Какво е включено в Ifa? Ензимен имуноанализ (EIA). Алтернативен метод ELISA

Ензимният имуноанализ открива специфични антитела или антигени към редица заболявания. Благодарение на диагностичната технология се откриват вещества с протеинов произход. Лекуващият лекар обяснява защо ELISA е положителен и какво означава това. За поставяне на диагнозата се вземат предвид резултатите от изследването и медицинската история на пациента.

Какво означава

Методът на изследване започна да се използва преди няколко десетилетия. Оттогава технологията се подобри и точността на резултатите се увеличи. Предимството на диагностиката е високата чувствителност. Има и недостатък - техниката включва търсене на даден агент, т.е. необходимо е да се приеме присъствието му в тялото.

Чужда частица (антиген) навлиза в тялото заедно с инфекциозен агент (агент). Антигенът може да бъде и частица от чужда кръв, която не отговаря на групата. Наличието на такива фактори предизвиква имунна реакция. В резултат на сложни невронни процеси се произвеждат имуноглобулини. Те се свързват с чужди молекули, създавайки имунен комплекс. В тази форма тялото по-лесно разпознава частиците и ги унищожава с помощта на имунната система. Всеки вид микроорганизъм произвежда специфични антитела.

За изследване се взема кръв от вена. След това образуваните съединения, които могат да попречат на изследването, се отстраняват от материала. Понякога се вземат проби от лигавицата или цереброспиналната течност като биологичен материал, в някои случаи се анализира амниотична течност. В лабораторията се използват специални плаки, в ямките на които има препарирани частици от патогенни микроорганизми. Лаборантът поставя събрания материал там и наблюдава дали се образуват имунни съединения.

За да получите точни резултати, трябва да вземете теста на празен стомах. 2 седмици преди подаването на материала трябва да спрете приема на антивирусни лекарства и антибиотици.

Анализът ви позволява да потвърдите следните заболявания:

токсоплазмоза;
различни видове херпес;
цитомегаловирус;
салмонелоза;
дизентерия;
инфекция с Helicobacter pylori;
дребна шарка;
енцефалит, пренасян от кърлежи;
рубеола;
заболявания на репродуктивната система;
хепатит.

Това е непълен списък с рецепти; също така включва варицела, сифилис и други заболявания, включително тези, причинени от различни коки.

Откриването на поне един имуноглобулин показва, че резултатът от ELISA е положителен:

Откриването на IgM показва остър стадий на инфекциозна патология. Това потвърждава едновременното наличие на IgA. Отрицателният резултат в някои случаи може да означава хронифициране на заболяването.
Положителният IgA индикатор показва латентно заболяване или наличие на хроничен процес.
Откриването на IgG в различни случаи може да показва наличието на хронична форма на заболяването или да показва ремисия.

Формулярът може да съдържа информация само за наличието или отсъствието на патогена. В някои случаи се посочва количествен показател. Понякога изследването е насочено към определяне на нивото на концентрация на антитела. За тази цел се определя степента на положителност на ELISA. Този индикатор ви позволява да определите колко дълго продължава патологичният процес в тялото.

Какво да правя

Лекарят по инфекциозни заболявания се занимава с диагностика и лечение на инфекциозни заболявания, така че в повечето случаи този специалист предписва изследването.

Ако ELISA покаже положителен резултат, трябва да се консултирате с лекар. Недопустимо е да правите заключения или да провеждате лечение сами. Трудно е да разберете индикаторите сами, декодирането на резултатите трябва да бъде получено от специалист.

Резултатите от кръвния тест могат да бъдат повлияни от фактори като тютюнопушене, консумация на алкохол и употребата на определени групи лекарства. Лекарят може да назначи повторен преглед, за да изключи грешки в резултатите. Понякога се предписват допълнителни видове изследвания за потвърждаване на диагнозата.

Не трябва да правите преждевременни заключения, ако тестът е положителен. Въпреки това, навременното изследване ще ви позволи да идентифицирате заболяването и да предпише необходимото лечение.

Във връзка с

Диагностичният метод (ELISA) е информативен и не е твърде скъп, поради което много лаборатории предлагат на своите клиенти този метод (ензимен имуноанализ на кръвта). Изследването се провежда на празен стомах, кръвта за анализ се взема от лакътната вена на пациента. Преди ELISA е препоръчително да не пушите и да не пиете алкохол.

Какво представлява кръвният тест, извършен по метода ELISA?

Сред методите за изследване на кръвта, които оценяват способността на организма да устои на инфекциозни заболявания и показват фазата на заболяването, ензимно-свързаният имуносорбентен анализ (ELISA) заема важно място. Провеждането на това изследване ви позволява цялостно да оцените активността на защитната функция на кръвта и да идентифицирате състоянието на имунодефицит при инфекциозни патологии, както и кръвни заболявания, автоимунни процеси и хормонални проблеми.

