Rozhodně by bylo přesnější RIBT.

Tato studie se používá k dvojité kontrole výsledků ELISA, pokud jsou na pochybách.

Pokud však porovnáme tyto dvě metody, RIBT má také nevýhody:

1. Metoda není příliš informativní v rané fázi vývoje onemocnění. Pozitivní se stává pouze 2 měsíce po infekci. Zatímco ELISA může být pozitivní již od 3 týdnů.

2. Drahé a náročné na práci. Zatímco ELISA je jednoduchá metoda, která umožňuje vyšetřit velké množství lidí v krátkém čase. Nevyžaduje od laboranta mnoho času a pro pacienta je levná.

3. Metoda je neinformativní v období užívání antibiotik, stejně jako po určitou dobu po ukončení antibakteriální terapie. Pacientovo užívání antibiotik způsobuje, že RIBT je negativní.

Proto je vhodné provést výzkum:

• ne dříve než 1 týden po vysazení ve vodě rozpustných penicilinů;
• nejdříve 25 dnů po ukončení podávání trvanlivých (dlouhodobě působících) antibiotik.

Vzhledem k uvedeným nevýhodám je RIBT metodou, která se k diagnostice syfilis používá velmi zřídka. Ale hlavní výhodou studie je její vysoká spolehlivost. Proto lze RIBT použít v obtížných diagnostických případech k potvrzení nebo vyloučení infekce.

Hlavní aplikace:

• diferenciální diagnostika z jiných testů na syfilis;
• diagnóza neurosyfilis;
• posouzení proveditelnosti vyřazení pacienta z registru venerologa, pokud jsou údaje získané z jiných studií sporné;
• detekce latentní syfilis;
• stanovení viscerální formy onemocnění;
• detekce patologie u těhotných žen, pokud jsou jiné studie neinformativní nebo v případě podezření na falešně pozitivní výsledky.

ELISA je screeningová metoda. Potvrzující může být pouze v případě, že již byla provedena jiná studie (například antikardiolipinový test).

Na rozdíl od ELISA je RIBT soběstačná studie.

Přítomnost pozitivního výsledku je důvodem ke stanovení diagnózy bez dalších diagnostických metod. Kromě toho se RIBT jako nejpřesnější způsob detekce Treponema pallidum používá ve forenzní praxi pro retrospektivní diagnostiku syfilis.

Syfilis: RIF, RIBT - naléhavě

Pokud potřebujete test na syfilis, včetně RIF nebo RIBT, kontaktujte naši kliniku. Spolupracujeme s několika velkými laboratořemi v Moskvě.

Máme proto široké diagnostické možnosti, které nám umožňují provádět téměř jakýkoli výzkum. Je však třeba chápat, že RIBT není diagnostická metoda, kde můžete počítat s naléhavostí.

Samotný výzkum a získání jeho výsledků nezabere mnoho času. Ale aby byla zajištěna jeho přesnost, bude vyžadována určitá příprava.

Pacient bude muset:

• počkejte 2 měsíce od okamžiku podezření na infekci (jinak bude výsledek s největší pravděpodobností negativní);
• počkejte 1 měsíc od okamžiku, kdy antibiotika užijete (zkreslují údaje studie, takže její výsledky jsou falešně negativní).

Pokud jsou splněny nezbytné podmínky, můžete vzít RIBT. Výsledky obdržíte za 1-2 dny. Pokud vyjde pozitivně, můžete léčbu syfilis podstoupit na naší klinice.

Máme zkušené venerology, kteří vám pomohou se této nebezpečné nemoci zbavit.

Pokud potřebujete provést RIBT a další testy na syfilis, kontaktujte kompetentní venereology.

Syfilis je doprovázena četnými příznaky a má velké množství klinických forem. Jeho rozpoznání je založeno na komplexním klinickém a laboratorním vyšetření pacienta. Obecný krevní test na syfilis poskytuje málo informací, takže se nepoužívá k diagnostice onemocnění.

K analýze lze vzít následující materiály:

• krev z prstu a žíly;
• mozkomíšní mok - mozkomíšní mok;
• výtok tvrdého chancre (vředy);
• oblasti regionálních lymfatických uzlin.

Výběr materiálu a diagnostická metoda závisí na stadiu onemocnění. O tom, jaké testy se na syfilis dělají, si povíme v další části.

Klasifikace metod laboratorní diagnostiky onemocnění

V počáteční fázi můžete použít bakterioskopickou metodu, založenou na identifikaci patogenu - Treponema pallidum - pod mikroskopem. V budoucnu jsou široce využívány sérologické testy založené na stanovení mikrobiálních antigenů a protilátek produkovaných tělem v biologickém materiálu.

Bakteriologické studie se neprovádějí, protože původce syfilis roste na živných půdách za umělých podmínek velmi špatně.

Všechny metody pro detekci treponému, to znamená typy testů na syfilis, jsou rozděleny do dvou velkých skupin:

1. Přímé, které přímo detekují samotného mikroba:

• mikroskopie v tmavém poli (detekce treponémů na tmavém pozadí);
• RIT test – infekce králíků testovaným materiálem;
• polymerázová řetězová reakce (PCR), která detekuje úseky genetického materiálu mikroorganismu.

2. Nepřímá (sérologická), založená na detekci protilátek proti mikrobu, které tělo produkuje v reakci na infekci.

Sérologické testy se dělí do dvou skupin

Netreponemální:

• reakce fixace komplementu s kardiolipinovým antigenem (CCk);
• mikroprecipitační reakce (MPR);
• test rychlé reaginace plazmy (RPR);
• test s toluidinovou červení.

