Laboratorní metody pro studium infekce HIV. Metody diagnostiky infekce HIV. Polymerázová reakce je předepsána pacientovi za účelem

V současné době nové diagnostické technologie umožňují identifikovat etiologické a patogenetické příčiny řady onemocnění a radikálně ovlivnit výsledky léčby. Snad nejpůsobivějších výsledků zavádění těchto technologií do klinické praxe bylo dosaženo v oblasti imunologie a diagnostiky infekčních onemocnění.

Testovací systémy založené na enzymatickém imunosorbentu a chemiluminiscenční imunoanalýze dokážou detekovat protilátky různých tříd, což významně zvyšuje informační obsah klinických a analytických metod senzitivity a specificity pro diagnostiku infekčních onemocnění. Je třeba poznamenat, že nejvýznamnější pokroky v diagnostice infekcí jsou spojeny se zavedením metody polymerázové řetězové reakce do laboratorní praxe, která je považována za „zlatý standard“ v diagnostice a hodnocení účinnosti léčby řady infekčních onemocnění. nemocí.

Pro výzkum lze použít různé biologické materiály: sérum, krevní plazmu, seškrab, biopsii, pleurální nebo mozkomíšní mok (CSF). Nejprve jsou metody laboratorní diagnostiky infekcí zaměřeny na identifikaci onemocnění, jako je virová hepatitida B, C, D, cytomegalovirová infekce, sexuálně přenosné infekce (kapavka, chlamydie, mykoplazma, ureaplasma), tuberkulóza, infekce HIV atd.

Infekce HIV je onemocnění způsobené virem lidské imunodeficience (HIV), který dlouhodobě přetrvává v lymfocytech, makrofázích a buňkách nervové tkáně, což má za následek rozvoj pomalu progresivního poškození imunitního a nervového systému těla, projevující se sekundárními infekcemi, nádory, subakutní encefalitidou a dalšími patologickými změnami.

Původci infekce - viry lidské imunodeficience typu 1 a 2 (HIV-1, HIV-2) - patří do rodiny retrovirů, podrodiny pomalých virů. Viriony jsou kulovité částice o průměru 100-140 nm. Virová částice má vnější fosfolipidový obal, který zahrnuje glykoproteiny (strukturální proteiny) s určitou molekulovou hmotností, měřenou v kilodaltonech. U HIV-1 jsou to gpl60, gpl20, gp41. Vnitřní obal viru, pokrývající jádro, představují také proteiny o známé molekulové hmotnosti - p17, p24, p55 (HIV-2 obsahuje gpl40, gpl05, gp36, p16, p25, p55).

Genom HIV obsahuje RNA a enzym reverzní transkriptázu (revertázu). Aby se genom retroviru spojil s genomem hostitelské buňky, je DNA nejprve syntetizována na virovém RNA templátu pomocí reverzní fáze. Provirová DNA je pak integrována do genomu hostitelské buňky. HIV má výraznou antigenní variabilitu, která výrazně převyšuje variabilitu viru chřipky.

V lidském těle jsou hlavním cílem HIV T-lymfocyty, které na svém povrchu nesou největší počet CD4 receptorů. Poté, co HIV vstoupí do buňky pomocí reverzní fáze, virus syntetizuje DNA na základě svého vzorku RNA, která je integrována do genetického aparátu hostitelské buňky (CD4 lymfocyty) a zůstává zde po celý život ve stavu proviru. Kromě pomocníků T-lymfocytů jsou postiženy makrofágy, B-lymfocyty, neurogliové buňky, střevní sliznice a některé další buňky. Důvodem poklesu počtu T-lymfocytů (CD4 buněk) je nejen přímý cytopatický účinek viru, ale také jejich fúze s neinfikovanými buňkami. Spolu s poškozením T-lymfocytů dochází u pacientů s HIV infekcí k polyklonální aktivaci B-lymfocytů se zvýšením syntézy imunoglobulinů všech tříd, zejména IgG a IgA, a následnému vyčerpání této části imunitního systému. Dysregulace imunitních procesů se projevuje i zvýšením hladiny α-interferonu, β2-mikroglobulinu a snížením hladiny IL-2. V důsledku dysfunkce imunitního systému, zejména při poklesu počtu T lymfocytů (CD4) na 400 buněk v 1 μl krve nebo méně, vznikají podmínky pro nekontrolovanou replikaci HIV s výrazným zvýšením počtu virionů v různých prostředí těla. V důsledku poškození mnoha částí imunitního systému se člověk infikovaný HIV stává bezbranným vůči patogenům různých infekcí.

Na pozadí zvyšující se imunosuprese se rozvíjejí těžká progresivní onemocnění, která se u člověka s normálně fungujícím imunitním systémem nevyskytují. Jde o nemoci, které Světová zdravotnická organizace (WHO) definovala jako nemoci označující AIDS nebo nemoci definující AIDS.

Nemoci definující AIDS

První skupina - onemocnění spojená pouze s těžkou imunodeficiencí (úroveň CD4<200). Клинический диагноз ставится при отсутствии анти-ВИЧ-антител или ВИЧ-антигенов.

Druhou skupinou jsou onemocnění, která se mohou vyvinout jak na pozadí těžké imunodeficience, tak v některých případech i bez ní.

Proto je v těchto případech nutné laboratorní potvrzení diagnózy.

První skupina:

• kandidóza jícnu, průdušnice, průdušek;
• mimoplicní kryptokokóza;
• kryptosporidióza s průjmem delším než 1 měsíc;
• cytomegalovirové léze různých orgánů jiných než játra, slezina nebo lymfatické uzliny u pacienta staršího 1 měsíce;
• infekce způsobená virem herpes simplex, projevující se vředy na kůži a sliznici, které přetrvávají déle než 1 měsíc, dále bronchitida, pneumonie nebo ezofagitida jakéhokoli trvání, postihující pacienta staršího 1 měsíce;
• generalizovaný Kaposiho sarkom u pacientů mladších 60 let;
• mozkový lymfom (primární) u pacientů mladších 60 let;
• lymfocytární intersticiální pneumonie a/nebo plicní lymfoidní dysplazie u dětí mladších 12 let;
• diseminovaná infekce způsobená atypickými mykobakteriemi (mykobakteriemi komplexu M. aviumintracellulare) s mimoplicní lokalizací nebo lokalizací (kromě plic) v kůži, krčních lymfatických uzlinách, lymfatických uzlinách kořenů plic;
• Pneumocystis pneumonie;
• progresivní multifokální leukoencefalopatie;
• cerebrální toxoplazmóza u pacientů starších 1 měsíce.

