Имуноблотингът (imunoblotting) е високоспецифичен и високочувствителен референтен метод, който потвърждава диагнозата при пациенти с получени положителни или неопределени резултати от изследването, вкл. използвайки RIGA или ELISA. Имуноблотингът е вид хетерогенен имуноанализ.
Този метод за откриване на антитела към отделни антигени на патогена се основава на извършване на ELISA върху нитроцелулозни мембрани, върху които се нанасят специфични протеини под формата на отделни ивици, разделени чрез гел електрофореза. Ако има антитела срещу определени антигени, в съответното място на лентата се появява тъмна линия. Уникалността на имуноблота се състои във високата му информативност и надеждността на получените резултати.
Материалът за изследването е човешки серум или плазма. За изследване на една лента са необходими 1,5-2 ml кръв или 15-25 µl серум.
Laboratory Diagnostics LLC използва комплекти за имуноблотинг за откриване на антитела срещу патогени на различни заболявания от EUROIMMUN (Германия), MIKROGEN (Германия):
HSV 1 и HSV 2 IgM/IgG(херпес вирусна инфекция)
CMV IgM/IgG(цитомегаловирусна инфекция)
Рубеола IgG
TORCH IgM профил(Токсоплазмоза, рубеола, цитомегаловирус, HSV 1 и HSV 2)
EBV IgMTIgG(инфекция с вируса на Epstein-Barr)
HCV IgG(вирусен хепатит С)
Използват се два вида комплекти - Western blot и линейно петно.
Western blot:Комплектите съдържат тест мембранни ленти с електрофоретично разделени нативни антигени на съответните инфекциозни агенти, т.е. антигените са подредени по реда на молекулното тегло. 1-2 допълнителни линии с клинично значими антигени (Western line blot) също могат да бъдат нанесени върху мембраните. Това е надежден потвърждаващ метод, който елиминира фалшивите положителни отговори и кръстосани реакции.
Линия петно:В този случай само клинично значими антигени (нативни, синтетични или рекомбинантни) се нанасят върху мембраните на тест лентата в определен ред. Този подход се използва при диференциална диагноза на няколко инфекции на една лента.
Същността му се състои в прехвърлянето на молекули на изследваното вещество от един твърд носител, използван за фракциониране на биополимери, в друг, където те се идентифицират специално с помощта на имунохимична реакция. Съвременният високочувствителен метод се състои в идентифициране на протеини, включително вирусни антигени. Методът се основава на комбинация от гел електрофореза и реакция антиген-антитяло. Висока степен на разделителна способност се постига чрез електрофоретично разделяне на протеини, глико- и липопротеини и максимална специфичност на откриване на имунни серуми или моноклонални антитела. При оптимални условия имуноблотингът може да открие антиген в количества под 1 ng в тестовия обем. Технически, имуноблотингът се извършва в три стъпки:
1) протеините за анализ се разделят в полиакриламиден гел в присъствието на денатуриращи вещества: натриев додецилсулфат или урея, този процес често се нарича SDS-PAGE; отделените протеини могат да бъдат визуализирани след оцветяване и сравнени с референтни проби;
2) отделените протеини се прехвърлят от гела чрез наслагване (попиване) върху
нитроцелулозен филтър и фиксиран върху него; в много случаи, но
Количествените съотношения на протеините не винаги се запазват по време на трансфера;
3) към филтрите се прилагат поли- или моноклонални детектори
антитела, съдържащи радиоизотопен или ензимен маркер; За
за откриване на свързани антитела се използва и антивидов анализ
белязан серум, с други думи, в последния етап на блотиране
подобни на твърдофазните имуноанализи.
Трябва да се има предвид, че в тази настройка за имуноблотинг протеините са в денатурирано състояние и следователно може да не бъдат разпознати от антитела, специфични за нативния протеин, но в присъствието на серуми за всички съставни пептиди, целият антигенен спектър на тестовият протеин се открива едновременно. Имуноблотингът се използва доста широко в изследванията на структурата на вирусите на хепатит, по-специално за установяване на антигенната връзка между отделните щамове. Високата разделителна способност на имуноблотинга позволява да се получат добри резултати в диагностичната практика, когато е необходимо да се идентифицира вирусът в тъканите или екскретите на пациент.
В зависимост от изследваното вещество се разграничават ДНК, РНК и протеин - блотиране.
Имунохимичното откриване на антигени може да се извърши с помощта на антитела, конюгирани с етикет. Напоследък или радиоактивни изотопи, или ензими (пероксидаза, алкална фосфатаза, лактамаза и др.) са широко използвани като етикети.
Времето за блотинг чрез дифузия е 36-48 часа, но най-бързият и ефективен начин за прехвърляне на протеини от гелове е електроблотингът, който обикновено отнема 1-3 часа, за някои високомолекулни протеини отнема повече от 12 часа.
Специфичният избор на сорбенти за различни модификации на петна (нитроцелулоза или хартия, обработена по съответния начин), изборът на блокиращи условия и имунохимично откриване на антигени зависи изцяло от антигена, неговото количество, метода на имуноанализ и целите на изследването.
Способността за откриване на антитела към специфични антигени на патогена позволява да се оцени значимостта на тези антитела (специфичност за даден етиологичен агент) и да се изключи реакцията към кръстосани антигени. Това отличава имуноблотинга от ELISA, където различни комбинации от антигенни детерминанти могат да се използват като антиген – както специфични, така и не, даващи кръстосани реакции с други патогени. В друг случай, ако се получи положителен резултат при ELISA, може само да се предположи, че това е следствие от кръстосана реакция, но в случай на имуноблотинг това е убедително
Поради редица причини методът за информационна сигурност е получил най-голямо разпространение като метод, подходящ за използване като тест за потвърждение.
Безспорното предимство на метода е възможността за тестване на антитела към слабо или напълно неразтворими антигени и елиминиране на етапа на въвеждане на радиоактивен етикет в антигените.
Чувствителността в случай на IB се оценява по максималното количество антиген, приложено към гела, което по време на протеиновото фракциониране може да бъде открито имунохимично след прехвърляне от гела към твърдата фаза (нитроцелулоза). Общата чувствителност на анализа зависи от редица фактори: условия на фракциониране и имобилизиране на антигена върху твърд носител, фоново ниво, специфичност и афинитет на антителата. Видът на използвания етикет и методът за идентифицирането му са важни.
По този начин методът на имуноблотинга прави възможно идентифицирането на антигенни зони върху твърдата фаза без свързване на целия протеин със специфични серумни антитела. Имуноблотингът и неговите модификации се използват главно за типизиране на бактериални и вирусни антигени и антитела, особено в случай на недостатъчна разделителна способност на конвенционалните системи, както и при анализ на имуноглобулини, нуклеинови киселини или като потвърждаващ тест в комбинация с други методи.
Има големи трудности при интерпретирането на резултатите от напречното сечение в реакциите и в случаите на началните етапи на сероконверсия. В първата ситуация, по време на повторно изследване след определен период от време, не се откриват антитела, но във втория имуноблот се появяват нови ивици, показващи появата на антитела срещу HIV протеини или гликопротеини, характеризиращи динамиката на отговора на имунната реакция към вирусни антигени.
Това всъщност е последният метод за проверка във веригата от серологични изследвания, който позволява да се направи окончателно заключение относно ХИВ позитивността на пациента или да се отхвърли. За извършване на IB се използват нитроцелулозни ленти, върху които HIV протеините предварително се прехвърлят чрез хоризонтална и след това вертикална имунофореза в ред на увеличаване на молекулните тегла. Антителата в тестваните серуми взаимодействат с протеини в определени области на лентата. По-нататъшният ход на реакцията не се различава от този за ELISA, т.е. включва третиране на лентата с конюгат и хромогенен субстрат, измиване на несвързаните компоненти и спиране на реакцията с дестилирана вода. Предварителното електрофоретично разделяне на протеини и тяхното фиксиране върху нитроцелулоза прави възможно идентифицирането на антитела срещу специфични протеини в съответствие с наличието (или отсъствието) на оцветяване (сивкаво-синьо) на съответните зони на лентата. Имуноблотингът не може да се използва за масови скринингови изследвания поради високата цена и е метод за индивидуален арбитраж в последния етап на серологично изследване.
Съществува доста ясна корелация между резултатите от серумния тест в IB и ELISA. Серумите, които са два пъти положителни при ELISA (в различни тестови системи), след това се интерпретират в IB като ХИВ-позитивни в 97-98% от случаите. Серумите, които са положителни при ELISA само в една от двете използвани системи за тестване, се оказват HIV-позитивни при IB не по-често от 4% от случаите. При провеждане на потвърждаващи изследвания около 5% от IB могат да дадат така наречените „неопределени“ резултати, които по правило съответстват на положителен ELISA, но не и на RIP. В приблизително 20% от случаите "неопределените" IB са причинени от антитела срещу HIV-1 gag протеини (p55, p25, p18). Ако се получат съмнителни резултати от имуноблотинг, изследването трябва да се повтори след 3 месеца и ако резултатът остане несигурен, след 6 месеца.
Радиоимуноанализ (RIM) (радиоимуноанализ, RIA)Радиоимуноанализът е метод за количествено определяне на биологично активни вещества (хормони, ензими, лекарства и др.) в биологични течности, базиран на конкурентно свързване на желани стабилни и подобни радионуклидно маркирани вещества със специфични системи за свързване. Последните най-често са специфични антитела. Поради факта, че белязаният антиген се добавя в определено количество, е възможно да се определи частта от веществото, която е свързана с антителата, и частта, която остава несвързана в резултат на конкуренция с открития небелязан антиген. Изследването се провежда ин витро. За Р. а. произвеждат стандартни набори от реактиви, всеки от които е предназначен да определя концентрацията на едно вещество. Изследването се провежда на няколко етапа: биологичен материал се смесва с реактиви, сместа се инкубира в продължение на няколко часа, отделят се свободни и свързани радиоактивни вещества, извършва се радиометрия на пробата и се изчисляват резултатите. Методът е с висока чувствителност, може да се използва при диагностика на заболявания на сърдечно-съдовата, ендокринната и други системи, за установяване на причините за безплодие, нарушения на развитието на плода, в онкологията за определяне на туморни маркери и проследяване на ефективността на лечението, за определяне концентрацията на имуноглобулини, ензими и лекарствени вещества. В някои случаи изследванията се провеждат на фона на стрес функционални тестове (например определяне на нивата на инсулин в кръвния серум на фона на тест за глюкозен толеранс) или в динамика (например определяне на половите хормони в кръвта по време на менструалния цикъл).
С помощта на търговски комплект от ABBOTT - Австрия II-I 125 е възможно да се открие HBsAg в концентрации до 0,1 ng/ml. Предимствата на метода включват възможността за стандартизиране и автоматизиране на метода с получаване на отговори в цифрово изражение. Недостатък на метода са ограниченията, определени от начина на работа с радиоактивен материал и относително краткия срок на годност на диагностичния комплект, който е свързан с разпадането на радиоактивния етикет.
Диагностични комплекти за идентифициране на различни антигени на вируси на хепатит А, В и D и антитела към тях се произвеждат от Изотоп (Ташкент) и някои чуждестранни компании (например ABBOTT). Като твърда фаза се използват топки от полистирол („EBBOTT“) или епруветки („Изотоп“). За маркиране на антитела или антигени най-често се използва изотопът I 125, който има период на полуразпад 60 дни и висока специфична радиоактивност. Измерването на радиоактивен индикатор, т.е. радиация, се извършва на специални броячи - радиоспектрометри. Преброяването на радиоактивните импулси както в контролните, така и в тестовите проби се извършва в едно фиксирано време, обикновено в рамките на 1 минута. При анализиране на резултатите от реакцията е необходимо да се вземе предвид наличието на фонова радиоактивност, която може да повлияе на крайния резултат от реакцията. Причините за повишения фон могат да бъдат: замърсяване на контейнера или гнездото за пробата; неправилни настройки на устройството; наличие на източник на силна радиация в близост до устройството.