Treponemal:

• reakce fixace komplementu s treponemálním antigenem (RSCT);
• imobilizační reakce treponema (RTI nebo RIBT);
• imunofluorescenční reakce (RIF);
• pasivní hemaglutinační reakce (RPHA);
• enzymový imunotest (ELISA);
• imunoblotování.

Metody těchto analýz jsou poměrně složité, proto se zaměříme především na to, kdy se provádějí a jak přesné informace poskytují.

Řekněme hned, že základem pro diagnostiku syfilis jsou sérologické metody. Jak se nazývá test na syfilis: v každém případě může vyšetření zahrnovat různé techniky. Níže o nich budeme hovořit podrobněji.

Přímé testy

Jejich detekce pod mikroskopem přesvědčivě dokazuje přítomnost treponém. Pravděpodobnost syfilis dosahuje 97%. Mikroby však lze prokázat pouze u 8 z 10 pacientů, takže negativní test onemocnění nevylučuje.

Diagnóza se provádí v obdobích, kdy se objeví šrám nebo kožní vyrážka. Právě ve vypouštění těchto infekčních elementů hledají původce onemocnění.

Efektivnější, ale zároveň nákladnější a komplexnější analýzou je průkaz treponem po předléčení fluorescenčními protilátkami. Jsou to látky, které se „lepí“ na mikroby a vytvářejí „záři“ v mikroskopovém poli.

Citlivost metod klesá s dlouhým trváním onemocnění, léčbou vředů a vyrážek antiseptiky a také po léčbě.

Biologická metoda diagnostiky RIT je vysoce specifická, ale nákladná a výsledek se dostaví až po dlouhé době, kdy se u infikovaného zvířete onemocnění rozvine. V současné době se metoda prakticky nepoužívá, i když je prakticky nejpřesnější ze všech. Výborným krevním testem na syfilis k detekci genetického materiálu treponém je PCR. Jeho jediným omezením jsou relativně vysoké náklady na diagnostiku.

Sérologické metody

Netreponemální testy

RSKk a RMP

Nejznámější z těchto testů je Wassermanova reakce. Jedná se o metodu rychlé diagnostiky (expresní test na syfilis), založenou na podobné reakci protilátek z krve nemocného člověka na samotný treponém a na kardiolipin získaný z hovězího srdce. V důsledku této interakce protilátek a kardiolipinu se tvoří vločky.

V Rusku se tato analýza prakticky nepoužívá. Byla nahrazena mikroprecipitační reakcí. Nevýhodou metody je její nízká specificita. Falešně pozitivní krevní test na syfilis se vyskytuje u tuberkulózy, krevních chorob, systémového lupus erythematodes, v těhotenství, po narození dítěte, při menstruačním krvácení a v mnoha dalších případech. Proto se při pozitivní RW používají přesnější diagnostické metody.

Po infekci se reakce stává pozitivní po dvou měsících. Se sekundární syfilis je pozitivní téměř u všech pacientů.

Mikroprecipitační reakce, která nahradila Wassermanovu reakci, má podobný mechanismus. Je levný, snadno se implementuje, rychle se vyhodnocuje, ale může také poskytnout falešně pozitivní výsledek. Tyto dva testy se používají jako screeningové testy.

RMP se stává pozitivní měsíc po objevení se chancre. K jeho provedení se používá krev z prstu.

Může být test na syfilis špatný? Samozřejmě ano, zvláště při použití netreponemových testů.

Příčiny akutních falešně pozitivních vzorků při použití RMP:

• akutní infekční onemocnění;
• zápal plic;
• infarkt myokardu;
• mrtvice;
• zranění a otravy.

Chronické falešně pozitivní výsledky se často vyskytují u následujících onemocnění:

• tuberkulóza;
• brucelóza;
• leptospiróza;
• sarkoidóza;
• revmatická onemocnění;
• Infekční mononukleóza;
• zhoubné nádory;
• diabetes;
• jaterní cirhóza a další.

Pokud se objeví kontroverzní testy, používají se k objasnění diagnózy treponemální sérologické testy.

Test RPR a toluidinové červeně

Rychlý plazmatický reagin test (syfilis rpr test) je dalším typem reakce s kardiolipinovým antigenem. Používá se v následujících případech:

• screening populace;
• podezření na syfilis;
• vyšetření dárce.

Zmiňme se ještě o testu s toluidinovou červení. Všechny tyto metody se používají k hodnocení účinnosti léčby. Jsou semikvantitativní, to znamená, že se snižují s zotavením a zvyšují se s relapsem infekce.

Negativní výsledky netreponemových testů s největší pravděpodobností naznačují, že subjekt nemá syfilis. Proto se k posouzení vyléčení používají netreponemální testy. První taková analýza by měla být provedena 3 měsíce po ukončení léčby.

Treponemální testy

Treponemální testy jsou založeny na použití treponemálních antigenů, což výrazně zvyšuje jejich diagnostickou hodnotu. Používají se v následujících situacích:

• pozitivní screeningový test (mikroprecipitační reakce);
• rozpoznání falešně pozitivních výsledků screeningu;
• podezření na syfilis;
• diagnostika latentních forem;
• retrospektivní diagnóza, když pacient dříve trpěl onemocněním.