Druhá skupina:

• bakteriální infekce, kombinované nebo recidivující, u dětí do 13 let (více než dva případy během 2 let sledování): sepse, zápal plic, meningitida, poškození kostí nebo kloubů, abscesy způsobené Haemophilus influenzae, streptokoky;
• diseminovaná kokcidioidomykóza (mimopulmonální lokalizace);
• HIV encefalopatie (HIV demence, AIDS demence);
• histoplazmóza s průjmem trvajícím déle než 1 měsíc;
• izosporóza s průjmem přetrvávajícím déle než 1 měsíc;
• Kaposiho sarkom v jakémkoli věku;
• mozkový lymfom (primární) u lidí jakéhokoli věku;
• jiné B-buněčné lymfomy (kromě Hodgkinovy ​​choroby) nebo lymfomy neznámého imunofenotypu: malobuněčné lymfomy (jako je Burkittův lymfom atd.); imunoblastické sarkomy (imunoblastické, velkobuněčné, difuzní histiocytární, difuzní nediferencované lymfomy);
• diseminovaná mykobakterióza (nikoli tuberkulóza) s poškozením kůže, krčních nebo hilových lymfatických uzlin kromě plic;
• mimoplicní tuberkulóza (postihující vnitřní orgány jiné než plíce);
• Salmonella septikémie, opakující se;
• HIV dystrofie (vyhublost, náhlá ztráta hmotnosti).

Tabulka 1 (viz zdrojový odkaz výše) uvádí nemoci definující AIDS a jejich etiologické agens.

Existuje mnoho klasifikací AIDS.

Podle nové klasifikace navržené Centrem pro kontrolu nemocí v USA (tabulka 2 - viz odkaz na zdroj výše) je diagnóza AIDS stanovena u osob s počtem CD4 lymfocytů nižším než 200/μl, a to i v r. nepřítomnost nemocí definujících AIDS.

Kategorie B zahrnuje různé syndromy, z nichž nejvýznamnější jsou bacilární angiomatóza, orofaryngeální kandidóza, recidivující vulvovaginální kandidóza, obtížně léčitelná, cervikální dysplazie, cervikální karcinom, idiopatická trombocytopenická purpura, listerióza, periferní neuropatie.

Protilátky proti HIV-1 a HIV-2 v krvi

Protilátky proti HIV-1 a HIV-2 normálně v krevním séru chybí.

Stanovení protilátek proti HIV je hlavní metodou laboratorní diagnostiky infekce HIV. Metoda je založena na enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA) - senzitivita je více než 99,5 %, specificita je více než 99,8 %. Protilátky proti HIV se objeví u 90-95% infikovaných lidí do 1 měsíce po infekci, u 5-9% - po 6 měsících, u 0,5-1% - později. Během stadia AIDS se může počet protilátek snižovat, až úplně vymizí.

Výsledek studie je vyjádřen kvalitativně: pozitivní nebo negativní.

Negativní výsledek testu indikuje nepřítomnost protilátek proti HIV-1 a HIV-2 v krevním séru. Laboratoř vydá negativní výsledek okamžitě, když je připravena. V případě pozitivního výsledku – průkaz protilátek proti HIV – aby se předešlo falešně pozitivním výsledkům v laboratoři, se rozbor ještě 2x opakuje.

Imunoblotting na protilátky proti virovým proteinům HIV v krevním séru

Protilátky proti virovým proteinům HIV v krevním séru normálně chybí.

Metoda ELISA pro stanovení protilátek proti HIV je screeningová metoda. Při pozitivním výsledku se k potvrzení jeho specifičnosti používá metoda imunoblotování - Western-blot - protisrážení v gelu protilátek v krevním séru pacienta s různými virovými proteiny, podrobeno separaci podle molekulové hmotnosti pomocí elektroforézy a aplikováno na nitrocelulózu. Stanoví se protilátky proti virovým proteinům gp41, gpl20, gpl60, p24, pi8, p17 atd.

Dle doporučení Ruského centra pro prevenci a kontrolu AIDS je třeba za pozitivní výsledek považovat průkaz protilátek proti některému z glykoproteinů gp41, gpl20, gpl60. Pokud jsou detekovány protilátky proti jiným virovým proteinům, výsledek je považován za pochybný, takový pacient by měl být vyšetřen dvakrát - po 3 a 6 měsících.

Absence protilátek proti specifickým HIV proteinům znamená, že metoda enzymové imunoanalýzy poskytla falešně pozitivní výsledek. Zároveň je při praktické práci při posuzování výsledků metody imunoblotování nutné postupovat podle návodu dodávaného firmou k použitému „Immunoblotting Kitu“.

Pro laboratorní diagnostiku infekce HIV se používá metoda imunoblotování.

Antigen p24 v krevním séru

Antigen p24 normálně v krevním séru chybí.

Antigen p24 je stěnový protein nukleotidu HIV. Stádium primárních projevů po infekci HIV je důsledkem nástupu replikačního procesu. Antigen p24 se objevuje v krvi 2 týdny po infekci a může být detekován metodou ELISA v období 2 až 8 týdnů. Po 2 měsících od okamžiku infekce antigen p24 z krve zmizí. Následně je v klinickém průběhu HIV infekce pozorováno druhé zvýšení hladiny proteinu p24 v krvi. Klesá při vzniku AIDS. Pro včasnou detekci HIV u dárců krve a dětí, stanovení prognózy průběhu AIDS a sledování terapie u pacientů s AIDS se využívají stávající testovací systémy ELISA pro detekci antigenu p24. ELISA má vysokou analytickou citlivost, která umožňuje detekovat antigen HIV-1 p24 v krevním séru v koncentraci 5-10 pkg/ml a HIV-2 - méně než 0,5 ng/ml a specificitu. Je však třeba poznamenat, že hladina antigenu p24 v krvi podléhá individuálním odchylkám, což znamená, že pouze 20–30 % pacientů lze tímto testem detekovat v časném období po infekci (Rose N.R. et al., 1997).

Protilátky proti antigenu p24 třídy IgM a IgG se objevují v krvi od 2. týdne, dosáhnou vrcholu během 2-4 týdnů a zůstávají na této úrovni různě dlouho: Protilátky třídy IgM - několik měsíců, vymizí do jednoho roku po infekce a IgG protilátky mohou přetrvávat roky.

Algoritmus diagnostiky HIV infekce závisí na fázi onemocnění a je charakterizován změnami v dynamice detekce protilátek různých tříd (obr. 1, 2 - viz odkaz na zdroj výše).

Výsledek studie je vyjádřen kvalitativně - pozitivní nebo negativní. Negativní výsledek testu indikuje nepřítomnost protilátek proti HIV-1 a HIV-2 a antigenu p24 v krevním séru.

Laboratoř vydá negativní výsledek okamžitě, když je připravena. V případě pozitivního výsledku – průkaz protilátek proti HIV-1 a HIV-2 a/nebo antigenu p24 – aby se předešlo falešně pozitivním výsledkům v laboratoři, se analýza ještě 2x opakuje.

Bez ohledu na výsledky studie odešle laboratoř vzorek krve pacienta a výsledky 3 studií do regionálního AIDS centra k potvrzení pozitivního výsledku nebo ověření neurčitého výsledku. V takových případech konečnou odpověď na tuto studii vydává regionální AIDS centrum.

Detekce HIV pomocí polymerázové řetězové reakce (kvalitativní)

Detekce HIV pomocí polymerázové řetězové reakce - PCR (kvalitativní) se provádí za účelem:

• rozlišení sporných výsledků imunoblotování;
• pro včasnou diagnostiku infekce HIV;
• sledování účinnosti antivirové léčby;
• stanovení stadia AIDS (přechod infekce v nemoc).