За потвърждаване на положителен резултат, получен по време на първоначалния скрининг на пробите, се препоръчва повторно тестване с RIA или алтернативен тест. Ако се открие HBsAg, трябва да се направи тест за потвърждение.
Таблица 1. Класификация на ваксините
Библиография:
Задължителен:
1. Хайтов Р.М., Игнатиева Г.А., Сидорович И.Г. Имунология: Учебник.-М.: Медицина, 2000.- 432 с.: ил. (Учебник за студенти от медицинските университети).
2. Ковалчук Л.В. Имунология: семинар: учебник. ръководство – М.: GEOTAR-Media, 2012. – 176 с.
3. Поздеев О.К. Медицинска микробиология / изд. акад. RAMS V.I. Покровски - М.: GEOTAR-Media, 2001. – 768 с.
4. Борисов Л.Б. Ръководство за практически занятия по микробиология. М. 1997 г
Допълнителен:
1. Genkel P.A., Микробиология с основите на вирусологията. М., 1974
2. Коротяев А.И., Бабичев С.А. Медицинска микробиология, имунология и вирусология: учебник за мед. университети 3-то издание, преработено. и допълнителни – Санкт Петербург, СпецЛит. 2002. – 591 с.
3. Борисов Л.Б., Смирнова А.М., Медицинска микробиология, вирусология, имунология, М., Медицина. 1994 г
4. Тимаков В.Д., Левашов В.С., Борисов Л.Б. микробиология. М. 1983 г
ХИВ имуноблотът открива антитела срещу вирусни протеини, поставени върху специална нитроцелулозна мембрана. Това е изключително точно изследване, което идентифицира наличието на фракции, в които основните протеини са разположени под формата на малки ленти.
Обвивката на вируса HIV-1 съдържа гликопротеини с молекулно тегло, вариращо от 41 kd до 160 kd (килодалтона). От голямо значение за имуноблотинга е HIV-2 гликопротеинът с молекулно тегло от 32 kd до 140 kd. HIV-1 основните протеини и вирусните ензими са представени от протеини p17, p24, p55.
Причинителят на HIV-2 се състои от протеини, обозначени като p16, p25, p56. Те образуват вътрешната му обвивка. Геномът включва 6 регулаторни и 3 структурни гена. Често по време на клетъчното делене възникват генетични неточности и се появяват няколко подвида на патогена.
Положителни тестове
За да се премахнат грешките в лабораторната диагностика на HIV инфекцията, на пациента се предписва допълнителен тест. Резултатите от него се интегрират като положителни, ако се открият антитела срещу 2 или 3 протеина на HIV-1 или HIV-2.
Имуноблотът потвърждава всички добри резултати от ELISA. В този случай се откриват антитела към gp120/160, gp41 или p24, които са структурни единици на трите основни гена на СПИН - gag, pol и env. При някои пациенти, които имат отрицателни резултати от ELISA и PCR, имуноблотът показва няколко положителни ивици. Лекарят предписва допълнителен тест p24, за да постави правилна диагноза и да изключи ранната фаза на HIV инфекцията.
Ако получените резултати са съмнителни, пациентът е помолен да повтори теста през следващите 3 месеца. Почти всички случаи на ХИВ се потвърждават с помощта на имуноблотинг система - устройство на Санофи. В повечето случаи се откриват HIV антигени, протеини p25, gp110/120 и gp160, което показва инфекция с вируса. Фалшиво положителен тест се регистрира при пациенти, страдащи от заболявания на съединителната тъкан с повишени нива на билирубин при взаимодействие с различни вирусни антигени.
Отрицателен резултат
Ако има липса на положителни линии, съответстващи на протеините на вируса на СПИН, имуноблотът се интерпретира като отрицателен резултат. Анализът ясно потвърждава липсата на инфекция с вируса на имунната недостатъчност или показва „период на прозореца“. Ако имуноблотът даде отрицателен резултат, лицето не е носител на вируса на СПИН.
За изследването се вземат проби от кръвен серум от HIV-инфектирани пациенти. Съхраняват се замразени при -20°C. Анализът се извършва с помощта на тестови системи:
- антиген;
- Рекомбинантен-HIV;
- Пептоскрийн.
Регистрирането на отрицателен резултат показва липсата на антитела срещу гликопротеините на обвивката на HIV gp120, gp160, Sp41 в серума.
Често пациентът се интересува от въпроса дали пациент, който има заразен сексуален партньор, може да има отрицателен резултат от имуноблот за ХИВ. След изследването често се получава съмнителен резултат или се откриват антитела към протеините gp120 и gp160, което показва пълна липса на отрицателни данни. Понякога се регистрира съмнителен отговор при пациенти с асимптоматична инфекция.
Неинтерпретируеми резултати
Тестовете, извършени с различни тестове за антитела срещу HIV, понякога са отрицателни и не отговарят на критериите за серопозитивност. За лекаря е трудно да определи причината за съмнителен резултат.
Някои пациенти не са изложени на риск от ХИВ инфекция. Лекарят може да направи грешки при тълкуването на резултатите от теста, ако инфекцията е причинена от различен серотип.
Кръвният серум на пациента трябва да се изследва с течение на времето. Ако в рамките на 6 месеца не се наблюдават клинични прояви на СПИН и няма рискови фактори, пациентът се записва като без инфекция.
При пациенти с нисък риск от инфекция се получават съмнителни резултати. В някои случаи появата на неясни данни се причинява от имунни комплекси и автоантитела, съдържащи се в кръвния серум.
При някои пациенти появата на съмнителни резултати е причинена от развитието на патологични процеси:
- инфекциозни заболявания;
- раков тумор;
- алергична реакция.
Пациентът изпитва промени в клиничния кръвен тест, повишаване на С-реактивния протеин или повишаване на ESR. При хора, страдащи от инфекциозни заболявания, често се открива съмнителна имуноблот реакция към ХИВ.
Пациенти с неопределен резултат не могат да даряват кръв и биологични материали.
Линеен метод
Принципът на имуноблотинг включва:
- Използване на нативно вирусно вещество HIV формат или антигени във формат Western Blot.
- Комбинацията от HIV протеини с индивидуални антитела, открити в кръвния серум.
- Инкубационният процес, който протича с добавянето на белязани антитела към човешки Ig.
- Тълкуване на цветни ивици.
Анализът позволява на лекаря своевременно да интерпретира резултатите от изследването. Положителният блот се дешифрира като 2ENV+/- GAG+/POL, неопределен - 1 ENV+/- GAG+/POL. Отрицателен резултат означава липса на ивици.
За извършване на анализа се използват рекомбинантни и лизатни имуноблоти. Изследването е специфично и е 99,5%.
Пациентите се чудят дали резултатът от теста може да се тълкува като фалшив. Получените данни могат да бъдат генерирани в резултат на стимулиране на защитните сили на организма (бременност, хемодиализа). Ако се подозира остър ретровирусен синдром и се препоръчва контакт с пациент с HIV инфекция, на пациента се препоръчва да дари серум за PCR реакция. Повторното серологично изследване се потвърждава чрез измерване на вирусния товар в предоставената проба от биологичен материал.
Диагностика на ХИВ при новородени
Тестът за СПИН при малко дете се извършва, ако се установи контакт с HIV-инфектирана майка. Серологичните реакции могат да бъдат положителни за 1,5 години. Антителата в кръвния серум на новородено се откриват с помощта на ELISA, RIF и имуноблотинг реакции.
По време на 9 месеца от живота на детето се появява положителен резултат поради наличието на майчини антитела в кръвния серум. Антигенът p24 има специфичност от около 65%. В някои случаи не е възможно да се открият антитела при болно дете, ако той е диагностициран с вродени ниски нива на глобулини в кръвта. Установеният отрицателен резултат от имуноблот не гарантира липсата на инфекция.
Тестването се извършва на няколко етапа:
- 1-2 дни след раждането;
- на 1-2 месеца;
- на шестмесечна възраст.
По-нататъшно изследване на антителата се провежда до получаване на 2 отрицателни резултата от имуноблот. Диагнозата СПИН при дете, родено от HIV-инфектирана жена, е възможна въз основа на 2 положителни PCR резултата. Предаването на HIV патогена на новородено е изключено, ако жената не кърми.
Тест за бременност
На бъдещата майка се предписва имунна и линейна блотинг, ако се получи положителен резултат за ХИВ чрез ELISA. Ако петното се потвърди, пациентът има СПИН. В този случай, като се започне от 14-та седмица на бременността, се предписва терапия за предотвратяване на инфекция на детето.
Може ли специалист да направи грешка при извършване на тест за кръвен серум по време на бременност, пациентите питат своя лекуващ лекар. Той е длъжен да даде на бременната жена копия от PCR и ELISA тестове, за да премахне съмненията относно тяхната надеждност.
Понякога възникват проблеми при извършване на имуноблотинг, но ако ELISA, блот и PCR са положителни, диагнозата HIV инфекция е окончателно потвърдена. Вероятността от получаване на фалшиво положителен тест по време на бременност е висока. Ако ELISA е (+), а имуноблотът е (-), жената е помолена да вземе отново кръвния серум.
Обменната карта на бременната жена показва резултата от изследването. Ако стойността му е положителна, на жената е забранено да храни детето си след раждането, за да не я зарази с вируса на СПИН. Окончателните заключения се правят въз основа на лабораторни, клинични и епидемиологични изследвания. Само след дешифрирането им пациентът се диагностицира с ХИВ инфекция.
Във връзка с
Когато ме изследваха за полово предавани болести, реших да се изследвам за ХИВ. На следващия ден получих готови тестове за ifa с изключение на ХИВ и накрая ми поставиха диагноза хламидия. Херпес и микроплазмоза. Но ХИВ така и не дойде. Обаждат ми се след 3 дни и ми казват, че трябва да дойдеш в центъра за СПИН, за да ти прехвърлят кръвта. Взех имуноблота и имуноблота показа положителен резултат. Може ли imunablot да бъде фалшиво положителен за заболявания хламидия микраплазмоза HPV херпес
Експерти на Woman.ru
Разберете мнението на експерт по вашата тема
Анастасия Шестерикова
Русина Ирина Владимировна
Психолог, облекчаване на стреса. Специалист от сайта b17.ru
Олга Юриевна Диганаева
Психолог. Специалист от сайта b17.ru
Олга Борисенко
Психолог, гещалт терапевт. Специалист от сайта b17.ru
Дмитрий Валериевич Тишаков
Психолог, Супервизор, Системен семеен терапевт. Специалист от сайта b17.ru
Шиян Олга Василиевна
Психолог, Психолог-консултант. Специалист от сайта b17.ru
Оксана Лушанкина
Психолог, семейни отношения. Специалист от сайта b17.ru
Анна Дашевская
Психолог, консултации по Skype. Специалист от сайта b17.ru
Ирина Букина
Психолог. Специалист от сайта b17.ru
Аксенова Анна Михайловна
Психолог, кандидат за групови анализи. Специалист от сайта b17.ru
Не искам да ви плаша, но когато ви извикат в центъра за СПИН, почти винаги е положително, не го повтаряйте, успех на вас, основното е да вземете терапия и да живеете дълго
Един приятел живее с ХИВ от десет години и се грижи за себе си.
Казват, че след три години може да намерят лек.
Във всеки случай не се отчайвайте и не разпространявайте това, лекувайте се
Не, IB не може да бъде фалшиво положителен и никакви полово предавани болести не влияят на този тест; ако е положителен, тогава, уви, имате ХИВ, трябва да наблюдавате имунните си клетки и да започнете терапия навреме.
