčního procesu. Druhou situací pro výskyt protilátek IgM je exacerbace chronického procesu. IgM cirkulují v průměru asi 3 měsíce, pak jejich množství postupně mizí. U některých pacientů však mohou být stopová množství IgM detekovatelná 1-2 roky po infekci.

Od 4. týdne po infekci se začínají objevovat IgG protilátky. U většiny infekcí se jejich titr postupně zvyšuje s maximem v různých časech (v průměru po 1,5-2 měsících), pak titr zůstává na nízké úrovni a indikuje imunitu. U některých onemocnění nejsou hladiny IgG vysoké.

Možnosti detekce protilátek

Izolovaný průkaz IgM protilátek naznačuje přítomnost primární infekce.
Současná detekce IgM a IgG v krvi je typická pro primární infekci v předchozích 2-3 měsících a také při exacerbaci chronického onemocnění.
Detekce izolovaného IgG může indikovat jak imunitu vůči onemocnění, tak chronickou infekci. Ve druhé situaci je důležité jak množství protilátek (titr), tak i změna tohoto titru v čase. Typicky se studie provádějí v intervalech 2-4-6 týdnů.

S pokrokem moderní medicíny je možné při podezření na určité patologie u pacienta provádět i hlubší diagnostiku. Jednou z informativních metod laboratorního výzkumu je analýza ELISA, která se provádí odběrem žilní krve. To znamená, že se pro pacienta obecně nic nemění. Laboratorní asistent-analyzátor ELISA však provádí složitou techniku pro zkoumání odebraného biomateriálu. V níže uvedeném materiálu pochopíme, co jsou testy ELISA a jaké jsou jemnosti použití metody ELISA jako diagnostické metody.

Co je to enzymatická imunoanalýza?

Produkci protilátek vyvolávají samotné antigeny, které pronikly do lidského těla. Při vstupu do „bitvy“ o zdraví těla protilátky jakoby označují antigeny, což vidí laborant při vyšetření krve. To znamená, že ve shromážděném biomateriálu je možné sledovat nejen přítomnost infekce, ale také její stopy po úplném zotavení těla.

Předepsáním enzymatického imunosorbentního testu pro pacienta tedy ošetřující lékař může sledovat dobu trvání infekce, stupeň její progrese nebo identifikovat přítomnost imunity vůči konkrétní infekci.

Diagnostický proces ELISA vypadá takto:

Odebraná žilní krev se v laboratoři přemění na krevní sérum;
Poté laborant použije speciální tác s buňkami, z nichž každá již obsahuje všechny potřebné antigeny. Do každé buňky stačí jednoduše nakapat krevní sérum a sledovat reakci imunoglobulinů (protilátek) na antigeny. Přítomnost „požadované“ reakce je indikována změnou barvy testovaného materiálu. Následně laborant studuje optickou hustotu zkoumaného média.

Ascariáza a enterobiáza (škrkavky a červi);
trichinelóza;
Opisthorchiáza v akutní a chronické formě;
Giardiáza;
amébióza;
toxoplazmóza;
Leishmanióza v jakékoli formě.

Důležité: enzymová imunoanalýza může být kvalitativní i kvantitativní. V prvním případě laborant pouze potvrdí nebo vyvrátí přítomnost požadované látky v krvi. Ve druhém případě výsledek analýzy ukazuje jeho koncentraci v těle pacienta.

Nevýhody metody

Se všemi výhodami této diagnostické metody stojí za to pochopit, že enzymatický imunosorbentní test není způsob, jak zjistit příčinu onemocnění pacienta, ale pouze způsob potvrzení diagnózy navržené ošetřujícím lékařem. A protože je výzkum poměrně nákladný, je třeba ho používat s rozumem. V tomto případě by měl výsledky studie interpretovat pouze kvalifikovaný odborník.

Dekódování výsledků

Poté, co jsme vyřešili zkratku ELISA a co to je ─ zjistil, stojí za to přejít k interpretaci výsledků. Zde je důležité pochopit, že pokud byla analýza provedena kvalitativně, výsledek bude pouze pozitivní nebo negativní. To znamená, že diagnóza buď potvrdí podezření lékaře ohledně určité diagnózy, nebo je vyvrátí. V tomto případě bude formulář obsahovat symboly „+“ nebo „-“.

Důležité: negativní výsledek testu nemusí vždy znamenat nepřítomnost infekce. Faktem je, že protilátky proti antigenům se mohou vytvořit do 14 dnů po infekci a je pravděpodobné, že ještě nebyly vytvořeny.