Během primární infekce HIV může metoda PCR detekovat HIV RNA v krvi 10-14 dní po infekci.

Výsledek studie je vyjádřen kvalitativně: pozitivní nebo negativní. Negativní výsledek testu indikuje nepřítomnost HIV RNA v krvi.

Pozitivní výsledek - detekce HIV RNA - naznačuje, že pacient je infikován.

Detekce HIV pomocí polymerázové řetězové reakce (kvantitativní)

Normálně v krvi není žádný HIV.

Přímá kvantifikace HIV RNA pomocí PCR umožňuje přesněji předpovídat rychlost rozvoje AIDS u lidí infikovaných HIV než stanovení počtu buněk CD4, a tedy přesněji posoudit jejich přežití. Vysoké hladiny virových částic obvykle korelují se závažným poškozením imunity a nízkým počtem buněk CD4. Nízké hladiny virových částic obecně korelují s lepším imunitním stavem a vyšším počtem buněk CD4. Obsah virové RNA v krvi nám umožňuje předpovědět přechod onemocnění do klinického stadia. Když je obsah HIV RNA-1 >74 100 kopií/ml, téměř u všech pacientů se rozvine klinický obraz AIDS (Senior D., Holden E., 1996).

Pravděpodobnost rozvoje AIDS je 10,8krát vyšší u jedinců s krevními hladinami HIV-1 > 10 000 kopií/ml než u jedinců s krevními hladinami HIV-1<10 000 копий/мл. При ВИЧ-инфекции прогноз непосредственно определяется уровнем виремии. Снижение уровня виремии при лечении улучшает прогноз заболевания.

Skupina amerických expertů vyvinula indikace pro léčbu pacientů s HIV. Léčba je indikována u pacientů s nízkým počtem CD4 buněk v krvi<300/мкл или уровнем РНК ВИЧ в сыворотке >20 000 kopií/ml (PCR). Výsledky antiretrovirové terapie u lidí infikovaných HIV jsou hodnoceny snížením hladiny sérové ​​HIV RNA.

Při účinné léčbě by se hladina virémie měla během prvních 8 týdnů snížit 10krát a měla by být pod limitem citlivosti metody (PCR) (<500 копий/мл) через 4-6 месяцев после начала терапии.

Dnes je tedy k diagnostice infekce HIV zavedeno mnoho výzkumných metod, které se používají v klinické praxi, stejně jako u všech ostatních virových infekcí. Mezi nimi hrají hlavní roli sérologické studie. Hlavní metody diagnostiky infekcí HIV jsou uvedeny v tabulce 3 (viz zdrojový odkaz výše), kde jsou rozděleny do čtyř úrovní v závislosti na důležitosti každé metody pro detekci virů:

• A - test se obvykle používá k potvrzení diagnózy;
• B test je za určitých okolností užitečný pro diagnostiku určitých forem infekce;
• C - test se pro diagnostické účely používá zřídka, ale má velký význam pro epidemiologické průzkumy;
• D test není obecně používán laboratořemi pro diagnostické účely.

Protože pro diagnostiku virových infekcí je kromě výběru optimální analytické metody stejně důležitá i správná identifikace a sběr biomateriálu pro výzkum, tabulka 4 (viz odkaz na zdroj výše) poskytuje doporučení pro výběr optimálního biomateriálu pro studium HIV infekce.

Pro sledování HIV infikovaných osob je třeba využít možností komplexního studia imunitního stavu - kvantitativního a funkčního stanovení všech jeho vazeb: humorální, buněčné imunity a nespecifické rezistence obecně.

V moderních laboratorních podmínkách vícestupňový princip hodnocení imunologického stavu zahrnuje stanovení subpopulace lymfocytů a krevních imunoglobulinů. Při hodnocení indikátorů je třeba vzít v úvahu, že HIV infekce je charakterizována poklesem poměru T-buněk CD4/CD8 na méně než 1. Index CD4/CD8 1,5-2,5 ukazuje na normergní stav, více než 2,5 znamená hyperaktivita, méně 1,0 – svědčí o imunodeficienci. Také poměr CD4/CD8 může být menší než 1 v závažných případech zánětlivého procesu.

Tento poměr má zásadní význam při hodnocení imunitního systému u pacientů s AIDS, protože HIV selektivně infikuje a ničí CD4 lymfocyty, v důsledku čehož poměr CD4/CD8 klesá na hodnoty výrazně nižší než 1.

Hodnocení imunologického stavu je také založeno na identifikaci obecných nebo „hrubých“ defektů v buněčném a humorálním imunitním systému: hypergamaglobulinémie (zvýšené koncentrace IgA, IgM, IgG) nebo hypogamaglobulinémie v terminálním stadiu; zvýšená koncentrace cirkulujících imunitních komplexů; snížená produkce cytokinů; oslabení odpovědi lymfocytů na antigeny a mitogeny.

Porušení poměru populací v obecném fondu B-lymfocytů je charakteristické pro insuficienci humorální imunity. Tyto změny však nejsou specifické pro infekci HIV a mohou se objevit i u jiných onemocnění. Při komplexním hodnocení řady dalších laboratorních parametrů je třeba vzít v úvahu, že HIV infekce je také charakterizována: anémií, lymfo- a leukopenií, trombocytopenií, zvýšenými hladinami β2-mikroglobulinu a C-reaktivního proteinu a zvýšenou hladinou transamináz. aktivita v krevním séru.

Prevence infekce HIV

Hygienická a epidemiologická pravidla

SP 3.1.5. 2826-10

I. Rozsah použití

1.1. Tento hygienický a epidemiologický řád (dále jen sanitární řád) stanoví základní požadavky na soubor organizačních, léčebných a preventivních, hygienických a protiepidemických opatření, jejichž prováděním je zajištěna prevence vzniku a šíření infekce HIV.

1.2. Dodržování hygienických předpisů je povinné pro občany, fyzické osoby podnikatele a právnické osoby.

1.3. Kontrolu plnění těchto hygienických a epidemiologických pravidel provádějí orgány vykonávající státní hygienický a epidemiologický dozor.

II. Použité zkratky

ARV léky	antiretrovirové léky
UMĚNÍ	antiretrovirová terapie
AG	antigeny
NA	protilátky
HAART	vysoce aktivní antiretrovirová terapie
nosokomiální infekce	nosokomiální infekce
VG	virová hepatitida
HIV	AIDS virus
SZO	Světová zdravotnická organizace
DI	interval spolehlivosti
JE	imunoblotování
IP	inhibitory HIV proteázy
STI	pohlavně přenosné infekce
ELISA	spojený imunosorbentní test
KSR	komerční sexuální pracovnice
LIA	line blotting
LPO	organizace léčby a prevence
MSM	muži, kteří mají sex s muži
NRTI	HIV nukleosidové inhibitory reverzní transkriptázy
NNRTI	nenukleosidové inhibitory reverzní transkriptázy HIV
NAT	amplifikace nukleové kyseliny
OI	oportunní infekce
PCR	polymerázová řetězová reakce
KOLÍK	injekční uživatelé drog
RNA	ribonukleová kyselina
AIDS	syndrom získané immunití nedostatečnisti
CD4	buňky nesoucí na svém povrchu buněčný receptor CD4

III. Obecná ustanovení

3.1. HIV infekce– onemocnění způsobené virem lidské imunodeficience je antroponotické infekční chronické onemocnění charakterizované specifickou lézí imunitního systému, vedoucí k jeho pomalé destrukci až do vzniku syndromu získané imunodeficience (AIDS), doprovázeného rozvojem oportunních infekcí a sekundárních maligních onemocnění novotvary.