уви, не ((ако сте били извикани в центъра, тогава определено е ХИВ
Доколкото знам, първите и дори следващите резултати от имуноблот могат да бъдат съмнителни. не е фалшиво положително, а по-скоро съмнително. и след това се предписва повторен анализ. Цитирам текста от сайта:
„Имунният блотинг най-често се използва за потвърждаване на диагнозата HIV инфекция. СЗО счита за положителни серуми, в които чрез имуноблотинг се откриват антитела срещу всеки два протеина от обвивката на ХИВ. Съгласно тези препоръки, ако има реакция само с един от протеините на обвивката (gp160, gp120, gp41) в комбинация или без реакция с други протеини, резултатът се счита за съмнителен и се препоръчва повторно тестване, като се използва комплект от различна серия или от друга компания. Ако и след това резултатът остане съмнителен, изследванията продължават на всеки 3 месеца.”
можете да го гугълнете. Ако е така, надявам се, че не е потвърдено, че сте ХИВ позитивен. но ако се потвърди, знайте, че днес хората живеят с тази диагноза и живеят колкото здрави хора и раждат деца. Основното условие е дисциплината при лечението. здраве за вас!
Антиретровирусна терапия онлайн
Калкулатори
Сайтът е предназначен за медицински и фармацевтични работници 18+
Обяснение на анализа - имуноблот
Моля, помогнете ми да дешифрирам анализа
ENV(GP160)+
ENV(GP110/120)+
ENV(GP41)+
GAG(P55)+
GAG(P40)+
GAG(P25)+
POL(P68)+
POL(P52)+
POL(P34)+
Здравейте! Преди 2,5 години направих тест за ХИВ и имаше този имуноблот:
Gp-160+, Gp-110/120+, Gp-41+, p17+, p25+, p31+, p34+, p52+, p55+, p68+. А ето имуноблота от 30.05.18 г.: Gp-160+, Gp-41+, GAG 1 -, poll+, env2-. Не е ясно какво означава roll+? Само той ли е там или не се е разкрил? А къде отидоха останалите катерици?
Pol и Env са гени, които кодират групи от протеини. Считайте го просто за различен запис. Въпросът е друг. какво чакаме Защо обмисляме петното? Всичко е доста ясно. Нещо трябва да се направи.
Вече свикнах, че имам ХИВ. И готов за терапия.
Просто ми е интересно да чуя вашето мнение. Това скорошна инфекция ли е или пропускам нещо? Или понякога се случва имуноблотът да се отваря много бавно?
Днес погледнах тестовете си в личното си досие (направено в СЦ):
ELISA на първата тест система - положителен
ELISA на втората тест система - отрицателна (как е това?)
Следва IB (направен ин витро и SC преди месец):
имуноблот на първата тестова система: gp 160+, gp 41+
имуноблот на друга тест система: gp41+, p24+, p17+
имуноблот на третата тест система: gp160+, gp120+, gp41+, p24+
Според моите прогнози можеше да се заразя преди година (острата фаза беше април някъде) или преди 9 месеца, но като цяло не знам кога) Винаги използвах защита и правих секс без презерватив само веднъж през есента на 2017г.
Днес пак минах тестовете VN и IS. Ще започна tera след месец, когато пристигне поръчката.
Добавете дати към споменатите тестове.
Първо петно преди ELISA? Не бие. Тук няма смисъл, който да ни позволи да кажем, че е много вероятно нова инфекция или обратното.
Това ще остане загадка, освен ако случайно не намерите източника и го сравните.
Да поясня тогава
Занесох го в Инвитро.
Първият ELISA е на 11 май.
След това същият серум беше блотиран и се появи положителен тест, където бяха открити два протеина.
gp 160+, gp 41+
После пак го занесох в СЦ.
Дарих кръв на 29 май.
И там той беше прокаран през няколко тестови системи, където първата показа отрицателна, втората положителна. Отрицателният ELISA все още е смешен.
След това същият серум отива в петното, откъдето идват данните:
Първа тестова система: gp41+, p24+, p17+
Втора тестова система: gp160+, gp120+, gp41+, p24+
Но не това е важното.
Пристигна нов анализ на IP - 754. Това е обнадеждаващо. VN все още не е готов. Щом пристигне, сигурно вече ще започна да го трия.
80% съм сигурен, че инфекцията е станала преди година. Но фактът, че петното се отваря бавно и ELISA е отрицателен, е странен. Или това е в рамките на нормалното?
Отрицателният ELISA все още е смешен. Иска ми се да знам името на системата, за да мога да го запиша в черна тетрадка. Въпреки че, този момент, ако не вземете теорията с брака, силно благоприятства ранното заразяване.
80% съм сигурен, че инфекцията е станала преди година. Петното е доста лошо за този период. Не невъзможно, но малко вероятно.
В един момент дори започнах да се съмнявам в резултатите от тестовете за ХИВ - така че чакам VN.
Тук се поставя финалната точка на въпроса.
Фактът, че IP-то е нараснало с 200 копия без tera в рамките на месец, също ли се счита за нормално? Сега приемам Ursosan за полип в жлъчния мехур - листовката казва, че лекарството подобрява имунитета.
Необходимо е да се оцени както с относително съдържание, така и да се вземат предвид данните от една лаборатория, като се използва един метод за изчисление. Защото Бог знае какво става с CD4.
Като цяло, CD4 е 780 клетки/μl. VN - 250 копия/мл.
Това е без терапия. Тоест CD4 от 486 скочи на 780 за месец.
VN падна от 550 на 250 копия.
И все пак това не е ли странно или подобни скокове са в рамките на нормалното? Време ли е Теру да започне?)
Здравейте! Взех IFA три пъти, всеки път +, имуноблотът p24+ p18+ дойде от SC. Потенциалният риск беше преди повече от шест месеца. p24 показва, че все още е ХИВ?
Петното е съмнително, повторете след 6-8 седмици. Най-вероятно фалшива тревога.
Добър ден!
Резултатите от теста пристигнаха, включително петното:
Опасен контакт: 24.04.2018г
HIV ELISA тест 23.05.2018 г. (4 седмици от опасен контакт или 29 дни) резултат „+“
ХИВ ELISA тест 28.05.2018 г. (5 седмици от опасен контакт или 34 дни) „повторен“ резултат
HIV ELISA тест 01.06.2018 г. (5 седмици от опасен контакт или 38 дни) резултат „+“
Петното пристигна от първия анализ (05.23.18):
GP160 sl.
P24 seq.
Нови тестове са направени на 06.06.2018 г. ELISA и HIV RNA PCR в местния център за СПИН. Все още чакаме резултатите.
Въпроси относно петното:
1. Ако присъства P24, задължително ли е HIV антиген или такъв протеин може да се открие при други заболявания?
2. Какво означава съкращението “sl” до протеин? Обикновено описаните петна съдържат + или –
3. Какво определя разгръщането на блот? От периода ли зависи или от индивидуалните особености на организма?
4. При такова петно в 4-та седмица от опасен контакт има ли шанс да не е ХИВ?
Приятен ден и благодаря.
1. не, може просто да е подобен протеин от различно естество. 2. слаб. тези. съмнително. 3. условия и изпълнение на индивидуални характеристики, но средно всичко е много близко. 4. Въпросът е грешен, винаги има шанс, докато не се постави диагноза.
Здравейте!
Моля, помогнете ми да навигирам в резултатите от теста и да разбера как да се държа правилно, така че повтарящите се тестове да са правилни.
Тестовете са направени на 25 май 2018 г
IB ХИВ
НОВ LAV BLOT 1 - недефиниран. от 29.05.2018г
IB HIV маркери
gp 160+
gp 120 -
gp 41 -
p55+
p40 —
p24+
стр18 —
стр. 68 —
стр. 52 —
стр. 34 —
ХИВ ELISA
ADVIA Centaur HIV Ag-Ab ELISA реактивност 12.00 положителна. (28.05.2018 г.)
Препоръчва се анализът да се повтори след 2 седмици.
През ноември 2017 г. имаше правна регистрация, след което направих тестове с помощта на тестовата система HIV Ag\Ab Combo Abbott Architect, след което резултатът беше отрицателен.
В същото време направих общ кръвен тест. Лимфоцитите са леко повишени, еозинофилите са точно 0 (но преди имах подобни нива на еозинофили.
Основният въпрос е:
Какви лекарства могат и не могат да се приемат през тези две седмици? (Не искам нищо да „фаулира“)
Периодично имам алергични атаки, обикновено приемам Tavegil. Трябва ли да се изостави?
Мога ли да приемам антибиотици преди изследването? (ако е предписано от лекар за лечение на други инфекции и заболявания)
Имунен блотинг при диагностика на ХИВ
Имуноблотинг (имуноблотинг, уестърн блот, уестърн блот)— съчетава ензимно-свързан имуносорбентен анализ (ELISA) с предварителен електрофоретичен трансфер на вирусни антигени върху нитроцелулозна лента (лента).
В това красиво научно наименование „петно“ най-вероятно се превежда като „петно“, а „западен“ - като „западен“ отразява посоката на разпространение на това „петно“ върху хартията отляво надясно, т.е. географска карта това съответства на посоката от запад на изток ". Същността на метода "имунно петно" е, че имуноензимната реакция се извършва не със смес от антигени, а с HIV антигени, предварително разпределени чрез имунофореза във фракции, разположени според молекулното тегло на повърхността на нитроцелулозната мембрана. В резултат на това основните HIV протеини, носители на антигенни детерминанти, се разпределят по повърхността под формата на отделни ивици, които се появяват по време на ензимно-свързана имуносорбентна реакция.
Имуноблотът включва няколко етапа:
Подготовка на лентата.Вирусът на имунната недостатъчност (HIV), предварително пречистен и унищожен на съставните си компоненти, се подлага на електрофореза и антигените, които съставляват HIV, се разделят по молекулно тегло. След това, използвайки метода на попиване (аналогично на изстискване на излишното мастило върху попивателна подложка), антигените се прехвърлят върху лента от нитроцелулоза, която сега съдържа спектър от антигенни ленти, характерни за ХИВ, който все още е невидим за окото.
Изследване на проби.Тестовият материал (серум, кръвна плазма на пациента и др.) се нанася върху нитроцелулозната лента и ако в пробата има специфични антитела, те се свързват със строго съответстващи (комплементарни) антигенни ивици. В резултат на последващи манипулации резултатът от това взаимодействие се визуализира – става видим.
Тълкуване на резултата.Наличието на ленти в определени области на нитроцелулозната плоча потвърждава наличието в изследвания серум на антитела срещу строго определени HIV антигени.
В момента имуноблотингът (imunoblot) е основният метод за потвърждаване на наличието на вирус-специфични антитела в тестовия серум. В някои случаи на HIV инфекция, преди да настъпи сероконверсия, специфичните антитела се откриват по-ефективно чрез имуноблотинг, отколкото чрез ELISA. При изследване с помощта на метода на имуноблотинг беше установено, че най-често антитела срещу gp 41 се откриват в серума на пациенти със СПИН, а откриването на p24 при хора, изследвани за превантивни цели, изисква допълнителни изследвания, за да се определи дали имат HIV инфекция. Тестовите системи за имуноблотинг, базирани на генетично модифицирани рекомбинантни протеини, се оказаха по-специфични от конвенционалните системи, базирани на пречистен вирусен лизат. При използване на рекомбинантен антиген се образува не дифузна, а ясно очертана тясна антигенна лента, която е лесно достъпна за запис и оценка.
Серумите на индивиди, заразени с HIV-1, разкриват антитела към следните основни протеини и гликопротеини - протеини на структурната обвивка (env) - gp160, gp120, gp41; ядро (gag) - p17, p24, p55, както и вирусни ензими (pol) - p31, p51, p66. Антителата към env са характерни за HIV-2 - gp140, gp105, gp36; gag - p16, p25, p56; pol - стр.68.