RIT a RIF

Nejkvalitnější (vysoce citlivé a vysoce specifické) jsou RIT a RIF. Nevýhodou těchto metod je složitost, časová náročnost a potřeba moderního vybavení a vyškoleného personálu. U většiny vyléčených pacientů zůstávají treponemální testy pozitivní po mnoho let, a proto je nelze použít jako kritérium vyléčení.

RIF je pozitivní dva měsíce po infekci. Pokud je negativní, je pacient zdravý, pokud je pozitivní, pravděpodobnost onemocnění je vysoká.

RIT se zvláště často používá v případě pozitivních výsledků rakoviny močového měchýře k vyloučení nebo potvrzení onemocnění. Je vysoce citlivý a umožňuje vám s velkou přesností říci, zda má pacient syfilis nebo ne. Test se však stane pozitivním až tři měsíce po infekci.

Imunoblotting

Imunoblotting je ještě citlivější než RIF, ale méně citlivý než RPGA. Používá se zřídka, hlavně pro diagnostiku syfilis u novorozenců.

Uvedené metody nejsou vhodné pro screening, tedy rychlou detekci onemocnění, protože se stávají pozitivními později než mikroprecipitační reakce.

ELISA a RPGA

Moderní vysoce informativní standardizované metody diagnostiky syfilis - ELISA a RPGA. Jsou levné, rychle se instalují a testují ve velkém množství. Tyto testy lze použít k potvrzení diagnózy.

Analýza RPGA se stává pozitivní s primární séropozitivní syfilis, tj. s výskytem chancre (měsíc po infekci). Je zvláště cenný při diagnostice pozdních a vrozených forem onemocnění. Pro diagnostickou přesnost však musí být RPHA doplněn alespoň jedním netreponemálním a jedním treponemovým testem. Tento trojitý test je nejspolehlivějším testem na syfilis. Nevýhodou RPGA je dlouhodobé přetrvávání pozitivní reakce, což neumožňuje použít test jako kritérium pro vyléčení.

Test ELISA na syfilis je pozitivní tři týdny po onemocnění. Nevýhodou ELISA je, že může být falešná. Falešně pozitivní reakce se vyskytuje u systémových onemocnění, metabolických poruch a také u dětí narozených nemocným matkám.

Nedostatky sérologických metod vedly k vývoji nejpokročilejších metod, které neprodukují chyby, ale jsou stále drahé a zřídka používané - plynová chromatografie a hmotnostní spektrometrie.

Algoritmus pro diagnostiku syfilitické infekce v různých fázích

V primárním séronegativním období (do 2 měsíců po infekci) se vyhledávání treponemu provádí v tmavém poli nebo pomocí fluorescenčních protilátek.

Pro primární séropozitivní, sekundární a latentní syfilis se používají RMP a ELISA a jako konfirmační test se používá RPGA.

U pacientů s relapsy sekundární syfilis se vyšetřují prvky vyrážky a snaží se z nich izolovat treponémy pro mikroskopické vyšetření.

V terciárním období je karcinom močového měchýře negativní u třetiny pacientů. ELISA a RPGA jsou pozitivní, ale nemusí indikovat terciární syfilis, ale předchozí onemocnění. Slabě pozitivní test ukazuje spíše na uzdravení než na terciární syfilis.

Při stanovení diagnózy „kongenitální syfilis“ se bere v úvahu přítomnost onemocnění u matky, rozdíl ve výskytu rakoviny prsu u matky a dítěte, pozitivní ELISA a RPGA u novorozence a imunoblotting.

Těhotné ženy musí být vyšetřeny na syfilis, zejména ty, které již prodělaly mrtvé narození, nevyvinuté těhotenství nebo předčasné potraty. Provádějí RMP, ELISA, RPGA. Před ukončením těhotenství jsou vyšetřeni na přítomnost onemocnění.

Pravidla pro získání testu na syfilis

Chcete-li získat doporučení do laboratoře, musíte navštívit místního lékaře. Pokud se chcete nechat otestovat rychleji, lze to provést v soukromé laboratoři bez doporučení (například laboratoře Invitro provádějí test na syfilis rychle a anonymně).

Jak se nechat vyšetřit na syfilis? Krev se daruje ráno, nalačno. Můžete pít pouze čistou vodu.

Příprava: Dva dny před testem je potřeba ze stravy vyloučit tučná jídla a především alkohol.

Jak se provádí analýza? obvyklým způsobem z prstu nebo loketní žíly.

Jak dlouho trvá test na syfilis? Výsledek testu je obvykle připraven druhý den. Přepis lze převzít od lékaře nebo laboratoře.

Jak dlouho je analýza platná? Po dobu až tří měsíců.

Analýza mozkomíšního moku

V některých případech se pro diagnostiku neurosyfilis provádí vyšetření mozkomíšního moku.

Toto vyšetření je předepsáno všem pacientům s latentní syfilis, pokud mají známky patologie nervového systému, stejně jako s latentní a pozdní neurosyfilis.

Kromě toho se analýza provádí u všech pacientů po uzdravení, pokud si udrží pozitivní sérologické reakce. O tom, že k tomuto jevu dochází poměrně často, jsme již psali v našem článku.

Rozbor mozkomíšního moku na syfilis předepisuje a provádí pouze lékař.

Mozkomíšní mok se získává punkcí mezi dvěma bederními obratli. Odebírá se po 4 ml do dvou zkumavek. Poté se místo vpichu ošetří jódem a překryje sterilním obvazem. Po punkci by měl pacient ležet na břiše s nožním koncem lůžka zvednutým alespoň 3-4 hodiny, poté může ležet na boku. Po punkci je indikován klid na lůžku po dobu dvou dnů.