Това е лабораторен тест, който ви позволява да определите наличието на специфични антитела (защитни кръвни фактори от протеинова природа) към определени антигени (патогенни агенти). Сред антителата основно значение имат имуноглобулините, които могат да съществуват под формата на имунокомплекси.

Имуноглобулините се произвеждат в резултат на сложни неврохуморални реакции на човешката имунна система, които възникват като отговор на въвеждането на чужди антигени. Всеки тип патогенен агент произвежда свои специфични антитела. Те действат чрез "свързване" на антиген или патологичен микроорганизъм, образувайки комплексно съединение "антиген-антитяло", последвано от неутрализиране, ензимен лизис, реакции на фагоцитоза и отстраняване от тялото чрез ELISA метода се определя наличието на определени комплекси вида на патогена или вредното вещество, налични в пациента.

Струва си да се помни, че след курса на лечение антителата могат да останат в тялото ни много дълго време, дори след като инфекцията е напуснала тялото ни, т.е. остава така нареченият „серологичен белег“. Да вземем пример: в нощното небе има хиляди звезди. Много от тези звезди са умрели отдавна, но тяхната светлина все още достига до нас в продължение на векове. По същество виждаме само следата на звездата. Има светлина, но звездата отдавна я няма.

Но ако няма светлина, това не означава, че звездата не е била там. Същото е и с антителата. Наличието им не гарантира наличието на желания инфекциозен агент в организма. Липсата на антитела не означава, че няма инфекция. Ако резултатът от ELISA теста е положителен, това означава, че трябва да търсите инфекцията с по-специфични и скъпи методи - PCR, бактериологични култури. Възможен е фалшив положителен резултат, ако няколко микроба имат подобна антигенна структура, тогава ще бъдат произведени „подобни“ антитела към различни микроби.

Какво представляват имуноглобулините?

Открити и изследвани са 5 основни класа имуноглобулини - IgA, IgM, IgG, IgD, IgE. ролята на останалите все още не е напълно изяснена и е в процес на научно изследване.

Основната задача на имуноглобулин А (IgA) е защитните функции на лигавиците на дихателните пътища, стомашно-чревния тракт и отделителната система. При остро начало на заболяването е невъзможно да се идентифицират. Тези защитни комплекси се появяват едва от 2-та седмица от началото на заболяването, понякога по-късно. По-голямата част от имуноглобулин А е концентриран в лигавичните тъкани. Приблизително около 80%. Останалите антитела циркулират в кръвта.

Основната функция е неутрализиране и унищожаване на микроорганизми. След отзвучаване на острите прояви на заболяването количеството на тези имуноглобулини започва да намалява и напълно изчезва до 8 седмици от началото на заболяването. Ако IgA се открие на по-късна дата, това показва хроничен процес.

Основните и първи маркери на острата фаза на развиваща се патология са имуноглобулините от клас М (IgM). Те се откриват на 5-ия ден от началото на заболяването. Наличието им в кръвта може да се определи в рамките на около 6 седмици. След това започват бързо да изчезват.

Остатъчният имунен отговор се характеризира с наличието на имуноглобулини G (IgG) в кръвта. Появата на тези фактори в кръвта се открива приблизително месец след началото на заболяването. В бъдеще те могат да бъдат открити в продължение на много месеци, години и дори цял живот, като изпълняват защитна функция срещу връщане (рецидив) на болестта и в някои случаи правят невъзможно вторичното развитие на патологията.

Ако количеството на имуноглобулин G започне да се увеличава отново, тогава може да се подозира повторна инфекция. Подобно заключение може да се направи чрез провеждане на две или три проби, взети през интервал от 2 седмици.

Как се извършва ELISA на кръвта?

За ензимен имуноанализ в повечето случаи се използва кръв на пациента; понякога се събират стъкловидна тъкан, течност от гръбначния канал и амниотична течност.

Кръвта се изтегля през инжекционна игла в спринцовка от кубиталната вена. Изследването се провежда на празен стомах. Трябва да се помни, че приемането на определени лекарства може да повлияе на резултата от теста. Преди да дарите кръв, трябва да се въздържате от пушенето и пиенето на алкохол. Употребата на наркотици може да изкриви резултатите.

В случай на отрицателни стойности на имуноглобулини IgM, IgG, IgA, можем да говорим за отсъствие на заболяването или неговата начална фаза; отрицателен резултат е възможен и при пълно възстановяване след значително време.

Ако IgA и IgM не се открият, а IgG е положителен, тогава най-вероятно говорим за формиран имунитет след инфекциозно заболяване или след ваксинация.

В случай на висок титър на IgM с отрицателни стойности на IgG и IgA, може да се заключи, че има остро инфекциозно заболяване.