Сред лабораторните методи, необходими за установяване на специфичността на реакцията, най-широко признато е откриването на антитела към протеините на обвивката на HIV-1 - gp41, gp120, gp160 и HIV-2 - gp36, gp105, gp140.
СЗО счита за положителни серуми, в които чрез имуноблотинг се откриват антитела срещу всеки два HIV гликопротеина. Съгласно тези препоръки, ако има реакция само с един от протеините на обвивката (gp 160, gp 120, gp 41) в комбинация или без реакция с други протеини, резултатът се счита за съмнителен и се препоръчва повторно тестване с помощта на комплект от друга серия или от друга фирма. Ако и след това резултатът остане съмнителен, се препоръчва наблюдение в продължение на 6 месеца (изследване след 3 месеца).
Наличието на положителна реакция с антигена p24 може да означава период на сероконверсия, тъй като антителата към този протеин понякога се появяват първи. В този случай се препоръчва, в зависимост от клиничните и епидемиологичните данни, да се повтори изследването със серумна проба, взета най-малко 2 седмици по-късно, и това е точно случаят, когато е необходимо изследване на сдвоени серуми при HIV инфекция.
Положителните реакции с gag и pol протеини без реакция с env протеини могат да отразяват ранна сероконверсия и могат също да показват HIV-2 инфекция или неспецифична реакция. Индивиди с тези резултати след тестване за HIV-2 се тестват повторно след 3 месеца (в рамките на 6 месеца).
Въпрос: Повторен тест за ХИВ?
Бях прегледан за полово предавани инфекции (без симптоми - исках доверие в отношенията си с жена). Тестът за ХИВ е положителен. След това на ехограф се установи тумор на бъбрека, който беше отстранен (оказа се злокачествен).
Четох книгата на I.M. Sazonova, тя казва, че злокачественият тумор може да даде положителен резултат от теста за ХИВ.
Може ли това да е точно така или няма какво да се надяваме?
Трябва да проведете контролен тест за ХИВ. Ако първият тест за ХИВ е определен чрез ELISA, тогава резултатът може да е фалшиво положителен. Надеждността му може да се провери чрез по-чувствителен диагностичен метод - PCR (полимеразна верижна реакция), който открива ДНК на вируса в кръвта.
Помогне. 12/16/10 ELISA (+) IB(+) след това от 03/23/11 до 05/19/11 девет отрицателни ELISA (-) и количествен PCR. няма да се определи. през 2002 г., по време на бременност, ELISA беше или (+), или (-), но IB винаги беше (-). от 2004 до 2008 направих ELISA (-) 2 пъти годишно, но на 30.04.08 IFA (+) и IB бяха неопределени. след това отново на всеки 2 месеца си правих ELISA тест винаги (-). и от декември 2010 г. е написано по-горе В същото време никога не съм инжектирал, съпругът ми винаги има ELISA (-). CD4 980 клетки. и кръвният тест за сифилис на 29 април даде 3+++ И след това три пъти. отрицателен на всеки 10 дни. хепатит всички (-). някой имал ли е нещо подобно? Благодаря ти.
Моля, изяснете дали сте били подложени на RIBT (реакция на имобилизация на treponema pallidum) и ако да, какви са резултатите от това изследване.
не, никой не ми предложи да направя такъв анализ. Какво ще покаже? Надявам се, че разбирате, че говорех за тестове за ХИВ. Благодаря ти. Имало ли е подобни случаи във вашата практика? Между другото, информационната сигурност беше неясна през 2008 г., защото... имаше p24/25 протеин. в 2010 IB(+) протеини gp160.41.120 p24.17.31. след това, когато IFA беше отново 3 пъти (-), те ме изпратиха в IB на 4 април. резултатът беше положителен, но протеини gp 120 и 41. останалите са задраскани с червена паста и отдолу в червено IB REPEAT. но PCR ще откаже същия номер. След 4 април направих теста ELISA и вече 4 пъти беше отхвърлен. всичко в скоростния център, включително тестове за антигени и антитела. Сега чакам повторен IB и висококачествен PCR. това е. МНОГО СЪМ УМОРЕН ДА МИСЛЯ И ЧАКАМ. Надявайки се на най-доброто. БЛАГОДАРЯ ТИ. Очаквам с нетърпение вашия отговор.
Ако зададете някакъв въпрос, опитайте следващия път да го формулирате по-конкретно, като изясните диагнозата. RIBT се използва за потвърждаване на диагнозата сифилис. За точно диагностициране на HIV инфекцията антителата срещу HIV в кръвта се определят чрез ELISA и имуноблот. Диагнозата се потвърждава само ако и двата резултата са положителни.
Извинете за неточното формулиране на въпроса. Писах, че през декември тестовете ELISA и Imunoblot за ХИВ се оказаха положителни. но от март насам IFA е отрицателен за ХИВ 9 пъти. Ако съм регистриран в центъра за скорост, това наистина ли се случва? ХИВ винаги е положителен или отрицателен. и как, ако резултатът от HIV ELISA е отрицателен, може да се използва имуноблот? тогава всички ще отрекат ifa, трябва да проверите за имуноблот, така че какво се случва? Нашият център за скорост не може да ми отговори нищо. Затова се обърнах към вас. Благодаря ти.
За съжаление, както ELISA, така и имуноблотът могат да дадат фалшиво положителни резултати. Ето защо диагнозата ХИВ се счита за окончателна само при едновременно откриване на ХИВ с помощта на ELISA и метода на имуноблот.
Здравейте, днес получих резултатите от висококачествен PCR тест за ХИВ - вирусът не беше открит и повторен имуноблот за ХИВ доведе до неопределен поради протеин 41. СПИН ЦЕНТЪР каза, че най-вероятно няма ХИВ, но в моето тяло има тела, подобни по структура на ХИВ. Но какво мислите, като вземете предвид въпросите ми от 15 и 16 юни (вижте по-горе), има ли ХИВ или не? БЛАГОДАРЯ ТИ.
В този случай диагнозата HIV инфекция е съмнителна.
Пишете, че само при едновременно откриване на ХИВ с помощта на IFA и имуноблот диагнозата ХИВ се счита за окончателна. Но какво тогава в моя случай? в крайна сметка всички ще отрекат PCR. и blot и ifa скачат през цялото време. за 9 години. Кажете ми, ако вирусът беше в кръвта ми, тогава неговата РНК и ДНК можеха да бъдат точно определени след толкова години. и може ли инкубационният период или „прозорецът“ да продължи толкова години? Има ли фалшиво отрицателни PCR резултати за ХИВ за такъв период от време? Да, забравих да кажа, че експресните тестове за ХИВ, които правя в ССЗ, винаги са отрицателни или не можете да разчитате на тях? Благодаря ти.
В този случай PCR диагностиката не е основният метод за идентифициране на динамиката на процеса - серологичните методи са по-информативни. В този случай вероятността от фалшиви отрицателни резултати е висока. Експресните тестове за ХИВ имат висок праг на чувствителност, така че те също могат да дадат фалшиво отрицателен резултат.
съжалявам Определено го написах на грешното място. моля отговорете в темата ХИВ или не ХИВ. Благодаря ти.
В случай, че вашият имейл не е получил известие, че сте получили отговор, можете да видите отговора на въпроса си на този адрес http://tiensmed.ru/news/answers/vich-ili-ne-vich-. html
Здравейте! Моля, кажете ми как да се регистрирам в LCD (в момента съм бременна в 10 седмици), направих тестове за ХИВ, преди няколко дни лекарят ми се обади и каза, че предварителните тестове за ХИВ са положителни (първият е направен в Кировоград, но все още няма официален резултат от Киев ), същия ден в нашата градска лаборатория направихме два бързи теста от компанията Pharmaco CITO TEST HIV 1/2, и двата резултата бяха отрицателни, лаборантът каза, че тези тестове са надеждни и не трябва да се притеснявам, тъй като това се случва по време на бременност и тези тестове може просто да се объркат. Лекарят ми каза да даря кръв отново и ми направиха кръвни изследвания още два пъти в различни болници (все още нямам нито един от трите резултата). Много се притеснявам, не съм наркоман, не съм имал съмнителни сексуални връзки и дори да се разболея, боледувам много рядко, всички други изследвания са в норма. Може ли да се вярва на бързите тестове? Това наистина ли се случва по време на бременност? Докторът ме изплаши твърде много. Благодаря ти
На първо място, трябва да се успокоите и да не мислите за лошото. Понякога по време на бременност има фалшиви положителни резултати. Необходимо е да се направи повторен кръвен тест за ХИВ и да се изчакат резултатите от изследването.
Здравейте! Факт е, че преди 2 месеца имах сексуален контакт с момиче (все още се срещаме). след 1,5 седмици температурата се повиши до 37,4. Скоро тя заспа. За да сме сигурни, направихме IFA тест след 2 седмици и отново след 1,5 месеца. И двата отговора са отрицателни. Но все още имам температура и кашлица, с променливо подобрение. Кажете ми, моля, има ли риск? Освен това работих дълго време без почивни дни и преди седмица бях в отпуск по болест (с ТОРС). Кръвните и белодробните изследвания са нормални. Благодаря ти.
Тази температура може да е свързана с вирусно заболяване, тялото все още не се е възстановило или хронична умора. В случай, че се изключи органична патология, общият тест на кръвта и урината е в нормални граници, както и данните от флуорографското изследване също са в нормални граници, тогава е необходимо да се изключат полово предавани болести: хламидия, микоплазмоза, уреаплазмоза, които могат причиняват възпаление на малките органи таза и уретрата и в резултат на това повишаване на телесната температура. Прочетете повече за причините за повишаване на телесната температура, като кликнете върху връзката: Висока температура.
Здравейте. Ето какво: Преди повече от година имах незащитен сексуален контакт с момиче, което се разхождаше наоколо. Тя настоя, че не е болна, но не можех да й се доверя на 100 процента. Тя също така увери, че е минала медицински преглед преди да кандидатства за работа (работеше като продавач) и всичко е наред. 7 месеца след контакта си направих тест за ХИВ в лабораторията на citylab; резултатът беше отрицателен. Но напоследък често се разболявам; от 3 седмици имам зачервено гърло и не мога да го излекувам. Пак започнах да се страхувам, ами ако го хвана тогава? Кажете ми възможно ли е това и трябва ли да се доверим на анализите от CityLab? Страх ме е пак да се явя на теста, не ми издържат нервите...
Ако резултатът е отрицателен, най-вероятно не сте болни или заразени с ХИВ/СПИН. Въпреки това, за да се изясни диагнозата, се препоръчва да се направи втори тест в специализирани лаборатории на държавни институции; този преглед се извършва анонимно. Ако самолечението не доведе до желания резултат, препоръчително е да се консултирате с отоларинголог за провеждане на адекватен преглед и предписване на подходящо лечение. Прочетете повече за тестването за ХИВ в поредица от статии, като кликнете върху връзката: ХИВ.
Кажете ми, можете ли да дадете някакви характеристики на лабораторията на citylab? Все пак не винаги е възможно да се изследвате в държавна агенция. И какъв е процентът на шанса човек да се зарази при незащитен контакт?
За съжаление не предоставяме сравнителни оценки на лаборатории и частни лечебни заведения. Ако се съмнявате в надеждността на резултатите, направете преглед в друг център и първо поискайте лиценз за предоставяне на тези медицински услуги, дали този център има право да извършва този преглед и дали всичко отговаря на приетите стандарти. Рискът от заразяване е еднакъв и за двата пола при полов контакт без предпазни средства. Прочетете повече за тестването за ХИВ в поредица от статии, като кликнете върху връзката: ХИВ.