3.2. Diagnóza infekce HIV je stanovena na základě epidemiologických, klinických a laboratorních údajů.

3.3. AIDS je stav, který se vyvíjí na pozadí infekce HIV a je charakterizován výskytem jedné nebo více nemocí klasifikovaných jako indikativní pro AIDS. AIDS je epidemiologický pojem a používá se pro účely epidemiologického dozoru nad infekcí HIV.

3.4. Původce infekce HIV, virus lidské imunodeficience, patří do podrodiny lentivirů z rodiny retrovirů. Existují dva typy viru: HIV-1 a HIV-2.

3.5 Zdrojem infekce HIV jsou lidé infikovaní HIV v jakékoli fázi onemocnění, včetně inkubační doby.

3.6. Mechanismus a faktory přenosu.

3.6.1. Infekce HIV se může přenášet jak přirozeným, tak umělým přenosovým mechanismem.

3.6.2. Přirozený mechanismus přenosu HIV zahrnuje:

3.6.2.1. Kontakt, ke kterému dochází především při pohlavním styku (homo- i heterosexuálním) a při kontaktu povrchu sliznice nebo rány s krví.

3.6.2.2. Vertikální (infekce dítěte od matky infikované HIV: během těhotenství, porodu a kojení.)

3.7.3. Mezi mechanismy umělého přenosu patří:

3.7.3.1. Umělé prostředky pro nelékařské invazivní postupy, včetně nitrožilního podávání léků (použití injekčních stříkaček, jehel, jiného injekčního vybavení a materiálů), tetování , při provádění kosmetických, manikúrních a pedikérských procedur pomocí nesterilních nástrojů .

3.7.3.2. Umělé pro invazivní intervence ve zdravotnických zařízeních. K infekci HIV může dojít transfuzí krve, jejích složek, transplantací orgánů a tkání, použitím spermatu dárce, mateřského mléka od dárce infikovaného HIV, stejně jako prostřednictvím lékařských nástrojů pro parenterální intervence, léčivých přípravků kontaminovaných HIV a nejsou zpracovány v souladu s požadavky regulačních dokumentů.

3.8. Hlavními faktory přenosu patogenu jsou lidské biologické tekutiny (krev, krevní složky, sperma, poševní výtok, mateřské mléko).

3.9. Hlavní skupiny populace ohrožené infekcí HIV jsou: injekční uživatelé drog (IDU), komerční sexuální pracovníci (CSW), muži, kteří mají sex s muži (MSM). Skupinu se zvýšeným rizikem nákazy HIV tvoří klienti prostitutek, sexuální partneři injekčních uživatelů drog, vězni, děti ulice, lidé s velkým počtem sexuálních partnerů, migrující segmenty populace (řidiči nákladních vozidel, sezónní pracovníci, včetně cizích občanů pracujících na na rotační bázi a další), lidé zneužívající alkohol a neinjekční drogy, protože pod vlivem psychoaktivních látek se častěji dopouštějí nebezpečnějšího sexuálního chování.

3.10. Klinický průběh infekce HIV bez použití antiretrovirové terapie.

3.10.1. Inkubační doba

Inkubační doba infekce HIV je doba od okamžiku infekce do reakce organismu na zavlečení viru (objevení se klinických příznaků nebo tvorba protilátek) obvykle 2–3 týdny, ale může trvat až 3– 8 měsíců, někdy až 12 měsíců. Během tohoto období nejsou u infikované osoby detekovány protilátky proti HIV, což zvyšuje riziko přenosu infekce od ní v nozokomiálních ohniscích, včetně transfuze krve a jejích složek.

3.10.2. Akutní infekce HIV.

U 30–50 % infikovaných se objevují příznaky akutní HIV infekce, která je doprovázena různými projevy: horečka, lymfadenopatie, erytematózně-makulopapulózní vyrážka na obličeji, trupu, někdy i na končetinách, myalgie nebo artralgie, průjem, bolest hlavy, nevolnost a zvracení, zvětšení jater a sleziny, neurologické příznaky. Tyto příznaky se objevují na pozadí vysoké virové zátěže v různých kombinacích a mají různý stupeň závažnosti. Ve vzácných případech se již v této fázi mohou rozvinout závažná sekundární onemocnění, která vedou ke smrti pacientů. V tomto období se zvyšuje frekvence odesílání nakažených do zdravotnických zařízení; riziko přenosu infekce je vysoké kvůli velkému množství viru v krvi.

3.10.3. Subklinické stadium.

Délka subklinického stadia je v průměru 5–7 let (od 1 do 8 let, někdy i více), kromě lymfadenopatie se nevyskytují žádné klinické projevy. V této fázi, při absenci projevů, zůstává infikovaná osoba po dlouhou dobu zdrojem infekce. Během subklinického období se HIV dále množí a počet CD4 lymfocytů v krvi klesá.

3.10.4. Stádium sekundárních onemocnění.

Na pozadí rostoucí imunodeficience se objevují sekundární onemocnění (infekční a onkologická). Nemoci s infekcemi virové, bakteriální, plísňové povahy probíhají zpočátku vcelku příznivě a jsou zastaveny běžnými terapeutickými prostředky. Zpočátku se jedná převážně o léze kůže a sliznic, poté orgánové a generalizované léze, vedoucí až ke smrti pacienta.

3.11. Antiretrovirová terapie (ART) je etiotropní léčba infekce HIV. V současné fázi ART zcela neodstraní HIV z těla pacienta, ale zastaví množení viru, což vede k obnovení imunity, prevenci rozvoje nebo regrese sekundárních onemocnění, zachování nebo obnovení schopnost pacienta pracovat a prevence jeho smrti. Preventivním opatřením, které snižuje riziko pacienta jako zdroje infekce, je také účinná antiretrovirová terapie.

IV. Laboratorní diagnostika infekce HIV

4.1. Laboratorní diagnostika HIV infekce je založena na průkazu protilátek proti HIV a virových antigenů a ve zvláštních případech také na průkazu HIV provirové DNA a HIV virové RNA (u dětí v prvním roce života).

4.2. Laboratorní testy pro diagnostiku infekce HIV se provádějí v institucích státního, obecního nebo soukromého systému zdravotní péče na základě hygienicko-epidemiologické zprávy a licence poskytované způsobem stanoveným právními předpisy Ruské federace.

4.3. Standardní metodou laboratorní diagnostiky HIV infekce je stanovení protilátek/antigenů proti HIV pomocí ELISA. Potvrzující testy (imunitní, line blot) se používají k potvrzení výsledků týkajících se HIV.