Едновременните положителни стойности на резултатите от имуноглобулините - IgA, IgM, IgG са характерни за острата фаза на рецидив на съществуващо хронично заболяване.

Какво осигурява представената технология: определяне на наличието на хелминти в кръвта; търсене на други патогени в тялото; можете да разберете причините за влошаването на вашето здраве; лечението също се основава на тестове, получени по този начин; можете да наблюдавате състоянието на имунната си система.

Друга добра характеристика е възможността за проследяване на ракови маркери, независимо от произхода им, разбира се, ако ги има в тялото. Този тест е подходящ и за описване на състоянието на човешката репродуктивна система. Наличието на определени протеини, хормони и пептиди позволява да се прецени потенциалът на партньора по отношение на зачеването на дете, както и очакваното качество на бъдещия плод.

Кръвният тест за Giardia е доста популярна практика сред съвременните лекари. В допълнение, този изследователски метод е отличен инструмент за биомедицински анализи и количествена статистика по отношение на специфични антигени.

Как се използва ензимно-свързаният имуносорбентен анализ?

Вярно е, че това са по-сложни случаи, така че качеството на такъв анализ ще зависи до голяма степен от лабораторните работници, които извършват тестването. Характеристики на технологията и нейната разлика от старите лабораторни изследвания:

сега вместо проба от изпражненията се използва кръв за определяне на наличието на хелминти;
Пробата се изследва много бързо в лабораторията, а пълната информация може да бъде получена още на следващия ден;
цената на лабораторните изследвания е евтина, тъй като теологията е много проста;
Кръвният тест за хелминти дава висока степен на точност.

Тестове за имунологичен анализ на кръвта с помощта на ELISA

Малко хора знаят какви кръвни тестове има от гледна точка на човешката имунна система, тъй като тези тестове не са толкова чести. По правило такъв кръвен тест дава информация за вируса на имунната недостатъчност в човешкото тяло и е анонимен, тъй като се извършва по искане на пациента.

За вземане на проби се използва кръв, взета от вена на празен стомах, от която се получава серум за изследване чрез центрофугиране. В допълнение, изследването на кръвния серум може да открие редица полово предавани болести (сифилис, херпес, хламидия), както и всички видове хепатит, морбили, рубеола, паротит и токсоплазмоза.

По принцип за ELISA анализ изследваният биологичен материал е кръв, но могат да се изследват цереброспинална течност, съдържание на стъкловидното тяло, амниотична течност и др.

Имуноглобулините са имунни молекули, които могат да се свързват и неутрализират повечето инфекциозни патогени и токсини в тялото. В този случай най-важната характеристика на имуноглобулините е тяхната специфичност, т.е. способността да се свързват със специфичен антиген. Именно това свойство се използва за провеждане на кръвен тест за имуноглобулин.

Има пет вида имуноглобулини, но най-изследваните са имуноглобулините A, M и G. Имуноглобулините M и G показват своята активност в кръвта. Имуноглобулините А са вид бариера на повърхността на лигавиците, тъй като те присъстват там в големи количества.

Имунологичният кръвен тест ви позволява да определите вида на имуноглобулините, благодарение на които ELISA ви позволява не само да диагностицирате заболяването, но и да определите стадия на заболяването и да наблюдавате динамиката на заболяването:

през първите 2 седмици от заболяването се откриват само имуноглобулини А;
от 2-ра до 3-та седмица на заболяването в кръвта се откриват имуноглобулини А и М;
CC3 до седмица 4, кръвен тест за имуноглобулин открива и трите вида;
след възстановяване имуноглобулините М изчезват от кръвта и количеството на А и G намалява 2-4 пъти;
при наличие на хроничен процес имуноглобулини G задължително присъстват в кръвта, имуноглобулини М отсъстват, имуноглобулини А могат да присъстват или да не присъстват.

Обхват на приложение на имунологичен кръвен анализ с помощта на ELISA

Диагностика на вирусни заболявания: хепатит, херпес, вирус на Епщайн-Бар, цитомегаловирус и др.;
полово предавани инфекции: хламидия, гонорея, трихомонада, микоплазма, уреаплазма;
сифилис; ендокринология (определяне на хормоналните нива);
туморни маркери (диагностика на рак); имунология (диагностика на имунодефицит);
алергология (диагностика и лечение на алергии).

Серологичният кръвен тест е лабораторен метод за изследване на кръвта, който се използва за диагностициране на инфекциозни заболявания и определяне на стадия на инфекциозния процес. Серологичната реакция се основава на взаимодействието на антитела и антигени.

Определянето на антигени се използва за определяне на рода и вида на микроорганизмите. Този метод на изследване се използва в урологията и венерологията. Кръвта за серологичен кръвен тест се взема сутрин на празен стомах от вената.