Mozkomíšní mok z první zkumavky se vyšetřuje pomocí obecně uznávaných reakcí na obsah bílkovin, buněk a stanovení známek meningitidy (zánětu mozkových blan).

Mozkomíšní mok z druhé zkumavky je vyšetřen na obsah protilátek proti treponemu pomocí Wassermanovy reakce, RMP, RIF a RIBT, kterou jsme probrali výše.

Podle závažnosti poruch se rozlišují čtyři typy změn v mozkomíšním moku. Jejich analýzou může lékař učinit závěr o přítomnosti různých forem poškození nervového systému (vaskulární neurosyfilis, syfilitická meningitida, meningovaskulární syfilis, tabes dorsalis, pozdní mezenchymální neurosyfilis), jakož i o uzdravení pacienta s pozitivním sérologickým testy.

Imunofluorescenční reakce (RIF) je sérologická reakce, která umožňuje detekci protilátek proti známým antigenům. Metoda zahrnuje mikroskopii obarvených nátěrů.

Tato reakce se využívá v imunologii, virologii a mikrobiologii. Umožňuje určit přítomnost virů, bakterií, hub, prvoků a ICC. RIF je velmi široce používán v diagnostické praxi pro detekci virových a bakteriálních antigenů v infekčním materiálu. Metoda je založena na schopnosti fluorochromu vázat se na proteiny bez narušení jejich imunologické specifity. Používá se hlavně při diagnostice infekcí močových cest.

Existují následující způsoby provádění imunofluorescenční reakce: přímá, nepřímá, s komplementem. Přímá metoda zahrnuje barvení materiálu fluorochromy. Vzhledem ke schopnosti mikrobiálních nebo tkáňových antigenů zářit v UV paprscích fluorescenčního mikroskopu jsou definovány jako buňky s jasně zbarveným zeleným okrajem.

Nepřímá metoda zahrnuje stanovení komplexu antigen+protilátka. K tomu je experimentální materiál ošetřen protilátkami z antimikrobiálního králičího séra určeného pro diagnostiku. Poté, co se protilátky navážou na mikroby, jsou odděleny od těch, které se nenavázaly, a ošetřeny fluorochromem značeným protikráličím sérem. Poté se pomocí ultrafialového mikroskopu stanoví komplex mikrob + animikrobiální protilátky + antikráličí protilátky stejným způsobem jako u přímé metody.

Imunofluorescenční reakce je v diagnostice syfilis nepostradatelná. Pod vlivem fluorochromu je původce syfilis identifikován jako buňka se žlutozeleným okrajem. Absence luminiscence znamená, že pacient není infikován syfilisem. Tento test je často předepisován pro pozitivní Wassermanovu reakci. Tato metoda je velmi účinná v diagnostice, protože umožňuje identifikovat patogen v počátečních stádiích onemocnění.

Kromě toho, že RIF umožňuje diagnostikovat syfilis, používá se také k určení přítomnosti patogenů, jako jsou chlamydie, mykoplazmata, trichomonas, a také patogenů kapavky a genitálního herpesu.

Pro analýzu se používají nátěry nebo žilní krev. Postup odběru nátěru je zcela bezbolestný a nepředstavuje žádné nebezpečí. Na tuto analýzu je nutné se připravit. Dvanáct hodin předtím se nedoporučuje používat hygienické prostředky, jako je malo nebo gely. Někdy se také podle pokynů lékaře provádí provokace. K tomu se doporučuje konzumovat kořeněná jídla nebo alkohol nebo píchnout provokující látku, jako je gonovaccin nebo pyrogenal. Navíc interval mezi užíváním antibakteriálních léků a provedením testu musí být alespoň čtrnáct dní.

Při hodnocení výsledků je třeba vzít v úvahu skutečnost, že luminiscence je pozorována nejen u živých bakterií, ale i u mrtvých, to platí zejména pro chlamydie. Po kúře antibiotik září i mrtvé buňky chlamydií.

Při správné přípravě pacienta a dodržování techniky odběru nátěru vám tato analýza umožňuje identifikovat onemocnění v raných stádiích, což je velmi důležité pro včasnou léčbu. Pozitivní aspekty této metody jsou krátká doba k získání výsledků, snadná implementace a nízké náklady na analýzu.

Mezi nevýhody patří skutečnost, že k provedení analýzy je potřeba poměrně velké množství zkušebního materiálu. Výsledky by měl navíc hodnotit pouze zkušený odborník.

RIF, RIBT, RPGA

RIF - imunofluorescenční reakce- treponemální test. Je to jeden z nejcitlivějších testů na syfilis. RIF se stává pozitivním 10-20 dní po infekci, což ji řadí mezi metodu pro včasnou detekci syfilis.

Indikace pro provádění RIF:

• RIF se provádí u osob s příznaky syfilis, s negativními reakcemi - RMP, RV;
• jako diferenciální reakce u jedinců s pozitivními RW reakcemi, mikroreakcemi a absencí symptomů;
• u těhotných žen bez klinických projevů a syfilis v anamnéze.

Metodika provádění RIF:

• Při provádění reakce se do pacientova séra přidá králičí krev infikovaná Treponema pallidum (původce syfilis) a fluorescenční (svítící) sérum. Studie spočívá v pozorování záře komplexů pod fluorescenčním mikroskopem. Výsledky reakce jsou interpretovány v závislosti na intenzitě záře od 1+ do 4+, což ukazuje na přítomnost syfilis. Absence záře – negativní výsledek RIF znamená, že vyšetřovaná osoba je zdravá. Falešné výsledky analýzy jsou extrémně vzácné během systémových procesů, těhotenství atd.
• Reakce se provádí v modifikacích RIF-200 a RIF-avs (absorpce).
• Citlivost reakce na primární syfilis je asi 85 %
• na sekundární syfilis - 100%
• s terciární syfilis - 98-100%.