4.4. Diagnostický algoritmus pro testování přítomnosti protilátek proti HIV:

4.4.1. V první fázi (screeningová laboratoř).

Pokud je v testu ELISA získán pozitivní výsledek, analýza se provádí postupně ještě 2krát (se stejným sérem a ve stejném testovacím systému je druhé sérum požadováno pouze v případě, že není možné odeslat první sérum k dalšímu výzkumu) . Pokud jsou získány dva pozitivní výsledky ze tří testů ELISA, je sérum považováno za primárně pozitivní a je odesláno do referenční laboratoře (HIV diagnostická laboratoř Centra pro prevenci a kontrolu AIDS) k dalšímu výzkumu.

4.4.2. Ve druhém stupni (referenční laboratoř).

Původně pozitivní sérum je znovu testováno metodou ELISA ve druhém testovacím systému od jiného výrobce, který se od prvního liší složením antigenů, protilátek nebo formátem testu zvoleným pro potvrzení. V případě negativního výsledku je sérum znovu testováno ve třetím testovacím systému od jiného výrobce, který se od prvního a druhého liší složením antigenů, protilátek nebo formátem testu. Pokud je získán negativní výsledek (ve druhém a třetím testovacím systému), je vydán závěr o nepřítomnosti protilátek proti HIV. Pokud je získán pozitivní výsledek (ve druhém a/nebo třetím testovacím systému), musí být sérum vyšetřeno imunním nebo lineárním blotem. Výsledky získané v konfirmačním testu jsou interpretovány jako pozitivní, neurčité nebo negativní.

4.4.2.1. Aby byla zajištěna kontrola a evidence výzkumu, měla by být referenční diagnostika prováděna ve stejném subjektu Ruské federace, kde bylo screeningové vyšetření provedeno v laboratoři pověřeného specializovaného zdravotnického zařízení, které provádí organizační a metodické práce na provádění diagnostická, terapeutická, preventivní a protiepidemická opatření pro infekci HIV a související onemocnění.

Referenční diagnostiku lze provádět také ve Spolkovém státním ústavu, na jehož základě fungují spolková a okresní centra prevence a kontroly AIDS, a v Republikánské nemocnici pro klinické infekční choroby spolkového státu (St. Petersburg).

4.4.3. Za pozitivní se považují testy, které obsahují protilátky proti 2 ze 3 glykoproteinů HIV (env, gag, pol).

4.4.4. Za negativní (negativní) jsou považována séra, ve kterých nejsou detekovány žádné protilátky proti žádnému z HIV antigenů (proteinů) nebo dochází k slabé reakci s proteinem p 18.

4.4.5. Séra, která obsahují protilátky proti jednomu HIV glykoproteinu a/nebo jakýmkoli HIV proteinům, jsou považována za neurčená (pochybná). Pokud je získán neurčitý výsledek s proteinovým profilem zahrnujícím jádrové proteiny (gag) p 25, provede se test k diagnostice HIV-2.

4.4.6. Pokud je při imunním nebo lineárním blotu získán negativní a sporný výsledek, doporučuje se vyšetřit sérum v testovacím systému pro stanovení antigenu p24 nebo HIV DNA/RNA. Pokud byl detekován antigen p24 nebo HIV DNA/RNA, provede se opětovné vyšetření pomocí imunitního nebo line blotu 2, 4, 6 týdnů po obdržení prvního neurčitého výsledku.

4.4.7. Pokud je získán neurčitý výsledek, provádějí se opakované testy na protilátky proti HIV pomocí imunitního nebo lineárního blotu po 2 týdnech, 3 a 6 měsících. Pokud jsou získány negativní výsledky ELISA, pak není nutný další výzkum. Pokud jsou po 6 měsících od prvního vyšetření opět získány neurčité výsledky a pacient nemá rizikové faktory infekce a klinické příznaky infekce HIV, je výsledek považován za falešně pozitivní. (Pokud existují epidemiologické a klinické indikace, sérologické studie se provádějí opakovaně podle předpisu ošetřujícího lékaře nebo epidemiologa).

4.5. K diagnostice infekce HIV u dětí do 18 měsíců narozených matkám infikovaným HIV se vzhledem k přítomnosti mateřských protilátek používají jiné přístupy.

4.5.1. K diagnostice infekce HIV u dětí do 12 měsíců narozených matkám infikovaným HIV se používají metody zaměřené na identifikaci genetického materiálu HIV (DNA nebo RNA). Získání pozitivních výsledků testů na HIV DNA nebo HIV RNA ve dvou samostatných krevních vzorcích od dítěte staršího jednoho měsíce je laboratorním potvrzením diagnózy HIV infekce. Obdržení dvou negativních výsledků testů na HIV DNA nebo HIV RNA ve věku 1–2 měsíců a 4–6 měsíců (při absenci kojení) znamená, že dítě má infekci HIV, ale dítě je vyřazeno z dispenzární evidence z důvodu intranatální a perinatální kontakt v důsledku infekce HIV může nastat po dosažení věku 1 roku.

4.5.2. Vyřazení z dispenzární registrace pro infekci HIV ve věku 18 měsíců se provádí za současné přítomnosti:

– dva nebo více negativních výsledků testování na protilátky proti HIV pomocí ELISA;

– nepřítomnost výrazné hypogamaglobulinémie v době krevních testů na protilátky proti HIV;

– nepřítomnost klinických projevů infekce HIV;

4.5.3. Diagnostika HIV infekce u dětí narozených HIV-infikovaným matkám a dovršení věku 18 měsíců se provádí stejně jako u dospělých.

4.6. Laboratorní diagnostiku infekce HIV lze provádět pouze pomocí certifikovaných standardizovaných diagnostických testovacích systémů (souprav) schválených pro použití na území Ruské federace v souladu se stanoveným postupem.

K provedení vstupní kontroly kvality testovacích systémů používaných k identifikaci osob infikovaných virem lidské imunodeficience se používají standardní panely séra (průmyslové standardní vzorky) schválené k použití předepsaným způsobem.

4.7. V dokumentu vydaném laboratoří na základě výsledků studie je uveden název testovacího systému, datum jeho expirace, série, výsledek ELISA (pozitivní, negativní), výsledek imunoblotu, lineární blot (seznam identifikovaných proteinů a závěr: pozitivní, negativní, neurčitý). Pro důvěrný výzkum musí dokument obsahovat údaje z pasu: celé jméno, celé datum narození, adresa bydliště, kontingenční kód. Při anonymním zkoumání je dokument označen speciálně stanoveným kódem.

4.7.1. Pokud je v konfirmačním testu (imunitní, lineární blot) získán sporný výsledek, je vydán závěr o nejistém výsledku studie a doporučuje se opakovat vyšetření pacienta do stanovení stavu (po 3., 6. 12 měsíců).

4.8. Jednoduché/rychlé testy na HIV specifické protilátky jsou testy, které lze provést bez speciálního vybavení za méně než 60 minut . Jako testovací materiál lze použít krev, sérum, krevní plazmu a sliny (seškrab ze sliznice dásně). ).