Показания за употреба и заболявания, открити чрез ELISA

Основният биоматериал за ELISA е кръвен серум: в лабораторията се взема кръвна проба от пациента от вена, от която впоследствие се отстраняват образуваните елементи, които усложняват анализа. В някои други случаи за анализ се използват цереброспинална течност, амниотична течност, петна от лигавици и др.

За да се избегнат изкривявания в резултатите, се препоръчва да се дарява кръв на празен стомах и две седмици преди теста (ако целта е да се диагностицират хронични, латентни инфекциозни заболявания), е необходимо да се спре приема на антибиотици и антивирусни лекарства Невъзможно е да се покрие пълен списък с показания за ELISA.

Безспорните предимства на ELISA са високата чувствителност и специфичност на метода. Чувствителността е способността да се разпознае желаното вещество, дори ако концентрацията му в пробата е ниска. Специфичността предполага безгрешна диагностика: ако резултатът е положителен, това означава, че е намерено точно антитялото или антигенът, който се очаква, а не някои други.

ELISA до голяма степен замени „златния стандарт“ на микробиологията - бактериологичен диагностичен метод, по време на който за идентифициране на патогена е необходимо да се изолира от тялото и след това да се отглежда култура върху хранителна среда в епруветка в продължение на няколко дни.

През цялото време, докато се извършваше анализът, лекарите бяха принудени да лекуват пациента „на сляпо“, отгатвайки произхода на микроорганизма по симптомите на заболяването. Определянето на IgM чрез ELISA позволява да се направи точна диагноза още в първите дни на заболяването.

Високата степен на технологична ефективност на ензимните имуноанализи минимизира влиянието на човешкия фактор, което намалява вероятността от грешка. Повечето от използваните в съвременните лаборатории тест системи и ELISA реагенти се произвеждат в индустриални условия, което гарантира точни резултати.

Недостатъци на метода ELISA

За съжаление, за да проведете ELISA, трябва да знаете какво точно да търсите: техниката на анализ предполага, че лекарят има предварително предположение за естеството на заболяването. Следователно няма смисъл да се предписва такъв тест с надеждата случайно да „отгатне“ диагнозата.

В случай на диагностициране на инфекциозни заболявания, ензимният имуноанализ не може да открие патогена и да определи неговите специфични свойства: той само показва наличието на антитела в кръвта на пациента, което косвено показва наличието на чужд микроорганизъм в човешкото тяло. ELISA е изключително точен, но не евтин метод, така че трябва да го използвате разумно и квалифициран лекар трябва да интерпретира резултатите.

Възможни резултати от ELISA

В зависимост от съдържанието на анализа формулярът може да представи данни под формата на таблица, в която са изброени всички антитела или антигени с бележки за отрицателна или положителна реакция или ще бъде посочена количествената стойност на резултата (отрицателна, слабо положителна, положителна или силно положителен).

Последната опция определя колко антитела се съдържат в анализираната проба. Друг количествен показател е индексът на авидитет на антителата, изразен в проценти. Той показва колко време е минало от началото на инфекциозния процес (колкото по-висок е индексът, толкова повече).

Днес се произвеждат хиляди видове тест системи ELISA, които позволяват откриването на специфични антитела и антигени за голямо разнообразие от патологии. Следователно този анализ се използва в почти всички медицински отрасли. Диагнозата, поставена с помощта на ELISA, е гаранция за предписване на адекватна терапия и ефективно лечение на заболяването.

При наличие на необходимите реактиви и добра организация на лабораторията, ще получите резултата от изследването до 1-2 дни след вземане на кръв. В някои случаи, ако е необходимо да се получи спешна реакция, този период може да бъде намален до 2-3 часа.

ELISA е модерен лабораторен тест, който търси специфични антитела в кръвта (или антигени) към специфични заболявания, за да идентифицира не само етиологията, но и стадия на заболяването.

търсене на специфични антитела към всяко инфекциозно заболяване;
търсене на антигени на всякакви инфекциозни заболявания;
изследване на хормоналния статус на пациента;
скрининг за наличие на автоимунни заболявания.

Както всеки метод за лабораторна диагностика, ELISA има своите предимства и недостатъци. Предимствата на метода включват:

висока специфичност и чувствителност на метода (повече от 90%);
способността за определяне на заболяването и проследяване на динамиката на процеса, т.е. сравняване на броя на антителата в различни периоди от време;
достъпност и бързина на това изследване;
неинвазивен метод за събиране на материал, а не изследване;

Недостатъкът на метода е фактът, че по време на анализа е възможно да се идентифицира не самият причинител на заболяването, а само имунният отговор към него (антитела).

Същността на метода ELISA

Има няколко вида ELISA: директен, индиректен, блокиращ метод, конкурентен. На практика обаче най-често се използва хетерогенният ензимно-свързан имуносорбентен анализ или ELISA.

Основата на ензимния имуноанализ е имунната реакция на антиген и антитяло с образуването на имунен комплекс, което води до промяна в ензимната активност на специфични белези на повърхността на антителата.