K negativitě RIF dochází během několika let po léčbě syfilis. Po antisyfilitické terapii je nutné sledování ukazatelů v čase.

RIBT- Treponema pallidum imobilizační reakce je nejspecifičtější krevní test na syfilis. RIBT je vysoce kvalitní, drahý krevní test, který mohou provádět dobře vybavené laboratorní komplexy. RIBT je základní reakcí pro latentní formy syfilis, neurosyfilis a viscerosyfilis. Umožňuje odlišit falešně pozitivní reakce od skutečné syfilis.

Reakce je založena na imobilizaci (imobilizaci) patogenu syfilis druhově specifickými protilátkami. Mikroskopickým vyšetřením se odečte výsledek reakce: 0-20% - negativní, 21-30% - pochybný, 31-50% - slabě pozitivní, 51-100% - pozitivní reakce. To znamená, že pozitivní výsledky pro syfilis zahrnují ty, kde je RIBT více než 50 %. U syfilis se RIBT stává pozitivní poměrně pomalu: v primárním období syfilis je stále negativní, v sekundárním čerstvém období je pozitivní v 50% případů, v období sekundárního relapsu je pozitivní v 90-100%, v terciární období je pozitivní v 99-100 %.

Negativita RIBT je prováděna již desítky let, proto není legitimní ji používat jako kritérium spolehlivosti vyléčení, přesto je nutné dynamické pozorování po antisyfilitické léčbě.

Reakci RIBT je vhodné provést nejdříve 30 dní po ukončení léčby. RPHA - pasivní hemaglutinační reakce - odkazuje na treponemální testy a provádí se v kombinaci s netreponemovými testy. Používá se k potvrzení diagnózy syfilis v jakékoli fázi.

Reakci je vhodné provést 4 týdny po očekávané infekci. Při provádění reakce se do krevního séra pacienta přidá lék připravený z červených krvinek živočišného původu, senzibilizovaný antigenem Treponema pallidum, původce syfilis.

Podstatou RPHA reakce je lepení (aglutinace) za přítomnosti protilátek proti treponemu a tvorba aglutinátu – obrazce, kterou pozoruje laborant. Reakce se hodnotí počtem +: 4+ - silně pozitivní výsledek, 3+ - pozitivní, 2+ - slabě pozitivní, 1+ - pochybný, - - negativní výsledek. Je-li reakce pozitivní, provede se kvantitativní hodnocení ke stanovení koncentrace (titru) protilátek. Jak syfilis postupuje, titr protilátek se neustále zvyšuje.

RPGA zůstává pozitivní po celá desetiletí po léčbě syfilis, a proto nemůže být použit jako kritérium pro jistotu vyléčení. Je však nutné sledovat titr RPHA protilátek v čase.

Metoda je vysoce citlivá. Výsledky RPGA mohou být falešně pozitivní. K takovým výsledkům analýzy mohou vést onemocnění pojivové tkáně, některé infekce atd.

Ve skutečnosti neexistuje pouze jedna analýza – je jich několik. K detekci syfilis se krev testuje několika způsoby. Kromě krve se v laboratorní diagnostice tohoto onemocnění používá další biologický materiál, který obsahuje patogen, spirochétu pallidum (syn. - treponema pallidum).

Jedná se o výtok ze syfilidů (specifické ulcerace a vyrážky na kůži a sliznicích), s neurosyfilis - mozkomíšní mok (CSF).

Všechny metody diagnostiky syfilis lze rozdělit na přímé a nepřímé. Přímé metody jsou zaměřeny na přímou detekci Treponema pallidum. Pokud jde o nepřímé, jsou založeny na detekci protilátek proti spirochétě. Existují protilátky, což znamená, že existuje samotná spirocheta. Nepřímé metody diagnostiky syfilis nejsou nic jiného než sérologické reakce, při kterých se jako testovací materiál používá krevní sérum.

Protilátky jsou detekovány, když interagují s antigeny. K provádění sérologických reakcí se používají přípravky obsahující daný antigen. V závislosti na typu tohoto antigenu mohou být sérologické reakce treponemální nebo netreponemální. Antigen specifický pro Treponema pallidum se účastní treponemálních reakcí.

Treponemální reakce zahrnují:

• RSK – reakce fixace komplementu s treponemálním antigenem
• RPHA - pasivní hemaglutinační reakce
• ELISA – enzymatická imunoanalýza
• RIF – imunofluorescenční reakce
• RIBT – imobilizační reakce Treponema pallidum

Netreponemální sérologické reakce zahrnují komplement fixační test s kardiolipinovým antigenem a mikroprecipitační test nebo rychlý plazmatický reagin test.

Kardiolipinový antigen použitý v těchto reakcích není antigen spirochete pallidum. Jedná se o extrakt z hovězího srdce, který má podobnou strukturu jako kardiolipin-fosfolipidový antigen buněčné membrány spirochet.

Proto protilátky produkované, když se objeví původce syfilis, budou také reagovat na tento antigen.