Pokud se provádí kvantitativní analýza, určí se typ protilátek, jejich množství a stupeň aktivity. Při této diagnóze se zejména stanovují protilátky (imunoglobuliny) IgG a IgM, které se tvoří v různých obdobích progrese infekce. Nejběžnější výsledky v tomto případě jsou:

Zvýšené IgM a úplná absence IgG. Tento obrázek ukazuje na nedávnou infekci a akutní fázi patologie.
Zvýšená aktivita obou typů imunoglobulinů (IgM i IgG). Hovoří o dlouhodobém a chronickém průběhu infekčního procesu.
Aktivita IgG a úplná absence IgM. K nákaze došlo nejméně před šesti měsíci a nyní je virus ve vleklé chronické fázi.
Nedostatek protilátek IgG a IgA. Výsledek není určen.
Absence protilátek IgM, IgA a IgG. Označuje nedostatek imunity vůči určité infekci.
Aktivita protilátek IgG, IgM a IgA ukazuje na exacerbaci chronického procesu.

Laborantka kromě identifikace typů protilátek uvádí také jejich množství ve speciálním sloupci formuláře ve vztahu k objemu krve. Pamatujte, že jakmile pochopíte, co je metoda ELISA, neinterpretujte výsledky sami. Získané výsledky může přesně interpretovat pouze ošetřující lékař v závislosti na očekávané diagnóze na základě klinického obrazu pacienta.

ELISA (enzyme-linked immunosorbent assay, ELISA) vstoupila do života praktické medicíny někde v 60. letech minulého století. Jejím prvotním úkolem byl histologický výzkum pro vědecké účely, který se scvrkl do hledání a identifikace antigenní struktury buněk živého organismu.

Metoda ELISA je založena na interakci specifických (AT) a příbuzných antigenů (AG) za vzniku komplexu „antigen-protilátka“, který je detekován pomocí enzymu. Tato skutečnost přiměla vědce k myšlence, že metodu lze použít pro diagnostické účely k identifikaci specifických imunoglobulinů různých tříd zapojených do imunitní odpovědi na konkrétní infekci. A byl to průlom v klinické laboratorní diagnostice!

Metoda se začala aktivně využívat až počátkem 80. let a poté především ve specializovaných institucích. První imunoenzymové analyzátory byly vybaveny krevními transfuzními centry a stanicemi, infekčními nemocnicemi a venerologickými nemocnicemi, protože hrozivý AIDS, zrozený na africkém kontinentu, se objevil na našem obzoru a okamžitě se přidal ke „starým“ infekcím, vyžadoval okamžitá diagnostická opatření a pátrání. pro terapeutické léky, které ho ovlivňují.

Rozsah aplikace metody ELISA

Možnosti enzymové imunoanalýzy jsou skutečně rozsáhlé. Nyní je těžké si představit, jak se lze obejít bez takového výzkumu, který se používá doslova ve všech odvětvích medicíny. Zdá se, co dokáže ELISA v onkologii? Ukazuje se, že může. A hodně. Schopnost analýzy najít markery charakteristické pro určité typy zhoubných novotvarů je základem včasného záchytu nádoru, kdy ještě není pro svou malou velikost detekován jiným způsobem.

Moderní klinická laboratorní diagnostika (CDL) má kromě nádorových markerů významný arzenál panelů ELISA a využívá je k diagnostice různých patologických stavů (infekční procesy, hormonální poruchy) a sledování farmaceutických léků za účelem identifikace jejich vlivu na organismus pacienta. a mimochodem nejen lidské. V současné době je enzymová imunoanalýza široce používána ve veterinárních službách, protože „naši bratříčci“ jsou také náchylní k mnoha nemocem, kterými někdy velmi trpí.

Tím pádem, ELISA může díky své citlivosti a specifičnosti určit ze vzorku krve odebrané ze žíly:

Hormonální stav (hormony štítné žlázy a nadledvin, pohlavní hormony);
Přítomnost virových a bakteriálních infekcí (HIV, B a C, chlamydie, syfilis a, a, stejně jako mnoho dalších onemocnění způsobených patogenními mikroorganismy);
Stopy vitální aktivity mikroorganismů, které iniciovaly infekční proces, který úspěšně skončil a přešel do fáze tvorby imunitní odpovědi na tento patogen. Takové stopy, tedy protilátky, zůstávají v mnoha případech po celý život kolovat v krvi, a tím člověka chrání před opětovnou infekcí.

Co je podstatou ELISA?

Metoda enzymové imunoanalýzy umožňuje stanovit nejen přítomnost samotného patogenu (kvalitativní analýza), ale také jeho kvantitativní obsah v krevním séru pacienta.