4.8.1. Oblasti použití pro jednoduché/rychlé testy:

• transplantologie – před odběrem dárcovského materiálu;
• dar – vyšetření krve, v případě naléhavé transfuze krevních produktů a absence dárcovské krve testované na HIV protilátky;
• vertikální prevence – testování těhotných žen s neznámým HIV statusem v prenatálním období (k předepsání lékové prevence infekce HIV během porodu);
• Postexpoziční profylaxe HIV – testování na HIV v případě nouze;

4.8.2. Každý test na HIV pomocí jednoduchých/rychlých testů musí být doprovázen povinným paralelním studiem stejného podílu krve klasickými metodami ELISA a IB.

4.9. Není dovoleno vydávat závěr o přítomnosti či nepřítomnosti infekce HIV pouze na základě výsledků jednoduchého/rychlého testu. Výsledky jednoduchých/rychlých testů slouží pouze pro včasné rozhodování v nouzových situacích.

Ve vysoce specializované laboratoři se provádí:

A) stanovení protilátek, antigenů a imunitních komplexů cirkulujících v krvi; kultivace viru, identifikace jeho genomového materiálu a enzymů;

B) posouzení funkcí buněčné části imunitního systému. Hlavní roli mají sérologické diagnostické metody zaměřené na stanovení protilátek, ale i antigenů patogenů v krvi a dalších biologických tekutinách těla.

Testování protilátek proti HIV se provádí:

A) bezpečnost krevních transfuzí a transplantací;

B) dohled, testování za účelem sledování prevalence infekce HIV a studium dynamiky její prevalence v určité populaci;

C) diagnostika infekce HIV, tj. dobrovolné testování krevního séra prakticky zdravých lidí nebo pacientů s různými klinickými příznaky a symptomy podobnými infekci HIV nebo AIDS.

Systém laboratorní diagnostiky HIV infekce je postaven na třístupňovém principu. První fází je screening, určený k provedení primárních krevních testů na přítomnost protilátek proti proteinům HIV. Druhý stupeň je referenční - umožňuje pomocí speciálních metodických technik objasnit (potvrdit) primární pozitivní výsledek získaný ve fázi screeningu. Třetí etapou je etapa expertní, určená ke konečnému ověření přítomnosti a specificity markerů HIV infekce identifikovaných v předchozích fázích laboratorní diagnostiky. Potřeba několika stupňů laboratorní diagnostiky je způsobena především ekonomickými úvahami.

V praxi se používá několik testů, které umožňují identifikovat osoby infikované HIV s dostatečnou mírou spolehlivosti:

ELISA test (enzyme-linked immunosorbent assay) pro detekci první úrovně se vyznačuje vysokou senzitivitou, i když menší specificitou než následující;

Imunitní blot (Western-blot), velmi specifický a nejpoužívanější test k rozlišení mezi HIV-1 a HIV-2;

Antigenemia p25 test, účinný v počátečních stádiích infekce;

Polymerázová řetězová reakce (PCR).

V případech hromadného screeningu krevních vzorků se doporučuje testovat směsi sér ze skupiny subjektů sestavené tak, aby výsledné ředění každého vzorku nepřesáhlo 1:100. Pokud je směs sér pozitivní, testuje se každé sérum v pozitivní směsi. Tato metoda nevede ke ztrátě senzitivity v ELISA i imunoblotu, ale snižuje mzdové náklady a náklady na vstupní vyšetření o 60–80 %.

Imunologické metody

1. počet T pomocníků,

2. poměr T4 a T8,

3. stav přecitlivělosti,

4. kompenzační funkce systému T buněk.

Projevuje se hyperprodukcí imunoglobulinů, jsou málo afinitní a tělesný materiál je spotřebováván ještě více.

Nevýhody: objevují se pozdě, některé imunologické ukazatele mohou být přítomny u jiných infekcí.

Klinické metody – m.b. jsou podobné jako u jiných onemocnění, nejtypičtější projevy jsou zaznamenány v pozdějších stadiích, takže klinická diagnostika není příliš účinná

Hlavní metoda – sérologická – se provádí ve 2 fázích:

1 – screeningové vyšetření – odběr celkových protilátek na všechny proteiny imunologického testu. Tato fáze poskytuje 95 % pravdivých výsledků a 5 % falešně pozitivních výsledků.

2 – konfirmační metoda – všechny vzorky se vyšetřují konfirmační metodou. Tato technika umožňuje detekovat protilátky proti virovému proteinu. Pozitivní výsledek je, když jsou detekovány protilátky alespoň na 3 virové proteiny, pokud na 1 nebo 2 je výsledek sporný a vyžaduje další vyšetření.

Při primární sérodiagnostice HIV infekce se zjišťují celkové protilátky pomocí screeningových testů – ELISA a aglutinačních reakcí. Ve druhé (arbitrážní) fázi se používá složitější test - imunoblot, který umožňuje nejen potvrdit nebo vyvrátit původní závěr, ale také to provést na úrovni stanovení protilátek proti jednotlivým proteinům viru.

Interpretace výsledků testu na protilátky proti HIV

Výsledek testu na protilátky proti HIV ovlivňuje poměrně velké množství různých faktorů a mezi nimi je důležité načasování testu po možné infekci.

Ve většině případů lze protilátky proti HIV detekovat 6–12 týdnů po infekci. Toto období od vstupu viru do těla do objevení detekovatelného množství protilátek se nazývá období pozitivní sérokonverze nebo období „okna“. Existují vzácné případy výskytu protilátek 6 měsíců po infekci a zprávy o detekci protilátek až po 1 roce nemají žádný důkaz. V současné době diagnostická služba využívá nové generace metod ELISA, které umožňují detekovat protilátky proti HIV 3–4 týdny po infekci a určité kombinace těchto metod, tzv. testovací strategie, zkracují dobu „okna“ na 2– 3 týdny, tj. umožňují detekovat protilátky proti HIV, jakmile se začnou v těle vytvářet.

Negativní výsledek znamená, že v krvi vyšetřované osoby nebyly zjištěny žádné protilátky proti HIV. Tento stav se nazývá séronegativita a obvykle znamená, že osoba není infikována.

Negativní výsledek neposkytuje žádnou záruku do budoucna. Uvádí pouze stav při vyšetření. Je malá šance, že průzkum byl proveden v období okna. Pokud byl tedy člověk v minulosti vystaven HIV a test byl negativní, měl by být testován znovu nejméně 6 měsíců po rizikové události.

Pozitivní výsledek znamená, že v krvi pacienta byly nalezeny protilátky proti HIV. Tento stav se nazývá séropozitivita – člověk je infikován virem HIV. Je důležité pochopit, že pozitivní výsledek indikuje pouze infekci HIV, nikoli AIDS. Je však nesmírně důležité po obdržení pozitivního výsledku kontaktovat lékaře s žádostí o radu a v případě potřeby lékařskou pomoc, která vám umožní udržet kvalitu života na dobré úrovni po dlouhou dobu.

Nejistý výsledek. Ve vzácných případech je výsledek testu na protilátky proti HIV nejasný. Laboratoř nemůže odpovědět, zda je člověk séropozitivní nebo séronegativní. Za takových okolností je nutné poradit se s lékařem a nechat se znovu otestovat.