Добър ден Детето е на 8 месеца, тествано е за ХИВ с помощта на ELISA, gp160 + и p25 + са открити в кръвта, останалото е отрицателно, заключението е съмнително. Съдейки по тези тестове, излиза, че детето е +? gp160 + gp110/120 - p68 - p55 - p52 - gp41 - p34 - p25 + p18 -
За съжаление, въз основа на получените данни е невъзможно да се постави диагноза със 100% вероятност, тъй като не може да се изключи фалшив положителен резултат. За да направите точна диагноза, ще трябва да преминете редица прегледи, включително повторение на този анализ с помощта на метода ELISA, както и вземане на тест с помощта на метода PCR. След това трябва да се свържете със специализирана медицинска институция, където специалист по инфекциозни заболявания ще може цялостно да оцени получените резултати. Можете да научите повече за проявите на ХИВ инфекцията в тематичния раздел на нашия уебсайт, като следвате връзката: ХИВ
Може ли да покаже фалшив положителен резултат за остри респираторни инфекции или по-остри инфекциозни заболявания? Четох някъде, че за 58 заболявания или дори повече може да се покаже "+", включително ваксинация срещу хепатит В, ако са засегнати бъбреците и т.н.?
Има възможност за фалшиво положителен резултат, затова ви препоръчвам да направите следното: направете теста отново - чрез метода ELISA и метода PCR и след това отново посетете инфекциониста. Можете да научите повече за диагностицирането на ХИВ инфекцията от тематичния раздел: ХИВ
Добър ден Имуноблотът е неопределен поради протеина p25. Каква е вероятността от ХИВ?
В тази ситуация е необходимо внимателно да се проучат протоколите от изследването в комбинация с други показатели, тъй като не е възможно да се направи предположение въз основа на тези данни. Вероятно резултатът може да се счита за съмнителен и е необходимо повторно изследване след 3 месеца. Прочетете повече в раздела на нашия уебсайт: ХИВ
Добър ден.
Можете ли да коментирате HIV ELISA?
1 серум +3,559 k=13,3
+2,121 k=4,9
p 24 отр
2 серум +3,696 k=13,9
+2,477 k=5,7
В този случай не е изключен фалшив положителен резултат, като се има предвид, че методът ELISA е индиректен, затова препоръчвам да се изследвате с друг, по-чувствителен метод - имуноблотинг. Можете да намерите по-подробна информация по този въпрос в съответния раздел на нашия уебсайт, като кликнете върху следната връзка: HIV
Добър ден, кажете ми какво да настроя? Преди година, когато планирахме дете, съпругът ми и аз претърпяхме всички тестове, включително ХИВ (те ги взеха много сериозно и правилно), бях прегледан в Кр Рог, съпругът ми в Киев, отговорът му беше отрицателен, аз бях казаха, че някакъв реактив не работи, трябва да го взема отново в Центъра за СПИН в Киев. След като направих теста в Центъра, отговорът и при мен излезе отрицателен. Сега съм в позиция на 14-та седмица, т.е. Регистрирам се и минавам през всички тестове и отново се върна отговорът, тестът за ХИВ беше неопределен, направих го отново в клиниката и направих експресен тест в Довир, за да ме успокоят, но те не ме успокоиха, експресният тест показа положителен резултат (втората линия беше по-слабо изразена), веднага след цялата тази процедура не губих време да се свържа с Центъра за СПИН, а също така направих тест и чакам резултата. (Не мога да се успокоя) Моля, кажете ми доколко можете да се доверите на експресните тестове и защо първият път няма отговор на теста за ХИВ? (съпругът ми и аз водим здравословен начин на живот и се обичаме). Благодаря ти.
Няма нужда да се паникьосвате предварително - експресната диагностика не е основата за диагностициране на ХИВ; тя ви позволява да идентифицирате групи пациенти, които изискват по-задълбочени изследвания. В такива ситуации се препоръчва да се проведе имунен блотинг и лично да се консултирате със специалист по инфекциозни заболявания. Можете да намерите по-подробна информация по този въпрос в тематичния раздел на нашия уебсайт, като кликнете върху следната връзка: HIV. Допълнителна информация можете да получите и в следния раздел на нашия сайт: Лабораторна диагностика
Здравейте, бях в инфекциозно отделение, точно днес ме изписаха на тръгване, лекарят ми се обади и ми обясни, че имам положителен IFA, първо при постъпване в болницата беше отрицателен, след това при повторен тест стана положителен, изпратиха тестове за имуноблот в планината Соколники, казаха, че ще бъде готов следващата седмица, бях в болницата с болки в гърлото и парагрипни вируси, пристигам в състояние на шок, все още не разбирам как за да оценя това, извлечение за моята клиника също беше съставено, което показва, че ifa е открит и по-долу, че имуноблотът работи, ако утре бъда изписан във вашата клиника, тогава в този извлечение всичко ще бъде посочено колко вероятно е това Налице ли е ХИВ, тъй като съм бил лекуван за възпалено гърло, причинено от парагрип, да има положителни резултати за ifa?
Вероятността за фалшив положителен резултат е много висока. Наличието на един положителен резултат все още не дава основание за диагностициране на ХИВ, затова ви препоръчваме да изчакате резултата от имуноблотинга и след това лично да се консултирате с лекар по инфекциозни заболявания относно по-нататъшно изследване и наблюдение. Възпалено гърло, парагрип и други настинки не оказват значително влияние върху резултатите от анализа.
Иска ми се да повярвам в това, но в края на август се почувствах зле, температурата се повиши, 37,5-38 Имах редки изпражнения около 4 дни, беше на почивка, където имаше много дискотеки, пиех чешмяна вода като много други, защото това беше много скъпо, чаша вода струваше 300 рубли, аз свързах редките изпражнения с такава температура с някаква чревна инфекция, хваната във водата, не помня точно, но имаше и малък обрив горната част на тялото, когато се прибрах вкъщи с температура, извиках лекар, тя написа ротавирусна инфекция, след 5 дни боледуване доброволно го напуснах и отидох на работа, където няколко дни по-късно се разболях от синузит (в този период от време, поради служебните ми задължения, трябваше да съм навън) Отдадох това на факта, че големият спад на температурата от ваканция и отравяне понижи имунитета ми и затова пак настинах със синузит, така че това е отново отпуск по болест, според инструкциите на УНГ, взех Klacid SR 500 10 дни, мина, върнах се на работа след 3 седмици, бях в командировка в гореща страна за 3 дни. Климатиците в транспорта и хотела бяха безмилостни и на връщане вкъщи температурата ми беше вече 39,5, ето ме вкъщи с температура 40, извиках лекар вкъщи, писах остра респираторна инфекция и казах, че съм. гърлото беше много зачервено, имам хроничен тонзилит и казах на специалиста по УНГ, аз самият писах да пия антибиотика Levolet r. Обадих се на линейка, защото имах температура и температурата беше 40 и не намаляваше, не предложиха хоспитализация, на следващия ден същата история - линейката постави антипиретична инжекция и си тръгна. Третият път, когато настоях за хоспитализация, едва ме откараха в инфекциозната болница, където беше открита смесена инфекция от парагрип и аденовирусна инфекция, но при изписване. , лекарят-началник на отделението каза, че съм диагностициран с ХИВ, ако е положителен и че са го направили два пъти, аз съм в шок, не знам какво да правя, не мога да ям и да пия .тя каза това Очевидно имам остра ХИВ инфекция и за да проверят, изпратиха имуноблот тест на кръвта ми в центъра за СПИН,
Сега, правейки аналогия на събитията, които ми се случиха за последно, както и 3 поредни болнични, пробвах всички симптоми и се ужасих какво може да бъде, след като ме изписаха в същия ден отидох да се изследвам анонимно инвитро и на следващия ден резултатът от IFA беше същия +
Съжалявам за толкова подробна информация, но съм объркан и убит, пия силни успокоителни и нямам апетит и почти не ям, отслабнах много
Имам и въпрос: лекарят с изписването от болницата посочи резултата от ХИВ, открит от IFA и по-долу, че имуноблотът е в процес на работа, но как да затворя bl в моята клиника на мястото, където ще бъде написано всичко там. Какво трябва да направя? Това вече няма да бъде поверително. Помолих лекуващия лекар да не пише този анализ в извлечението, на което тя ми отказа, до каква степен се спазват правата ми относно неразкриването на информация?
За съжаление резултатите от изследванията, проведени в болницата, са включени в извлечението, тъй като лекуващият местен лекар трябва да има пълна информация за вашето здравословно състояние. В тази ситуация не говорим за разкриване на информация, тъй като тя се прехвърля само на друг лекуващ лекар, който допълнително ще ви наблюдава.
Здравейте! Направих тестове за ХИВ, защото имах нужда от сертификат за FMS, те не дадоха тестовете няколко седмици, след това ме поканиха при мениджъра и ми дадоха положителен резултат, взеха куп разписки и ги изпратиха в регионалния СПИН център за допълнително изследване, както пише в удостоверението. Искам да го взема в друга клиника и след това да отида в районното или няма смисъл да го карам отново? Само не разбирам защо не ги дадоха толкова дълго, добре, лекарят каза, че уж са направили някакъв анализ и уж им дължа още 4 хиляди рубли, защото ако са го направили, тогава вероятно в допълнение към удостоверението биха дали подробна информация за заболяването?
В тази ситуация не трябва да се паникьосвате преди време - получаването на един положителен резултат не ви позволява надеждно да прецените възможна инфекция, тъй като фалшивите положителни резултати не могат да бъдат изключени. Препоръчваме Ви да направите теста отново и при положителен резултат ще трябва да се подложите на още едно изследване – имуноблотинг. По правило лабораторията не дава подробна информация за резултатите, което е нормална и обичайна практика. На всички въпроси, които имате може да получите отговор от Вашия лекуващ лекар след преглед по време на лична консултация.
Забравих да добавя, че от началото на юни до средата на септември взех курс на анаболни стероиди, а именно Sustanon 250, смес от тестостерони и станозолол с примаболан, исках да се подготвя за лятото и ваканцията, може ли да съборят имунитета ми и всичко, което ми се случи.
Нарушеният имунитет, както и наличието на автоимунни заболявания, могат да дадат фалшиво положителни резултати от теста за ХИВ. Ето защо, в случай на получаване на 2 положителни резултата по метода ELISA, се препоръчва имуноблотинг, който ще отговори точно на въпроса дали има инфекция или не.
Какво означава да имаш автоимунни заболявания?
Като цяло мога да кажа, че боледувах доста често от ранна детска възраст и дори преди няколко години помолих лекуващия лекар да се грижи за имунитета ми, защото бях постоянно уморен и често боледувах, главно уши, гърло, нос , но през цялото време имаше отрицателни резултати за ХИВ, аз ги минах доста лесно, без колебание.
Фалшиво положителен резултат от теста за ХИВ може да възникне след скорошна вирусна инфекция, ваксинация срещу хепатит В, туберкулоза, хепатит, херпес, както и на фона на автоимунни заболявания като ревматоиден артрит, системен лупус еритематозус, дерматомиозит, склеродермия, съединителна тъкан заболявания и др.
Бих искал да добавя към въпроса си, имуноблотът ми излезе отрицателен, но лекарят каза, че тъй като имах две IFA +, когато бях в инфекциозната болница, все пак трябва да си направя теста отново, но малко по-късно
В този случай медицинската тактика е оправдана - препоръчваме да вземете отново имуноблот след 1,5-2 месеца.
Каква е вероятността: 2 IFA + разликата между вземанията на кръв е около 2 дни, имуноблот - ; Бях в инфекциозна болница с аденовирусна инфекция и параинфлуенца, където взеха кръв, имуноблотът беше изпратен в центъра за СПИН
Добър ден Регистрирах се в жилищния комплекс, преминах всички тестове, лекарят каза, че имам херпес в кръвта си, след това се обадиха от центъра за СПИН и казаха, че трябва да се тествам отново, попитах и ми казаха, че съм ХИВ позитивен , в паника, с мъжа ми отидохме да се тестваме отново Направих си теста и получих IFA и имуноблот + съпругът ми го получи и аз пак след месец. Имам + моя съпруг – сега съм бременна в 23 седмица!