Když lidé mluví o testování na syfilis, mají nejčastěji na mysli tuto metodu, Wassermanovu reakci

Wassermanova reakce (RW)

Když lidé mluví o testování na syfilis, mají nejčastěji na mysli tuto metodu, Wassermanovu reakci. Tuto reakci vyvinul pro diagnostiku syfilis německý imunolog Wasserman před více než stoletím, na samém počátku minulého století. Provádí se však dodnes, i když s výraznými změnami.

V podstatě RW ve své současné verzi odkazuje na RSK. V imunologii se komplementem rozumí systém plazmatických proteinů, které tvoří vrozený imunitní systém. RW je založena na reakci antigenů s protilátkami za účasti komplementu. V séru pacienta se syfilidou jsou přítomny protilátky proti Treponema pallidum. Pokud jsou do takového séra přidány antigeny, protilátky s nimi budou reagovat.

Pro RW se používají hotové sady specifických a nespecifických antigenů. Specifické antigeny byly izolovány z kultur Treponema pallidum pěstovaných na živných médiích.

Nespecifické antigeny jsou reprezentovány bovinním srdečním kardiolipinem. RW lze tedy klasifikovat jako treponemální i netreponemální studie.

Reakce specifických a nespecifických antigenů s protilátkami testovacího séra není zvenčí viditelná. K jeho indikaci se používají ovčí červené krvinky.

Jako součást hemolytického séra imunizovaného králíka se přidávají do testovaného materiálu. Co se stane nakonec?

Pokud je subjekt zdravý, pak v jeho séru nejsou žádné protilátky proti treponemu. Zároveň dochází vlivem komplementu k hemolýze (zničení) ovčích erytrocytů, což je dobře patrné ve zkumavce, jejíž obsah je jednotně zbarven bez sedimentu („lak krev“).

Hemolýza tedy indikuje nepřítomnost protilátek. V tomto případě je reakce negativní.

U pacientů se syfilidou je tomu naopak. V nich je veškerý komplement vázán při tvorbě imunitních komplexů antigenů s protilátkami a, zjednodušeně řečeno, je ho málo na zničení červených krvinek.

Nepřítomnost hemolýzy tedy ukazuje na přítomnost protilátek proti spirochetám, a tedy na syfilis. V tomto případě je reakce pozitivní a je označena znaménkem plus.

Přesněji řečeno, může to mít několik výhod, protože zpoždění hemolýzy má různé stupně závažnosti:

• 1 plus – reakce je sporná
• 2 plusy – reakce je slabě pozitivní
• 3 plusy – pozitivní reakce
• 4 plusy – reakce je ostře pozitivní.

V lékařském slangu se plusy v tomto případě nazývají křížky a výsledek je podle toho označen: +, ++, +++ nebo ++++.

Technika RW je poměrně jednoduchá, levná, zabere málo času a nevyžaduje složité laboratorní vybavení. Proto se tato reakce uchýlí všude, a to nejen za přítomnosti specifických indikací (podezření na syfilis, přítomnost charakteristických příznaků).

Provádí se jako screeningová metoda při běžných lékařských prohlídkách, u těhotných žen při registraci a u všech pacientů během hospitalizace.

Mezitím tato technika není bez významných nedostatků. Za prvé, ne vždy dává pozitivní výsledek v případě existující syfilis. Protilátky se totiž netvoří hned, ale až po nějaké době.

Toto období, kdy nejsou žádné protilátky, se nazývá séronegativní období syfilis a trvá 5-8 týdnů. od okamžiku infekce.

A séropozitivní období syfilis začíná již na konci primární syfilis. Sekundární syfilis je téměř vždy séropozitivní a terciární komplikovaná syfilis může být séronegativní. V tomto případě to vůbec neznamená, že Treponema pallidum v těle není. Jde jen o to, že imunitní systém se po mnoho let vyčerpal a protilátky se přestaly uvolňovat.

Na druhou stranu v některých případech i po úspěšné léčbě syfilis mohou 1-2 křížky v rozboru přetrvávat řadu let a někdy i doživotně.

Počet křížení u RW tedy nezávisí na aktivitě Treponema pallidum a závažnosti syfilis. K tomuto účelu se používá další indikátor - titr protilátek. Toto je maximální stupeň ředění séra, při kterém dochází k ostře pozitivní reakci.

Další nevýhodou RW je její nízká specificita s častými falešně pozitivními výsledky při opožděné hemolýze při absenci syfilis.

Mezi důvody falešně pozitivních výsledků patří jiné bakteriální a virové infekce, systémová kolagenóza, těhotenství, alkoholismus, drogová závislost, léky, dietní chyby a mnoho dalšího. Proto je velmi důležité se na analýzu řádně připravit.

7-10 dní před odběrem krve přestaňte užívat antibiotika. Během posledních 24 hodin byste se měli zdržet konzumace velkých, tučných jídel a alkoholu.

Krev pro analýzu se odebírá ze žíly nalačno. Negativní výsledky v nepřítomnosti charakteristických klinických projevů ve formě chancre ukazují s vysokou mírou jistoty nepřítomnost syfilis. Pokud je přítomen alespoň jeden z křížů, uchýlí se k jiným diagnostickým metodám.

Pasivní hemaglutinační reakce spočívá ve slepení nebo aglutinaci červených krvinek.

Pasivní hemaglutinační reakce (RPHA)

Pasivní hemaglutinační reakce spočívá ve slepení nebo aglutinaci červených krvinek. Treponemální antigeny jsou fixovány na červené krvinky použité v této reakci. K tomuto materiálu se poté přidá testovací sérum.