По същество този процес може да бъде разделен на няколко етапа:

на повърхността на ямките на таблетката с тестова система има пречистен антиген на специфичен патоген. Когато се добави животински кръвен серум, настъпва специфична реакция между този антиген и желаното антитяло;
След това към ямката се добавя специален хромоген (конюгат, белязан с пероксидаза). Протича ензимна реакция, която води до образуване на оцветена субстанция в ямката на плаката. Интензивността на цвета му зависи от количеството имуноглобулини (антитела), съдържащи се в серума на животното;
След това се оценява резултатът. С помощта на многоканален спектрофотометър оптичната плътност на тестовия материал се сравнява с оптичната плътност на контролните проби и резултатите се обработват математически. Количеството антитела в пациента зависи пряко от височината на оптичната плътност на дадена ямка.

Трябва да се помни: за всяка тестова система са разработени индивидуални индикатори за записване на резултатите, показатели за нормалност и патология („референтни стойности“). Това трябва да се има предвид при оценката на резултатите от всяко конкретно изследване.

Неправилно е резултатите от една лаборатория да се интерпретират въз основа на „референтните стойности“ на друга лаборатория. Също така е неправилно да се сравняват резултатите от различни лаборатории помежду си.

При оценката на резултатите за специфични инфекции класът на откритите антитела и тяхното количество са важни. От това зависи не само въпросът за етиологията на инфекцията, но и очакваният стадий на заболяването (остър, хроничен), както и наличието на активна инфекция (остра или обостряне на хронична) по време на изследването.

Какъв е приблизителният срок за появата на антитела?

Най-ранните антитела са IgM. Те могат да бъдат открити 1-3 седмици след евентуална инфекция, което характеризира острата фаза на инфекциозния процес. Втората ситуация за появата на IgM антитела е обостряне на хроничен процес. IgM циркулират средно около 3 месеца, след което количеството им постепенно изчезва. Въпреки това, при някои пациенти следи от IgM могат да бъдат открити в рамките на 1-2 години след инфекцията.

От 4-та седмица след инфекцията започват да се появяват IgG антитела. При повечето инфекции техният титър постепенно се увеличава с максимум в различно време (средно след 1,5-2 месеца), след което титърът остава на ниско ниво и показва имунитет. При някои заболявания нивата на IgG не са високи.

Опции за откриване на антитела

Изолираното откриване на IgM антитела предполага наличието на първична инфекция.
Едновременното откриване на IgM и IgG в кръвта е характерно за първична инфекция през предходните 2-3 месеца, както и по време на обостряне на хронично заболяване.
Откриването на изолиран IgG може да показва както имунитет към болестта, така и хронична инфекция. Във втората ситуация е важно както количеството антитела (титър), така и промяната в този титър във времето. Обикновено изследванията се провеждат на интервали от 2-4-6 седмици.

С напредъка на съвременната медицина е възможно да се извърши по-задълбочена диагностика, ако има съмнение за определени патологии при пациент. Един от информативните методи за лабораторно изследване е ELISA анализът, който се извършва чрез събиране на венозна кръв. Тоест като цяло нищо не се променя за пациента. Но лаборантът-ELISA анализатор извършва сложна техника за изследване на събрания биоматериал. Какво представляват ELISA тестовете и какви са тънкостите на използването на метода ELISA като диагностичен метод, ще разберем в материала по-долу.

Какво е ензимен имуноанализ?

Производството на антитела се провокира от самите антигени, които са проникнали в човешкото тяло. Когато влизат в „битката“ за здравето на тялото, антителата сякаш маркират антигени, което вижда лаборантът при изследване на кръвта. Тоест в събрания биоматериал е възможно да се проследи не само наличието на инфекция, но и нейните следи след пълното възстановяване на тялото.

По този начин, като предписва ензимно-свързан имуносорбентен тест за кръв на пациент, лекуващият лекар може да проследи продължителността на инфекцията, степента на нейното прогресиране или да идентифицира наличието на имунитет към определена инфекция.

Диагностичният процес на ELISA изглежда така:

Събраната венозна кръв се превръща в кръвен серум в лабораторията;
След това лаборантът използва специална табла с клетки, всяка от които вече съдържа всички необходими антигени. Достатъчно е просто да капнете кръвен серум във всяка клетка и да наблюдавате реакцията на имуноглобулини (антитела) към антигени. Наличието на "желаната" реакция се показва чрез промяна в цвета на материала, който се тества. Впоследствие лаборантът изследва оптичната плътност на изследваната среда.

Аскаридоза и ентеробиоза (кръгли червеи и острици);
трихинелоза;
Описторхиаза в остра и хронична форма;
лямблиоза;
амебиоза;
токсоплазмоза;
Лайшманиоза във всякаква форма.