Při diagnostice infekce HIV se používají 4 skupiny metod:

1. Stanovení přítomnosti viru, jeho antigenů nebo kopií RNA v materiálech od pacienta nebo osoby infikované HIV

2. Sérologická diagnostika, založená na průkazu specifických protilátek proti povrchovým (gp 120 a gp 41) a vnitřním (p 18 a p 24) HIV proteinům.

3. Identifikace patognomických (specifických) změn v imunitním systému pro infekci HIV.

4. Laboratorní diagnostika oportunních infekcí (onemocnění spojená s AIDS).

1. Virologická diagnostika. Materiálem pro izolaci HIV jsou krevní T-lymfocyty, leukocyty kostní dřeně, lymfatické uzliny, mozková tkáň, sliny, spermie, mozkomíšní mok a krevní plazma. Výsledný materiál se používá k infekci kontinuální kultury T-lymfocytů (H9). Indikace HIV v buněčné kultuře se provádí pomocí CPD (tvorba symplastů), dále imunofluorescencí, elektronovou mikroskopií a vyjádřenou aktivitou reverzní transkriptázy. Moderní výzkumné metody umožňují detekovat jeden infikovaný lymfocyt na 1000 buněk.

Detekce virových antigenů v infikovaných T lymfocytech se provádí pomocí monoklonálních protilátek

Pro stanovení prognózy a závažnosti infekce HIV je v posledních letech zásadní stanovení počtu kopií HIV RNA v krevní plazmě metodou polymerázové řetězové reakce (PCR) - tzv. virové nálože. Pokud je u pacientů, kteří nedostávají terapii, virová zátěž pod detekčním limitem (méně než 5000 kopií HIV RNA v 1 ml plazmy), znamená to nepřítomnost progrese nebo pomalou progresi. Stupeň nákazy je minimální. Vysoká virová nálož (více než 10 000 kopií RNA v 1 ml plazmy) u pacientů s počtem CO4 lymfocytů menším než 300 v 1 μl vždy svědčí pro progresi onemocnění.

2. Sérologická diagnostika. V současné době je nejrozšířenější.

Materiál pro výzkum: 5 ml. heparinizovanou krev, kterou lze před dodáním do laboratoře uchovávat v chladničce, ale ne zmraženou po dobu 6-8 hodin.

Pro účely sérologické diagnostiky AIDS se používají především metody enzymové imunoanalýzy se standardními enzymovými imunoanalytickými systémy (ELISA). Jedná se o screeningovou metodu. Princip fungování je založen na klasickém principu přímé ELISA. Imunosorbentem jsou polystyrenové tablety s imobilizovaným inaktivovaným virově specifickým antigenem získaným z HIV nebo synteticky. Poté se přidá zředěné testovací sérum. Inkubace se provádí v jamkách s antigenem. Po navázání AG na AT se nenavázané proteiny třikrát promyjí a poté se do jamek přidá konjugát protilátek proti lidským imunoglobulinům s enzymatickou značkou. Vznik specifického komplexu AG+AT se detekuje přidáním substrátu pro enzym (roztok orthofenylendiaminu a peroxidu vodíku). V důsledku toho se barva média mění úměrně množství protilátek. Výsledky studie se berou v úvahu na spektrofotometru. Krevní séra, která mají podle údajů ELISA protilátky specifické pro virus, musí být dále vyšetřena imunoblotem.

Imunitní blotting je potvrzující test, protože detekuje protilátky proti různým HIV proteinům. Je založena na předběžné frakcionaci molekulovou hmotností (separaci) HIV proteinů elektroforézou v polyakrylamidovém gelu s následným přenosem antigenů na nitrocelulózovou membránu. Testovací sérum se poté nanese na membránu. V tomto případě tvoří specifické protilátky komplex se specifickým antigenem (gp.120, gp.41, str.24, str.18). Poslední fází studie je identifikace protilátek proti různým HIV proteinům. K tomu se do systému přidávají protilátky proti lidským proteinům značené enzymem nebo radioizotopovou značkou. V séru pacienta jsou tedy detekovány (nebo nedetekovány) virově specifické protilátky proti všem nebo většině antigenů HIV.

3. Studie imunitního stavu. Zaměřeno na identifikaci:

1) snížení poměru buněk CD4/CD8 (u N 2 a >, s AIDS - 0,5 resp.<);

2) snížení obsahu buněk CD4 (<200 клеток/мл.);

3) přítomnost jednoho z laboratorních příznaků, včetně anémie, leukopenie, trombopenie, lymfopenie;

4) zvýšení koncentrace Ig A a Ig G v krevním séru;

5) snížení reakce tvorby lymfocytárních blastů na mitogeny;

6) nepřítomnost kožní reakce GTZ na několik antigenů;

7) zvýšení hladiny cirkulujících imunitních komplexů.

... diagnostika jakéhokoli infekčního onemocnění je založena na srovnání epidemiologických, klinických a laboratorních údajů a přehánění významu jedné ze skupin těchto údajů může vést k diagnostickým chybám.

Diagnostika infekce HIV zahrnuje dvě fáze:
já etapa - stanovení skutečného faktu infekce HIV ;
II etapa - určení stadia onemocnění .

STANOVENÍ SKUTEČNOSTI HIV INFEKCE

Zjištění skutečného faktu o infekci HIV (to znamená identifikace osob infikovaných HIV) také zahrnuje dvě fáze:
Fáze I- spojený imunosorbentní test(ELISA): metoda ELISA je screeningová (výběrová) metoda - výběr pravděpodobně infikovaných jedinců, to znamená, že jejím cílem je identifikovat podezřelé jedince a eliminovat zdravé jedince; Protilátky proti HIV se detekují pomocí jiných protilátek proti požadovaným protilátkám (protilátky proti jiným protilátkám). Tyto „pomocné“ protilátky jsou značeny enzymem. Všechny screeningové testy musí být vysoce citlivé, aby nezmeškaly pacienta. Z tohoto důvodu není jejich specificita příliš vysoká, to znamená, že ELISA může dát pozitivní odpověď („pravděpodobně nemocná“) u neinfikovaných lidí (například u pacientů s autoimunitními onemocněními: revmatismus, systémový lupus erythematodes atd.). Frekvence falešně pozitivních výsledků při použití různých testovacích systémů se pohybuje od 0,02 do 0,5 %. Pokud test ELISA osoby dává pozitivní výsledek, je nutné další vyšetření, aby se potvrdila skutečnost, že jde o infekci HIV. Při provádění ELISA jsou falešně negativní výsledky možné ve 3–5 % případů – pokud k infekci došlo relativně nedávno a hladina protilátek je stále velmi nízká, nebo v terminálním stadiu onemocnění, charakterizovaném závažným poškozením imunitního systému s hlubokým narušením procesu tvorby protilátek. Pokud tedy existují důkazy o kontaktu s lidmi nakaženými virem HIV, provádějí se opakované studie obvykle po 2 - 3 měsících.
Etapa II - imunoblotování(upravený Western Blot, Western Blot): je složitější metoda a slouží k potvrzení faktu infekce. Tato metoda nedetekuje komplexní protilátky proti HIV, ale protilátky proti jeho jednotlivým strukturním proteinům (p24, gp120, gp41 atd.). Výsledky imunoblotu jsou považovány za pozitivní, pokud jsou detekovány protilátky alespoň proti třem proteinům, z nichž jeden je kódován geny env, druhý geny gag a třetí geny pol. Pokud jsou detekovány protilátky proti jednomu nebo dvěma proteinům, je výsledek považován za sporný a vyžaduje potvrzení. Ve většině laboratoří je diagnóza HIV infekce stanovena, pokud jsou současně detekovány protilátky proti proteinům p24, p31, gp4l a gpl20/gp160. Podstata metody: virus je zničen na složky (antigeny), které se skládají z ionizovaných aminokyselinových zbytků, a proto mají všechny složky navzájem odlišný původ; poté se pomocí elektroforézy (elektrického proudu) antigeny rozmístí na povrch proužku – pokud testované sérum obsahuje protilátky proti HIV, pak budou interagovat se všemi skupinami antigenů, a to lze detekovat.