Virová nebo bakteriální dávka významně ovlivňuje průběh infekčního procesu a jeho výsledek, proto kvantitativní analýza hraje důležitou roli v diagnostice a léčbě onemocnění v různých formách a stádiích.

Když však známe enzymové imunotesty jako metodu ELISA, ani nás nenapadne, jak dokáže pokrýt tak širokou škálu mikroorganismů obývajících naši planetu, z nichž mnohé přímo ohrožují zdraví a životy lidí a zvířat. Faktem ale je, že ELISA má mnoho možností (nesoutěžních i konkurenčních – přímých i nepřímých), z nichž každá řeší svůj vlastní problém a umožňuje tak cílené vyhledávání.

K identifikaci imunoglobulinů té či oné třídy se používá tradiční 96jamkový polystyrenový panel (deska), v jehož jamkách jsou koncentrovány sorbované rekombinantní proteiny v pevné fázi. Protilátky nebo antigeny, které se dostanou do jamky s krevním sérem, najdou „známý“ předmět a vytvoří s ním komplex (AG - AT), který se fixovaný enzymovým konjugátem projeví změnou barvy jamky při čtení výsledků.

Enzymová imunoanalýza se provádí pomocí testovacích systémů určité specifičnosti, vyrobených ve speciálních laboratořích a vybavených všemi potřebnými reagujícími složkami. Výzkum lze provádět pomocí praček („praček“) a čtecích spektrofotometrů, které většinou zahrnují ruční práci. Na plně automatických strojích, které zbavují laboranta monotónního kapání, mytí a dalších rutinních úkonů, je samozřejmě práce rychlejší a pohodlnější, ale ne všechny laboratoře si mohou dovolit takový luxus a nadále pracovat postaru - na poloautomatické stroje.

Interpretace výsledků ELISA je v kompetenci lékaře laboratorní diagnostiky a je třeba vzít v úvahu i vlastní vlastnost téměř všech imunochemických reakcí dávat falešně pozitivní nebo falešně negativní odpovědi.

Video: moderní enzymatická imunoanalýza

Výsledky ELISA na příkladu syfilis

Enzymová imunoanalýza je vhodná pro detekci všech forem a navíc se používá ve screeningových studiích. K provedení analýzy se používá pacientova žilní krev odebraná nalačno. V práci jsou použity tablety s určitou specificitou (AB třídy A, M, G) nebo celkové protilátky.

Vzhledem k tomu, že protilátky u syfilis jsou produkovány ve specifické sekvenci, může ELISA snadno odpovědět na otázku, kdy k infekci došlo a v jaké fázi je proces, a interpretaci získaných výsledků lze prezentovat v následující podobě:

IgM udává dobu trvání infekčního procesu (může se objevit během exacerbace chronických zánětlivých onemocnění);
IgA uvádí, že k infekci došlo před více než měsícem;
IgG naznačuje, že infekce je v plném proudu nebo že léčba byla nedávno provedena, což lze snadno určit na základě anamnézy.

Při testování na syfilis zůstanou negativní jamky (a negativní kontrola) bezbarvé, zatímco pozitivní jamky (a pozitivní kontrola) budou vykazovat jasně žlutou barvu v důsledku změny barvy chromogenu přidaného během testu. Intenzita barvy se však nemusí vždy shodovat s kontrolou, to znamená, že může být mírně bledší nebo mírně nažloutlá. Jedná se o pochybné výsledky, které zpravidla podléhají opětovnému zkoumání s povinným zohledněním kvantitativních ukazatelů získaných na spektrofotometru, ale obecně je barva přímo úměrná počtu imunitních komplexů (sdružených Ag a AT) .

Nejzajímavější z enzymových imunotestů je HIV ELISA

Analýza na je možná zajímavější než jiné pro široké spektrum populace, protože stále nelze s jistotou říci, že mnoho sociálních problémů zmizelo (prostituce, drogová závislost atd.). HIV bohužel neovlivňuje pouze tyto vrstvy lidské společnosti; můžete se nakazit za různých okolností, které nesouvisejí se sexuální nemorálností nebo užíváním drog. Pokud je ale potřeba provést HIV test, neměli byste se bát, že o vaší návštěvě takové laboratoře budou vědět všichni kolem vás. Nyní jsou lidé infikovaní HIV chráněni zákonem a ti, kdo mají pochybnosti, se mohou obrátit na anonymní úřady, kde mohou problém vyřešit bez obav z publicity a odsouzení.

Enzymová imunoanalytická metoda používaná k diagnostice HIV infekce je jednou z nejdůležitějších standardních studií, která však vyžaduje speciální podmínky, protože téma je velmi delikátní.