В тази ситуация, за съжаление, има възможност за ХИВ инфекция, но окончателна диагноза не може да бъде поставена дори с положителен имуноблот, като се има предвид състоянието на бременността. В тази ситуация е необходимо да се изключат фалшивите положителни резултати, затова препоръчваме да направите теста отново и лично да се консултирате със специалист по инфекциозни заболявания.
Ако имуноблотът покаже положителен резултат за ХИВ, но скринингът е отрицателен, на кой резултат трябва да вярваме?
Имуноблотът е по-точен тест, следователно, с това изследване, ако се получи положителен резултат, трябва да продължите изследването и лично да посетите специалист по инфекциозни заболявания.
хипотония, тахикардия, задух, цианоза. При тежки случаи на заболяването са възможни кървене и повръщане с примеси на кръв. Черният дроб и далакът са увеличени. Отбелязва се олигурия. Температурата остава постоянно висока за 3-10 дни. В периферната кръв - неутрофилна левкоцитоза с изместване вляво. В допълнение към описаните общи прояви на чумата се развиват поражения, характерни за отделните клинични форми на заболяването.
Кожната форма е рядка (3–5%). На мястото на входната врата на инфекцията се появява петно, след това папула, везикула (фликтена), пълна със серозно хеморагично съдържание, заобиколена от инфилтрирана зона с хиперемия и оток. Phlyctena се характеризира със силна болка. При отваряне се образува язва с тъмна краста на дъното. Чумната язва има дълъг курс и заздравява бавно, образувайки белег. Ако тази форма е усложнена от септицемия, се появяват вторични пустули и язви. Възможно е развитие на регионален бубон (кожна бубонна форма).
Бубонната форма е най-честата (около 80%) и има относително доброкачествено протичане. От първите дни на заболяването се появява остра болка в областта на регионалните лимфни възли, което затруднява движението и принуждава пациента да заеме принудително положение. Първичният бубон, като правило, е единичен; В повечето случаи се засягат ингвиналните и феморалните лимфни възли и малко по-рядко аксиларните и шийните лимфни възли. Размерът на бубона варира от орех до средно голяма ябълка. Ярки характеристики са остра болка, плътна консистенция, адхезия към подлежащите тъкани, гладкост на контурите поради развитието на периаденит. Бубонът започва да се образува на втория ден от заболяването. С развитието си кожата над нея става червена, лъскава и често има цианотичен оттенък. В началото тя е плътна, след това омеква, появяват се флуктуации, контурите стават неясни. На 10-12-ия ден от заболяването се отваря - образува се фистула и язва. При доброкачествен ход на заболяването и съвременна антибиотична терапия се наблюдава неговата резорбция или склероза. В резултат на хематогенно въвеждане на патогена могат да се образуват вторични бубони, които се появяват по-късно и са малки по размер, по-малко болезнени и като правило не нагнояват. Сериозно усложнение на тази форма може да бъде развитието на вторична белодробна или вторична септична форма, която рязко влошава състоянието на пациента и дори води до смърт.
Първична белодробнаФормата е рядка, в периоди на епидемии в 5-10% от случаите и представлява най-опасната епидемиологично и тежка клинична форма на заболяването. Започва остро, бурно. На фона на изразен синдром на интоксикация от първите дни се появява суха кашлица, силен задух и режеща болка в гърдите. След това кашлицата става продуктивна, с отделяне на храчки, чието количество може да варира от няколко изплювания до огромни количества, рядко изобщо липсва. Храчките, първоначално пенести, стъклени, прозрачни, след това придобиват кървав вид, по-късно стават чисто кървави и съдържат огромно количество чумни бактерии. Обикновено има течна консистенция - един от диагностичните признаци. Физикалните данни са оскъдни: леко скъсяване на перкуторния звук над засегнатия лоб, при аускултация няма много фини хрипове, което явно не отговаря на общото тежко състояние на пациента. Терминалният период се характеризира с увеличаване на задуха, цианоза, развитие на ступор, белодробен оток и ITS. Кръвното налягане спада, пулсът се ускорява и става нишковиден, сърдечните звуци са заглушени, хипертермията се заменя с хипотермия. Без лечение заболяването завършва със смърт в рамките на 2-6 дни. При ранна употреба на антибиотици протичането на заболяването е доброкачествено и малко се различава
Имуноблотинг –(от английски „blot“ - петно) - метод за идентифициране на антигени (или антитела) с помощта на известни серуми (или антигени). Това е комбинация от гел електрофореза и ELISA. Първоначално бактериалните клетки или вириони се унищожават с помощта на ултразвук, а след това всички антигени на вируса или бактериалните клетки се разделят чрез електрофореза и се получава търговски реагент върху специален нитроцелулозен филм. При извършване на имуноблотинг серумът на пациента, който се изследва, се нанася върху филм с известни антигени. След инкубиране и промиване на несвързани антитела, преминете към ELISA - антисерум към човешки имуноглобулини, маркирани с ензим и хромогенен субстрат, който променя цвета си при взаимодействие с ензима, се нанася върху филма. При наличие на антиген-антитяло-антисерум към имуноглобулин-ензимни комплекси върху носителя се появяват цветни петна. Методът на имуноблотинг ви позволява отделно да откривате антитела срещу различни патогенни антигени (например при HIV инфекция имуноблотингът открива антитела срещу gp120, gp24 и други вирусни антигени).
Радиоимуноанализ (RIA)
Методът се основава на реакция антиген-антитяло, като се използва радионуклидно маркиран антиген или антитяло. 125I, 14C, 3H, 51Cr и други радионуклиди се използват като етикети. Получените имунни комплекси се изолират от системата и тяхната радиоактивност се определя на броячи (β-лъчение). Интензитетът на радиацията е правопропорционален на броя на свързаните молекули антиген и антитяло.
Твърдофазовият вариант на RIA, използващ белязани антитела или антигени, сорбирани в ямките на полистиролови панели, е широко разпространен.
RIA се използва за откриване на антигени на микроби, вируси, различни хормони, ензими, лекарства, имуноглобулини, както и други вещества, съдържащи се в тестовия материал в малки концентрации от 10-12-10-15 g / l.
Контролни въпроси
Реакция на имунна бактериолиза: какъв вид е реакцията; какво е антиген, какво е антитяло, механизъм на реакция, методи на получаване, практическо приложение. Реакция на имунна хемолиза: необходими съставки, процедура; управление, практическо приложение. Реакция на локална хемолиза в гел (реакция на Jerne): принцип на реакцията, начин на формулиране, практическо приложение. Реакция на свързване на комплемента: принцип на реакцията; какво се образува, когато имунният серум взаимодейства със специфичен антиген; какво се случва с комплемента, ако той присъства по време на това взаимодействие? Каква е съдбата на комплемента, ако няма специфичен афинитет между антигена и антителата? Каква реакция може да се използва, за да се определи какво се е случило с комплемента; защо се използва тази конкретна реакция; Какъв е видимият положителен резултат от RSC? Защо? Какво свойство на комплемента се използва в първата фаза на RSC? Във втората фаза? Ако крайният резултат от RSC е хемолиза, това означава ли положителен или отрицателен резултат? Обяснете резултатите: RSK+ + + +, RSK+ + +, RSK+ +, RSK+. Назовете съставките на първата система RSK и съставките на втората система RSK. Защо тест серумът трябва да бъде инактивиран? Как се титрува комплементът? Хемолитичен серум: какво съдържа, как се получава, какъв е титърът и как се определя? Какви животни се използват за получаване на RSC компоненти? Методология за настройка на RSC на студено. При стадиране коя от следните реакции изисква участието на комплемента: преципитация, флокулация, аглутинация, откриване на непълни антитела, имунна бактериолиза, имунна хемолиза, Jerne, RSC? Имунофлуоресцентна реакция (RIF) - посочва последователността на събитията в директната реакция на Кунс; необходими съставки. Какво е антиген, какво е антитяло, с какво се маркират антителата, как се отчита резултатът от реакцията, как изглежда положителният резултат? Практическо приложение - какво може да се определи с помощта на тази реакция? Реакция на индиректна имунофлуоресценция - посочете последователността на събитията по време на тази реакция, необходимите съставки, какъв е антигенът, какви имунни серуми се използват; практическа употреба; предимство на индиректния RIF в сравнение с директната реакция. Ензимно-свързан имуносорбентен анализ (ELISA) – принцип на реакцията; необходими съставки; посочва последователността от събития при извършване на реакция за откриване на антиген в материала, който се тества; необходими съставки; Какво се случва, когато резултатът е положителен, как изглежда? Посочете последователността от действия при извършване на ELISA за откриване на антитела в тестовия серум; необходими съставки; какво се случва, ако резултатът е положителен? Имуноблотинг – принцип на реакцията; основни етапи; необходими съставки; как се отчита резултатът; ползи от реакцията. Радиоимуноанализ (РИА) – кои са основните етапи на реакцията; С какво се маркират антитела или антигени, как се отчита резултатът? Имуноелектронна микроскопия - принцип на метода; основни етапи; необходими съставки; с какви антитела са маркирани; как се отчита резултатът от реакцията. Реакции на имобилизация – принцип на метода, техника на поставяне, компоненти, протоколиране на резултатите.
Задачи за изпълнение по време на процеса на самоподготовка.
Попълнете таблицата „Имунни реакции“ във връзка с реакциите, обсъждани в тази тема.
Имунни реакции
Работа на студентите по време на практическо занятие
Започнете работата веднага с настройка на фаза 1 на RSK, но го запишете в бележника си по-късно (вижте по-долу).
1. Реакция на имунна хемолиза. Вижте демонстрационна реакция на имунна хемолиза, скицирайте я под формата на диаграма, обяснете резултата в експерименталните и контролните епруветки.
2. Реакция на фиксиране на комплемента
а) анализирайте RSK според таблицата;
б) начертайте в тетрадка схема на настройката на RSC под формата на таблица;
в) поставете втората фаза на RSK (първата фаза се поставя в началото на урока);
г) анализира диагностичните препарати, необходими за RSC;
д) вземете предвид резултата. Формулирайте заключение за наличието на специфични антитела в тестовия серум.
3. Реакция на имунофлуоресценция. Разгледайте таблицата, направете схема на реакцията в тетрадката си; погледнете диагностичните серуми; определя какво съдържа серумът, как се приготвя, за каква реакция (директна или индиректна RIF) се използва. Вижте демонстрационния резултат от RIF във флуоресцентен микроскоп.
4. Ензимно-свързан имуносорбентен анализ (ELISA). В тетрадката си съставете схема за настройка на реакция в две версии: за откриване на антиген в изследвания материал и за откриване на антитела в серума. Прегледайте комплекта съставки за ХИВ и хепатит B. Определете какво съдържа всяка съставка и за какво се използва.
5. Имуноблотинг. Направете схема на реакцията в тетрадката си; гледайте демонстрацията - резултатът от реакцията.
6. Радиоимуноанализ (RIA). Направете схема на реакцията в тетрадката си.
7. Имунна електронна микроскопия (IEM). Вижте демонстрацията - резултата от реакцията, начертайте схема на реакцията в тетрадката си, посочете със стрелки антигена (вируса) и белязаните антитела.
Имуноблотингът е високочувствителен метод за откриване на протеини, базиран на комбинация от електрофореза и ELISA или RIA. Имуноблотингът се използва като диагностичен метод за HIV инфекция и др.