Je třeba mít na pamětiže protilátky proti HIV se objeví u 90-95 % nakažených do 3 měsíců po infekci, u 5-9 % nakažených se protilátky proti HIV objeví po 6 měsících a u 0,5-1 % nakažených se protilátky proti HIV objeví v pozdějších termínech. Během stadia AIDS se může počet protilátek snižovat, až úplně vymizí.

V imunologii existuje takový koncept jako "sérologické okénko" - doba od infekce do objevení se takového množství protilátek, které lze detekovat. U HIV toto období obvykle trvá od 2 do 12 týdnů, ve vzácných případech déle. Během „sérologického okna“ je podle testů člověk zdravý, ale ve skutečnosti je infikován HIV. Bylo zjištěno, že DNA HIV může zůstat v lidském genomu po dobu nejméně tří let bez známek aktivity a protilátky proti HIV (markery infekce HIV) se neobjevují.

Během tohoto období („sérologické okno“) je možné identifikovat osobu infikovanou HIV a dokonce i 1-2 týdny po infekci pomocí polymerázová řetězová reakce(PCR). Jedná se o extrémně citlivou metodu – teoreticky lze detekovat 1 DNA na 10 ml média. Podstata metody je následující: pomocí polymerázové řetězové reakce se získá mnoho kopií nukleové kyseliny (virus je nukleová kyselina - DNA nebo RNA - v proteinovém obalu), které jsou následně identifikovány pomocí značených enzymů nebo izotopů a také jejich charakteristickou strukturou. PCR je drahá diagnostická metoda, proto se nepoužívá pro screening ani rutinně.

STANOVENÍ STÁDIÍ ONEMOCNĚNÍ

Rozvoj AIDS je založen na, především destrukce T-lymfocytů-pomocníků, označených monoklonálními protilátkami - diferenciačními shluky - jako CD4. V tomto ohledu je diagnostika a sledování progrese onemocnění nemožné bez sledování subpopulace pomocných T buněk, což se nejvýhodněji provádí pomocí laserového třídiče buněk.

Pro mírnou infekci HIV Počet T-lymfocytů je extrémně variabilní ukazatel. Obecně lze říci, že pokles počtu CD4 buněk (absolutní i relativní) je zjišťován u jedinců, u kterých došlo k infekci HIV alespoň před rokem. Na druhé straně je v časných stádiích infekce často prudce zvýšený počet supresorových T buněk (CD8) jak v periferní krvi, tak ve zvětšených lymfatických uzlinách.

S těžkým AIDS Absolutní většina pacientů má snížený celkový počet T-lymfocytů (méně než 1000 v 1 μl krve včetně CD4 lymfocytů - méně než 22 v 1 μl, přičemž absolutní hodnota obsahu CD8 zůstává v mezích normy). V souladu s tím se poměr CD4/CD8 prudce snižuje. Reakce T buněk in vitro na standardní antigeny a mitogeny jsou sníženy v přísném souladu s relativně sníženým počtem CD4.

Pro pozdní stadia AIDS Charakterizovaná celkovou lymfopenií, neutropenií, trombocytopenií (respektive snížením počtu lymfocytů, neutrofilů a krevních destiček), anémií. Tyto změny mohou být důsledkem centrální inhibice krvetvorby v důsledku poškození krvetvorných orgánů virem a také autoimunitní destrukce buněčných subpopulací na periferii. Kromě toho je AIDS charakterizován mírným zvýšením množství gama globulinů s dominantním zvýšením obsahu IgG. Pacienti se závažnými příznaky AIDS mají často zvýšené hladiny IgA. V některých stádiích onemocnění se výrazně zvyšuje hladina markerů AIDS, jako je 1-mikroglobulin, acidorezistentní interferon, 1-thymosin. Totéž se děje se sekrecí volného neopterinu, metabolitu makrofágů. Relativní význam každého z uvedených testů, jejichž počet neustále narůstá, zatím nelze posoudit. Proto by měly být zvažovány v interakci s markery HIV infekce, a to jak imunovirologickými, tak cytologickými. Klinický krevní test je charakterizován leukopenií, lymfopenií (respektive snížením počtu leukocytů a lymfocytů).

Fáze 1 - " inkubační fázi» - protilátky proti HIV dosud nebyly zjištěny; diagnóza infekce HIV v této fázi je stanovena na základě epidemiologických údajů a musí být laboratorně potvrzena průkazem viru lidské imunodeficience, jeho antigenů a nukleových kyselin HIV v krevním séru pacienta;
Fáze 2 - " stádium primárních projevů» - v tomto období již dochází k tvorbě protilátek:;
Fáze 2A – “ asymptomatické» - HIV infekce se projevuje pouze tvorbou protilátek;
Fáze 2B – “ akutní infekce HIV bez sekundárních onemocnění» - široké plazmatické lymfocyty - v krvi pacientů lze detekovat „mononukleární buňky“ a často je pozorován přechodný pokles hladiny CD4 lymfocytů (akutní klinická infekce je pozorována u 50-90 % infikovaných jedinců v prvních 3 měsíce po infekci zpravidla předchází sérokonverzi, tj. výskyt protilátek proti HIV, začátek období akutní infekce;
Fáze 2B – “ akutní infekce HIV se sekundárními chorobami» - na pozadí poklesu hladiny CD4 lymfocytů a z toho vyplývající imunodeficience se objevují sekundární onemocnění různé etiologie (angína, bakteriální a Pneumocystis pneumonie, kandidóza, herpetická infekce atd.);
Fáze 3 - " latentní» - v reakci na progresi imunodeficience dochází k modifikaci imunitní odpovědi v podobě nadměrné reprodukce CD4 buněk s následným postupným snižováním hladiny CD4 lymfocytů v průměru rychlostí 0,05-0,07x109/l za rok; protilátky proti HIV jsou detekovány v krvi;
Fáze 4 - " stádiu sekundárních onemocnění» - deplece lymfocytů populace CD4, výrazně klesá koncentrace protilátek proti viru (v závislosti na závažnosti sekundárních onemocnění se rozlišují stadia 4A, 4B, 4B);
Fáze 5 - " terminální fáze» - typicky pokles počtu CD4 buněk pod 0,05x109/l; koncentrace protilátek proti viru výrazně klesá nebo protilátky nemusí být detekovány.