Важно: ензимният имуноанализ може да бъде както качествен, така и количествен. В първия случай лаборантът само потвърждава или отрича наличието на желаното вещество в кръвта. Във втория случай резултатът от анализа показва неговата концентрация в тялото на пациента.

Недостатъци на метода

С всички предимства на този диагностичен метод си струва да се разбере, че ензимно-свързаният имуносорбентен тест не е начин за откриване на причината за заболяването на пациента, а само метод за потвърждаване на диагнозата, предложена от лекуващия лекар. И тъй като изследването е доста скъпо, трябва да се използва разумно. В този случай резултатите от изследването трябва да се интерпретират само от квалифициран специалист.

Декодиране на резултатите

След като сме подредили съкращението ELISA и какво е то ─ разбрано, струва си да преминем към тълкуване на резултатите. Тук е важно да се разбере, че ако анализът е извършен качествено, резултатът ще бъде само положителен или отрицателен. Тоест диагнозата или потвърждава подозренията на лекаря относно определена диагноза, или ги опровергава. В този случай формулярът ще съдържа съответно символите „+“ или „-“.

Важно: отрицателният резултат от теста не винаги означава липса на инфекция. Факт е, че антитела срещу антигени могат да се образуват в рамките на 14 дни след инфекцията и е вероятно те все още да не са се образували.

Ако се извърши количествен анализ, тогава се определят вида на антителата, тяхното количество и етап на активност. По-специално, по време на тази диагноза се определят антитела (имуноглобулини) IgG и IgM, които се образуват през различни периоди на прогресиране на инфекцията. Най-честите резултати в този случай са:

Повишен IgM и пълна липса на IgG. Тази картина показва скорошна инфекция и острата фаза на патологията.
Повишена активност и на двата вида имуноглобулини (IgM и IgG). Говори за продължително и хронично протичане на инфекциозния процес.
IgG активност и пълна липса на IgM. Инфекцията е настъпила преди поне шест месеца и сега вирусът е в продължителен хроничен стадий.
Липса на IgG и IgA антитела. Резултатът е неопределен.
Липса на IgM, IgA и IgG антитела. Показва липса на имунитет към определена инфекция.
Активността на антителата IgG, IgM и IgA показва обостряне на хроничния процес.

В допълнение към идентифицирането на видовете антитела, лаборантът посочва и тяхното количество в специална колона на формата и обема на кръвта. Не забравяйте, че след като разберете какво представлява методът ELISA, не интерпретирайте резултатите сами. Получените резултати могат да бъдат интерпретирани с точност само от лекуващия лекар в зависимост от очакваната диагноза въз основа на клиничната картина на пациента.

ELISA (ензимно-свързан имуносорбентен анализ, ELISA) навлиза в живота на практическата медицина някъде през 60-те години на миналия век. Първоначалната му задача беше хистологично изследване за научни цели, което се свеждаше до търсене и идентифициране на антигенната структура на клетките на живия организъм.

Методът ELISA се основава на взаимодействието на специфични (AT) и свързани антигени (AG) с образуването на комплекс "антиген-антитяло", който се открива с помощта на ензим. Този факт накара учените да мислят, че методът може да се използва за диагностични цели за идентифициране на специфични имуноглобулини от различни класове, участващи в имунния отговор към определена инфекция. И това беше пробив в клиничната лабораторна диагностика!

Методът започва да се използва активно едва в началото на 80-те години, и то предимно в специализирани институции. Първите имуноензимни анализатори бяха оборудвани с центрове и станции за кръвопреливане, инфекциозни и венерологични болници, тъй като страховитият СПИН, роден на африканския континент, се появи на нашия хоризонт и веднага се присъедини към „старите“ инфекции, изискваше незабавни диагностични мерки и търсене за терапевтични лекарства, които му въздействат.

Обхват на приложение на метода ELISA

Възможностите на ензимния имуноанализ са наистина обширни.Сега е трудно да си представим как може да се направи без такова изследване, което се използва буквално във всички отрасли на медицината. Изглежда, какво може да направи ELISA в онкологията? Оказва се, че може. И то много. Способността на анализа да открие маркери, характерни за определени видове злокачествени новообразувания, е в основата на ранното откриване на тумор, когато той все още не е открит по друг начин поради малкия си размер.

Съвременната клинична лабораторна диагностика (CDL), в допълнение към туморните маркери, разполага със значителен арсенал от ELISA панели и ги използва за диагностициране на различни патологични състояния (инфекциозни процеси, хормонални нарушения) и наблюдение на фармацевтичните лекарства, за да идентифицира ефекта им върху тялото на пациента. и между другото не само човешки. В момента ензимният имуноанализ се използва широко във ветеринарните услуги, тъй като „нашите малки братя“ също са податливи на много заболявания, от които понякога страдат много.