В общ смисъл имуноблотингът се отнася до анализ на смес от протеини, прехвърлени върху твърда мембранна опора, към която те са свързани чрез ковалентни връзки, последвано от имунооткриване.
Можете да анализирате смес от протеини, директно нанесени върху субстрата - dot blot анализ - или след предварителното й фракциониране чрез електрофокусиране, дискова електрофореза или двуизмерна електрофореза - Western blot анализ.
Патогенните антигени се разделят с помощта на електрофореза с полиакриламиден гел, след което се прехвърлят от гела върху активирана хартия или нитроцелулозна мембрана и се проявяват с помощта на ELISA.
Компаниите произвеждат такива ленти с "петна" от антигени. Серумът на пациента се нанася върху тези ленти. . След това, след инкубация, пациентът се промива от несвързани антитела и се прилага серум срещу човешки имуноглобулини, белязани с ензим . Комплексът, образуван върху лентата (антиген + антитяло на пациента + антитяло срещу човешки Ig) се открива чрез добавяне на хромогенен субстрат, който променя цвета си под действието на ензим.
Тази методология се използва и за избор на клонинги от бактерии, фаги или вируси, които експресират целевите клонирани генни продукти.
Прехвърлянето на протеини към мембраната се извършва или пасивно, или с помощта на електротрансферно оборудване. Ефективността на преноса на протеини към мембраната се влияе от много фактори, като например молекулното тегло на протеините, порьозността на гела, времето за прехвърляне и състава на използвания буферен разтвор (транс-буфер).
В зависимост от целите и условията на експеримента се избират условия на трансфер, които дават най-добри резултати. Като субстрати обикновено се използват нитроцелулоза, поливинилиден дифлуорид (PVDF) или положително заредени найлонови мембрани. Нитроцелулозата може да свърже до 80 - 100 μg протеин на 1 cm2.
Протеините с ниско молекулно тегло (с молекулно тегло по-малко от 20 kDa) могат да бъдат загубени в резултат на измивания. Това дава възможност за предварително изследване на полиморфизма на определени генетични локуси въз основа на дължините на съответните ДНК рестрикционни фрагменти.
Освен това, използвайки Southern хибридизация, можете лесно да разберете дали целевият ген има място на хидролиза от определен рестрикционен ензим във вътрешната си част, което ви позволява да изберете оптималната стратегия за клониране на изследвания регион на генома.
Използвайки подобна схема, молекулите на РНК могат да бъдат прехвърлени от агарозен гел към нитроцелулозен филтър. Този метод беше наречен Northern blotting, за разлика от Southern blotting, тъй като името Southern означава „южен“ на английски.
Прехвърлянето на протеини върху филтри от гела съответно се нарича Western blotting. Големите протеини (>100 kDa), денатурирани в разтвор на натриев додецилсулфат (SDS), могат да бъдат лошо прехвърлени към мембраната, ако етанолът присъства в транс буфера. Алкохолът значително подобрява преноса на протеини от SDS-полиакриламидния гел, но стеснява порите в гела, което води до задържане на големи протеини.
PVDF мембраната е оптимизирана за имунооткриване и е способна да задържа до 160 μg/cm2 специфично свързани протеини с много ниски нива на неспецифично свързване.
Имуноблотинг
Важно свойство на тази мембрана е възможността за многократна употреба. Найлоновите мембрани Zeta-Probe ефективно свързват SDS протеини в отсъствието на алкохол и това свързване е устойчиво на последващо третиране. Протеините с ниско молекулно тегло също се задържат ефективно. С висок капацитет на свързване от приблизително 480 μg протеин на cm2, мембраните Zeta-Probe позволяват откриването на следи от протеин в тестовите смеси.
След като антигенът е имобилизиран върху мембраната, останалите места на свързване се блокират с разтвори на желатин, говежди серумен албумин или обезмаслено мляко.
След това мембраната се инкубира в разтвор на поликлонални или моноклонални антитела към изследвания антиген. След измиване на несвързаните антитела, мембраната се инкубира в разтвор на вторични антитела, които са конюгат на ензимите алкална фосфатаза (АР) или пероксидаза от хрян (HRP) с антивидови антитела (кози антитела срещу заешки, миши или човешки имуноглобулини ) или протеини A (протеин на Staphylococcus aureus) или G (протеин на Streptococcus sp.), имащи висок афинитет към Fc областта на имуноглобулините.
Откриването на образуваните имунни комплекси се извършва химически или хемилуминесцентно. Субстрати за химическата реакция при използване на конюгати на алкална фосфатаза са 5-бромо-4-хлоро-3-индолил фосфат (BCIP) или син тетразол (NBT), а при използване на конюгати на пероксидаза от хрян - 4-хлоро-1-нафтол и водороден пероксид .
В резултат на ензимни реакции върху мембраната се образува цветна лента или петно на мястото на локализиране на комплекса антиген-антитяло.
Чувствителността на този метод е 100 pg протеин при използване на AP конюгати и 100-500 pg при използване на HRP конюгати. Хемилуминесцентното откриване на имунни комплекси позволява откриването на по-малко от 5 pg антиген. Принципът на този метод е, че когато HRP реагира с водороден пероксид и цикличен диацилхидразин луминол, се излъчва светлина с дължина на вълната 428 nm, която може да бъде записана върху фоточувствителен филм.
Реакцията на имуноблотинг (RI) е разработена на базата на ELISA. Това е най-специфичният и чувствителен метод за имунохимичен анализ. Имуноблотингът (от англ. blot - петно, петно) съчетава ELISA с електрофореза. Използва се за откриване не на сложни антитела срещу HIV, а на антитела към отделните му структурни протеини (протеини p24, гликопротеини gp120, gp 41 и др.). Отнася се за експертни (потвърждаващи) реакции за диагностициране на HIV инфекция.
Реакцията протича на няколко етапа:
Вирусът се разрушава на компоненти - антигени (p24, gp120, gp 41 и др.), Които се подлагат на електрофореза в полиакриламиден гел, т.е. разделяне на антигени на фракции по молекулно тегло.
2. Гелът е покрит с нитроцелулозна мембрана и антигенните фракции се прехвърлят към него чрез електрофореза. Нитроцелулозата се държи като попивателна хартия. Мембраната се нарязва на ленти. Компаниите произвеждат такива ленти с "петна" от антигени.
Имуноблотинг - допълнителен индиректен метод
Ленти, покрити с HIV антигени, се потапят в серума на субекта и след това се измиват, за да се отстрани несвързаният материал.
4. Лентите се инкубират с антиглобулинов серум, маркиран с пероксидаза и се промиват.
Добавя се субстратът и се отбелязва броят на цветните фракции (петна), които съответстват на зоната на локализация на комплекса AG-AT.
Наличието на ленти в определени области на лентата потвърждава наличието в тествания серум на антитела срещу строго определени HIV антигени. Резултатът от имуноблотинга се счита за положителен, ако върху мембраната се виждат ивици, съответстващи на всеки два от трите HIV антигена - p24, gp41 и gp 120 (фиг. 37).
ЧЕРТЕЖИ
СПИСЪК НА ИЗПОЛЗВАНАТА ЛИТЕРАТУРА
Основна литература
Медицинска микробиология, вирусология и имунология: учебник за студенти по медицина. университети 2-ро изд., рев. и допълнителни — 702 стр. Ед. А.А. Воробьова. М.: MIA, 2012.
2. Микробиология, вирусология и имунология: ръководство за лабораторни упражнения: учебник/(В. Б. Сбойчаков и др.); редактиран от В. Б. Сбойчакова, М. М. Карапац. – М.: GEOTAR-Media, 2014.- 320 с.: ил.
3. Медицинска микробиология, имунология и вирусология [Електронен ресурс]: учебник за мед.
университети - 760 стр. — Режим на достъп: http://www.studmedlib.ru/book/ISBN9785299004250.html Коротяев А.И., Бабичев С.А. Санкт Петербург: Спецслит, 2010.
4. Медицинска микробиология, вирусология и имунология [Електронен ресурс]: учебник: в 2 тома / Т. 1. - 448 с. — Режим на достъп: http://www.studmedlib.ru/book/ISBN97859704142241.html Зверев В.В., Бойченко М.Н.
М.: Geotar Media, 2010.
5. Медицинска микробиология, вирусология и имунология [Електронен ресурс]: учебник: в 2 тома Т. 2. - 480 с. Режим на достъп: http://www.studmedlib.ru/book/ISBN97859704142242.html Зверев В.В., Бойченко М.Н. М.: Geotar Media, 2010.
допълнителна литература
1. Имунодиагностични реакции: учебник / комп.: G.K.Davletshina, Z.G.Gabidullin, A.A.Akhtarieva, M.M.Tuigunov, A.K.Bulgakov, T.A.Savchenko, R.F.
Хуснаризанова, Ю. З. Габидулин, М. М. Алсинбаев - Издателство на Държавната бюджетна образователна институция за висше професионално образование на Министерството на здравеопазването на Русия, 2016 г. - 86 с.
2. Характеристики на някои свойства, които определят патогенния потенциал на съвместно култивирани вариации на бактерии Enterobacter, Citrobacter, Serratia, E.coli, Proteus: научна публикация / Ю. З. Габидулин, Р. С. Суфияров, И. И. Долгушин - Уфа, 2015 г. - 250 с.
Начало » Имуноблот – какво е това? Имуноблот в диагностиката на инфекциозни заболявания
Имуноблот - какво е това? Имуноблот в диагностиката на инфекциозни заболявания
Какво е имуноблот? Това е често срещан метод за лабораторна диагностика на човешки вирусни инфекции. Това е един от най-точните и надеждни начини за откриване на наличието на ХИВ.
За надеждност той е дори по-голям от ензимно-свързания имуносорбентен анализ (elisa). Резултатите от имуноблот се считат за окончателна и убедителна обща информация
Имуноблот - какво е това? За да разпознаете дадено лице като ХИВ, трябва да се подложите на лабораторен тест за изследване на кръвния серум за наличие на антитела.
Секциите Western blot се наричат още Western blots. Използва се за откриване на човешки вирусни инфекции като допълнителен експертен метод. Това е необходимо за потвърждаване на ELISA - лабораторен тест, който ви позволява да определите наличието на антитела срещу HIV в кръвта. Повторна проверка на имуноблот положителен ELISA.
Счита се за най-чувствителния, сложен и скъп.
Мишена
Какво е имуноблот? Този метод за лабораторно изследване на кръвен серум за наличие на антитела срещу вируса.
По време на специални изследвания общите вирусни протеини са открити в гела и върху нитроцелулозни мембрани.
Имуноблотинг (откриване на антитела в серуми на пациенти срещу определени патогенни антигени)
Процедурата Western blot секция е предназначена за определяне на HIV инфекцията на различни етапи. На първия етап пречистеният вирус от съставните му части се подлага на електрофореза и включените в него антигени се разделят по молекулно тегло.
Вирусът на човешката имунна недостатъчност се репликира в живи клетки, вградени в неговата генетична информация. На този етап човек става носител на ХИВ вируса, ако сте били заразени.
Спецификата на това заболяване е, че не се проявява дълго време. Вирусът разрушава лимфоцитите, поради което имунитетът на човека намалява и тялото става неспособно да се бори с инфекциите.
Ако ХИВ се лекува правилно и своевременно, пациентът ще доживее до дълбока старост. Липсата на лечение неизбежно води до смърт. От момента на заразяване, но без лечение, максималният срок е не повече от десет години.
Особености
Имуноблот анализът е надежден метод, който ви позволява да определите наличието на антитела срещу HIV антигени от първия и втория тип.
Ако човек е заразен, след две седмици антителата могат да бъдат открити много по-късно. Особеност на ХИВ е, че количеството антитела нараства бързо и остава в кръвта на пациента. Дори и да са налице, заболяването може да не се прояви две или повече години. Методът ELISA не винаги точно показва наличието на заболяването, изисквайки потвърждение на резултатите от PCR и Western blot срезове, ако ензимният имуноанализ показа положителен резултат.