Pokud obsahuje protilátky, interagují s antigeny na červených krvinkách, což vede k jejich aglutinaci. Aglutinace tedy indikuje pozitivní RPHA a existující syfilis a nepřítomnost aglutinace a negativní RPHA ukazuje, že subjekt je zdravý. Zde jsou také 4 stupně pozitivních výsledků s různými titry protilátek.

Citlivost RPGA je ve srovnání s RW vyšší. Tento test je však negativní na samém počátku onemocnění, během prvních 2-4 týdnů, někdy i 6 týdnů. Následně v sekundárním a terciárním období je RPGA vždy pozitivní, stejně jako u latentní syfilis.

Proto ji lze použít k diagnostice onemocnění bez jasných klinických projevů. Stejně jako jiné treponemální studie zůstává RPGA pozitivní po celý život, dokonce i po úplném uzdravení. Proto ji nelze použít k posouzení adekvátnosti léčby syfilis.

Může se stát negativní pouze v případech, kdy léčebná opatření začala, jakmile pacient onemocněl syfilis.

RPGA také poskytuje falešně pozitivní výsledky u některých onemocnění a patologických stavů. Falešně pozitivní výsledky se liší od skutečně pozitivních v tom, že se stanou negativními velmi rychle, po několika týdnech nebo měsících.

Navíc k tomu dochází spontánně, dokonce i bez specifické léčby. RPGA také odkazuje na screeningové diagnostické metody. Pokud je výsledek pozitivní, provádějí se další treponemální testy.

Enzymová imunoanalýza je také založena na reakci antigen-protilátka.

Enzymová imunoanalýza ELISA

Enzymová imunoanalýza je také založena na reakci antigen-protilátka. Treponemální antigeny jsou fixovány na povrchu jakéhokoli pevného materiálu.

Zpravidla se jedná o polystyren, ze kterého se vyrábí moderní testovací systémy, které vypadají jako desky s jamkami. Do těchto jamek se přidá testovací sérum. Pokud toto sérum obsahuje protilátky, tvoří komplexy s antigeny testovacích systémů.

Žluté zbarvení testovaného materiálu indikuje přítomnost protilátek. Čím více těchto protilátek, tím intenzivnější je barvení.

Protilátky patří k imunoglobulinům (Ig) a jsou zastoupeny několika odrůdami - IgA, IgM a IgG. Jejich počet není v různých obdobích onemocnění stejný. Prevalenci jednoho nebo druhého Ig lze tedy použít k posouzení délky trvání onemocnění.

ELISA se stává pozitivní již po 3 týdnech a může tak zůstat po zbytek života. Časté jsou zde ale i falešně pozitivní výsledky, což je značný nedostatek.

Mezi výhody ELISA patří dostupnost metody a možnost provést velké množství studií v relativně krátkém čase.

Imunofluorescenční reakce je založena na světelné indikaci komplexu antigen-protilátka

Imunofluorescenční reakce (RIF)

Imunofluorescenční reakce je založena na světelné indikaci komplexu antigen-protilátka. Existující antigen se smíchá s testovacím sérem. Pokud jsou přítomny protilátky, tvoří imunitní komplexy s antigeny.

Poté se do diagnostického materiálu přidá protidruhové králičí sérum obsahující fluorescein, látku zářící v ultrafialovém světle. Záře je detekována při pozorování fluorescenčním mikroskopem.

V závislosti na intenzitě záře, jejíž barva se mění od sotva patrné po žlutozelenou, existují 4 stupně pozitivního RIF.

Výhodou této metody je její specificita a citlivost. U existující syfilis dává RIF pozitivní výsledek na samém začátku onemocnění, již do konce 1 týdne. infekce, ještě předtím, než se objeví chancre.

Falešně pozitivní výsledky nejsou prakticky detekovány. Mezi nevýhody této metody patří technické potíže a potřeba speciálního vybavení.

Proto se k RIF uchýlí, když jsou výsledky jiných testů, které vyžadují objasnění, pozitivní.

Imobilizační reakce Treponema pallidum je založena na fenoménu imobilizace, imobilizace patogenu v přítomnosti testovaného séra.

Treponema pallidum imobilizační reakce (TPI)

Imobilizační reakce Treponema pallidum je založena na fenoménu imobilizace, imobilizace patogenu v přítomnosti testovaného séra. Sérum pacienta se syfilidou obsahuje imunoglobulinové protilátky, které se pro svou schopnost imobilizovat spirochety nazývají imobiliny.

Imobilisiny se uvolňují mnohem později než jiné protilátky a RIBT dává pozitivní výsledek až po 3 měsících. po infekci.

Metoda je spolehlivá, vysoce citlivá a mohla by být použita v případě falešně pozitivních výsledků v jiných studiích. Je však technicky složitý, jeho dokončení trvá dlouho, vyžaduje drahé vybavení a speciálně vyškolený personál.

Proto se RIBT, vyvinutý v polovině minulého století, v současné době v klinické praxi nepoužívá. Provádí se pouze pro výzkumné účely.

Mikroreakce precipitace má jiný název - rychlý plasmový reagin test

Mikroreakce MP precipitace

Precipitační mikroreakce má jiný název - rychlý plasmový reagin test. V reakci na poškozené součásti tkáňových buněčných membrán nebo na součásti membrán samotných treponémů imunitní systém uvolňuje protilátky zvané reaginy.

Tato diagnostická metoda je založena na detekci těchto reaginů. K danému antigenu, který zahrnuje cholesterol, kardiolipin a lecitin, se pro indikaci přidávají částice dřevěného uhlí.