По този начин, ELISA, поради своята чувствителност и специфичност, може да определи от кръвна проба, взета от вена:

Хормонален статус (хормони на щитовидната жлеза и надбъбречните жлези, полови хормони);
Наличието на вирусни и бактериални инфекции (HIV, B и C, хламидия, сифилис и, и, както и много други заболявания, причинени от патогенни микроорганизми);
Следи от жизнената активност на микроорганизмите, които инициираха инфекциозния процес, който успешно приключи и премина в етапа на формиране на имунен отговор към този патоген. Такива следи, тоест антитела, в много случаи остават циркулиращи в кръвта за цял живот, като по този начин предпазват човек от повторно заразяване.

Каква е същността на ELISA?

Методът на имуноензимния анализ позволява да се определи не само наличието на самия патоген (качествен анализ), но и неговото количествено съдържание в кръвния серум на пациента.

Вирусната или бактериалната доза значително влияе върху хода на инфекциозния процес и неговия резултат, поради което количественият анализ играе важна роля в диагностиката и лечението на заболявания в различни форми и стадии.

Въпреки това, знаейки изследванията на ензимния имуноанализ като метода ELISA, ние дори не се замисляме как той успява да обхване толкова широк спектър от микроорганизми, обитаващи нашата планета, много от които представляват пряка заплаха за здравето и живота на хората и животните. Но факт е, че ELISA има много опции (неконкурентни и конкурентни - директни и индиректни), всяка от които решава свой собствен проблем и по този начин позволява целенасочено търсене.

За идентифициране на имуноглобулини от един или друг клас се използва традиционен 96-ямков панел от полистирол (плака), в чиито ямки са концентрирани сорбирани рекомбинантни протеини в твърдата фаза. Антитела или антигени, които попадат в ямката с кръвен серум, намират „познат“ обект и образуват комплекс с него (AG - AT), който, фиксиран от ензимен конюгат, ще се прояви чрез промяна в цвета на ямката, когато четене на резултатите.

Ензимният имуноанализ се извършва с помощта на тест системи с определена специфичност, произведени в специални лаборатории и оборудвани с всички необходими реагиращи компоненти. Изследванията могат да се извършват с помощта на перални машини ("шайби") и спектрофотометри за отчитане, които включват предимно ръчен труд. На напълно автоматични машини, които освобождават лаборанта от монотонно вливане, миене и други рутинни задачи, разбира се, се работи по-бързо и удобно, но не всички лаборатории могат да си позволят такъв лукс и да продължат да работят по стария начин - на полуавтоматични машини.

Интерпретацията на резултатите от ELISA е от компетенцията на лекаря по лабораторна диагностика, като трябва да се вземе предвид и присъщото свойство на почти всички имунохимични реакции да дават фалшиво положителни или фалшиво отрицателни отговори.

Видео: модерен ензимен имуноанализ

Резултатите от ELISA, използвайки примера за сифилис

Ензимният имуноанализ е подходящ за откриване на всички формии в допълнение се използва в скринингови изследвания. За извършване на анализа се използва венозна кръв на пациента, взета на празен стомах. Работата използва таблетки с определена специфичност (AB класове A, M, G) или тотални антитела.

Като се има предвид, че антителата при сифилис се произвеждат в определена последователност, ELISA може лесно да отговори на въпроса кога е възникнала инфекцията и на какъв етап е процесът, а интерпретацията на получените резултати може да бъде представена в следната форма:

IgM показва продължителността на инфекциозния процес (може да се появи по време на обостряне на хронични възпалителни заболявания);
IgA показва, че инфекцията е настъпила преди повече от месец;
IgG показва, че инфекцията е в разгара си или наскоро е проведено лечение, което лесно се определя чрез снемане на анамнеза.

При тестване за сифилис отрицателните ямки (и отрицателната контрола) ще останат безцветни, докато положителните ямки (и положителната контрола) ще покажат ярко жълт цвят поради промяната на цвета на хромогена, добавен по време на теста. Интензитетът на цвета обаче не винаги съвпада с контролния, т.е. може да е малко по-блед или леко жълтеникав. Това са съмнителни резултати, които по правило подлежат на повторно изследване със задължително отчитане на количествените показатели, получени на спектрофотометъра, но като цяло цветът е право пропорционален на броя на имунните комплекси (свързани Ags и ATs) .

Най-вълнуващият от ензимните имунотестове е HIV ELISA

Анализът е може би по-интересен от други за широк кръг от населението, тъй като все още е невъзможно да се каже с увереност, че много социални проблеми са изчезнали (проституция, наркомания и др.). За съжаление, ХИВ засяга не само тези слоеве на човешкото общество; можете да се заразите при различни обстоятелства, които не са свързани със сексуална неморалност или употреба на наркотици. Но ако има нужда от тест за ХИВ, не трябва да се страхувате, че всички около вас ще знаят за вашето посещение в такава лаборатория. Сега ХИВ-инфектираните са защитени от закона и тези, които имат съмнения, могат да се обърнат към анонимни офиси, където могат да разрешат проблема без страх от публичност и осъждане.