Показания за
Какъв вид "имуноблотинг" вече е открит, но кой се въвежда в изследването?
Причината за изследване за вируса на човешката имунна недостатъчност (HIV) ще бъде положителен резултат от ELISA. Необходимо е да се премине през ензимно-свързан имуносорбентен анализ при пациенти, на които предстои операция. Освен това трябва да направите анализ на жените, които планират бременност, както и тези, които са безразборни. Western blot срезове се предписват на пациенти с HIV инфекция, ако резултатите от Elisa са двусмислени.
Следните тревожни симптоми могат да бъдат: бърза загуба на тегло, загуба на чревна функция, която продължава три седмици, увеличаване на лимфните възли в тялото , пневмония, токсоплазмоза, обостряне на херпес.
Не е необходимо пациентът да се подготвя преди даряването на венозна кръв.
Не яжте 8-10 часа преди теста. В деня преди кръводаряването не се препоръчва да се пие алкохол или кафе, да се правят тежки физически упражнения или да се тревожи.
Къде да направите анализа?
Къде мога да се изследвам за ХИВ?
ELISA, имуноблот анализ, извършен в градски частни клиники, дава резултати в рамките на един ден. Възможна е и спешна диагностика. В обществените институции медицинските тестове Elisa и Western blot секциите са безплатни в съответствие със законодателството на Руската федерация.
Задължителен скрининг за инфекциозни заболявания при бременни жени и пациенти, които се нуждаят от хоспитализация или операция. Как се провежда това изследване?
Как се извършва ELISA? Положителният/отрицателният имуноблот потвърждава или опровергава резултатите от Елиза. Процедурата е доста проста. Специалистът взема венозна кръв, което отнема по-малко от пет минути.
След вземане на пробата мястото на инжектиране трябва да се дезинфекцира и да се покрие с превръзка. Вземането на проби се извършва на празен стомах, така че след процедурата няма да навреди да ядете блок черен шоколад или сладка топла напитка.
За да получите направление за безплатно изследване в обществено здравно заведение, трябва да посетите лекар.
Като цяло, имуноблотът не се различава от другите кръвни тестове чрез събиране. Методологията на изследването е проста. Ако вирусът присъства в кръвта на човек, тялото започва да произвежда антитела, за да го унищожи. За всеки вирус има много протеинови антигени. Откриването на тези антитела е в основата на метода на Western blot раздела. Цена
Колко време е анализът? ХИВ имуноблотът е един от най-евтините тестове.
Средно методите за имуноанализ варират от 500 до 900 рубли. Секциите Western blot са изследване на тестове, чиято цена варира от три до пет хиляди рубли. По-сложните методи са много по-скъпи. Например, за анализ на полимеразна верижна реакция (PCR) ще трябва да платите около 12 000 рубли.
Тълкуване на резултатите
Най-често срещаните методи за диагностициране на HIV инфекцията са ензимно-свързан имуносорбентен анализ и имуноблот.
Те се използват за определяне на антитела срещу човешкия имунодефицитен вирус в серума. Инфекцията обикновено се потвърждава с два теста: скрининг и потвърждаващ. Резултатите трябва да бъдат интерпретирани от лекар, който поставя диагнозата и назначава лечение. Ако имуноблотът е положителен, това означава, че в човешкото тяло има вирус.
Положителният резултат не трябва да бъде причина за независимо лечение, тъй като всеки пациент може да има своя собствена картина на заболяването.
Качественият анализ включва скрининг и сертифициране. Ако вирусът не се открие при пациента, резултатът е „отрицателен“. Когато този сертификат бъде открит, се извършват допълнителни скринингови изследвания. Имуноблот анализ, който потвърждава или опровергава скрининга. Ако тест лентите се появят в определени тъмни области (локализация на протеини), се поставя диагноза ХИВ.
Ако резултатите са съмнителни, тогава тестовете се извършват в рамките на три месеца.
За да предотвратите инфекция с вируса на човешката имунна недостатъчност, е възможно, ако спазвате определени правила: избягвайте случаен сексуален контакт, използвайте презервативи по време на контакт, не използвайте наркотици.
Ако заболяването се открие при бременна жена, важно е да следвате препоръките на лекуващия лекар и не забравяйте да тествате за наличие на вируса.
Какво е Western blotting?
Идентифицирането на протеини в сложни смеси или екстракти от различни тъкани е един от често срещаните проблеми. С помощта на инструмент като специфични антитела е възможно да се определи изследваният протеин с минимални времеви и финансови разходи.
При Western blotting метода, на първия етап, смес от протеини се разделя чрез електрофореза в присъствието на натриев додецилсулфат (SDS), след което се прехвърля върху нитроцелулозна мембрана чрез електроблотинг.
Същността на този метод е, че след електрофореза гелът се поставя върху нитроцелулозна мембрана между слоевете филтърна хартия. Сглобеният по този начин „сандвич“ се поставя в електрическо поле, така че комплексите протеин-SDS да се движат през плочата на гела и да се обездвижват (в резултат на неспецифична сорбция) върху повърхността на нитроцелулозната мембрана.
Свързването на комплекса протеин-SDS с нитроцелулозната мембрана включва предимно сили от електрическо естество, като това взаимодействие е многоточково и води до „разпръскване“ на протеините по повърхността на мембраната. Така след електротрансфер се получава реплика на гел върху нитроцелулоза с протеини, разположени по същия начин, както в полиакриламиден гел.
След SDS електрофореза, електротрансфер и сорбция на протеини от гела върху нитроцелулозна мембрана, третичната конформация на протеина е силно променена, ако като цяло е правилно да се говори за съществуването на третична структура за протеина след такова сурово третиране. Следователно, за имунохимично откриване на изследвания протеин обикновено се използват само моно- или поликлонални антитела, специфични за линейни области на протеиновата молекула.
51. Имуноензимен анализ, имуноблотинг. Механизъм, компоненти, приложение.
Антителата, специфични за конформационни епитопи (или региони, включващи контакти между субединици), обикновено не са подходящи за използване при Western blotting.
След трансфер на протеин, мембраната се инкубира последователно с антитела, специфични за изследвания протеин, и след това с вторични антитела, специфични за Fc фрагментите на първичните антитела, конюгирани с ензимен (или някакъв друг) етикет (фиг.
1 А). В случай, че първичните антитела, специфични за изследвания антиген, са директно конюгирани с етикета, не са необходими вторични антитела (фиг. 1 B). Имунните комплекси, образувани на мястото на локализиране на изследвания протеин, се „проявяват“ с помощта на хромогенен субстрат (в зависимост от вида на етикета).
Чувствителността и специфичността на метода зависи до голяма степен от това какви антитела се използват в изследването.
Използваните антитела трябва да са специфични за уникална аминокиселинна последователност, характерна само за изследвания протеин. В противен случай е възможно взаимодействие (особено в случая на сурови протеинови екстракти) на антитела с няколко протеинови молекули, което от своя страна ще доведе до появата на няколко цветни ивици върху мембраната.
Идентифицирането на изследвания протеин в този случай често е трудно или дори невъзможно.
Вторият важен фактор, който трябва да имате предвид при избора на антитела, е афинитетът. Колкото по-висок е афинитетът на използваните антитела, толкова по-ярки и ясни са оцветените протеинови ленти, толкова по-висока е чувствителността на метода. Когато се използват антитела с висок афинитет, може да се постигне чувствителност от 1 ng или дори по-висока.
За визуализиране на резултата от взаимодействието между мембранно свързан антиген и антитела се използват вторични антитела, конюгирани с агенти, способни да произведат определен сигнал при определени условия.
Обикновено като такъв агент се използва ензим (пероксидаза или фосфатаза), чийто реакционен продукт е оцветен и се утаява върху мембраната под формата на неразтворима утайка.
Също така е възможно да се използват флуоресцентни етикети в този метод.
Ориз. 1. Схема на имунохимично оцветяване на изследвания протеин: А - използване на вторични антитела, конюгирани с ензимен маркер; B - първичното антитяло е директно конюгирано към ензимен маркер.
Протокол:
I. Приготвяне на гел и мембрана и протеинов електротрансфер
След електрофореза, полиакриламидният гел се поставя във вана с попиващ буфер (25 mM Tris, рН 8.3, 192 mM глицин, 10% етанол).
Два листа филтърна хартия, изрязани по формата на попивателната касета и навлажнени с попивателен буфер, се поставят върху частта от касетата, която ще гледа към анода. След това върху филтърната хартия се поставя нитроцелулозна мембрана, предварително навлажнена със същия буфер, като се уверява, че между мембраната и хартията няма въздушни мехурчета.
След това гелът трябва внимателно да се постави върху мембраната, като отново се обръща особено внимание на това да се гарантира, че няма въздушни мехурчета между гела и мембраната. Оформянето на сандвича се завършва с два слоя навлажнена филтърна хартия, които се поставят върху повърхността на гела (фиг. 2). Полученият сандвич се захваща в касета и се поставя между електродите, така че мембраната да гледа към анода.
Ориз. 2. Схема на електротрансфер на протеини към мембраната.
II. Електрически трансфер
Електротрансферът на протеини към нитроцелулозна мембрана се извършва в буфер, съдържащ 25 mM Tris, pH 8,3, 192 mM глицин, 10% етанол за 30-50 минути при постоянно напрежение от 100 V.
Времето на електротрансфер зависи от размера на протеините, които се прехвърлят; колкото по-голям е протеинът, толкова по-дълго отнема електротрансферът. Качеството на електротрансфера и местоположението на протеиновите ленти се оценяват чрез оцветяване на нитроцелулозната мембрана с 0,3% разтвор на Ponceau S в 1% оцетна киселина. Преди имунохимично оцветяване, мембраната трябва да се измие няколко пъти със слабо алкален воден разтвор на Tris, за да се отстрани багрилото, свързано с протеините.
III. Имунохимично оцветяване на протеини, имобилизирани върху нитроцелулозна мембрана
За да се блокират местата на неспецифично свързване на антитела, мембраната се инкубира при постоянно разбъркване при стайна температура в продължение на 30 минути в PBST (за по-добро блокиране може да се използва разтвор на PBST, съдържащ 10% обезмаслено мляко на прах).
След блокиране, мембраната се инкубира за един час при стайна температура при постоянно разбъркване в PBST, съдържащ 1-10 μg/ml специфични антитела.
Оптималната концентрация на антитела се избира емпирично и зависи от афинитета на взаимодействието на антителата с антигена.
В края на инкубацията, измийте мембраната 5 пъти с PBST и я прехвърлете в разтвор на вторични антитела, конюгирани с пероксидаза от хрян. Разреждането на конюгата обикновено се посочва от производителя върху опаковката или се избира емпирично от изследователя. Инкубирайте мембраната в разтвора на вторичното антитяло за 1 час при постоянно разбъркване.
След цялостно промиване (смяна на буфера поне 5-6 пъти), PBST мембраната се прехвърля в хромогенен субстратен разтвор, съдържащ 3 mg диаминобензидин (DAB) и 10 μl 30% водороден пероксид в 10 ml 0,1 M Tris-HCl , рН 7,6.
Инкубацията се извършва при разбъркване в продължение на 5 - 10 минути. След приключване на инкубацията със субстрата, мембраната трябва да се измие с PBST, да се изсуши чрез попиване с филтърна хартия и незабавно да се направи електронно копие чрез сканиране в цвят. Ако мембраната изсъхне напълно, боядисаните протеинови ивици избледняват и изображението се оказва по-малко ярко и контрастно.
Забележка: DAB е токсичен и потенциален канцероген. Работете само с гумени ръкавици!