Antigen se poté smíchá s testovacím sérem. Pokud obsahuje reaginy, dochází k flokulační reakci s tvorbou vločkovitého sedimentu, který má černou barvu kvůli přítomnosti částic uhlí.

Pozitivní výsledek MP lze pozorovat nejdříve za 4–5 týdnů. po infekci. Stejně jako u jiných sérologických reakcí mohou existovat různé stupně závažnosti a různé titry reaginových protilátek.

S rozvojem patologického procesu se titr protilátek zvyšuje, ale v pozdějších fázích se snižuje a reakce se stává slabě pozitivní nebo pochybná. Kromě toho má tato výzkumná metoda také mnoho falešně pozitivních výsledků.

Mezi výhody patří skutečnost, že na základě rychlého plazmatického reagin testu lze posoudit průběh onemocnění a účinnost jeho léčby. Zde se totiž používá netreponemální antigen a po zničení treponemu je výsledek MP negativní, zatímco u jiných sérologických reakcí s treponemálními antigeny může přetrvávat doživotně.

Tato metoda kombinuje elektroforézu a ELISA. Treponema pallidum se elektroforézou rozdělí na antigenní frakce. Poté je výsledný materiál ošetřen sérem pacienta, které v případě syfilis obsahuje specifické imunoglobuliny IgM a IgG. Poté se přidá sérum s protilátkami proti těmto imunoglobulinům značeným radioizotopy nebo enzymy.

V tomto případě mají oblasti obsahující tyto imunoglobuliny podobu charakteristických pruhů. Imunoblotting je moderní metoda diagnostiky syfilis, která byla vyvinuta relativně nedávno. Je citlivý a spolehlivý, ale vyžaduje drahé vybavení, a proto není levný.

V současné době se imunoblotting používá především k diagnostice vrozené syfilis.

Mikroskopie

Při standardní mikroskopii je obtížné rozlišit spirochety, protože velmi špatně se barví. Proto se spirochétě říkalo bledá. Mikroskopie se nejlépe provádí pomocí mikroskopu v tmavém poli.

Na rozdíl od běžného mikroskopu je zde boční osvětlení zaostřeno tak, aby zvýraznilo světelné treponémy na tmavém pozadí.

Materiálem pro studii je výtok chancre a prvky kožní vyrážky. Mikroskopie v tmavém poli se proto používá hlavně k diagnostice primární a sekundární syfilis.

Ve fázi terciární syfilis, komplikované neurosyfilis, lze v mozkomíšním moku nalézt treponemy a v vrozené syfilis - v tkáni pupečníku.

Vizuální detekce treponem je spolehlivým příznakem syfilis. Patogen však nemusí být detekován vždy, ale pouze v 80 % případů.

Při dlouhodobé syfilis se specifickou léčbou a léčbou patologických oblastí kůže a sliznic antiseptiky se snižuje pravděpodobnost detekce treponémů v mikroskopu v tmavém poli.

Pro efektivnější diagnostiku lze treponémy léčit fluorescenčními protilátkami, které se na ně fixují a dále zesilují záři. Tato metoda však vyžaduje dodatečné náklady na materiál.

Polymerázová řetězová reakce (PCR)

Polymerázová řetězová reakce (PCR)

Polymerázová řetězová reakce je založena na detekci mikrobiálního patogenu (v tomto případě treponemu) jeho DNA. Veškerý genetický materiál se mnohonásobně rozmnožuje za účasti enzymu DNA polymerázy. DNA treponema je pak nalezena pomocí elektroforézy.

Citlivost PCR je maximální, protože detekce řetězce mikrobiální DNA ukazuje na syfilis. PCR lze použít k diagnostice jakéhokoli stadia syfilis.

V závislosti na stadiu onemocnění a jeho komplikacích může být rolí biologického materiálu krev, moč, mozkomíšní mok, tkáň lymfatických uzlin a výtok syfilis. Citlivost těchto materiálů na PCR se může lišit.

Většina treponem se nachází ve výtoku syfilidů a v uretrálním nebo vaginálním nátěru nemusí být vůbec detekována. Po úspěšné léčbě navíc v těle často nějakou dobu zůstávají fragmenty mrtvých treponémů, jejichž DNA se identifikuje i pomocí PCR.

Proto nelze pomocí této metody vždy určit, zda se jedná o aktivní fázi onemocnění nebo zda je již ve stádiu hojení. PCR je však nejúčinnější metodou pro diagnostiku syfilis. Jeho použití brání složitost provedení a potřeba drahého vybavení.

Která analýza je nejlepší?

Vše závisí na stadiu onemocnění. Pro primární séronegativní syfilis je nejvýhodnější mikroskopie v tmavém poli a RIF. Dále se pro primární séropozitivní a sekundární syfilis provádějí RW a ELISA a pro vyloučení falešně pozitivních výsledků jsou doplněny RPGA.

V terciárním období je RW negativní a RPG a ELISA jsou pozitivní. Pro vyloučení falešně pozitivních výsledků jsou doplněny o RIF. K diagnostice vrozené syfilis se vyšetřuje matka i novorozenec. Žena je vyšetřena na RW, RPGA a RIF. U novorozence může být diagnóza doplněna imunoblotem. Ve všech kontroverzních případech se používá PCR.

Vážení návštěvníci stránek Farmamir. Tento článek nepředstavuje lékařskou radu a neměl by sloužit jako náhrada konzultace s lékařem.