Má smysl provádět HIV ELISA po sexuálním kontaktu, krevní transfuzi, jiných lékařských zákrocích, které naznačují infekci, a na konci inkubační doby („séronegativní okno“), ale je třeba mít na paměti, že tato doba je ne konstantní. Může skončit za 14–30 dní, nebo může trvat až šest měsíců, za průměrnou hodnotu se tedy považuje interval od 45 do 90 dnů. Krev se na HIV daruje stejně jako na jiné infekce – ze žíly nalačno. Výsledky budou připraveny v závislosti na akumulaci materiálu v laboratoři a jejím vytížení (od 2 do 10 dnů), i když nejčastěji laboratoře poskytnou odpověď ve stejný nebo následující den.

Co můžete očekávat od svých výsledků HIV?

ELISA pro infekci HIV detekuje protilátky proti dvěma typům viru: HIV-1 (běžnější v Rusku a dalších zemích Evropy a Asie) a HIV-2 (častější v západní Africe).

Úkolem HIV ELISA je vyhledávat protilátky třídy G, které jsou detekovány na všech testovacích systémech, ale v pozdějším období, a protilátky třídy A a M detekované na rekombinantních testovacích soupravách nové generace, které umožňují najít protilátky v nejranějších fázích (inkubační doba – „séronegativní okno“). Od ELISA můžete očekávat následující odpovědi:

Primárně pozitivní výsledek: krev musí být znovu vyšetřena testovacím systémem stejného typu, ale pokud možno jiné série a jinou osobou (laborantem);
Opakované (+) zahrnuje nový odběr krve od pacienta s jejím vyšetřením podobným primární analýze;
Další pozitivní výsledek je předmětem referenční analýzy, která využívá vysoce specifické testovací soupravy (2-3 ks);
Pozitivní výsledek v obou (nebo třech) systémech je odeslán na imunoblotování (stejný test ELISA, ale prováděný individuálně pomocí testovacích souprav s obzvláště vysokou specificitou).

Závěr o infekci HIV se dělá pouze na základě imunoblotu. Rozhovor s infikovanou osobou je veden zcela důvěrně. Prozrazení lékařského tajemství v Rusku, stejně jako v jiných zemích, podléhá trestnímu postihu.

Mimořádnou oblibu si získaly také testy na chlamydie a cytomegalovirus metodou enzymové imunoanalýzy, protože umožňují určit dobu infekce, stadium onemocnění a účinnost léčebných opatření.

Během implementace lze také pozorovat výskyt protilátek různých tříd. v různých fázích patologického stavu způsobeného infekčním agens:

IgM lze detekovat již sedm dní po infekci;
IgA ukazuje, že infekce žije v těle déle než měsíc;
IgG potvrzuje diagnózu chlamydií a pomáhá sledovat léčbu a určovat její účinnost. Je třeba poznamenat, že protilátky třídy G zůstávají a cirkulují v těle bez ohledu na dobu trvání onemocnění, proto pro správnou interpretaci analýzy musíte vzít v úvahu referenční hodnoty (normy), které mimochodem , jsou různé pro každý CDL: s ohledem na značku testovacího systému a specifičnost činidel obsažených v sadě. Normální hodnoty se zadávají do formuláře vedle výsledku ELISA.

Co se týče , tady je to trochu jinak: Protilátky třídy M se objevují asi po měsíci až měsíci a půl, to znamená, že pozitivní výsledek (IgM+) se dostane do fáze primární infekce nebo při reaktivaci latentní infekce a zůstane tak od 4 měsíců do šesti měsíců.

Přítomnost protilátek třídy G je charakteristická pro nástup primární akutní infekce nebo reinfekce. Analýza uvádí, že virus je přítomen, ale neposkytuje informaci o tom, v jaké fázi je infekční proces. Mezitím stanovení normálního titru IgG také způsobuje potíže, protože zcela závisí na imunitním stavu konkrétní osoby, který je však stanoven identifikací imunoglobulinů třídy G vzhledem k tomuto chování protilátek při diagnostice CMV k posouzení schopnosti protilátek třídy G interagovat s CMV, aby je později „neutralizovaly“ (avidita AT). V počáteční fázi onemocnění se IgG velmi špatně váže na virové antigeny (nízká avidita) a teprve poté začíná vykazovat aktivitu, proto lze hovořit o zvýšení avidity protilátek.

O výhodách enzymové imunoanalýzy můžeme mluvit hodně, protože tato metoda dokázala vyřešit mnoho diagnostických problémů pouze s použitím žilní krve. Odpadá dlouhé čekání, starosti a problémy se sběrem materiálu pro výzkum. Kromě toho se testovací systémy pro ELISA stále zdokonalují a není daleko den, kdy test poskytne 100% spolehlivý výsledek.