Имуноензимният метод за диагностициране на HIV инфекцията е едно от най-важните стандартни изследвания, което обаче изисква специални условия, тъй като темата е много деликатна.

Има смисъл да се извършва HIV ELISA след сексуален контакт, кръвопреливане, други медицински процедури, предполагащи инфекция, и в края на инкубационния период („серонегативен прозорец“), но трябва да се има предвид, че този период от време е не е постоянно. Може да завърши след 14-30 дни или да продължи до шест месеца, така че средната стойност се счита за интервал от 45 до 90 дни. Кръвта се дарява за ХИВ по същия начин, както при други инфекции - от вена на празен стомах. Резултатите ще бъдат готови в зависимост от натрупания материал в лабораторията и нейната натовареност (от 2 до 10 дни), но най-често лабораториите дават отговор на същия ден или на следващия.

Какво можете да очаквате от вашите ХИВ резултати?

ELISA за HIV инфекция открива антитела срещу два вида вирус: HIV-1 (по-често срещан в Русия и други страни от Европа и Азия) и HIV-2 (по-често срещан в Западна Африка).

Задачата на HIV ELISA е да търси антитела от клас G, които се откриват на всички тестови системи, но в по-късен период, и антитела от клас А и М, откривани в рекомбинантни тестови комплекти от ново поколение, които позволяват откриването на антитела в най-ранните етапи (инкубационен период - "серонегативен прозорец"). От ELISA могат да се очакват следните отговори:

Първичен положителен резултат: кръвта трябва да се изследва повторно с тест система от същия тип, но по възможност от друга серия и от друго лице (лаборант);
Повторното (+) включва ново вземане на кръв от пациента с изследване, подобно на първичния анализ;
Друг положителен резултат подлежи на референтен анализ, при който се използват високоспецифични тестови комплекти (2-3 бр.);
Положителен резултат в двете (или три) системи се изпраща за имуноблотинг (същият ELISA, но извършен индивидуално с помощта на тестови комплекти с особено висока специфичност).

Заключението за HIV инфекция се прави само въз основа на имуноблотинг. Със заразения се провежда разговор при пълна конфиденциалност. Разкриването на медицинска тайна в Русия, както и в други страни, подлежи на наказателно наказание.

Тестовете за хламидия и цитомегаловирус, използващи метода на ензимен имуноанализ, също придобиха особена популярност, поради факта, че те позволяват да се определи времето на инфекция, стадия на заболяването и ефективността на мерките за лечение.

По време на прилагането може да се наблюдава и появата на антитела от различни класове.в различни фази на патологичното състояние, причинено от инфекциозен агент:

IgM може да се открие още седем дни след заразяването;
IgA показва, че инфекцията живее в тялото повече от месец;
IgG потвърждава диагнозата хламидия и помага за проследяване на лечението и определяне на неговата ефективност. Трябва да се отбележи, че антителата от клас G остават и циркулират в тялото независимо от продължителността на заболяването, следователно, за да интерпретирате правилно анализа, трябва да вземете предвид референтните стойности (норми), които между другото , са различни за всеки CDL: като се вземат предвид марката на тест системата и спецификата на включените в комплекта реагенти. Нормалните стойности се въвеждат във формуляра до резултата от ELISA.

Що се отнася до , тук е малко по-различно:антителата от клас М се появяват след около месец до месец и половина, тоест положителният резултат (IgM+) става във фазата на първична инфекция или по време на реактивиране на латентна инфекция и остава такъв от 4 месеца до шест месеца.

Наличието на антитела от клас G е характерно за началото на първична остра инфекция или реинфекция. Анализът посочва, че вирусът е наличен, но не дава информация на какъв етап е инфекциозният процес. Междувременно определянето на нормалния титър на IgG също създава трудности, тъй като зависи изцяло от имунния статус на конкретен човек, който обаче се установява чрез идентифициране на имуноглобулини от клас G, когато се диагностицира CMV за оценка на способността на антителата от клас G да взаимодействат с CMV, за да го „неутрализират“ по-късно (AT авидитет). В началния стадий на заболяването IgG се свързва много слабо с вирусните антигени (нисък авидитет) и едва след това започва да проявява активност, следователно можем да говорим за повишаване на авидитета на антителата.

Можем да говорим много за предимствата на ензимния имуноанализ, тъй като този метод успя да реши много диагностични проблеми, използвайки само венозна кръв. Няма нужда от дълго чакане, притеснения и проблеми със събирането на материал за изследване. В допълнение, тестовите системи за ELISA продължават да се подобряват и не е далеч денят, когато тестът ще даде 100% надежден резултат.